对张家界市2012年食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测结果的分析

目的：总结单核细胞增生李斯特氏菌鉴定的经验,提高食源性致病菌的检验能力,及时发现食品安全隐患,为单核细胞增生李斯特氏病的控制提供科学依据。方法：采用国家食品安全风险评估中心单核细胞增生李斯特氏菌检验标准程序检测。结果：我市食品风险监测样品中,经对46份食品中单核细胞增生李斯特氏菌分离鉴定,检出单核细胞增生李斯特氏菌3株,检出率为6.5﹪。结论：凉拌菜中存在单核细胞增生李斯特氏菌污染的危险,需加强食凉拌菜中单核细胞增生李斯特氏菌的防控。     

PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

目的:建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法:采用聚合酶链反应（PCR）特异性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血素基因(hly A),用PCR方法检测80份长春地区的食品样品。结果:在706 bp处出现hlyA基因的目的片段,食品样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出12份,阳性率为15%,与吉林省疾病预防控制中心同步进行的国标法检测结果一致,二者符合率100%。结论:PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌更简便、快速、敏感、特异性高,适用于基层单位开展食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染的调查及监测。     

阳江市区6类食品中L monocytogenes污染状况调查

目的了解阳江市区6类食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染状况。方法抽检生肉类、熟肉制品类、奶类、水产品类、冷饮类、蔬菜类共6类食品370份样品，采用国家标准方法并参照广东省2006年食源性致病菌监测工作方案对抽取的样品进行单核细胞增生李斯特氏菌分离、鉴定。结果370份样品中共检出单核细胞增生李斯特氏菌14株，总阳性检出率为3．78％，其中生羊肉中检出2株，生鸡肉中检出5株，熟肉中检出7株，检出率分剐为8．00％（2／25）、10．00％（5／50）和15．56％（7／45），其它类中均未检出。结论阳江市区6类食品中存在单核细胞增生李斯特氏菌的污染，应加强相关的食品监督管理。     

南京地区食品中单核细胞增生李斯特菌分离鉴定

目的了解南京地区食品中单核细胞增生李斯特菌在市售食品中污染状况,为食源性疾病的监测和预警提供科学依据。方法采集11大类食品共计286份样品,按照GB/T4789.30-2003食品微生物检验标准进行单核细胞增生李斯特菌分离培养,然后应用常规方法、ATB细菌鉴定仪和荧光定量PCR方法进行菌株鉴定。结果 2007-2009年食品中单核细胞增生李斯特菌总检出率为12.9%,2007年检出率为16.8%,2008年为16.9%,2009年为7.0%,生肉检出率高达52.4%,2007年生猪肉的检出率为62.5%,2007和2008年鸡肉中的检出率均为60.0%;生速食米面2007年检出率高达30.0%。结论南京地区单核细胞增生性李斯特菌污染较为严重,可能是近年食物中毒发生的潜在危险因素,须引起足够重视。     

2010-2013年呼和浩特市食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染调查分析

目的对呼和浩特市市售食品被单核细胞增生李斯特氏菌污染状况调查并分析,为食品卫生监督人员提供该菌对本市食品污染的科学数据。方法根据国家食源性致病菌监测工作手册及GB/T 4789-2010国家食品卫生微生物学检验方法进行食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测。结果监测8类744份食品样本,共检出单核细胞增生李斯特氏菌10株,阳性率为1.34%,生肉制品和散装食品阳性率分别为4.71%和1.63%,农贸市场检出率为2.56%。结论呼市市售食品一定程度受到单核细胞增生李斯特氏菌的污染,尤以生肉制品较为突出,散装食品污染严重,农贸市场检出率最高。建议加强对这几类食品的监督以及对农贸市场的管理。     

