核苷二磷酸激酶等蛋白在人胰腺癌与癌旁组织中的差异表达

目的 应用比较蛋白质组学方法研究人胰腺导管腺癌组织和癌帝组织之间差异的蛋白质.方法利用双向凝胶电泳(2-DE)对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离,两组间差异蛋白质点用质谱和数据库检索鉴定利用蛋白质印迹分析和免疫组织化学法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达.结果 鉴定出30个差异表达蛋白,包括亲环素A、过氧化氧化还原蛋白1、14-3-3 sigma、Annexin Ⅱ、热休克蛋白27、核苷二磷酸激酶(NDPD)等.差异表达蛋白NDPK在35例胰腺癌组织表达率为77.1%,而配对癌旁组织为28.6%.结论 2-DE为基础的蛋白质学技术是研究肿瘤的一种重要手段.NDPK等差异表达蛋白可能是潜在的胰腺癌诊断标记物.     

人胰腺组织及胰腺癌细胞株蛋白质组的双向电泳分析

目的建立具有高分辨率和稳定性的胰腺癌蛋白质组研究的双向电泳方法.方法取正常胰腺、胰腺癌手术标本和胰腺癌细胞株,分别制备组织、细胞匀浆,提取蛋白质组分,进行双向电泳.结果加大蛋白酶抑制剂,应用两性电解质,可以得到理想的胰腺组织、细胞的蛋白质组分,并获得清晰、重复性良好的双向电泳图谱.结论胰腺组织细胞蛋白质双向电泳中,样本的制备和双向电泳的条件是关键因素.     

胰腺癌组织相关蛋白质分子的差异表达

目的用双向凝胶电泳的方法建立胰腺癌、癌旁组织和正常胰腺组织的蛋白质组二维图谱并分析差异蛋白质点。方法提取人正常胰腺组织、胰腺癌和癌旁组织总蛋白质，双向电泳分离蛋白，比较不同组织中蛋白质表达的差异。每份组织均重复电泳3次。结果在同一份组织的3张银染的凝胶蛋白质图谱上均可辨识1000个左右的蛋白质点，蛋白质点在形状、位置和密度上一致，重复性好。在不同组织之间发现了22个明显差异的蛋白质点，初步确定了其等电点和分子量。正常胰腺组织有一个高表达的蛋白质点，癌和癌旁组织有21个高表达的蛋白质点。结论正常胰腺组织、胰腺癌、癌旁组织蛋白质组二维图谱存在明显的差异，部分差异蛋白质可能具有诊断应用价值。     

胰腺癌组织相关蛋白质分子的差异表达

目的用双向凝胶电泳的方法建立胰腺癌、癌旁组织和正常胰腺组织的蛋白质组二维图谱并分析差异蛋白质点.方法提取人正常胰腺组织、胰腺癌和癌旁组织总蛋白质,双向电泳分离蛋白,比较不同组织中蛋白质表达的差异.每份组织均重复电泳3次.结果在同一份组织的3张银染的凝胶蛋白质图谱上均可辨识1 000个左右的蛋白质点,蛋白质点在形状、位置和密度上一致,重复性好.在不同组织之间发现了22个明显差异的蛋白质点,初步确定了其等电点和分子量.正常胰腺组织有一个高表达的蛋白质点,癌和癌旁组织有21个高表达的蛋白质点.结论正常胰腺组织、胰腺癌、癌旁组织蛋白质组二维图谱存在明显的差异,部分差异蛋白质可能具有诊断应用价值.     

肝癌及癌旁肝组织的高尔基体差异蛋白质分析

目的 筛选并鉴定肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组中差异表达的蛋白质,从高尔基体层面解释肝癌的发生和发展机制,为早期诊断和抗癌药物的研发提供线索.方法 应用亚细胞比较蛋白质组学研究方法,比较分析肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组.收集肝癌患者手术切除的癌组织和癌旁肝组织标本,蔗糖密度梯度离心法分离高尔基体.建立并优化两种组织高尔基体的双向电泳方法,用PD-Quest软件分析差异表达的蛋白质点,然后用质谱仪获取相应蛋白点的肽质指纹图谱,联网到Swiss-Prot蛋白质组数据库鉴定获得的差异蛋白质点,最后用Western blot验证双向电泳结果.蛋白质相对表达量的比较采用配对t检验.结果 获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱.与癌旁肝组织相比,肝癌高尔基体蛋白质组有包括膜联蛋白5在内的27个蛋白质位点表达上调,包括染色体修饰蛋白2b在内的20个蛋白质位点表达下调,初步鉴定出了其中17个蛋白质,并用Western blot从蛋白质水平上验证了双向凝胶电泳结果.结论 肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组具有不同的蛋白质位点,这些差异表达的蛋白质涉及到细胞的能量代谢、肿瘤的侵袭和转移,细胞周期调控等方面,为进一步阐释高尔基体在肿瘤的发生和发展中所起的作用提供了有价值的信息.     

