电针干预豚鼠膜迷路积水的参数优选及其对耳蜗AQP2表达的影响

[目的]观察不同频率电针对豚鼠膜迷路积水的干预情况,以期优选出电针治疗膜迷路积水的适宜治疗参数,并初步探讨电针治疗梅尼埃病的可能机制。[方法]健康雄性豚鼠48只,采用完全随机法分为空白组、模型组、假电针组、电针组(据不同频率分为3个亚组),每组8只。除空白组外,其余各组均通过腹腔注射醋酸去氨加压素的方法建立膜迷路积水模型。空白组不进行干预;模型组造模后仅采取与各治疗组动物相同的固定方式,不行其他干预;电针组中各个亚组,取"百会"和左侧"听宫"穴,分别以2、15、100Hz 3种不同频率进行电针治疗,1次/d,输出电流1mA,留针20min;假电针组予针刺"百会"和左侧"听宫"穴,但不通电,其余处理同电针组,均连续治疗10d。干预结束后,采用听觉脑干诱发电位仪检测各组豚鼠听性脑干反射(auditory brairstem response,ABR)反应阈值,HE染色检测耳蜗积水程度,并通过公式蜗管横截面积/(蜗管横截面积+前庭阶横截面积)计算出比值(R值),免疫组化染色法检测耳蜗水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达情况。[结果]各组豚鼠ABR反应阈值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗R值增加(P<0.01);与模型组比较,各治疗组豚鼠耳蜗R值均降低(P<0.01,P<0.05);与假电针组比较,100Hz电针组R值降低(P<0.01),2、15Hz电针组R值均较假电针组降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。各电针组组间比较,100Hz电针组R值较2、15Hz电针组降低,差异有统计学意义(均P<0.05);2、15Hz电针组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗AQP2表达增强(P<0.01);与模型组比较,各治疗组豚鼠耳蜗AQP2表达减弱(P<0.01,P<0.05);各治疗组间比较AQP2表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]假电针及电针治疗均能减轻豚鼠膜迷路积水,其中100Hz电针效果最佳,其作用机制可能与下调耳蜗AQP2的表达有关。     

不同针灸方法对膜迷路积水模型豚鼠听力及耳蜗形态结构的影响

目的探讨不同针灸方法干预对豚鼠膜迷路积水的效应差异。方法 50只豚鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组、电针组,每组10只。采用腹腔注射醛固酮的方法诱导膜迷路积水模型。各治疗组分别在"百会""听宫"实施相应穴位刺激,每日1次,连续治疗10 d。治疗结束后,行听觉脑干诱发电位测试,观察听阈值。HE染色法观察耳蜗积水程度,计算蜗管横截面积与蜗管加前庭阶横截面积之和的比值(R值)。结果 1针刺组、艾灸组、电针组听阈值均较模型组降低(P<0.01),电针组听阈值较艾灸组、针刺组降低(P<0.01),艾灸组听阈值较针刺组降低(P<0.05)。2针刺组、艾灸组、电针组R值均较模型组降低(P<0.01),电针组R值较针刺组、艾灸组降低(P<0.01,P<0.05),艾灸组R值较针刺组降低(P<0.01)。结论针刺、艾灸、电针刺激"百会""听宫"均能减轻豚鼠膜迷路积水,并且改善耳蜗听功能。电针表现出最好的效应,优于艾灸、针刺;艾灸优于针刺。     

电针对膜迷路积水豚鼠耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α表达的影响

目的 探讨电针对血管加压素（arginine vasopressin, AVP）诱导的美尼尔综合征膜迷路积水豚鼠耳蜗血管加压素受体2(vasopressin type 2 receptor, V2R)、水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)、上皮细胞钠离子通道蛋白-α(epithelial sodium channel-α,ENaC-α)表达的影响,初步阐明电针干预美尼尔综合征膜迷路积水机制。方法 白色红目豚鼠分为正常组、模型组、电针刺组,每组12只。采用AVP腹腔注射建立膜迷路积水模型。电针刺组给予“百会”、左侧“听宫”电针治疗,20min/次,每日1次,共治疗10日。治疗结束后每组6只豚鼠采用HE染色法观察耳蜗积水程度,每组6只豚鼠采用Western blot法检测左侧耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组耳蜗积水程度增加（P<0.01）,与模型组比较,电针刺组耳蜗积水程度降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组耳蜗V2R、AQP2、ENaC-α蛋白表达增加（P<0.01）,与模型组比较,电针刺组耳蜗V2R、AQP2...     