食品中李斯特菌污染调查及其改良检验方法

目的 了解本市食品中李斯特氏菌的污染状况，比较不同增菌方法对李斯特氏菌的检出效果。方法随机采集本市市售生肉、熟肉制品、蔬菜、水产品、生乳及乳制品、冰淇淋等6类484份食品，采用国标LB法、EB法以及改良LB2法进行增菌，分离MMA平板，经TSI和SIM进行筛选，用Vitek-32全自动微生物分析系统、溶血试验、小鼠致病力试验进行鉴定。结果484份食品中有13份检出单核细胞增生李斯特菌，阳性率2．69％，6份检出英诺克李斯特菌，阳性率1．24％，未检出其它种李斯特菌；各类食品中单核细胞增生李斯特菌的污染率以生肉最高（5．74％），其次为熟肉制品（5．0％）。三种增菌方法对食品中李斯特菌检测，改良啦法与国标LB法的检出效果一致，LB法的检出效果明显优于EB法。结论本市市售食品存在不同程度的李斯特菌污染；改良LB2法可快速筛检食品中李斯特菌阴性检品，省时、省成本，适用于基层开展食品中李斯特菌的检测。     

FEPAS牛肉单核细胞增生性李斯特菌几种检验方法比较

目的:探讨在食品检验中单核细胞增生性李斯特菌的检验方法。方法:采用常规培养法、全自动酶联免疫荧光分析仪筛选法、基因探针化学发光检测法、实时荧光定量PCR检测法对英国食品检验能力评价体系(FEPAS)牛肉单核细胞增生性李斯特菌水平测试提供的二份盲样(M164d02A和M164d02B)进行检测。结果:4种检测方法检测结果一致,样本M164d02A检出单核细胞增生性李斯特菌、样本M164d02B未检出单核细胞增生性李斯特菌,而实时荧光定量PCR检测法灵敏度较高,检测周期较短、特异性较高。结论:实时荧光定量PCR检测法在单核细胞增生性李斯特菌的检测中具有灵敏度高、检测时间短、特异性高等特点。     

Comparison of Several Methods for Detection of FEPAS Beef Listeria Monocytogenes

目的:探讨在食品检验中单核细胞增生性李斯特菌的检验方法.方法:采用常规培养法、全自动酶联免疫荧光分析仪筛选法、基因探针化学发光检测法、实时荧光定量PCR检测法对英国食品检验能力评价体系(FEPAS)牛肉单核细胞增生性李斯特菌水平测试提供的二份盲样(M164d02A和M164d02B)进行检测.结果；4种检测方法检测结果一致,样本M164d02A检出单核细胞增生性李斯特菌、样本M164d02B未检出单核细胞增生性李斯特菌,而实时荧光定量PCR检测法灵敏度较高,检测周期较短、特异性较高.结论:实时荧光定量PCR检测法在单核细胞增生性李斯特菌的检测中具有灵敏度高、检测时间短、特异性高等特点.     

南通市食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染情况分析

目的了解食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染情况，预防李斯特菌病的发生和流行。方法样品的分离和菌株鉴定均按GB4784-2003《单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行。结果食品受到单核细胞增生李斯特氏菌污染较严重。结论加强食品生产经营单位原材料生产、加工、存储中的卫生监督和管理，预防食物中毒的发生。     

恩施市豆制品单核细胞增生李斯特氏菌污染状况调查

目的了解恩施市市售豆制品单核细胞增生李斯特氏菌污染状况,为该市的食源性疾病和食物中毒监测提供科学依据。方法全年二次分别对恩施市4大农贸市场和4家大型连锁超市出售的豆制品进行随机抽样,共采集样品62份,用国家标准方法进行检测。结果从62份豆制品中检出单核细胞增生李斯特氏菌5株,总的检出率为8.1%。结论恩施市市售豆制品受到不同程度的单核细胞增生李斯特氏菌污染,地方主管机构应加强豆制品生产加工、运输等环节的安全监督监测力度。     

