哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA表达及其与杀伤性T淋巴细胞平衡间的关系

目的研究转录因子T—bet／GATA-3在小儿哮喘发病以及杀伤性T淋巴细胞Te1／Te2失衡中的作用。方法通过半定量RT-PCR检测38例哮喘患儿（哮喘发作组20例,缓解组18例）及20例正常对照组儿童外周血单个核细胞（PBMC）中T—bet、GATA-3mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Te1、Tc2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Te1、Te2细胞比率进行相关分析,了解T—bet／GATA-3对哮喘患儿的Tc细胞分化的调节作用。结果（1）哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T—bet mRNA表达水平低于正常对照组（0．28±0．03）,其中哮喘发作组（0．14±0．04）显著低于哮喘缓解组（0．21±0．03）（P〈0．05）;转录因子GATA-3mRNA表达水平高于正常对照组（0．37±0．04）,其中哮喘发作组（0．49±0．09）高于哮喘缓解组（0．44±0．08）（P〈0．05）。（2）哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Te1百分率低于正常对照组（31．2±3．8）,其中哮喘发作组（6．6±2．4）又低于哮喘缓解组（14．2±4．3）（P〈0．05）;Tc2细胞百分率高于正常对照组（3．5±1．1）,其中哮喘发作组（10．0±4．2）又高于哮喘缓解组（5．4±2．2）（P〈0．05）。（3）哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Tc1细胞比率呈正相关（r=0．704）,与Tc2细胞比率呈负相关（r=-0．629）;GATA-3mRNA表达量与Tc1细胞比率呈负相关（r=-0．612）,与Tc2细胞比率呈正相关（r=0．673）;T-bet／GATA-3mRNA比值与Tel细胞比率呈正相关（r=0．731）,与Te2细胞比率呈负相关（r=-0．642）,与Te1／Te2比值呈正相关（r=0．773）。结论哮喘患儿T—bet／GATA-3mRNA表达水平失调,与哮喘患儿的T细胞呈现Te2优势分化密切相关。     

川崎病患儿血清可溶性血管细胞黏附分子-1、肿瘤坏死因子-α水平变化的意义

目的探讨可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在川崎病（KD）发病中的意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）分别测定确诊为KD34例患儿急性期血清sVCAM-1、TNF-α水平,测定其中32例恢复期患儿血清sVCAM-1、TNF-α水平,26例健康儿童为健康对照组。结果KD组血清急性期sVCAM-1、TNF-α[（97.8±35.6）、（73.9±21.7）μg/L]均高于健康对照组[（41.2±8.9）、（2.7±1.8）μg/L],差异有显著性（Pa〈0.01）;KD患儿恢复期血清sVCAM-1、TNF-α水平[（46.9±16.8）、（4.3±2.9）μg/L]下降显著与急性期比较差异有显著性（Pa〈0.01）;而KD恢复期患儿与健康对照组无显著差异（P〉0.05）,且sVCAM-1与TNF-α呈正相关（r=0.798P〈0.001）。结论sVCAM-1、TNF-α可能参与KD发病的病理过程,血清sVCAM-1、TNF-α检测有助于对KD病情发展作出判断。     

碱性成纤维细胞生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的保护作用。方法7日龄新生Wistar大鼠96只,制备HIBD模型,随机分为生理盐水对照组和bFGF治疗组;另取48只为假手术组。通过免疫组化方法检测三组大鼠（每组40只）不同时点（术后第4、7、10、17、24天）海马CA1区巢蛋白（Nestin）、生长相关蛋白（GAP-43）的表达。各组余8只大鼠于生后30d开始进行Morris水迷宫测试,观察其学习记忆功能。结果（1）Nestin表达：对照组术后第4、7、10、17、24天Nestin阳性细胞数（9．51±1．45、11．35±1．87、17．124-2．13、11．17±1．11、2．92±1．02）较假手术组（6．17±1．85、4．92±1．88、3．75±1．22、3．08±1．20、2．83±1．12）增加,治疗组各时点Nestin阳性细胞数（14．83±1．75、19．17±1．69、24．50±1．45、28．33±1．67、16．17±1．69）增加较对照组更明显,三组各时点比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）GAP-43表达：三组新生鼠GAP-43表达均于术后第10天达高峰,积分光密度值对照组术后第4、7、10、17、24天（9．35±1．10、12．94±1．01、14．29±1．21、13．28±1．26、6．51±0．99）较假手术组（7．88±1．27、11．75±1．30、13．06±1．54、11．79±1．18、4．66±0．91）均升高,治疗组（10．63±1．02、13．98±0．79、15．11±0．89、14．60±1．28、7．40±1．08）升高更明显,三组各时点比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）对照组逃避潜伏期（51．75±11．27s）较治疗组（40．32±11．48s）和假手术组（36．58±10．83s）明显延长（P〈0．05）;对照组拆除平台后跨越平台的次数（2．34±2．42次）较治疗组（5．08±3．86次）和假手术组（7．03±3．62次）明显减少（P〈0．05）;治疗组与假手术组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论（1）新生鼠HIBD后海马CA1区Nestin、GAP-43的表达增加,可能与脑损伤后神经再生和轴突重塑有关;（2）bFGF可明显改善大鼠HIBD后的学习记忆能力;（3）外源性bFGF可增强新生鼠脑缺氧缺血后损伤区Nestin、GAP-43的表达,在神经细胞损伤的修复中发挥一定的保护作用。     