泽泻汤组分不同配比对豚鼠膜迷路积水影响的比较

目的:观察泽泻汤中泽泻与白术不同剂量配比对膜迷路积水豚鼠的影响。方法:采用腹腔注射醋酸去氨加压素法复制膜迷路积水动物模型。观察各组豚鼠的行为学变化及蜗管组织病理学改变,计算各组豚鼠蜗管横截面积与蜗管加前庭面积之和(总面积)的比值,以评价膜迷路积水的程度。结果:与空白组比较,模型组豚鼠蜗管横截面积与总面积的比值明显升高(P<0.05);与模型组比较,3组实验组豚鼠蜗管横截面积与总面积的比值均下降,但实验1组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:3组实验组中,以原方剂量配比(泽泻∶白术为5∶2)的实验1组缓解豚鼠膜迷路积水作用最佳,证实了仲景方剂配伍的科学合理性。     

外耳道间断加压对豚鼠膜迷路积水及ANP表达的影响

目的 研究外耳道20cmH2O间断加压对豚鼠膜迷路积水及耳蜗外侧壁心钠素（ANP）表达的影响。方法 建立豚鼠外耳道间断加压模型。常规火棉胶切片观察膜迷路积水的发展,用免疫组化S-P法研究ANP的表达,结果 20cmH2O间断加压对中耳及内耳均无明显损伤,间断加压使膜迷路积水程度减轻。加压组与对照组反应阈无明显差异。加压耳蜗管外侧壁ANP表达能无明显效果,耳蜗ANP阳性细胞可能有内分泌或旁分泌作用。     

豚鼠耳蜗血管纹和前庭膜的超微结构

本文对4只(8耳)健康成年豚鼠耳蜗的血管纹和前庭膜进行超微结构观察。血管纹是衬贴在膜性蜗管外壁上的一层上皮,它由三种细胞,即边缘细胞、中间细胞和基底细胞组成。上皮中含有丰富的毛细血管。前庭膜为膜性蜗管的上壁,将前庭阶与膜性蜗管(中阶)分开。前庭膜很薄,由两层上皮和一薄层的结缔组织组成。     

泽泻汤及拆方对豚鼠膜迷路积水模型的影响

目的观察泽泻汤及拆方对豚鼠膜迷路积水模型的影响。方法采用腹腔注射醋酸去氨加压素法复制膜迷路积水模型,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积加前庭阶面积之和的比值为指标,研究泽泻汤及其拆方的作用。结果泽泻汤组与模型组比较有非常显著差异(P0.01),泽泻组与模型组比较有显著性差异(P0.05),泽泻汤组与泽泻组比较有显著性差异(P0.05),与白术组比较有非常显著性差异(P0.01)。结论泽泻汤具有显著的减轻膜迷路积水的作用,其疗效优于方中任何一味药物。     

电针百会穴对内淋巴积水豚鼠耳蜗及血生化的影响

目的:观察电针百会穴对内淋巴积水豚鼠耳蜗形态学和血生化的影响,探讨针刺治疗梅尼埃病可能的作用机制。方法:以腹腔注射血管加压素建立内淋巴积水豚鼠模型。40只豚鼠随机分为假手术组、模型组、穴位组(电针百会穴)、非穴位组(电针股部非穴位)、药物组(血管加压素拮抗剂OPC-41061灌胃)及针药联合组。干预28 d后,采用生化、组织形态学观察豚鼠耳蜗内淋巴积水、前庭耳蜗功能和形态的改变。结果:使用血管加压素以及电针或OPC-41061对豚鼠的主要器官和组织未产生明显影响,各组豚鼠血液中生化指标差异均无统计学意义(P0.05)。HE染色结果显示,穴位组较非穴位组前庭膜膨隆明显减轻,内淋巴积水减少,与OPC-41061的效果相似。顶转、第二转和底转中的前庭阶占前庭阶和中阶的面积之比[S前庭阶/(S前庭阶+S中阶)]模型组明显低于假手术组(P0.05);穴位组、药物组和针药联合组明显高于模型组(P0.05);穴位组与非穴位组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:电针百会穴能明显改善由血管加压素诱导的豚鼠内淋巴积水,提示针刺百会穴可能是通过血管加压素信号途径改善豚鼠内淋巴积水。     

