体外培养人脐静脉内皮细胞的光电镜观察

体外培养人脐静脉内皮细胞的光电镜观察姚忠祥，蔡文琴第三军医大学重庆６２００３８Ｐｕｐｎｉｃｋ等在培养微血管内皮细胞时，观察到内皮细胞具有多种不同的形态，并推测其原因可能是它们来源于不同节段的微血管。本研究取正常人足月产胎儿脐静脉内皮细胞体外培养，第五...     

切应力对培养人脐静脉内皮细胞摄取脂质的影响

了解切应力对血管内皮细胞脂质摄取的影响。方法可模拟生理及超生理范围脉动切应力的循环装置，分别模拟１９．２９、５６．２５、３８５．７１ｄｙｎｅｓ／ｃｍ＾２脉动应力作用培养人脐内皮细胞，免疫组化定量分析内细胞对低密度脂蛋白吞饮的影响。     

不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养效果的影响

目的研究不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养生长的影响,探讨内皮细胞的最佳体外扩增培养条件。方法取健康产妇分娩后脐带,用胶原酶Ⅰ消化后得脐静脉内皮细胞,进行原代培养,并用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,传代培养时则分别采用RPMI-1640培养基和EGM-2培养基,倒置显微镜观察两种培养条件下细胞的生长状态,同时利用流式细胞仪检测其生长周期,对比培养效果。结果 EGM-2组内皮细胞生长良好,2d后贴壁生长的细胞可达90%。EGM-2组S期细胞比例为（29.07±1.48）%,RPMI-1640培养基组S期细胞为（17.58±3.49）%,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EGM-2培养基更适合人脐静脉内皮细胞的体外传代扩增培养。     

培养人脐静脉内皮细胞的一种无血清培养基

培养人脐静脉内皮细胞的一种无血清培养基利用高体培养血管内皮细胞技术研究正常和病理情况下内皮细胞生理变化已出现许多可利用方法。然而大多数离体实验研究内皮细胞功能均使用有血清培养基。用高浓度动物血清可导致许多不便，如许多生产性能改变、出现外来因子，产物价...     

大鼠烧伤血清对人脐静脉内皮细胞骨架的作用

目的应用免疫荧光技术 ,通过观察人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞骨架 (F -actin)动态分布变化 ,进而从形态学的角度阐述烧伤血清对内皮细胞的作用。方法将EVC304细胞以1×105/ml接种在微孔小皿上 ,培养24～48h后开始实验。烧伤休克动物模型参照本室赵克森教授的方法。动物分组 :(1)正常组 :将大鼠浸于室温水浴 ;(2)烧伤组 :将大鼠浸于100℃水中20s ,分别于烧伤后24h收集血液制备烧伤血清 ,而后进行过滤除菌 ,56℃灭活支原体备用。制备成含30 %烧伤血清DMEM培养基后分别培养内皮细胞 (对照组细胞培养基用正常大鼠血清制备 )2、4、6、8、12、24h。F_actin对染色方法先用2 %的多聚甲醛、0.5 %TritonX -100混合PBS液固定和膜打孔20min、洗涤 ,罗丹明 -鬼笔环肽 (2u/ml,MolecularProbes)染色40min,PBS洗3次 ,最后用NikonTE300荧光倒置显微镜镜检 ,Kodak200胶卷照相。结果F_actin的变化 :正常组F_actin主要分布在细胞的周边 ,胞内也有少许丝状纤维 ,细胞体积比较大呈自然轮廓 ;烧伤血清刺激后2h的细胞F_actin分布明显混乱 ,有的细胞有应力纤维形成 ;4h刺激组上述现象更明显 ,并且有部分细胞有丝状伪足形成 ;6h、8h结果相似都表现为有明显的应力纤维形成 ,加上有明显丝状和板状伪足都形成 ,大部分细胞轮廓变园变     

切应力对培养人脐静脉内皮细胞形态的影响

用可模拟生理及超生理切应力的平行板模拟循环流动装置进行实验，发现模拟生理脉动切应力及超生理脉动切应力均可使培养人脐静脉内皮细胞沿液体流动方向伸长。采用计算机半自动图像分析系统半定量处理，进一步发现内皮细胞伸长程度与切应力大小及作用时间呈正相关、并且，模拟超生理切应力对内皮细胞形态的影响较生理脉动切应力大。     

肿瘤坏死因子对培养的人脐静脉内皮细胞骨架的影响

目的：用肿瘤坏死因子（TNF－α）处理培养的人脐静脉内皮细胞研究不同作用浓度和不同作用时间的TNF－α的刺激对内皮细胞的形态和骨架的影响。结果：2000U的TNF－α处理内皮细胞8小时,细胞形态发生改变,细胞间的紧密接触变的松攻,间隙增宽,骨架失去原有的网状形态,呈块状收缩,24小时后骨架结构开始恢复。细胞形态似成纤维细胞,1000U的TNF－α对内皮细胞影响比较明显,8小时后细胞变圆,细胞间的接触消失,骨架浓缩,网状结构消失,24小时后出现特征性“鸟喙”样改变,72小时后不完全恢复,不同浓度的TNF－α刺激内皮不同时间,均可使内皮细胞内游离钙比对照组明显增加。结论：TNF－α可改变内皮细胞的形态结构。影响其屏障机能,并可能与胞内游离钙浓度相关。     

