乌司他丁对缺血诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的 研究乌司他丁是否能够抑制缺血诱导的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)凋亡。 方法 采用25只SPF级C57BL/6J雄性大鼠为研究对象,将大鼠随机平均分为正常对照组、缺血模型组、乌司他丁组、乌司他丁+AKT通路抑制剂组、乌司他丁+ERK通路抑制剂组,其中正常对照组不进行任何前处理;缺血模型组仅进行缺血处理;乌司他丁组、乌司他丁+AKT通路抑制剂(LY294002)组、乌司他丁+ERK通路抑制剂(PD98059)组,每组大鼠在缺血处理BMSC前,分别加入乌司他丁、乌司他丁+LY294002、乌司他丁+PD98059预处理1 h,然后在药物作用下再进行缺血处理。乌司他丁浓度为500 U/ml。 结果 培养6 h后,细胞凋亡比例显著高于培养3 h时,其余相邻时间点之间无显著差异。正常对照组凋亡率与缺血模型组凋亡率之间差异具有统计学意义,缺血模型组大鼠caspase-3显著高于正常对照组。乌司他丁+AKT通路抑制剂组与乌司他丁+ERK通路抑制剂组大鼠caspase-3水平均显著高于乌司他丁组,且乌司他丁+AKT通路抑制剂组大鼠caspase-3水平显著低于乌司他丁+ERK通路抑制剂组大鼠(t=3.289,P=0.046)。 结论 培养6 h效率最高,较适宜作为最佳缺血时间。乌司他丁能够有效抑制大鼠BMSC凋亡。乌司他丁通过ERK抑制通路发挥作用更优于AKT通路。      

比伐卢定对大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的 探讨比伐卢定(直接凝血酶抑制剂)在大鼠胰岛分离过程中保护胰岛细胞的作用.方法 将SD大鼠分为比伐卢定处理组和对照组,处理组在胰岛分离全过程中加用比伐卢定进行干预,对照组则不加比伐卢定处理,采用Ficoll非连续密度离心纯化后对两组胰岛细胞的凋亡(采用原位末端核苷酸标记法及流式细胞仪检测)、胰岛产量及活力方面进行比较性研究.结果 比伐卢定5000U处理组的胰岛细胞凋亡计数(5±4)个/HPF、凋亡率(16.5±3.6)％、Fas-1基因表达水平(4.6±1.9)％均显著低于对照组(P＜0.01),胰岛产量(315.3±6.1)IEQ、胰岛素释放水平(179.11±2.18)mIU/L和Bcl-2基因表达水平(10.5±1.2)％均显著高于对照组(P＜0.01),差异有统计学意义.结论 胰岛分离过程中加用比伐卢定对胰岛具有抑制凋亡、提高胰岛产量和保护胰岛活力的作用.     

乌司他丁对异氟烷介导的大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨乌司他丁预处理对异氟烷介导的大鼠海马神经元线粒体途径凋亡的影响及可能的机制。方法36只SD雄性 大鼠随机分为对照组、异氟烷组和乌司他丁组,每组12只。对照组不给与任何处理,异氟烷组和乌司他丁组采用0.75%异氟烷 急性暴露6 h,而乌司他丁组在采用0.75%异氟烷急性暴露前,先给与50000 U/kg乌司他丁预处理。以TUNEL染色检测细胞凋 亡,JC-1探针检测线粒体膜电位（△ψm）,Western blot检测细胞色素C释放及caspase-3活性,H2DCFDA探针检测细胞内活性氧 （ROS）。结果与对照组比较,异氟烷组海马神经元凋亡显著增加（P<0.05）,而乌司他丁组显著下降（P<0.05）;异氟烷组神经元 线粒体△ψm显著降低（P<0.05）,乌司他丁组显著提高（P<0.05）;异氟烷组海马神经元ROS、细胞色素C释放及caspase-3活性均 显著增加（P<0.05）,而乌司他丁组显著降低（P<0.05）。结论乌司他丁可以抑制异氟烷介导的大鼠海马神经元凋亡,其机制可 能与抑制线粒体途径凋亡有关。     