艾灸疗法对梅尼埃病膜迷路积水豚鼠模型听阈的影响

目的探讨艾灸疗法对梅尼埃病膜迷路积水豚鼠模型听阈的影响,为临床治疗本病提供实验依据。方法采用腹腔注射醛固酮的方法复制梅尼埃病膜迷路积水豚鼠模型,以听性脑干反射(ABR)检测的阈值为观察指标。结果治疗后模型组与空白组比较,听阈值有显著性差异(P0.01);艾灸组与模型组听阈值变化的比较有显著性差异(P0.01)。结论艾灸疗法有改善梅尼埃病膜迷路积水豚鼠模型听力的作用。     

电针通过调节血管加压素改善豚鼠内淋巴积水的机制研究(英文)

目的:探究电针百会穴(GV20)对血管加压素(AVP)诱导的豚鼠内淋巴积水的作用及可能机制。方法:取50只雄性豚鼠,以腹腔注射AVP建立内淋巴积水模型,另设10只豚鼠为对照组。造模豚鼠随机分为模型组(不予处理)、穴位组(电针百会穴)、非穴位组(电针非穴位)、OPC-41061组[血管加压素2型受体(V2R)拮抗剂]及针药联合组。各组均予以相应干预。4个疗程后,HE染色观察耳蜗形态学变化;检测各组豚鼠血浆、下丘脑和耳蜗组织的AVP表达水平;PCR、Western blot、免疫组化检测各组豚鼠耳蜗组织V2R和水通道蛋白-2(AQP2)的表达水平。结果:电针百会穴可有效减轻AVP诱导的豚鼠内淋巴积水,降低循环AVP的水平,下调下丘脑和耳蜗的AVP表达,进而促进耳蜗组织V2R的mRNA和蛋白表达,抑制耳蜗组织AQP2的mRNA和蛋白表达(P0.05)。其作用强度和机制与OPC-41061干预相似。结论:电针百会穴能有效缓解AVP诱导的豚鼠内淋巴积水症状,其作用机制与调控AVP-V2R-AQP2通路相关。     

内毒素致豚鼠血迷路屏障通透性及其超微结构观察

目的研究内毒素(ETX)致豚鼠血迷路屏障的动态变化情况.方法采用听泡内注入内毒素,以伊文思蓝(Evans Blue,EB)为示踪剂,测量EB通过耳蜗血迷路屏障的渗出量,应用透射电镜观察耳蜗外侧壁形态学的变化.结果内毒素使耳蜗血迷路屏障EB渗出量随时间的变化而变化,12 h开始有EB渗出,24 h达高峰,与12、72 h比较,有显著性差异.生理盐水组超微结构无变化,内毒素组血管纹血管内皮细胞呈不同程度的损伤,细胞间的间隙增宽,有炎性细胞浸润.结论内毒素能使血迷路屏障通透性增加,其原因主要是由血管纹微血管内皮细胞连续性中断及细胞间的紧密连接开放所致.     