快速检测单核细胞增生李斯特菌LAMP方法的建立

目的:建立一种检测单核细胞增生李斯特菌核酸的快速、特异的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermalamplification,LAMP)方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌的李斯特菌溶血素hlyA基因设计4条LAMP引物,在水浴箱内65℃保温约60 min,完成对单核细胞增生李斯特菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色和电泳鉴定。利用LAMP和PCR方法同时检测1株单核细胞增生李斯特菌和10株非单核细胞增生李斯特菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性。用LAMP和PCR方法分别检测一系列稀释后的单核细胞增生李斯特菌菌液,比较两者的敏感性。结果:经肉眼、加染料和电泳均能观察到1株单核细胞增生李斯特菌LAMP扩增阳性反应,10株非单核细胞增生李斯特菌没有出现LAMP扩增。LAMP敏感度比PCR高,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌的检测下限为3 cfu/ml,PCR检测下限>300 cfu/ml。LAMP检测速度比PCR更快,只需要60 min。结论:建立了一种检测单核细胞增生李斯特菌的快速、特异的LAMP方法。     

食品中单核细胞增生李斯特菌分离及药敏试验的研究

目的：了解食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的污染状况及药敏情况。方法:菌株分离鉴定应用国家卫生标准检验方法、API法和多聚酶链反应(PCR)；药敏试验采用Kirby—Bauer法。结果:李斯特氏菌(李氏菌)总污染率为5．18％(16／309)，其中生肉和水产品均为8％、熟肉制品为11．51％、生牛奶为3．51％、乳制品和蔬菜均未检出，Lm检出率为1．29％(4／309)，经PCR测定4株Lm同时含有内化素基因和李氏溶血素O基因，并且溶血试验与小鼠致病力试验均为阳性。药敏试验选用12种抗生素，4株Lm对庆大霉素、万古霉素、卡那霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、红霉素、氯霉素、四环素、头孢噻吩、头孢唑啉敏感；对依诺沙星和呋喃妥因耐药。结论:李氏菌在多种食品中均有不同程度的污染，4株Lm小鼠致病力阳性；溶血试验和PCR测定的溶血素基因是鉴别Lm的一个重要方法，Lm对多种抗生素敏感，对依诺沙星和呋喃妥因耐药。     

单核细胞增生性李斯特菌fbpa基因敲除菌株的构建

 目的构建单核细胞增生性李斯特菌fbpa基因敲除菌株。方法 克隆fbpa及其上、下游基因,构建其载体质粒;通过酶切反应将上、下游基因分别重组到载体质粒中,形成同源重组质粒;同源重组质粒电转入细菌内,进行同源重组;采用PCR、Western blot鉴定敲除菌株。结果 单核细胞增生性李斯特菌fbpa基因敲除菌株基因组DNA无fbpa基因片段,且无FbpA蛋白表达。结论 成功构建单核细胞增生性李斯特菌fbpa基因敲除菌株     

几种常见肠道致病菌多重PCR检测的效果评价

目的：建立一种应用多重PCR技术,能够同时快速准确检测大肠杆菌O157、副溶血性弧菌、普通变形杆菌和单核细胞增生李斯特菌4种常见肠道致病菌的方法。方法：根据大肠杆菌O157、副溶血性弧菌、普通变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌的特异基因作为目的基因,设计相应的引物,并进行实验优化以确立对4种肠道致病菌的检测体系。并对市售经果汁样品人工随机染菌后进行模拟样品验证。结果：该多重PCR方法能够有效地扩增出相应致病菌的目的基因片段,其中单核细胞增生李斯特菌扩增片段为155 bp,大肠杆菌O157扩增片段为366 bp,变形杆菌扩增片段为522 bp,副溶血弧菌扩增片段为199 bp,且特异性较强。对4种目标菌的检测灵敏度可达到103CFU/mＬ。能够检测出模拟样品中随机接种的任意3种细菌。结论：利用建立的多重PCR可以快速、准确地筛查大肠杆菌O157、副溶血弧菌、普通变形杆菌和单核细胞增生李斯特菌。     

