Wilson病家系ATP7B基因第18外显子突变及多态

目的：检测中国人Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因的第１８外显子（ｅｘｏｎ１８）突变及多态。方法：应用多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，分析１６个ＷＤ家系５４例个体和１８例正常人ＡＴＰ７Ｂ基因ｅｘｏｎ１８分子结构改变。结果：在ＷＤ家系中发现有３种单链构象，其中１种为正常构象，１种为突变，另１种可能为正常ＤＮＡ多态；１７例ＷＤ患者及其３７例一级亲属中分别检出突变者１０例和１１例，突变率分别为２９．４％和１４．９％。其中一级亲属检出的突变者中有３例经血清铜氧化酶及眼科Ｋ－Ｆ环检查证实为ＷＤ症状前患者。结论：ｅｘｏｎ１８是中国人ＷＤ基因突变热点之一，大多数ＷＤ患者为复合杂合子；应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术分析ｅｘ－ｏｎ１８是一种有效的ＷＤ基因筛选方法，也可为无家族史的ＷＤ可疑者提供诊疗依据     

Wilson病基因是一种与Menkes基因相似的铜转运P型ATP酶

Ｗｉｌｓｏｎ病是铜转运障碍的常染色体隐性遗传病，由于铜蓄积引起对肝、脑的毒性。其基因（ＷＤ）已定位于染色体１３ｑ１４．３。在这一区域的建的人工酵母染色体中，我们识别出一段序列，与Ｍｅｎｋｅｓ病缺陷的ＡＴＰ酶基因（ＭＮＫ）编码的铜结合区相似。我们证明该序列构成一Ｐ型ＡＴＰ酶基因的一部分，即Ｗｃｌ。与原核生物的重金属转运酶非常相似，亦具有６个金属结合区。该基因在肝和肾中表达，位于包含ＷＤ基因座在内的约     

PCR直接测序在Wilson病基因第8外显子检出一个突变热点

目的寻找中国人Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因突变热点。方法应用ＰＣＲ直接测序法对３０例Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＷＤ基因第８外显子进行了突变筛查。结果在１４例患者中发现同一种错义突变Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ，其中４例为这一突变的纯合，其余为杂合，突变率为３０％。结论ＷＤ基因第８外显子７７８位密码子（ＣＧＧ→ＣＴＧ）系中国人的突变热点之一。     

Wilson＇s病基因诊断的研究

Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓ病基因诊断的研究天津市儿童医院儿研所（３０００７４）陈悦Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｃａｓｅ，ＷＤ），又称肝豆状核变性（ｈｅｐａｙｔｏｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＨＬＤ），是一种较常见的以铜代谢障碍为特...     

染色体单体型分析及突变检测在Wilson病临床诊断中的应用

目的建立染色体单体型分析法与突变检测相结合的Ｗｉｌｓｏｎ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）的基因诊断方法。方法以８个汉族ＷＤ家系为对象,用Ｄ１３Ｓ３１６、Ｄ１３Ｓ１３３和Ｄ１３Ｓ３１４３个［ＣＡ］ｎ重复遗传标记构建染色体单体型,进行ＷＤ家系内的诊断研究;对先证者的致病突变已明确的５个家系,同时用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测法检测突变以完善诊断。结果找到了１例无症状期ＷＤ患者,５例杂合子。结论通过分析Ｄ１３Ｓ３１６、Ｄ１３Ｓ１３３、Ｄ１３Ｓ３１４构成的染色体单体型,基本可为先证者同胞兄妹明确诊断;对致病突变已确定的家系,突变检测能为诊断提供直接而肯定的依据。两种方法的联合使用可为诊断提供更多的依据     