内毒素致豚鼠内耳血管纹损伤

将内毒素注入豚鼠内耳的外淋巴腔,并以注入生理盐水作对照,观察注射前后血管纹超微结构变化。结果对照组无显著改变。实验组血管纹边缘细胞的膜性细胞器(线粒体、内质网等)严重破坏,细胞间隙增宽,溶酶体增多,№~+-K~+-ATP 酶反应产物减少。作者认为内毒索引发血管纹严重损害,使耳蜗的水与离子代谢紊乱,破坏内耳生化环境并导致耳蜗能源衰竭,是中耳炎并发感音神经性聋的主要原因。     

醛固酮诱发豚鼠双耳膜迷路积水

目的豚鼠腹腔注射醛固酮建立膜迷路积水的动物模型。方法30只豚鼠平均分成3组。A组:左耳皆行内耳Kimura手术,右耳为对照;B组:经腹腔注射醛固酮0.1mg/(0.1kg·d),连续5d;C组经腹腔注射生理盐水0.5ml/d,连续5d。分别在1、2月时,每组随机各选5只进行血钾、钠、钙离子浓度检查,并观察耳蜗、心、肺、脑、肝和肾病理变化。结果膜迷路积水状况A组1、2月时手术耳皆为中、重度;B组1月时皆为双耳轻度,2月时皆为双耳中、重度;C组双耳皆无积水表现。与C组相比,A组血液电解质无显著变化;B组钾、钙浓度下降,钠浓度升高。30只豚鼠重要脏器皆正常。结论醛固酮能够诱发豚鼠双耳膜迷路积水。     

晕可宁颗粒对急、慢性梅尼埃病模型的影响

目的　探讨晕可宁颗粒的主要药效学 ,为临床提供药效学资料及治疗学基础。方法　采用三氯甲烷破坏豚鼠一侧膜迷路感受器模型 ,探讨受试药对眼震颤、摆头及旋转的影响 ;采用内淋巴囊和内淋巴管阻塞手术复制豚鼠膜迷路实验性膜迷路积水模型 ,研究内耳组织平均中阶面积 (SMA)增加率及形态学的变化。结果　抑眩宁阳性对照组、晕可宁颗粒 (8、16g/kg)模型给药组豚鼠眼球震颤次数减少 ,差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。成功复制了不同程度膜迷路积水豚鼠模型 ,表现为前庭膜重度膨出 ,前庭阶缩小 ,膜蜗管增大 ,SMA增加率变大 ,差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;晕可宁颗粒灌胃后可减轻豚鼠实验性膜迷路积水的程度 ,差异有显著意义 (P <0 .0 1) ;但与空白对照组比较SMA增加率差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论　晕可宁颗粒可以减轻内淋巴囊积水程度 ,对梅尼埃病症状有对抗治疗作用。     

实验性内淋巴积水的形态和功能研究

手术阻断豚鼠内淋巴管(囊)造成了十三耳内淋巴积水。经火棉胶包埋切片、耳蜗电图、眼震电图技术进行观察。病理改变主要是耳蜗内淋巴积水,以顶回多见;前庭膜扩张增厚甚至破裂;柯替氏器、皿管纹和螺旋神经节部分变性发生较晚。球囊扩张常见。椭圆囊半规管扩张罕见且其感觉成分光镜下未见明显异常。听力损失早期以低频为主晚可累及全频。可见耳蜗重振和听阈波动现象。-SP/CAP仅少数动物术前后有统计意义的增高。半规管功能改变表现为眼震阈值提高;前庭重振;半规管轻瘫和优势偏向。积水程度与听力损失程度、半规管功能损害程度间无显著相关。     

紧密连接蛋白occludin和ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达

目的:研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达.方法:成年健康杂色豚鼠,耳廓反射灵敏,分别取耳蜗、脑、肺三组组织,免疫组织化学法及Western Blot研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在耳蜗外侧壁血管纹中的表达,以脑组、肺组为阳性对照.结果:光镜下可见豚鼠耳蜗外侧壁血管纹毛细血管内皮细胞等边缘细胞中均强阳性颗粒表达,脑组、肺组毛细血管内皮细胞内壁也均有明显阳性表达;Western Blot下occludin, ZO-1在耳蜗组中高表达,并且明显高于脑组与肺组.结论:occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹紧密连接中的高浓度表达,与维持血迷路屏障结构、功能密切相关.     

