三氧化二砷对HL-60细胞端粒酶活性表达的抑制作用

目的:探讨不同浓度的三氧化二砷(As2O3 )与HL-60细胞共反应不同时间后对其端粒酶活性表达的抑制作用.方法:采用端粒重复序列扩增(TRAP)-银染法检测HL-60细胞的端粒酶活性,并经Smart view生物电泳图像分析系统扫描分析.结果:浓度分别为0.1 μmol/L、1.0 μmol/L、5.0 μmol/L的As2O3 与HL-60细胞共培养3天,HL-60细胞相对端粒酶活性由97.83%下降至9.62%,且具有剂量依赖性和时间依赖性.结论:As2O3可有效抑制HL-60细胞的端粒酶活性.     

三氧化二砷对HL-60细胞生长的影响

目的：观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对HL－60细胞生长的作用。方法：采用瑞氏染色油镜观察细胞形态；四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法观察As2O3对HL－60细胞的生长抑制作用。结果：瑞氏染色显示低浓度的As2O3（0.1μmol/L,1.0μmol/L）诱导后，细胞呈现部分分化现象，而高浓度的As2O3（5．0μmol/L）诱导后细胞呈现凋亡特征，As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长，第1天半数抑制率（IC50）约为20．0μmol/L，第2天、第3天IC50均约为5．0μmol/L。结论：As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长；低浓度者可诱导HL－60细胞部分分化，高浓度者可诱导其凋亡。     

三氧化二砷对HL-60细胞端粒酶hTERT启动子活性的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抑制HL-60细胞端粒酶hTERT表达的分子机制。方法:构建含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体,转染HL-60细胞,分别在有无As2O3作用下检测各组荧光素酶活性变化,间接反映As2O3对hTERT启动子不同片段活性的影响。结果:在As2O3作用下,含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体的荧光素酶活性均下降(P0.05～P0.01)。结论:As2O3对HL-60细胞端粒酶hTERT启动子活性具有抑制作用。     

CTGF基因转染对宫颈癌细胞MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖的影响

目的:研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因对人宫颈癌Hela细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及细胞增殖的影响,探讨CTGF在宫颈癌侵袭和转移中的作用机制。方法:经脂质体介导将含有CTGF重组表达质粒转染人宫颈癌Hela细胞株,用G418筛选阳性细胞克隆及实时荧光定量PCR、蛋白质印迹鉴定;采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞MMP-2及MMP-9的表达;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果:成功建立稳定高表达CTGF的阳性Hela细胞克隆,证实其MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖活性均显著增高。结论:CTGF转染可显著增加宫颈癌细胞MMP-2及MMP-9的表达并促进其细胞增殖,CTGF可能是宫颈癌基因治疗的潜在靶点。     

腺苷对人Müller细胞MMP-2和MMP-9mRNA表达的影响

目的 探讨腺苷受体在人Müller细胞中的表达情况以及腺苷(adenosine,ADO)对人Müller细胞中基质金属蛋白酶-2 (matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinases-9,MMP-9) mRNA表达的影响.方法 ...     

TRAIL联合三氧化二砷对HL-60细胞生长及凋亡的影响

目的　研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL) 联合三氧化二砷 (As2O3) 诱导急性早幼粒白血病细胞株HL 60凋亡, 探讨其应用于临床的可行性。方法　在对数生长期的 HL 60 细胞中分别加入不同浓度的TRAIL和1μmol/L的As2O3, 采用MTT比色法测定TRAIL和 As2O3 单独和联合应用时对细胞的生长抑制率, 并用流式细胞术检测细胞凋亡。结果　TRAIL联合 As2O3 可协同降低 HL 60 细胞活力, 抑制细胞增殖, 诱导细胞凋亡。当TRAIL浓度小于100μg/L时, 其作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强 (P<0 .05), 而当 TRAIL浓度再增高时, 对细胞生长抑制率和凋亡率的增强作用不明显 (P>0 .05)。结论　TRAIL与 As2O3 具有协同作用, 能高效杀灭白血病细胞。TRAIL是一种有望应用于白血病临床治疗的新型生物制剂。     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

三氧化二砷对结肠癌小鼠移植瘤淋巴管形成与MMP-9表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As：O,）对结肠癌淋巴管形成与MMP-9表达的影响。方法建立结肠癌小鼠移植瘤模型,分为1mg／（kg·d）As2O3,组、2mg／（kg·d）As：0,组和生理盐水组（注射等体积生理盐水）。应用免疫组织化学方法检测肾小球足突细胞黏蛋白（podoplanin）、血管内皮生长因子C（VEGF—C）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达并计数微淋巴管密度（MLD）。结果As2O3处理组VEGF—C和MMP-9的表达均较生理盐水组明显减弱,2mg／（kg·d）As2O3组VEGF—C和MMP-9的表达明显弱于1mg／（kg·d）As2O3组;As2O3处理组MLD较生理盐水组明显减少,2ms／（kg·d）As2O3组MLD明显少于1mg／（kg·d）As2O3组;以上差异均具有统计学意义。结论As2O3对小鼠结肠癌移植瘤的淋巴管形成与MMP-9表达均有抑制作用。     