儿童CagA+幽门螺杆菌感染根治前后胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡和P53蛋白水平表达的对比研究

目的研究幽门螺杆菌（Hp）感染胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡和突变型P53蛋白水平的表达情况,以及Hp感染根除治疗前后胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡指数变化。方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术（TUNEL）以及PCNA免疫组织化学法对30例CagA^＋Hp感染患儿和30例Hp阴性患儿胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡情况进行比较,同时对突变型P53基因蛋白的表达情况进行检测。CagA蛋白抗体的检测采用Western Blot2．1免疫印迹法。结果CagA^＋Hp感染组胃黏膜上皮细胞增殖指数为11．56％±4．21％,较Hp阴性组（5．85％±2．21％）高（t=7．57,P〈0．01）;凋亡指数CagA^＋Hp感染组（10．58％±5．31％）较Hp阴性组（2．86％±0．64％）高（t=8．096,P〈0．01）。30例CagA^＋Hp感染组有28例完成了三联药物的Hp根除治疗,2例失访,其中21例根除,7例未根除;21例cagA’Hp感染根除治疗后,胃黏膜上皮细胞增殖指数治疗前为（11．50％±4．11％）,治疗后为（6．30％±3．26％）（t=3．968,P〈0．01）。凋亡指数治疗前为（10．58％±4．02％）,治疗后为（3．74％±2．30％）（t=6．69,P〈0．01）。7例未根除治疗患儿胃黏膜上皮细胞增殖指数及凋亡指数变化无统计学意义。cagA’Hp感染组胃黏膜上皮细胞P53阳性表达率63％（19／30）;在P53阳性表达中,轻度2例,中度8例,重度9例。Hp阴性组胃黏膜上皮细胞P53阳性表达率16％（5／30）,均为轻度表达。CagA^＋Hp感染组P53阳性表达率高于Hp阴性感染组（X2=6．805,P〈0．01）。结论CagA^＋Hp感染可引起胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡的变化,使黏膜增殖、凋亡动态失衡,黏膜的不稳定性增加,突变型P53基因蛋白异常表达可能参与此过程的调控。     

黄芪对哮喘大鼠肺组织信号转导子和转录激活子4表达的调控

目的观察黄芪对大鼠哮喘模型肺组织信号转导子和转录激活子4（STAT4）蛋白及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组：正常对照组、哮喘组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组,每组10只鼠。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行嗜酸性粒细胞（EOS）计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4和IL-12浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT4蛋白和STAT4 mRNA的表达。结果（1）哮喘组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比[（EOS％）（35．8±7．3）×10^7／L,（8．20±1．75）％]均显著高于正常对照组[（1．5±1．0）×10^7／L,（0．70±0．48）％]（P〈0．01）,黄芪组上述指标[（14．9±2．4）×10^7／L,（4．70±0．82）％;（11．0±1．8）×10^7／L,（3．56±0．53）％]均低于哮喘组（P〈0．01）;（2）BALF中IL-4浓度（ng／L）哮喘组（25．70±7．36）显著高于对照组（8．55±2．97）（P〈0．01）,黄芪组[（13．87±3．61）,（11．67±3．05）]均显著低于哮喘组（P〈0．01）;BALF中IL-12浓度（ng／L）哮喘组（16．10±3．38）显著低于对照组（42．33±9．66）（P〈0．01）,黄芪组[（31．89±5．46）,（35．26±6．03）]均显著高于哮喘组（均为P〈0．01）;（3）免疫组化和原位杂交显示,哮喘组肺组织STAT4蛋白和STAT4 mRNA表达的强度[（0．096±0．012）,（0．098±0．011）]均低于对照组[（0．216±0．034）,（0．228±0．032）],黄芪组[（0．176±0．012）,（0．185±0．023）;（0．183±0．011）,（0．201±0．019）]较哮喘组均明显升高（均为P〈0．01）,其主要表达细胞是气道平滑肌细胞和肺细小动脉的血管平滑肌细胞及内皮细胞;（4）肺组织中STAT4及其mRNA表达分别与BALF中的IL-12浓度呈显著正相关（r=0．897、0．910,P〈0．01）;而与BALF中的IL-4浓度、EOS数量均分别呈显著负相关[（r=-0．693、-0．668,P〈0．01）,（r=-0．891、-0．897,P〈0．01）]。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,上调气道平滑肌细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞STAT4蛋白及其mRNA表达,使IL-12合成增加可能为其作用机制。     