高压氧对肾虚豚鼠药物所致听觉功能损伤的影响

[目的]观察高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）对肾虚豚鼠药物所致听觉功能损伤的干预效果并探讨其作用机制。[方法]将30只雄性豚鼠随机分为正常对照组（正常组）、肾虚耳聋模型对照组（模型组）、肾虚耳聋高压氧治疗组（治疗组）。肌注醋酸泼尼松龙注射液及硫酸卡那霉素进行肾虚耳聋模型造模,再将治疗组豚鼠置于实验舱内吸氧,正常组豚鼠不作任何处理。观察各组豚鼠听性脑干诱发电位（ABR）的反应阈、各波潜伏期及波间期的变化;耳蜗螺旋韧带及基底膜铺片,光镜下观察耳蜗血管纹及毛细胞的形态变化;耳蜗琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH）染色,光镜下观察耳蜗毛细胞的SDH活性变化。[结果]治疗组ABR反应阈升高幅度明显低于模型组（P〈0.01）;模型组豚鼠ABR各波潜伏期延长亦比治疗组明显,两组之间及两组分别与正常组比较均有显著性差异（P〈0.01）;而各波间期比较,三组差异无显著性（P〉0.05）。模型组SDH显色变淡或消失,毛细胞受损显著,血管纹缺血明显,治疗组SDH变化、毛细胞受损及血管纹缺血程度均明显低于模型组。[结论]HBO对肾虚型听功能损伤有一定的治疗作用,但不能使听功能恢复正常;其可能机制为改善内耳微循环和提高内耳酶活性。     

豚鼠耳蜗血管纹黑色素的分布及其合成

目的 观察豚鼠耳蜗血管纹中黑色素和酪氨酸酶的分布特征,进而了解血管纹黑色素的合成。方法 对１２只杂色豚鼠,分别在光镜和电下观察血管纹中黑色素和酪氨酸酶的分布及其超微结构特征。结果 黑色素主要分布于豚鼠血管纹中间细胞内,基底细胞含少量黑色素,边缘细胞内无黑色素分布。酪氨酸酶分布于中间细胞Ｇｏｌｇｉ体的分泌面和ＧＥＲＬ囊泡,边缘细胞的基底细胞内无酪氨酸酶分布。结论杂色豚鼠血和纹中间细胞为黑色素细胞,能     

外淋巴钠,钾离子浓度对豚鼠蜗内电位的影响

用全耳蜗外淋巴灌注技术改变豚鼠外淋巴中纳、钾离子浓度,观察其对蜗内电位的影响。实验分高钾、无钾和低纳外淋巴组。经20分钟灌注后,各组豚鼠的蜗内电位均受到显著抑制,其中高钾组的蜗内电位平均下降61%。无钾组的蜗内电位平均下降52%。低纳组的蜗内电位平均下降66%。各组蜗内电位的下降均和外淋巴中纳、钾离子浓度的改变使耳蜗血管纹边缘细胞的纳、钾离子泵受抑制有关。讨论了可能的作用途径。     

盐酸椒苯酮胺通过降低caspase-3表达减轻庆大霉素豚鼠耳蜗损伤

目的研究盐酸椒苯酮胺（PPTA）对庆大霉素耳蜗损伤的保护作用及抗凋亡机制。方法听力正常豚鼠分3组：正常组、GM
组和PPTA组。采用庆大霉素致豚鼠耳蜗损伤模型,PPTA腹腔注射,ABR 分析听力变化,Western blot 检测耳蜗组织中
caspase-3蛋白表达,TUNEL染色、扫描电镜和透射电镜观察形态学改变。结果ABR反应阈：GM组、PPTA组显著高于正常对
照组（P<0.05）,PPTA组显著低于GM组;Western blot测caspase-3的表达：结果表明用药后GM组豚鼠caspase-3表达显著增加
（P<0.001）,PPTA组显著高于正常组但显著低于GM组（P<0.001）;TUNEL、扫描和透射电镜观察见：GM组毛细胞损伤严重,耳
蜗螺旋器、血管纹和螺旋神经节存在大量凋亡细胞形态;而PPTA组耳蜗组织损伤较GM组明显减轻。结论PPTA可以通过降
低caspase-3蛋白表达抑制凋亡,对庆大霉素豚鼠耳蜗损伤起到保护作用。