蛋白组学分析胰腺癌干细胞相关差异蛋白的表达

目的:筛选与鉴定胰腺癌干细胞相关的差异表达蛋白质.方法:以MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)为研究胰腺癌干细胞的工具细胞,采用荧光差异双向凝胶电泳技术分离并筛选上述细胞差异表达蛋白,反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱鉴定差异蛋白,免疫印迹验证差异表达的TRIM28.结果:获得了MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)荧光差异蛋白表达图谱,经DeCyder v6.5软件分析,共有23个差异在1.5倍以上的蛋白质点,经质谱鉴定得到19个蛋白质,相对于BxPc-3(TIClow),在MIA-PaCa2(TIChigh)细胞组中高表达者有8个,低表达者有11个,包括参与细胞通讯和信号传导蛋白、免疫反应蛋白、转录因子与细胞周期调控蛋白、调节脂肪细胞分化和脂滴形成蛋白、细胞骨架蛋白、细胞黏附分子、差向异构酶、转运活性蛋白及参与翻译调节相关蛋白.免疫印迹结果显示TRIM28在BxPc-3(TIClow)没有表达,在MIA-PaCa2(TIChigh)高表达.结论:筛选得到的TRIM28等胰腺癌干细胞相关差异表达蛋白可能与胰腺癌干细胞的发生、发展和调控机制相关,有望成为胰腺癌新的治疗靶点.     

甲基化CpG结合蛋白2在胰腺癌及癌旁组织中的表达及临床意义

目的:分析甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)在胰腺癌及癌旁组织中的表达及其对预后的评估价值。方法:采用组织芯片和免疫组织化学染色法检测59例胰腺癌组织和53例癌旁正常胰腺组织中MeCP2的表达,分析MeCP2表达水平与患者临床病理特征的关系,应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox回归法分析MeCP2表达对...     

生长抑素2型受体基因转染对胰腺癌细胞蛋白表达的影响

目的 探讨生长抑素2型受体(hSSTR2)基因转染对胰腺癌细胞PANC1蛋白表达的影响,以寻找新的胰腺癌敏感治疗靶点.方法 利用前期构建的腺病毒载体Ad.CMV.hSSTR2.GFP将hSSTR2全长cDNA导入胰腺癌细胞PANC1.采用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术分离并筛选转染hSSTR2的实验组、空载体对照组以及空白组胰腺癌细胞之间差异表达蛋白,用反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)技术对差异蛋白进行鉴定.结果 hSSTB2成功地转染了胰腺癌细胞,获得了hSSTR2阴性和阳性表达的PANC1荧光差异蛋白表达图谱,经DeCyder v6.5软件分析,共有18个差异在1.3倍以上的蛋白质点,经质谱鉴定得到13个蛋白质.低表达的蛋白7个,为GMP合酶、磷酸化应激诱导蛋白、谷氨酸脱氢酶、Septin-11、波形蛋白、异柠檬酸脱氢酶α亚基、线粒体内膜易位酶;高表达蛋白6个,为真核延长因子1α1、丙酮酸激酶异构体M2型、烯酰-CoA水合酶、转录调节因子1-β、Mitofilin、HSP105.结论 hSSTR2基因转染胰腺癌细胞PANC1后引起蛋白表达发生变化,这些差异蛋白功能涉及到糖、脂肪、核酸代谢以及细胞生长调节和细胞凋亡等,从而为寻找新的胰腺癌敏感治疗靶点奠定基础.     