儿科重症监护病房呼吸机撤离失败的危险因素

目的分析PICU机械通气（MV）患儿撤机失败率及其相关危险因素。方法对2005年1月-2007年6月本院PICU收治的317例MV患儿临床资料行回顾性分析。撤离呼吸机48h内再次予以辅助通气者判定为撤机失败。结果183例按计划撤机。其中166例撤机成功，17例失败，撤机失败率9．29％（95％CI为5．08％～13．50％）。≤6个月患儿撤机失败率较〉6月龄明显升高（13．4％vs4．7％P〈0．05）。撤机前MV时间≤24h者撤机失败风险明显低于〉24h者（3．2％vs12．5％P〈0．05）。撤机失败者总MV时间[（17．8±15．2）dvs（6．0±8．7）d]、住PICU时间[（32．7±22．0）dvs（14．5±17．0）d]及总住院时间[（41．7±23．8）dvs（28．7±25．3）d]与撤机成功者比较均明显延长（Pa〈0．05），死亡率增高（23．5％vs6．0％P〈0．05）。造成撤机失败是多因素的，其中撤机后喉水肿所致最常见。多因素Logistic回归分析显示，并呼吸道狭窄（OR为4．7，95％CI为1．37～16．25）、撤机后吸气性喘鸣发生（OR为5．64，95％CI为1．69～18．84）是预示撤机失败的独立危险因素。中枢神经系统疾病患者易发生撤机延误。结论儿科医师应重视患儿自主呼吸能力的全面评估，对撤机困难者应积极查找潜在的合并症，进一步开展呼吸力学监测、新的智能通气模式，将有助于呼吸机平稳及时撤离。     

Toll样受体信号途径活化在川崎病免疫发病机制中的作用

目的探讨Toll样受体(TLR s)信号途径在川崎病(KD)免疫发病机制中的作用。方法急性期KD患儿16例,正常同年龄对照组16例。KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检,未加任何体外丝裂原刺激培养。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测外周血单个核细胞TLR s 1~10,MD-2,MyD88,IL-1,βIL-6及IL-8 mRNA的表达;流式细胞术分别检测单核/巨噬细胞表面TLR s 2、4及共刺激分子CD80、CD86的表达。结果(1)急性期KD患儿TLR4 mRNA及蛋白表达均显著高于正常同年龄对照组[Real-tim e PCR(325.22±50.34)vs.(2.20±0.23),P<0.01);流式细胞术检测(15.96±5.94)%vs.(3.21±0.62)%,P<0.01],其他TLR表达无明显改变;(2)TLR4传导途径相关因子MD-2及MyD88亦明显增高(P<0.01),IVIG治疗后有不同程度下降;(3)急性期KD患儿组单核/巨噬细胞表面共刺激分子及前炎症细胞因子表达亦明显增高(P<0.01)。结论急性期KD患儿TLR4及其相关分子MD-2、MyD88异常增高,提示TLR4异常活化可能是KD免疫功能紊乱的始动因素之一。     