Wilson's病8号外显子突变研究

目的对中国人ＷＤ基因８号外显子进行突变分析。方法对中国人Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）４５例患者以及２０例正常人的ＡＴＰ７Ｂ基因８号外显子进行ＳＳＣＰ分析,对有异常者进行测序,根据突变点序列设计合适的内切酶对所有患者进行酶切分析。结果正常组未见异常。患者组发现ｅｘ－ｏｎ８有泳动异常,序列分析证实Ｇ２２７３Ｔ置换,即Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变。用限制性内切酶ＭｓｐⅠ对４５例患者以及２０例正常对照进行该位点酶切分析,表明正常组未见异常,患者组有２例突变纯合子,占患者总数４．４％,１１例杂合子,占１２．２％。外显子８的Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变率占ＷＤ突变基因的１６．６７％。检测了２个突变家系。结论８号外显子突变可能是中国人ＷＤ发病的较重要原因。     

微卫星标记AFM238vc3多态性及Wilson病基因诊断的研究

目的：评估中国人群Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因（ＷＮＤ）侧翼微卫星ＤＮＡ（ＳＴＲ）位点ＡＦＭ２３８ｖｃ３的基因多态性及在ＷＤ基因诊断中的价值。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法分析８９名无血缘关系中国人ＡＦＭ２３８ｖｃ３的片段长度多态性；并对１９个ＷＤ家系进行ＳＴＲ连锁分析。结果：ＡＦＭ２３８ｖｃ３有２１个等位片段，长度范围为２９１～３４５ｂｐ，多态信息含量（ＰＩＣ）为０９３８。共检出８例症状前患者，８例基因携带者及１４例正常人，６例未能确定，基因诊断率达８３％。结论：ＡＦＭ２３８ｖｃ３在中国人群是优秀的多态性标记，对ＷＤ基因诊断有较重要价值。     

成纤维细胞的银掺入试验以诊断MENKES病

Ｍｅｎｋｅｓ病（Ｍｅｎｋｅｓｄｉｓｅａｓｅ）是一种严重Ｘ连锁隐性铜代谢疾病，主要症状为神经变性、结缔组织异常和发育停滞。各种铜依赖性酶因铜吸收不良和铜的利用率降低而缺乏。该病通常可导致婴儿期及幼儿期死亡。培养的成纤维细胞和羊水细胞的铜掺入试验已被用于产前及产后Ｍｅｎｋｅｓ病的诊断。在１９９３年该缺陷基因被发现以后，通过Ｍｅｎｋｅｓ基因ＡＴＰ７Ａ突变分析的诊断也成为可能，然而由于突变范围太广而且８０％的突变为微小的碱基对改变，所以生化学诊断仍然是证实临床怀疑的必要方法。而且铜掺入实验需要特殊的专业…     

早发性帕金森病parkin基因第1～6外显子缺失突变的初步研究

目的 探讨中国人早发性帕金森病（ｐｒａｅｃｏｘ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ,ＰＰＤ）中ｐａｒｋｉｎ基因第１～６外显子是否存在突变,及其与该病临床特点的关系。方法 用ＰＰＤ患者外周血液提取ＤＮＡ,通过ＰＣＲ扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定ｐａｒｋｉｎ基因外显子缺失突变,并结合临床资料分析。结果 ２１中层得中发现有２例第１外显子缺失,２例第４外显子缺失,１例第６外显子缺失;发生基因缺失突变的病例年龄为     

Huntington舞蹈病相关基因被克隆

自Ｇｕｓｅｌｌａ于１９８３年用Ｇ８探针对Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ（ＨＤ）家系进行连锁分析，将ＨＤ基因定位于人４号染色体后，经过美国和英国共６个研究组努力，历时１０年，于１９９３年初将ＨＤ基因克隆。这不但为ＨＤ的诊断、治疗带来了希望，其特殊的基因突变机制也为一种新的突变─━动态突变（ｄｙｎａｍｉｃｍｕｔａｔｉｏｎ）又增加了一典型例子。这种突变机制在人类遗传病变中可能具有普遍意义。     

Wilson病诊断的研究进展

Ｗｉｌｓｏｎ病诊断的研究进展乐俊河综述朱锡华审阅Ｗｉｌｓｏｎ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＷＤ）又称肝豆状核变性（ｈｅｐａｔｏｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ），是一种由于铜代谢障碍引起的常染色体隐性遗传病，也是引起儿童慢性肝脏疾病...     