高迁移率族蛋白1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的研究胰腺癌(PC)组织中高迁移率族蛋白1(High mobjlity group box 1,HMGB1)蛋白表达,并探讨其与癌分化程度、肿瘤大小、浸润、淋巴及血道转移的关系.方法用免疫组织化学SABC方法,检测73例胰腺癌组织、10例癌旁组织、6例正常胰腺组织HMGB1蛋白表达.结果HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达(76.7%),在癌旁组织中仅有微弱表达,正常胰腺组织无表达;HMGB1的阳性率与癌分化程度无关(P＞0.05);与肿瘤的大小、浸润、淋巴及血道转移呈正相关(P＜0.01).结论HMGB1在胰腺癌中呈强阳性表达,可作为胰腺癌生长、转移及预后的重要判定指标.     

AKT2在胰腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨胰腺癌组织中蛋白激酶B（AKT）2的表达及其在胰腺癌发生、发展中的作用。方法 采用免疫组化SABC法检测63例胰腺癌组织和23例胰腺良性病变组织中AKT2的表达,分析其与胰腺癌临床病理因素的关系。结果 AKT2在胰腺癌组织中的阳性表达率为39．7％（25／63）,明显高于胰腺良性病变组织的13％（3／23）,P〈0．05。AKT2表达与胰腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期有关（P〈0．05）。结论 AKT2在胰腺癌组织中表达增高,可能在胰腺癌发生、发展、转移中起重要作用。     

胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎及正常胰腺组织中胰腺上皮内瘤变的比较研究

目的探讨胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中各级别PanIN的发生率以及与临床病理学参数间的关系。方法回顾性研究长海医院2001年1月-2003年12月间外科切除和同期尸检获得的250例胰腺标本中PanIN的发生情况,并联系临床病理指标进行相关分析。结果250例胰腺标本中,有156例存在PanIN病变,发生率62.4％。其中,胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中PanIN的发生率分别为75.6％、46.0％和30.0％,胰腺导管腺癌PanIN发生率明显高于慢性胰腺炎及正常胰腺组织(P<0.01);慢性胰腺炎中高级别PanIN发生率明显高于正常胰腺组织(P<0.05)。PanIN-3仅在胰腺导管腺癌和慢性胰腺炎中见到。胰腺导管腺癌中,有烟酒嗜好和(或)糖尿病者高级别PanIN的发生率53.7％,明显高于对照组29.4％(P<0.01)。PanIN的发生率以61-70岁年龄组为最高。结论胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中PanIN的发生率逐渐增加,程度逐渐加重,支持胰腺癌发生的分子模型。     

肺结核患者外周血单个核细胞蛋白质差异的表达

目的 应用比较蛋白质组学方法筛选出肺结核患者发病免疫相关蛋白质,为阐明结核病的发病的免疫机制和诊断治疗提供理论依据.方法 收集10例肺结核患者和10名健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),采用双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,运用Image Master 2D Elite 5.0图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱获取肽质量指纹图谱,检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,并对差异表达的蛋白质用Western blot进行验证.两组间比较采用秩和检验.结果 建立了重复性良好的肺结核患者和健康志愿者PBMC的双向凝胶电泳图谱,找出14个表达量有明显差异的蛋白质点并鉴定出共12种蛋白质,其中冠蛋白1A等10种蛋白在肺结核组中表达上调,普列克底物蛋白(PLEK)和Ras基因抑制蛋白1(RSU1)在肺结核组中表达下调;Western blot法验证PLEK在肺结核组表达下调,与双向凝胶电泳结果一致.结论 对肺结核患者PBMC的比较蛋白质组学研究鉴定出冠蛋白1A、PLEK等12种差异蛋白质,其中PLEK和冠蛋白1A可能通过对单核巨噬细胞吞噬作用的调节在肺结核发病中起着重要作用.     

胰腺癌患者血清相关蛋白质差异表达的研究

目的 利用肿瘤血清蛋白质组分析方法 (serologic proteome analysis,SERPA)对胰腺癌患者血清和正常人血清进行蛋白质组的分析,寻找胰腺癌特异的肿瘤标记物.方法 利用HPLC柱去除血清中的自蛋白,通过双向电泳分离蛋白质,经图像采集与分析,切取胰腺癌患者血清和正常人血清的差异蛋白质点,进行质谱分析鉴定.结果 共获得4个差异蛋白质.正常人血清含量高而胰腺癌患者血清含量低的蛋白质为胍裂解环化酶激活蛋白2(guanylate cyclase-activating protein 2).胰腺癌患者血清含量高而正常人血清含量低的蛋白质3个,分别为结合珠蛋白2α(haptoglobin 2 alpha)、转甲状腺素蛋白(transthyretin)及KIAA1018蛋白.结论KIAA1018有望成为胰腺癌筛选和早期诊断的肿瘤标记物.     