膀胱移行细胞癌组织中MMP-2、MMP-9和CD147表达及相互关系

目的：探讨膀胱移行细胞癌组织基质金属蛋白酶-2、9（MMP-2、MMP-9）和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（CD147）的表达和相互关系。方法：采用免疫组织化学sP法检测48例膀胱移行细胞癌组织及16例正常膀胱黏膜组织MMP-2、MMP-9和CD147的表达情况,比较不同临床、病理特征膀胱移行细胞癌患者CD147和MMP-2、MMP-9的表达及其相关性。结果：膀胱移行细胞癌组织中MMP-2、MMP-9和CD147的阳性表达率分别100％、95．8％、95．8％,均明显高于正常膀胱黏膜组织（P均〈0．05）;其阳性表达与肿瘤的病理分级、临床分期呈正相关（P〈0．05）,与临床预后无显著相关（P〉0．05）;膀胱移行细胞癌组织CD147与MMP-2、MMP-9多同时表达,呈现出显著正相关,相关系数分别为0．784、0．853（P〈0．001）。结论：MMP-2、MMP-9、CD147在膀胱移行细胞癌发展中可能起着重要的作用。MMP-2和MMP-9的分泌增加可能与CD147的诱导促进作用有关系。     

三氧化二砷或ATRA对原代APL细胞或HL-60细胞作用研究

目的：探讨三氧化二砷（吡霜）或ATRA对原代APL细胞或HL－60细胞影响,同时分析三氧化二砷与ATRA之间的交叉耐药性。方法:MTT测定HL－60细胞或APL细胞的增殖性。流式细胞仪检测两类细胞的凋亡性,NBT法用于测定HL－60细胞或原代APL细胞的分化性。结果：三氧化二砷与ATRA均能明显抑制APL细胞或HL－60细胞的体外增殖,它们作用机制分别为诱导明显的凋亡或分化。体外三氧化二砷对ATRA耐药HL－60细胞具有明显的抑制增殖作用,并诱导其凋亡发生。结论：三氧化二砷与ATRA无交叉耐药性。研究结果表明,ATRA诱导的高白细胞征并非归因于分化大于凋亡。     

Potentiation of arsenic trioxide-induced apoptosis by retinoic acid in retinoic acid sensitive and resistant HL-60 myeloid leukemia cells

Objective To study the effect of arsenic trioxide (As(2)O(3)) on non-APL acute myeloid leukemia (AML) cells and the interreactive effect between retinoic acid (RA) and As(2)O(3).Methods RA-sensitive (S) and RA-resistant (R) HL-60 non-APL AML cells were used as an in vitro model. Cell number and trypan blue were used to observe cell growth and survival. Apoptosis was determined by morphological changes, using a DNA laddering assay, terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) fragment end labeling assay and a flow cytometry assay. Results As(2)O(3) induced apoptosis in both HL-60S and HL-60R cells, As(2)O(3)-induced apoptosis was both time- and concentration-dependent in a therapeutically-achievable As(2)O(3) range (0.25-4.0 μmol/L). Both all-trans retinoic acid (ATRA) and 9-cis retinoic acid (9cRA) potentiated As(2)O(3)-induced apoptosis, as measured by quantitative TdT fragment end labeling and flow cytometry assays in both HL-60S and HL-60R cells (P&lt;0 .05, for all RA+As(2)O(3) combinations vs As(2)O(3) alone in both sublines). Conclusions As(2)O(3) may inhibit the growth of non-APL AML cells by promoting programmed cell death. RA can potentiate As(2)O(3)-induced apoptosis even in RA-resistant HL-60 cells in which the classical ATRA response pathway is repressed owing to a homozygous inactivating mutation in the retinoic acid receptor α. As[2]O[3] can have clinical activity in non-APL cases of AML and the enhanced activity might result from the combined As(2)O(3)-RA therapy.     