未成熟大鼠缺氧缺血性脑白质损伤中F-actin及RhoA变化

目的研究丝状肌动蛋白（filament actin,F-actin）和RhoA在未成熟大鼠缺氧缺血（hypoxic-ischemia,HI）性脑白质损伤（white matter damage,WMD）中的变化,探讨两者作用及可能存在的关系。方法2日龄SD大鼠（n=184只）随机分为14组：7个时段WMD组（HI后12、24、48、72h,7、14、28d）和7个相应时段对照组。采用Back方法制作WMD动物模型。HE染色观察脑组织病理学变化,电镜观察超微结构改变。采用荧光免疫组织化学方法（n=80只）和实时荧光定量PCR（n=80只）分别观察HI后12、24、48、72h,7d脑组织中F—actin和RhoA的变化。结果（1）光镜和透射电镜检查脑组织,符合WMD的病理及超微结构也改变。（2）WMD组胞膜荧光染色不连续细胞百分比与对照组相比明显增高（P〈0．05）,WMD组分别为0．32±0．04,0．43±0．04,0．56±0．03,0．65±0．04,0．87±0．03;对照组为0．02±0．01,0．02±0．01,0．01±0．01,0．02±0．01,0．02±0．01。（3）WMD组RhoAmRNA表达在HI后12、24、48、72h均明显高于对照组（P〈0．05）,WMD组分别为1．205,2．415,4．830,1．500;对照组为0．300,0．375,0．375,0．530。HI后7dWMD组RhoAmRNA表达接近对照组（P〉0．05）。结论（1）2日龄未成熟大鼠WMD模型建立成功。（2）HI后,F-actin在细胞内分布发生变化：细胞膜上分布减少,胞浆中分布增高,该变化可能与神经细胞生长锥的塌陷和回缩有关。（3）WMD中RhoA可能在一定程度上参与了F-actin分布表达的变化,但并不是影响F-actin的惟一因素。     

新生鼠窒息后心肌基质金属蛋白酶活性与心肌损害的相关性

目的探讨新生鼠窒息后心肌组织心肌基质金属蛋白酶（MMPs）表达与心肌损害的相关性。方法60只7—10日龄Wistar鼠,随机分成对照组（D组）、窒息组（A、B、C3组,分别为窒息复氧后1、7、14d）,每组15只。窒息组模拟新生鼠常压窒息模型,测定cTnI水平;心肌组织MMPs-3、9活性;心肌病理积分及胶原含量。结果cTnI（ng／m1）A组（0．3680±0．40）明显高于D组（0．0783±0．06）P〈0．05,B组下降（0．1889-i-0．15）P仍〈0．05,C组降至正常（0．1338±0．07）P〉0．05;心肌组织MMPs-3活性A组（0．1847±0．04）,B组最高（O．2780±0．05）,C组（0．2014±0．05）,与D组（0．1213±0．03）比较P均〈0．05;MMPs-9活性A、B、C组逐渐增高（0．1502±0．01、0．1715±0．01、0．1868±0．03、P均〈0．05）;心肌胶原含量A、B、C组逐渐增高（35．59±1．09、38．94±0．67、40．69±0．75ng／ml分别为P〉0．05、P〈0．05、P〈0．05）;MMPs-3、9表达与心肌病理积分呈正相关（r分别为0．669、0．667,P均〈0．05）,与胶原含量呈正相关（r分别为0．482、0．679,P均〈0．05）。结论新生鼠窒息后心肌MMPs-3、9过度激活,继发胶原含量增高,MMPs-3、9活性与心肌病理损害密切相关。提示MMPs参与了窒息后心肌损害,可能是心肌间质重塑的因素之一。     

黄芪甲甙治疗Balb/c小鼠慢性柯萨奇B3病毒性心肌炎的疗效

目的观察黄芪甲甙对实验性小鼠柯萨奇B3病毒（CVB3）性心肌炎的疗效。方法Balb／c小鼠80只随机分为模型组（30只）、干预组（30只）、对照组（20只）。模型组和干预组小鼠1次／月腹腔接种CVB3，共3个月；对照组腹腔注射等容积不含病毒的培养液。对照组和模型组小鼠每日以饮用水喂养，干预组小鼠以加有羧甲基纤维素钠助溶的黄芪甲甙饮用水（质量浓度为300mg／L）喂养，观察小鼠生存率。3个月后处死所有存活小鼠，HE染色进行心肌病理检查、苦味酸天狼星红胶原染色后以自动图像分析系统计算胶原容积积分（CVF），采用原位末端标记法检测其心肌细胞凋亡指数，半定量反转录聚合酶链反应进行心肌CVB3 RNA和心肌组织凋亡检测。结果模型组生存率为59．7％，干预组生存率为76．7％，二组比较有显著性差异（χ^2=4．26P〈0．05）；模型组与干预组病理积分分别为（3．86&#177;0．47）、（1．72&#177;0．56），二组比较有显著性差异（t=4．21 P〈0．01）；模型组与干预组CVF分别为（17．4&#177;1．2）％、（8．6&#177;0．9）％，二组比较有显著性差异（χ^2=5．38P〈0．05）；模型组与干预组心肌细胞凋亡指数分别为（19．6&#177;5．2）％、（4．3&#177;2．5）％，二组比较有显著性差异（χ^2=35．16 P〈0．01）。干预组心肌组织中CVB3 RNA水平与模型组比较有非常显著的统计学意义[（0．69&#177;0．38）vs（1．24&#177;0．57），t=4．26 P〈0．01]。结论黄芪甲甙可能成为一种有效的治疗Balb／c小鼠慢性CVB3心肌炎的药物。     