呼吸机相关性肺损伤中氧化应激诱导的细胞凋亡机制及乌司他丁的改善作用

目的:分析呼吸机相关性肺损伤中氧化应激介导的细胞凋亡机制及乌司他丁的改善作用,为相关研究及临床治疗提供借鉴.方法:40只SD大鼠随机分为4组:对照组、大潮气量模型组、乙酰香草素及乌司他丁组(n=10),除对照组外,其余各组大鼠给予大潮气量造模,乌司他丁组大鼠在通气前预灌注乌司他丁,乙酰香草素组给予乙酰香草素治疗,模型组大鼠给予等剂量0.9％ NaCl溶液.分析各组大鼠支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子及谷胱甘肽过氧化物酶水平的变化,western blotting分析氧化应激相关蛋白及细胞凋亡蛋白的变化.结果:模型组灌洗液中肿瘤坏死因子水平明显增高,而谷胱甘肽过氧化物酶明显降低,NADPH氧化酶亚基p22、p47及细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3和Caspase9表达上调,而抑制凋亡蛋白Bcl2表达降低,乙酰香草素及乌司他丁可以显著逆转上述指标的异常.结论:乌司他丁可以通过抑制氧化应激细胞凋亡缓解呼吸机相关性肺损伤.     

尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁抗肺癌作用研究

目的 探讨尿胰蛋白酶抑制剂(urinary trypsin inhibitor,UTI)对人肺癌细胞系A549细胞体内外抗肿瘤作用.方法 选用尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁(ulinastatin),设置乌司他丁 0、100、200、400 U/mL四个浓度组及CTX3 μg/mL阳性对照组,采用MTT比色法检测乌司他丁对A549细胞增殖抑制作用,采用侵袭小室法检测乌司他丁对A549细胞的侵袭抑制作用.建立人肺腺癌(A549)细胞裸鼠异种抑制瘤模型,设置乌司他丁 0万单位、2.5万单位、5万单位组、10万单位组及CTX 0.1 g阳性对照组,通过绘制移植瘤生长曲线、统计分析瘤重和肺转移灶,检测乌司他丁对裸鼠体内肺腺癌抑制增殖和转移的作用.结果 增殖抑制率分别为0%、17.82%、25.46%、42.73%、57.46%,显示乌司他丁对人肺癌细胞系A549细胞具有增殖抑制作用;侵袭指数分别为16.44%、13.06%、11.73%、7.63%、8.12%,表明乌司他丁能有效抑制人肺癌细胞系A549细胞的侵袭;瘤重抑制率分别为0%、56.19%、61.11%、68.53%、89.17%;抗肺转移率分别为0%、75.36%、85.51%、90.75%、86.94%,显示乌司他丁能有效抑制裸鼠肺癌移植瘤的生长及转移.结论 乌司他丁对人肺癌细胞系A549细胞具有体内外抗肿瘤作用,该作用表现为抑制肿瘤增殖并突出表现于抑制肿瘤转移.     

乌司他丁对重症中暑患者血管内皮细胞损伤的影响

目的：探讨乌司他丁对重症中暑患者血管内皮细胞损伤的保护作用。方法回顾性分析40例重症中暑患者的临床资料,其中20例患者采用常规治疗,为常规组,20例患者在常规治疗的基础上加用乌司他丁治疗,为乌司他丁组,比较两组治疗后外周CEC数量、外周血管vWF和TM浓度。另选择20例健康体检者作为对照组。结果治疗前重症中暑患者外周血CEC计数、vWF和TM浓度显著高于对照组（P＜0.01）,治疗后常规治疗组和乌司他丁组较治疗前均显著下降（P＜0.05或P＜0.01）,但乌司他丁组下降幅度显著大于常规治疗组（P＜0.01）。结论重症中暑患者在常规治疗的基础上加重乌司他丁治疗对患者的血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

Effect of Ulinastatin on the Lipopolysaccharide-induced Production of Nitric Oxide and mRNA Expression of iNOS in Macrophages

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOSmRNA)表达的影响.方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10 000 U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOSmRNA的表达.结果 高浓度的乌司他丁(1 000～ 10 000 U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P＜0.05),下调iNOSmRNA含量(P＜0.05);低浓度乌司他丁(100 U/ml)对LPS诱导的RAW264.7细胞NO、iNOSmRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOSmRNA表达,这种抑制与浓度相关.     