4种食源性致病菌污染状况调查

目的了解肇庆市食品中沙门氏菌、单增李斯特菌、EHEC O157:H7和副溶血性弧菌的分布状况、动物储存宿主的种类、菌株生物学特点,初步确定可能污染上述致病菌的高危食品,为食物中毒监测提供科学依据。方法依据国标方法,采用进口显色培养基。对样本分别进行沙门氏菌、单增李斯特菌、EHEC O127:H7和副溶血性弧茵分离、生化及血清学鉴定。结果监测生肉(猪、牛、鸡)、熟肉、水产品三类样品共58件,共检出致病菌6株,总检出率10．3％。其中分离沙门氏菌4株,检出率6．9％;单增李斯特菌2株,检出率3．4％:EHEC O157:H7和副溶血性弧菌均未检出。3类食品中致病菌阳性率最高的为生肉(17．9％),其次为水产品(5．0％),熟肉未检出致病菌。结论肇庆市居民主要消费食品存在食源性致病菌污染,其中生肉是主要污染食品品种,生肉(猪肉)中沙门氏菌带菌率较高(30．0％),主要血清型为德尔卑沙门氏菌,熟肉未检出致病菌。     

PCR方法检测单核细胞增多性李斯特菌的实验研究

目的建立一种快速、简便、准确，适合于基层应用的检测鉴定Lm的方法。方法选取iap基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对4株标准株及4株无关茵进行PCR扩增，得到进一步验证。采用PCR和常规方法同时对人工感染的牛奶进行检测鉴定。结果4株标准株获得了预期700bp左右的扩增片段，而同属的L.welshimefi、L．grayi、粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌均没有这一特异性条带。检测人工感染牛奶20份，检出率为90％，高于传统分离培养法（60％）。结论建立的PCR法可用于单增李斯特氏菌的快速、特异、敏感诊断。     

2012年绵阳市食源性致病菌监测结果分析

目的了解绵阳市食源性致病菌污染状况及污染途径,初步确定高危食品的种类,为食源性疾病的监测提供科学的依据。方法根据（（2012食源性致病菌监测工作手册》提供的微生物检验标准操作程序对2012年3—12月采集的8大类食品共计360个样品进行沙门菌、志贺氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌0157：H7、阪崎肠杆菌,蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌0104：H4、大肠埃希氏菌计数,除大肠埃希氏菌计数外共计8种致病菌的分离鉴定。结果360个样品中除大肠埃希氏菌以外,共检出致病菌30株,检出率为8．3％（30／360）。其中沙门菌检出3株,检出率0．9％（3／320）;单增李斯特菌检出5株,检出率1．9％（5／260）;金黄色葡萄球菌检出3株,检出率0．9％（3／330）;蜡样芽孢杆菌检出18株,检出率15．7％（18／115）;阪崎肠杆菌检出1株,检出率2．5％（1／40）。未检出肠杆菌0157：H7、大肠杆菌0104：H4和志贺氏菌。其中蜡样芽孢杆菌检出率最高（15．7％）。结论绵阳市2012年某些食品存在一定程度的食源性致病菌污染,凉拌菜、熟肉制品是食源性疾病的高危食品;单增李斯特菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌是食源性疾病的潜在高危致病菌。卫生监督执法部门应采取有效的控制措施加强食品卫生监督管理,减少食源性疾病的发生。     

沧州市2009年食源性致病菌污染状况调查

目的了解沧州市2009年食品中沙门氏菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、肠出血性大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌的污染状况,为沧州市食源性致病菌和食物中毒监测提供科学依据。方法依据国家食源性致病菌监测网2009年度工作手册,对3类食品进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、肠出血性大肠埃希氏菌等5种致病菌的分离、生化及血清型鉴定。结果 46份样品中共检出致病菌14株,总检出率为35%。其中沙门氏菌3株,检出率为7.5%;副溶血弧菌11株,检出率为27.5%;单增李斯特菌、肠出血性大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌未检出。结论 2009年沧州市食品中存在食源性致病菌的污染,其中水产品污染较重。希望卫生监督部门加大对上述产品流通、销售和餐饮的管理,防止食源性疾病的发生。