丙戊酸钠联合三氧化二砷对HL-60细胞株的体外研究

目的:探讨丙戊酸钠(sodium valproate,SV)联合三氧化二砷(arsenous trioxide,As2O3)诱导HL-60细胞凋亡与bcl-2﹑bax mRNA之间可能的关系。方法:在对数生长期的HL-60细胞中分别加入不同浓度的SV和1.0μmol/LAs2O3,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,用Annexin V-FITC/PI双重标记经流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测bcl-2,bax mRNA在细胞中的表达。结果:SV抑制HL-60细胞生长并促进其凋亡,SV联合1.0μmol/L As2O3对HL-60细胞的生长抑制及促凋亡作用更明显。SV单独或联合1.0μmol/L As2O3作用于HL-60细胞,bcl-2mRNA表达下降,bax mRNA表达增高。结论:SV与As2O3有协同作用,抑制HL-60细胞生长并诱导其凋亡,bcl-2﹑bax mRNA的表达变化可能参与了SV对HL-60细胞的促凋亡作用。     

Nuclear matrix associated protein PML: an arsenic trioxide apoptosis therapeutic target protein in HepG2 cells

Objective To investigate arsenic trioxide(As2O3)-induced apoptosis and the effects on cell nuclear matrix related protein promyelocytic leukaemia(MPL).Methods HepG2 cells were cultured in MEM medium and treated with 0.5,2.5 and 10μmol/L As2O3 for either 24 h or 96 h at each concentration.In situ terminal deoxynucleotidyl trangferase(TdT) labeling (TUNEL)and DNA ladders were used to detect apoptosis.Confocal microscopy and Westem blotting were used to observe the expression of PML.Results The growth rates of HepG2 cells were slower in the As2O3 treated than the untreated control group.DNA ladder and TUNEL positive apoptotic cells could be detectedin As2O3 treated groups.The expression of PML decreased in HepG2 cells with 2 μmol/L As2O3 treatment,Confocal images demonstrated that the expression of PML protein in HepG2 cell nuclei decreased after treatment with 2μmol/L As2O3,and micropunctates characteristic of PML protein in HepG2 cell nuclei disappeared after treatment with 5μmol/L As2O3.Conclusions Our results show that arsenic trioxide can significantly inhlbit the growth of HepG2 cellsin vitro.As2O3 induces apoptosis in HepG2 tumor cells in a time and concentration dependent manner.As2O3 may degrade the PML protein in HepG2 cell nuclel.The decreased expression of PML in As2O3 treated tumor cells is most likely to be caused by apoptosis.Nuclear matrix associated protein PML could be the target of As2O3 therapy.     

硼替佐米或联合三氧化二砷治疗HL-60白血病细胞移植瘤裸鼠的实验研究

目的 探讨硼替佐米(Bor)单独和联合三氧化二砷(As2O3)对HL-60白血病细胞移植瘤裸鼠的抗瘤作用、作用机制及药物毒性.方法 建立皮下移植瘤裸鼠模型,随机分为4组,即生理盐水(NS)组、Bor单药组、As2O3单药组、Bor联合As2O3组,比较各组的抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,并对移植瘤进行细胞凋亡和免疫组化检测.结果 Bor单独或联合As2O3均能抑制移植瘤生长和延长裸鼠生存时间,并诱导肿瘤细胞凋亡和抑制其增殖,其中以联合用药组效果最好,且未引起重要脏器损害.结论 Bor联合As2O3对HL-60白血病细胞移植瘤裸鼠具有显著的抗瘤作用,此作用可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制其增殖有关,且无明显毒副作用.     

硼替佐米或联合三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的 探讨硼替佐米单独或联合三氧化二砷对HL-60细胞凋亡的影响.方法 不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞12～48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性;DNA凝胶电泳、细胞形态学观察、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 10～50 nmol/L硼替佐米可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其发生凋亡.其中10nmol/L剂量处理12 h,即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量,细胞凋亡率明显增加.选择15 μmol/L三氧化二砷与10nmol/L硼替佐米联合应用,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加.结论 硼替佐米对HL-60细胞存在时间和剂量依赖性的细胞凋亡效应,与三氧化二砷联合具有明显的协同作用.     

人参炔醇对HL-60细胞体外诱导分化作用的研究

目的 通过细胞形态学和增殖动力学研究人参炔醇对HL—60细胞诱导分化作用。方法 采用台盼蓝染色及细胞计数器测定细胞存活量，流式细胞仪检测人参炔醇对细胞周期和分子标志表达的影响，观察信号通路阻断剂对人参炔醇诱导细胞分化的影响。结果 人参炔醇使HL—60细胞倍增时间延长，诱导HL—60向单核细胞分化，细胞集中于G1期，显著上调细胞表面CDl4分子表达，并中度上调CDllb分子表达，RpcAMPS及H7均可使人参炔醇诱导的HL—60细胞NBT阳性率降低。结论 人参炔醇诱导HL—60向单核细胞分化，与细胞内腺苷酸环化酶(cAMP)，蛋白激酶C(PKC)信号通路活化有关。