川崎病Toll样受体信号途径调节因子变化及其意义

目的 探讨急性期川崎病(KD)Toll样受体(TLRs)信号途径调节因子的变化及意义.方法 急性期KD患儿48例,正常同年龄对照组儿童(对照组)16例,感染性疾病对照组(ID组)16例.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测外周血单核/巨噬细胞(MC)TLR4信号途径传导分子,调节因子及前炎症细胞因子mRNA的表达;流式细胞术检测MC TLR4的表达.结果 (1)急性期KD患儿TLR4、髓样分化蛋白2(MD-2)、髓样分化蛋白88(MyD88)、白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK-4)、肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF6)、转化生长因子-β-活化激酶1(TAK1)、TAK结合蛋白1(TABl)和TAK结合蛋白2(TAB2)mRNA表达明显高于对照组(P＜0.05);(2)KD患儿及ID组患儿MC正性调节因子TLR4相关蛋白(PRAT4B)和信号转导接头蛋白2(STAP2)表达明显高于对照组(P＜0.05),两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);KD患儿DAP12基因表达明显低于对照组(P＜0.05),FLN29、RP105及MD-1 mRNA表达上调(P＜0.05),4种负性调节因子均显著低于ID组(P＜0.05);KD患儿前炎症细胞因子表达明显高于ID组(P＜0.05);(3)体外细菌脂多糖(LPS)刺激后KD患儿及对照组正性调节因子mRNA表达显著上调,对照组负性调节因子表达上调(P＜0.05),KD患儿除DAP12表达上调外(P＜0.05),FLN29、RP105及髓样分化蛋白1(MD-1)刺激前后无明显变化(P＞0.05);(4)KD合并冠状动脉损伤组(KD-CAL+组)MC正性调节因子PRAT4B和STAP2表达明显高于无冠状动脉损伤组(KD-CAL-组)(P＜0.05);KD-CAL+组负性调节因子FLN29、RP105和MD-1表达显著低于KD-CAL-组(P＜0.05);KD-CAL+组前炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及CD14+细胞表面TLR4蛋白表达高于KDCAL-组[(11.9±2.4)%vs.(6.5±1.7)%,P＜0.05].结论 急性期KD患儿TLRs信号途径负性调节因子调控失衡可能是导致KD免疫功能紊乱的因素之一.     

942例川崎病的临床分析

目的总结川崎病（Kawasaki disease,KD）的临床特征,探讨KD预后与治疗的关系。方法回顾性分析2000年1月—2004年12月期间942例住院KD患儿的临床资料：（1）比较典型KD与不完全性KD（incomplete KD）的临床特征;（2）总结KD对静脉注射免疫球蛋白（intravenous immune globulin,IVIG）治疗无反应的影响因素;（3）随访观察其中的510例KD患儿,比较IVIG 1g／kg和2g／kg治疗的远期疗效。结果（1）942例中,典型KD774例,不完全性KD168例。不完全性KD冠状动脉病变（coronary artery lesion,CAL）发生率较高（P〈0．05）,除肛周脱屑外,其他临床症状发生较少,出现较晚（P〈0．05或0．01）;（2）与IVIG治疗反应敏感组比较,IVIG治疗无反应组的发热时间较长,血红蛋白（Hb）、白蛋白（ALB）、血细胞比容（Hct）及血小板（PLT）较低（P〈0．05或0．01）;（3）WIG 1g／kg和2g／kg治疗组在KD发病后2年内,CAL的恢复率及新发生率,两组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论（1）不完全性KD的CAL发生率较高,肛周脱屑可以作为不完全性KD的早期诊断依据之一;（2）急性期发热时间较长,PLT无升高及Hb、Hct、ALB持续降低是IVIG治疗无反应的影响因素;（3）IVIG 1g／kg和2g／kg治疗KD的疗效在KD发病后2年内相似。     