人脐静脉内皮细胞膜上钙和钾离子通道

目的：观察体外培养人脐静脉内皮细胞膜上钙离子（Ｃａ＾２＋）通道和Ｃａ＾２＋激活的钾离子（ｋｃａ）通道。方法：膜片钳单通道记录技术。结果：体外培养人脐静脉内皮细胞上含有Ｃａ＾２＋通道和Ｋｃａ通道,但其通道分布概率和开放概率均不高．结论：人脐静脉内皮细胞作为一种非兴奋性细胞。其细胞膜上含有的Ｃａ＾２＋通道和Ｌｃａ通道,对细胞浆内Ｃａ＾２＋浓度的维持、Ｃａ＾２＋补充来源和细胞电位的维持等均具有重要意义,     

体外培养人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮合酶

为了证实人脐静脉内皮细胞是否具有合成一氧化氮的能力，用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学法和原位杂交对体外的人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮合酶进行了观察。结果显示，体外培养人脐静脉内皮细胞的ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学的阳性百分率为６２％，诱生型一氧化氮合酶的原位杂交的阳性百分率为７４％。阳性反应产物分布在核周及细胞突起中。本研究首次证明体外培养的人脐静脉内皮细胞能表达诱生型一氧化合酶，即人脐静脉内皮细胞在体     

脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用

血管内皮细胞 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＥＣ)炎症反应是感染性休克向不良方向演变的重要原因 ,有关激活剂 (ＬＰＳ、ＩＬ 1)导致ＥＣ活化的研究是败血症病理反应的中心课题。内毒素引起微循环ＥＣ损伤是内毒素性组织损伤的重要环节之一。本实验探讨了ＬＰＳ对体外培养脐静脉ＥＣ的直接损伤作用。1　材料与方法1 1　材料 :ＲＭＰＩ 16 40培养基、ＬＰＳ(Ｓｉｇｍａ产品 )1 2　细胞培养及鉴定 :内皮细胞传 4代。ＰＭＮ的分离采用Ｐｅｒｃｏｌｌ’ｓ分离液 5 0 0ｇ离心 2 0ｍｉｎ取白细胞层用培养基稀释成2× 10 6 ｍＬ备用。1 3　…     

体外人脐静脉内皮细胞分泌IL—6的研究

内皮细胞是一个非造血细胞 ,却表达和 /或产生大多数已知的造血受体和细胞因子。这些因子和受体的生物学作用仍不十分清楚。目的 :本研究旨在探求内皮细胞自然产生 IL- 6及其生物学功能。试图阐明 IL- 6在造血调控中的作用。在建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型的基础上 ,收集原代培养内皮细胞 1 - 9天培养上清液 ,离心 ,- 2 0℃保存备用。采用双抗夹心 ELISA法对上清液中 IL- 6进行定性和定量测定。结果 :在未加任何刺激因素的条件下 ,从培养的人脐静脉内皮细胞培养上清液中可测及 IL- 6(735.380 1± 883.53pg/ ml)。随着内皮细胞培养天数的增加 ,IL- 6的释放量也随之增加。在第 6天时接近释放峰值 IL- 6(2 80 8.61 pg/ ml)。结论 :体外培养的人脐静脉内皮细胞具有自然分泌 IL- 6的功能。 IL- 6对各系造血祖细胞的增殖均起促进作用。本研究为内皮细胞支持各系造血干 /祖细胞的增殖和分化提供了理论依据。     

复方降压片和西拉普利对人脐静脉内皮细胞功能的影响

血管内皮功能已经越来越受到人们的重视 ,研究表明高血压时血管内皮功能受到损害。本文旨在通过细胞培养的方法研究和比较目前临床常用的两种抗高血压药物复方降压片和西拉普利对血管内皮细胞功能的影响。1　材料和方法1 1　材料1 1 1　脐带取自协和医院产科病房。1 1 2　Ｍ - 199、胎牛血清、胰酶、Ｌ -谷氨酰胺为ＧＩＢＣＯ公司产品 ;ＥＣＧＦ、Ｈｅｐｅｓ为ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品 ;Ｉ型胶原酶为Ｓｉｇｍａ公司产品。氢氯噻嗪纯品由常州制药厂提供 ,西拉普利由罗氏药厂惠赠。ＴＮＦ由邦定公司提供 ,ＡｎｇⅡ为Ｓｉ…     

培养的人脐静脉内皮细胞产生单核细胞趋化因子的研究

The blood monocytes have been well known as one of the origins of foam cells in atherosclerotic plaque, but the mechanism controlling the migration of monocytes into the subendothelial space is still unclear. The chemotactic activity of the conditioned medium from cultured human umbilical vein endothelial cells for human blood monocytes was investigated by micropore filter assay; meanwhile, heat stability and enzyme digestion assays were undertaken. The results showed that the conditioned medium from the cultured endothelial cells was significantly chemotactic rather than chemokinetic for monocytes. The conditioned medium from the cultured endothelial cells still retained the chemotactic activity for monocytes although it was heated at 80C and 100C for 15 min respectively, whereas after digestion with protease, the chemotactic activity vanished. From the above-mentioned facts, it is reasonable to believe that cultured human umbilical vein endothelial cells can secrete a chemotactic factor for monocytes, which is a kind of peptide.     

黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的增殖作用研究

目的：观察黄芪注射液对人血管内皮细胞的作用。方法：黄芪注射液与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cell line EVC-304)共同培养后，采用MTT法及形态学方法观察黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用。结果：黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞有显著增殖效应，具剂量依赖性，且成正相关。     

人脐静脉内皮细胞饲养层促进胚胎干细胞的生长

目的 探讨人脐静脉内皮细胞是否可作为饲养层支持胚胎干细胞(ESCs)的生长.方法 分离培养人脐带内皮细胞,采用生长良好的3代内皮细胞,灭活后制备饲养层,通过观察碱性磷酸酶染色、胚胎干细胞特异性表面标志物检测、染色体核型分析和严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)体内畸胎瘤形成实验,对在内皮细胞上的E14.1胚胎干细胞进行鉴定.结果 E14.1胚胎干细胞在人脐静脉内皮细胞上传3～8代后细胞呈克隆性生长,高度表达碱性磷酸酶、SSEA.1及Oct-4.传15代后仍表现正常的二倍体核型.传20代的ESCs接种到SCID小鼠,6周后均能形成畸胎瘤.结论 人脐静脉血管内皮细胞能有效地支持ESCs的生长,解决了ESCs临床应用的生物安全性问题.     

丹参对缺氧复氧人脐静脉内皮细胞分泌内皮素1的影响

内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，ＥＴ）是血管内皮细胞分泌的具有极强缩血管活性的多肽类物质。已在动物实验和心、脑梗塞等病人中发现，缺血后再灌注可导致血浆ＥＴ－１含量异常升高，其程度与梗塞面积密切相关，而ＥＴ－１拮抗剂则对缺血后再灌注组织有保护作用。临床研...     

登革病毒Ⅱ型对人脐静脉血管内皮细胞通透性的研究

目的 研究登革病毒Ⅱ型(DENV-2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)通透性的影响.方法 DENV-2病毒滴定,DENV-2接种HUVEC单层细胞,用间接免疫荧光法动态观察DENV-2感染HUVEC的情况(30 min,l、3、6、12、24、30、36、42、48、72 h),实时定量荧光PCR方法检测病毒载量,transwell法检测DENV-2对HUVEC通透性的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果 DENV-2对HUVEC通透性的影响30 min时作用最为明显,其次为42 h时.且病毒载量与HUVEC通透性改变呈正相关.透射电镜结果显示有细胞微绒毛脱落,胞质溶解,部分核膜间隙增宽,甚至是细胞核中也存在裂隙,部分线粒体嵴消失甚至空化,线粒体髓样变,包膜不完整.结论 DENV-2对HUVEC通透性有影响,为探究登革病毒的发病机制提供一定的理论依据.

Abstract：

Objective To research Dengue virus type 2 (DENV-2) to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) permeability. Methods The titration of DENV-2 was detected and HUVEC infection DENV-2 layer of cells. At different time points after infection (30 min, 1 h, 3 h, 6 h, 12 h, 30 h,36 h, 24 h, 42 h, 48 h,72 h), the permeability in HUVEC were detected after Dengue virus infection. The virus load in HUVEC was detected by quantitative real-time PCR. And ultrastructure in HUVEC was observed by electron microscope. Results The permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection by time lasting. The most permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection at 30 min and 42 h. And at the same time the virus load were most value in all of time. The results of the cell membrane were changed by electron microscope. The deciduous cell microvillus and dissd endochylema were founded. And some of nuclear membrane blank was wided by Dengue virus. Even the leakage was founded in cell nucleus. The other change included that disappearance mitochondrial and vacuolization crista, elder pith change mitochondria. In addition, the complete of cell membrane were dissolved. Conclusion The permeability of HUVEC was changed by DENV-2. To explore the pathogenesis of Dengue virus provide certain theoretical basis.     

原代培养人脐动脉内皮细胞的生长与增殖

在未来贴附基质和生长因子情况下，成功地培养了人脐动脉内皮细胞（ＨＵＡＥＣ）。接种密度为１×１０＾５／ｃｍ＾２。采用ＨＥ染色、显微计量法及透射电镜术研究了内皮细胞的形态、生长行为与增殖。（１）接种后２４ｈ已出现岛状细胞团；４８ｈ细胞团增大，可区分出细胞密集的中央区及细胞密度较小的周边区；７２ｈ大部分细胞团已汇合；２１６ｈ内皮细胞衰退、脱落。（２）ＨＵＡＥＣ呈较长的多边形，相邻细胞间以短突相连，内胞质