Duchenne型肌营养不良症的产前基因诊断研究

应用Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型肌营养不良症（Ｄｕｃｈｅｎｎｅ　ｍｕｓｃｕｌａｒ　ｄｙｓｔｒｏｐｙ，ＤＭＤ）基因的ｃＤＮＡｓ作为探针，以限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析为策略，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交方法，成功地对１例可疑ＤＭＤ的男性胎儿及１例ＤＭＤ患儿进行基因诊断。结果显示该胎儿ＤＭＤ基因正常，而患儿存在ＤＭＤ基因缺失（缺失２．１５ｋｂ）。在基因分析前，应用聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术鉴定胎儿性别为男性。胎儿出生后检查结果与与产前基因诊断相吻合。为了获得高灵敏度探针，本文采用地高辛配基标记ＤＮＡ探针的方法，通过酶联免疫法，使分子杂交的ＤＮＡ检测带出现颜色反应。实验结果表明，此方法适用于基因组单拷贝ＤＮＡ顺序的检测，具有快速、安全等优越性，可以替代同位素进行推广、应用。     

中国人中所见黑蒙性痴呆的新突变

在３个中国婴儿型黑蒙性痴呆（Ｔａｙ－Ｓａｃｈｓｄｉｓｅａｓｅ，ＴＳＤ）家庭中鉴定了３种突变等位基因，这３家无血缘关系，也无亲近婚配。其中两种突变等位基因是新的，第三种则为曾报道过的突变（Ｇ１４４４Ａ）。家庭１，ＤＮＡ经ＰＣＲ体外扩增后直接测序，发现为ＨＥＸＡ基因第５外显子的第５４７核苷酸处插入一个腺嘌呤所造成的移码突变，导致插入部位下游６ｂＰ处提前出现终止密码。用等位基因特异性寡核苷酸（ＡＳＯ）杂交证明先证者为突变基因纯合子。家庭２，用单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析及将扩增的第１３外显子直接测序，发现为第１４５３核苷酸Ｔ转换为Ｃ，造成第４８５位色氨酸为精氨酸取代，以Ｔ１４５３Ｃ（ｅｘｃｏｎ１３）／Ｗ４８５Ｒ表示之（Ｗ代表色氨酸，Ｒ代表精氨酸）。此突变造成了一个Ｆｎｕ４Ｈ１酶切位点。患儿则为此等位基因的纯合子。当Ｔ１４５３Ｃ定向致突变的αｃＤＮＡ在ＣＯＳ－１细胞中表达时，未能测出氨基已糖苷酶（Ｈｅｘ）Ｓ的活性。家庭３的突变为第１３外显子的１４４４核苷酸Ｇ转换为Ａ，造成第４８２位谷氨酸为赖氨酸取代，以Ｇ１４４４Ａ（ｅｘｏｎｌ３）／Ｅ４８２Ｋ表示之（Ｅ代表谷氨酸，Ｋ代表赖氨酸）。此突变发生于一个ＧｐＧ二核苷酸，以     

肌萎缩性脊髓侧索硬化症与铜锌超氧化物歧化酶之间关系的研究 …

肌萎缩性脊髓侧索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＬＳ）是一种致命的神经退化性疾病,在ＡＬＳ所有的病例中有５％～１０％是家族性ＡＬＳ（ＦＡＬＳ）,它是一种常染色体显性遗传病,与２１号染色体上的ＳＯＤ－１基因（编码铜锌超氧化物歧化酶〈Ｃｕ／Ｚｎ－ＳＯＤ〉）的突变有关,但突变的Ｃｕ／Ｚｎ－ＳＯＤ酶功能障碍并不能直接损伤神经元而导致ＡＬＳ的发生。因为正常野生型Ｃｕ／Ｚ     

与线粒体基因组点突变有关的双侧感音神经性耳聋

与线粒体基因组点突变有关的双侧感音神经性耳聋Ｏｓｈｉｍａ－Ｔ，ｅｔａｌ．Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ．１９９６；１０６（１ｐｔｌ）：４３～４８与感音神经性耳聋（ＳＮＨＬ）有关的线粒体ＤＷＡ〔ｍｔＤＮＡ）突变在ＭＥＬＡＳ（线粒体肌病，脑病，扎成血症和中风样...     