急性期川崎病γ干扰素组蛋白乙酰化改变及意义初探

目的探讨急性期川崎病(KD)患儿IFN-γ组蛋白乙酰化改变及其在KD免疫发病机制中的作用。方法以2015年2月至2016年6月深圳市儿童医院诊断并住院治疗的KD患儿为KD组,经IVIG治疗后为KD-IVIG组,KD组依冠状动脉有无损伤分为冠状动脉损伤(KD-CAL+)亚组和无冠状动脉损伤(KD-CAL-)亚组,于IVIG治疗前、后取血备检;同期体检的健康儿童为对照组。采用染色质免疫共沉淀法检测外周血CD4+T细胞IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平及组蛋白乙酰化酶p300和去乙酰化酶HDAC1/2结合水平;流式细胞术检测外周血CD4+IFN-γ+细胞(Th1)比例及IFN-γ、p STAT4、p STAT5和T-bet蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测CD4+T细胞IFN-γ、IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和ITLR4m RNA表达;ELISA检测外周血浆中IL-12、IL-2和IL-18浓度。结果 1KD患儿38例(男20例),年龄1~5.2岁;KD-CAL+亚组16例,KD-CAL-亚组22例。对照组32例(男17例),年龄1.2~4.9岁。KD组和对照组年龄、性别差异无统计学意义。2急性期KD患儿Th1细胞比例、IFN-γm RNA和蛋白表达及其组蛋白乙酰化水平显著高于对照组(P0.05),且KDCAL+亚组高于KD-CAL-亚组(P0.05),经IVIG治疗后明显恢复(P0.05)。3急性期KD患儿CD4+T细胞IFN-γ组蛋白乙酰化酶p300结合水平显著增加(P0.05),HDAC1/2结合水平明显降低(P0.05),p300/HDAC1/2明显高于对照组且与IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平呈正相关(r=0.52;P0.05),经IVIG治疗后均有所恢复(P0.05)。其中KD-CAL+亚组p300结合水平及p300/HDAC1/2比值均高于KD-CAL-亚组(P0.05),而HDAC1/2结合水平则低于后者(P0.05)。4急性期KD患儿血浆IL-2、IL-12和IL-18浓度显著增高(P0.05),CD4+T细胞表面受体IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和TLR4及其下游信号分子p STAT5、p STAT4、T-bet和My D88表达明显上调(P0.05),且KD-CAL+亚组前述各项均高于KDCAL-亚组(P0.05),经IVIG治疗后均有不同程度恢复(P0.05)。结论 IFN-γ组蛋白过度乙酰化可能是导致急性期KD患儿免疫功能紊乱的重要因素之一。     

CD69和CD25及HLA-DR在川崎病患儿外周血T淋巴细胞中表达的研究

目的研究急性期川崎病(Kawasaki disease,KD)患者外周血CD3+T淋巴细胞中CD69、CD25及HLA-DR的表达水平.方法采用多色流式细胞仪对31例KD急性期、8例KD急性期和恢复期的外周血CD3+T淋巴细胞及其活化标志进行了分析,并以17名正常儿童外周血作为对照.KD组男16例,女15例;年龄4～60个月,平均(26±18)个月.确诊后给予大剂量丙种球蛋白及阿司匹林治疗,丙种球蛋白剂量1g/(kg·d),连续2 d,阿司匹林剂量30～50 mg/(kg·d).丙种球蛋白不反应者(1)重复使用大剂量丙种球蛋白;(2)加用甲泼尼龙20mg/(kg·d),连续3 d.对照组男9名,女8名;年龄3～84个月,平均(25±18)个月.川崎病自身对照组8例,其中男5例,女3例;年龄21～42个月,平均(30±7)个月.结果KD急性期CD3+T淋巴细胞百分数明显低于恢复期及正常对照组,早期(CD69+)、中期(CD25+)活化率明显高于恢复期及正常对照组,丙种球蛋白治疗后,这些活化标志的百分率明显降低(P＜0.01).KD组中冠状动脉改变与冠状动脉正常两组外周血CD3+T淋巴细胞及其活化标志的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论CD3+T淋巴细胞早、中期活化是KD时心血管组织损伤的重要机制.     