慢性纤维包块型胰腺炎与胰腺导管腺癌癌旁组织的病理学及免疫组化特征

目的 比较慢性纤维包块型胰腺炎（FMCP）及胰腺导管腺癌（PDAC）癌旁组织基本病理变化特征,试从间质微环境角度探讨FMCP在促进PDAC发生、发展中的可能作用.方法 对48例FMCP及62例PDAC的癌旁组织HE切片进行镜下观察比较,观察内容包括导管上皮内瘤变（PanIN）、导管复合体形成（TC）、纤维结缔组织增生、炎细胞浸润及神经炎等病理变化.免疫组化法检测神经纤维增生和微血管形成状况.结果 FMCP及PDAC癌旁组织中PanlN的发生率分别为97.9％ （47/48）和91.4％ （53/58）,其中PanIN-3在PDAC癌旁组织内发生率为20.8％,显著高于FMCP的4.3％（P=0.031）;TC的发生率分别为58.3％ （28/48）和65.0％ （40/62）,差异无统计学意义（P =0.508）.FMCP促纤维结缔组织增生程度重于PDAC癌旁组织,以中、重度为主（P =0.037）.两种组织的炎细胞浸润程度差异无统计学意义（P=0.754）;神经炎发生率分别为81.3％和66.1％,差异亦无统计学意义（P=0.077）.FMCP及PDAC癌旁组织内细小无髓神经纤维数目明显增加,发生率分别为68.8％ （33/48）和63.3％ （38/60）,200倍视野下计数分别为（12.08±3.72）根和（11.14±4.70）根,差异无统计学意义（P=0.537）;微血管密度（MVD）分别为（39.69±22.88）个和（44.89±16.83）个,差异亦无统计学意义（P=0.605）.结论 FMCP及PDAC癌旁呈现较为相似的病理变化,提示FMCP在PDAC发生、发展过程中提供了可能的微环境,FMCP可能是重要的PDAC癌前病变.     

神经生长因子及其受体在人胰腺导管癌组织中的表达

目的 探讨β神经生长因子(β-NGF)及其受体[酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrKA)和P75NGFR]在人胰腺导管癌组织中的表达及意义.方法 选择胰腺导管癌组织标本80例和正常胰腺组织20例,采用免疫组化、荧光定量PCR等方法,定量检测β-NGF及其受体表达,分析β-NGF)及其受体与临床病理学特征,尤其与神经侵袭的关系.结果 随着癌细胞分化程度降低和肿瘤TNM分期增加,β-NGF、TrKA蛋白表达水平增加,且低分化与高分化、中分化组相比显著增加(P<0.01),Ⅲ～Ⅳ期较Ⅰ～Ⅱ期显著增加(P<0.05);β-NGF、TrKA蛋白表达水平在有神经浸润组明显高于无神经浸润组(P<0.01),有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0.01),且邻近神经组织的肿瘤细胞β-NGF、TrKA阳性程度高于远离神经组织的癌细胞.P75NGFR表达与肿瘤细胞分化程度关系密切.β-NGF和TrKA表达呈正相关.β-NGF、TrKA和P75NGFR mRNA表达水平在胰腺癌组织中明显高于正常胰腺组织,分别增加3.84、4.23和2.41倍.结论 β-NGF及其受体参与介导胰腺癌的发生,与胰腺癌临床病理学特征关系密切,β-NGF、TrKA高表达和胰腺癌嗜神经性关系密切.     

Comparative proteomic analysis of differentially expressed proteins in human pancreatic cancer tissue

BACKGROUND:Pancreatic cancer is one of the most common malignant tumors.Early diagnosis of pancreatic cancer is difficult because of the latent onset and lack of good biomarkers.This study aimed to look for and identify differentially expressed proteins in tissues of pancreatic cancer and adjacent noncancerous tissues by proteomic approaches so as to provide information about possible pancreatic cancer markers and therapeutic targets.METHODS:Proteins extracted from 3 paired adjacent noncancerous and cancero...