应用微卫星DNA单体型检测Wilson病症状前患者及杂合子

目的建立快速、准确、有效的Ｗｉｌｓｏｎ病（Ｗｉｌｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＷＤ）患者早期诊断及杂合子检测的基因诊断技术。方法应用Ｄ１３Ｓ３０１、Ｄ１３Ｓ３１６、Ｄ１３Ｓ２９６、ＡＦＭ２３８ｖｃ３、ＡＦＭ０８４ｘｃ５等５个微卫星ＤＮＡ（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ），经聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增片段长度多态性－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＡＦＬＰ－ＰＡＧＥ），对２３个ＷＤ家系１２０名成员的ＤＮＡ进行单体型分析。结果２例拟诊患者得到确诊。在３１例ＷＤ同胞中，检出肯定症状前患者４例、杂合子８例、正常人１７例、可疑患者２例。结论ＳＴＲ单体型可提供高信息量的遗传诊断信息，为ＷＤ基因诊断提供了重要的新途径     

温度梯度凝胶电泳及其在遗传学突变筛选中的应用

温度梯度凝胶电泳(ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,ＴＧＧＥ)是近几年兴起的一种快速突变分析方法。该方法通过建立一定的温度梯度,可以筛选出发生单个或多个碱基突变的双链ＤＮＡ分子,为更加快速、准确地查找突变基因提供了一种先进技术。我们利用ＴＧＧＥ对家族性高胆固醇血症(ｆｍｉｌｉａｌｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｌｅｍｉａ,ＦＨ)患者的低密度脂蛋白受体(ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＬＤＬＲ)基因进行遗传学分析,获得了较满意的结果,现将此技术…     

PCR-酶切法检测Wilson病935密码子基因突变

目的：应用ＰＣＲ酶切法对中国人ＷＤ患者ＡＴＰ７Ｂ基因的高频突变点进行检测，企图建立一种能应用于临床的中国人ＷＤ快速基因诊断方法。方法：用限制性内切酶ＭａｅⅡ对４８例患者及３０例正常人的ＡＴＰ７Ｂ基因第１２外显子９３５密码子ＰＣＲ扩增生进行酶切分析。结论：ＡＴＰ７Ｂ基因第１２外显子９３５密码子为中国人ＷＤ患者的高频突变点之一：ＰＣＲ酶切法可作为ＷＤ常用的基因诊断方法应用于症状前期患者的筛选及产前诊断     

人类基因组中与HIV-1感染相关的基因多态性及其意义

为探讨ＣＣＲ５、ＣＣＲ２和ＳＤＦ１等位基因的突变和多态性特点,评估不同人群对ＨＩＶ－１感染的遗传易感性,作者收集近年来国际上报道的人类免疫缺陷病毒（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ－１,ＨＩＶ－１）感染基因相关文献资料,其中包括作者检测的中国人基因组的ＣＣＲ５、ＣＣＲ２和ＳＤＦ１基因多态性的检测结果。通过对比分析,结果显示世界上不同人群的ＨＩＶ－１相关基因的突变和我态性有一     

中国人WD基因第14和18号外显子的错义突变

目的了解中国人肝豆状核变性（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）基因第１４和１８号外显子的突变情况,与国外报道的这两个外显子的高突变频率进行比较。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合ＤＮＡ测序技术,对４４例无亲缘关系的ＷＤ患者及６０例正常对照进行突变检测。结果一例患者在１４号外显子发生了Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ（３１２１Ｇ→Ｃ）纯合错义突变,另一例患者在１８号外显子发生了Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ（３８０９Ａ→Ｇ）杂合错义突变。结论Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ为未报道过的新型错义突变,Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ突变与国外报道一致。但均未呈热区分布。