P选择素及E选择素在小儿川崎病血管损伤中的作用机制及其意义

目的探讨P选择素(P-selectin, PS)、E选择素(E-selectin, ES)在小儿川崎病血管损伤中的作用机制,寻找其与冠状动脉(简称冠脉)损伤之间直接关系的依据.方法应用酶联免疫吸附实验(ELISA)双抗体夹心法、放免法检测36例川崎病(KD)患儿、20例发热疾病患儿、30例健康对照组儿童的PS、ES、血栓素(TXB2)、6酮前列腺素F1α(6-KPGF1α),并将KD患儿分为急性期、亚急性期、恢复期;有冠脉损伤(CAL)组与无冠脉损伤(NCAL)组,根据初始应用静脉丙种球蛋白(IVIG)48小时是否热退分为IVIG有效组与IVIG无效组.结果 KD患儿组的PS、ES急性期[ (211±28、186±14)ng/ml ]、亚急性期[(238±27、151±13)ng/ml]和恢复期[(198±21、100±9) ng/ml]均高于健康对照组 [(102±36、72±10)ng/ml],差异有显著性(P<0.01);治疗后PS仍维持较高水平,但IVIG有效组PS、ES下降与急性期相比差异有显著性(P<0.01);CAL组PS、ES[(281±78、210±52)ng/ml]水平明显高于NCAL组[(217±15、108±10)ng/ml,P<0.01 ],IVIG有效组PS、ES水平治疗后2周比治疗后1周降低,差异有显著性(P<0.01),IVIG无效组PS水平治疗后2周仍高于治疗后 1周,但差异无显著性(P>0.05);治疗后1周IVIG无效组与IVIG有效组PS水平未降低,差异无显著性(P>0.05);治疗后2周IVIG无效组PS、ES水平仍显著高于IVIG有效组(P<0.01),差异有显著性,PS的高峰期在亚急性期.KD患儿急性期TXB2水平显著升高,与健康对照组相比差异有显著性(P<0.01),亚急性期与正常组、CAL与NCAL组间差异无显著性(P>0.05),治疗后TXB2水平迅速降低;6-KPGF1α急性期、亚急性期、恢复期水平显著低于健康对照组(P<0.01);治疗后2周仍未达正常水平,CAL与NCAL组间差异无显著性(P>0.05);发热疾病组急性期PS、ES水平与健康对照组相比差异无显著性(P>0.05);KD组患儿ES与CRP水平差异有极显著性(r＝0.79 ,P<0.01),发热疾病组ES与CRP水平差异无显著性,KD组患儿PS与血小板计数(PLT)水平差异有极显著性(r＝0.75 ,P<0.01),发热疾病组PS与PTL差异无显著性.结论 PS、ES水平在KD患儿组急性期和亚急性期升高可能在川崎病患儿血管损伤的病理生理发生机制中起重要作用,PS、ES具有预示KD患儿CAL潜在的可能性.     

新生大鼠缺氧缺血性脑病模型脑组织新生血管形成及调控因素

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型脑组织新生血管形成及调控因素.方法 68只新生大鼠建立HIE模型组(44只)或行假手术组(24只).两组缺氧后1、3、7和14天各处死5只大鼠,用免疫组化方法检测脑组织内皮细胞、增生细胞核抗原和血管内皮生长因子(VEGF).模型组的其余24只新生大鼠建立HIE模型,于缺氧后3、12h,1、3、7和14d各处死4只大鼠,取缺氧缺血侧脑组织液氮速冻,用于提取RNA.假手术组的其余4只正常新生大鼠作假手术处理后即刻处死提RNA做正常对照.分析缺氧缺血侧脑组织毛细血管密度(BCDI)、增生毛细血管密度和VEGF表达.用RT-PCR检测VEGF和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA表达.结果模型组缺氧缺血侧脑组织坏死灶周围BCDI在第3天开始上升,并持续增加;BCDI显著高于假手术组(第14天13.29±3.90条/HPF vs 6.08±1.50条/HPF,P＜0.01).正常新生大鼠脑组织偶见增生毛细血管,而模型组缺氧缺血侧脑组织增生毛细血管密度在第3、7天(0.54±0.15条/HPF和0.90±0.25条/HPF)显著高于假手术组(0.12±0.05条/HPF和0.13±0.07条/HPF,P＜0.01).VEGF主要由神经元、毛细血管内皮细胞和软膜细胞等细胞表达.缺氧缺血后脑组织VEGF mRNA表达上调,12h时VEGF mRNA表达显著高于正常(1.56±0.27 vs 0.95±0.21, P＜0.05);HIF-1α mRNA表达上调先于VEGF,3h时HIF-1α mRNA表达即显著高于正常(1.07±0.21 vs 0.64±0.28, P＜0.05).结论新生大鼠HIE模型脑组织有新生血管形成; HIF-1介导的VEGF表达上调在此过程中可能起重要作用.     