乌司他丁对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏保护作用的研究

目的 研究乌司他丁对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver, NAFL)大鼠肝脏的保护作用.方法 取24只Wistar大鼠随机分为正常对照组,高脂饮食生理盐水处理组(模型组)及乌司他丁治疗组(乌司他丁组),各8只.正常对照组和模型组大鼠每天腹腔注射生理盐水2 mL,乌司他丁组大鼠腹腔内注射含乌司他丁(4×104 IU/kg)的生理盐水2 mL,于第8周处死大鼠,取肝组织用于病理组织学观察及脂肪沉积评价;取血备于血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)等生化指标检测.结果 模型组大鼠血清TG、TC、ALT 及AST含量显著高于对照组;病理组织学证实非酒精性脂肪肝模型建立成功.乌司他丁治疗组大鼠血清TG、TC含量显著低于模型组;治疗组大鼠血清ALT及AST水平介于对照组与模型组之间,ALT值显著低于模型组,P<0 05;AST值治疗组与模型组之间无明显差别,P>0 05;光镜下观察乌司他丁治疗组肝细胞脂肪变较模型组轻.结论 乌司他丁可以控制高脂饲养大鼠血脂升高,保护肝脏功能,从而抑制NAFL的形成.     

乌司他丁和胸腺肽α1联合治疗严重脓毒症的组织病理学观察

目的通过组织病理学观察联合应用乌司他丁和胸腺肽α1治疗严重脓毒症的效果。方法采用经典大鼠CLP脓毒症模型,全部动物随机分为对照组、联合治疗组(乌司他丁+胸腺肽α1)、乌司他丁治疗组和胸腺肽α1治疗组。制模成功后分别于6、24、48和72 h经尾静脉或皮下注射给药,记录每天死亡数。制模后24、48、72和96 h处死动物,留取心、肝、脾、肺、肾、小肠标本,以光镜进行病理学检查,脾脏标本行凋亡检测。结果联合治疗组死亡率显著降低(P=0.0325);组织病理学显示,对照组各脏器损害最严重,单药组其次,联合用药组最轻;此外,对照组脾脏细胞大量凋亡,联合用药组凋亡程度显著下降[(47.4±10.9)%vs(39.3±11.4)%,P=0.0000]。结论乌司他丁和胸腺肽α1联合用药可以显著减轻脓毒症大鼠脏器损害,抑制脾脏细胞凋亡,提高脓毒症大鼠存活率。     

乌司他丁对创伤失血性休克兔血浆磷脂酶A2水解产物及细胞因子的影响

目的评价蛋白酶抑制剂乌司他丁对创伤性休克的治疗效果,并观察乌司他丁对血浆磷脂酶A2水解产物及细胞因子的影响.方法30只新西兰白兔随机分为三组,对照组、创伤性休克组和创伤性休克乌司他丁治疗组,观察休克前后TXA2和PGI2,、TNF-a、IL-8的动态变化及乌司他丁对它们的影响.结果对照组TNF-a、IL-8的血浆浓度和TXA2/PGI2的比值在整个实验期呈现增高趋势,但没有统计学意义.创伤性休克组和创伤性休克乌司他丁治疗组休克后TXA2、TNF-α、IL-8的血浆浓度分别在不同的时点较休克前有显著增高,其中乌司他丁治疗组的TXA2、TNF-α、IL-8血浆浓度均明显低于休克组.光镜及电镜下观察肺组织,乌司他丁治疗组较休克组的病理损害亦显著减轻.结论在创伤性休克的发展过程中血浆磷脂酶A2水解产物及细胞因子起着重要作用,应用蛋白酶抑制剂乌司他丁有助于休克的改善及重要脏器的保护.