血清sIL-2RIL-6与hs-CRP水平的测定在川崎病早期诊断中的临床意义

目的：研究表明川崎病(Kawasakidisease,KD)异常的免疫激活可导致免疫性血管炎。该研究的目的在于探讨川崎病患儿血清可溶性白细胞介素2受体(soubleinterleukin-2receptors,sIL-2R)及白细胞介素-6(in-terleukin-6,IL-6)水平在川崎病早期诊断中的临床意义。方法：收集实验组32例川崎病患儿急性期静脉注射丙种球蛋白(intravenousgammaglobulin,IVIG)前、后及对照组20例外周静脉血,ELISA双抗体法测定血清sIL-2R,IL-6含量,同时检测血清超敏C-反应蛋白(high-sensitiveC-reactiveprotein,hs-CRP)含量。结果：川崎病患儿急性期用IVIG前及用IVIG后血清sIL-2R和hs-CRP含量均较正常儿童显著增高(P<0.05);IVIG用前较用后血清sIL-2R和hs-CRP含量同样有显著增高(P<0.05);IVIG前川崎病患儿血清IL-6水平较正常儿童显著增高(P<0.05)。川崎病患儿血清sIL-2R与hs-CRP水平呈正相关(r=0.60,P<0.01);IVIG前血清IL-6与hs-CRP水平呈正相关(r=0.68,P<0.01)。结论：sIL-2R,IL-6与hs-CRP在川崎病血管炎的病理过程中显著激活,血清sIL-2R与IL-6及hs-CRP水平增高有助于川崎病早期诊断,评估患儿免疫状况。     

川崎病患儿外周血单个核细胞基质细胞衍生因子-1和其受体的变化及意义

目的：观察川崎病(KD)患者血浆基质细胞衍生因子1(SDF1)水平及外周血单个核细胞(PBMC)中SDF1的受体CXCR4mRNA表达变化,并分析其与KD及冠状动脉损害的相关关系。方法：采用ELISA方法及荧光定量PCR技术分别测定12例合并冠脉损害和44例无冠脉损害KD患者的急性期与缓解期血浆SDF1浓度及PBMC中CXCR4mRNA表达变化,并与60例正常人比较。结果：KD患者急性期血浆SDF1蛋白水平为1833±395ng/L;PBMC中CXCR4mRNA表达水平为6.57±2.81较对照组升高(P<0.05,P<0.01);缓解期血浆SDF1蛋白和CXCR4mRNA表达水平较急性期下降(P<0.01),但仍显著高于对照组。KD患者合并冠脉损害者PBMC中CXCR4mRNA表达为8.19±2.39,显著高于无冠脉损害者的6.13±2.77(P<0.01)。结论：KD患者血浆SDF1水平及PBMC中CXCR4mRNA表达是增高的,有可能作为判断KD病情活动状态及冠脉损害的免疫学指标。     

盐酸二甲双胍改善代谢综合征青少年脂联素水平和胰岛素敏感性的研究

目的观察盐酸二甲双胍治疗青少年代谢综合征(MS)前后血清脂联素水平和胰岛素敏感性的变化。方法对348例(男208例,女140例)7~16岁[(11.47±2.12)岁]中、重度肥胖青少年进行体检和生化检测、口服葡萄糖耐量试验,检出其中符合MS诊断标准的36例,设为MS组,无生化检测异常的单纯性肥胖61例,设为单纯肥胖组。另设24例非肥胖青少年为对照组。对三组进行总体胰岛素敏感指数、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和血清脂联素等的比较。对MS组患儿中20例给予连续口服盐酸二甲双胍治疗3个月,观察治疗前后的HOMA-IR和血清脂联素、生化指标的变化。结果(1)HOMA-IR水平由低到高依次为对照组、单纯性肥胖组、MS组;胰岛素敏感指数和血清脂联素水平排序正好相反;HOMA-IR、胰岛素敏感指数和血清脂联素在3组间比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(2)连续应用盐酸二甲双胍治疗满3个月的20例MS患儿:HOMA-IR下降[治疗前5.7(1.9~12.4),治疗后2.9(0.9~7.4),t=5.05,P<0.01],血清脂联素上升[治疗前(3.0±0.9)mg/L,治疗后(6.1±1.9)mg/L,t=6.19,P<0.01],血压、2 h血糖、甘油三酯、胆固醇、肝酶均有不同程度下降,治疗前后比较,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论MS青少年脂联素水平和胰岛素敏感性比单纯性肥胖更低;应用盐酸二甲双胍治疗后MS青少年的脂联素水平上升,胰岛素敏感性改善,临床多项指标好转。