一种纳米粒细胞动力学的生理药动学模型的建立与解析

目的：以纳米粒与细胞的相互作用过程为基础,建立一种纳米粒细胞动力学的生理药动学模型。方法：以受体介导的纳米粒细胞摄取过程为基础,建立描述纳米粒细胞摄取和细胞清除的动力学模型,对纳米粒的细胞摄取和清除数据进行拟合,获取模型参数,并将拟合结果与实验数据进行对比。结果：建立了一种包含纳米粒隔室和纳米粒清除隔室的动力学模型,并且获得了细胞内纳米粒含量和纳米粒消除量的数值计算方法。通过对白蛋白纳米粒的细胞摄取数据和细胞清除数据的拟合,获取了模型参数,并且模型的拟合结果与实验测定结果相符。结论：该模型能较好地对纳米粒的细胞摄取-细胞清除的动力学进行模拟。同房室模型相比,该模型含有与细胞生理因素有关的模型参数,因此该模型在对纳米粒多细胞动力学研究中具有较大的优势。     

胰岛素输注治疗62例初诊糖尿病患者的疗效及其对胰岛β细胞功能的影响

目的探讨胰岛素输注(SCII)治疗对初诊2型糖尿病患者临床疗效及胰岛β细胞功能的影响。方法选取我院2014年1月至2015年6月收治的初诊2型糖尿病患者62例,空腹血糖水平检测11.2 mmol/L以上,对患者进行为期2周的SCII强化治疗,并分别对其治疗前后的空腹血糖水平(FPG)、餐后2 h血糖水平(2h PG)、空腹胰岛素水平、餐后2 h胰岛素水平进行观察记录,并通过Homa模型来计算胰岛素抵抗指数和Homa-β功能指数,治疗成功患者进行为期3个月的随访。结果经过为期2周的SCII强化治疗后,患者在FPG、2h PG、Homa-β功能指数、胰岛素抵抗指数等方面均取得显著成果,胰岛β细胞功能显著改善。结论在对初诊2型糖尿病患者的临床治疗中,胰岛素输注(SCII)强化治疗能够取得良好的临床效果,明显改善患者胰岛β细胞功能,具有临床推广价值。     

氧化苦参碱通过影响辅助性T细胞17/调节性T细胞的比例对急性淋巴细胞白血病小鼠免疫功能的影响

目的 探讨氧化苦参碱(OMT)通过影响辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)的比例对急性淋巴细胞白血病小鼠免疫功能的影响。方法 2021年6—12月将50只小鼠按随机数字表法分为正常对照组、非干预组、OMT低、中、高剂量组,正常对照组灌胃等量生理盐水,其余四组小鼠于右前侧皮下注射L1210细胞悬浮液建立急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠模型。造模成功后进行干预治疗,OMT低、中、高剂量组分别灌胃50、100、200 mg/kg剂量的OMT,正常对照组和非干预组注射灌胃生理盐水。采用人工计数法进行白细胞计数及分类;计算脾脏和胸腺指数;ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-17、IL-22、转化生长因子-β(TGF-β)和IL-10水平;流式细胞术检测CD4+、CD8+百分比、CD4⁺/CD8⁺及Th17、Treg比例。结果 OMT可增加小鼠体质量、中性粒细胞数量、CD4⁺/CD8⁺、脾脏和胸腺指数,降低皮下瘤质量、L1210细胞、淋巴细胞、白细胞数量及Th17/Treg。正常对照...     

拓扑替康对宫颈癌HeLa细胞的抑制及放疗增敏作用

目的研究拓扑替康(TPT)对宫颈癌HeLa细胞的抑制和放疗增敏作用。方法噻唑蓝法(MTT)和流式细胞仪法(FCM)检测不同浓度TPT在不同作用时间下对HeLa细胞的抑制作用;细胞克隆形成法进一步检测TPT作用24h和48h后对HeLa细胞抑制及放疗增敏作用,应用单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放疗增敏比。结果TPT对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用呈时间剂量依赖性,作用浓度越大、作用时间越长,对肿瘤细胞的抑制程度越大(P<0.05)。TPT作用24h时的半数致死浓度(IC50)为8μg/mL,显著低于作用48h和72h时IC50(P<0.05)。FCM检测TPT联合放射线辐射对HeLa细胞的抑制率为68.2%,明显高于单化疗组(45.7%)和单放射线辐射组(14.4%)(P<0.05)。细胞克隆形成法表明TPT作用24h和48h后联合不同剂量放射线,对HeLa细胞的杀伤作用明显增强,提示TPT具有放疗增敏作用。应用单击多靶模型拟合生存曲线得到24h和48h放疗增敏比为1.167和1.344。结论TPT对宫颈癌HeLa细胞具有抑制和放疗增敏作用,呈时间剂量依赖性,其机制可能与细胞放射线损伤修复功能抑制有关。     

牛磺酸对心肌缺血损伤细胞凋亡与Fas/FasL基因表达变化的影响

目的探讨大鼠心肌缺血损伤心肌细胞凋亡与Fas/FasL基因表达变化及牛磺酸对其的影响。方法结扎冠状动脉制备心肌缺血模型,转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学法检测Fas/FasL蛋白水平,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分析Fas基因mRNA表达变化。结果心肌缺血后心肌细胞凋亡指数、Fas/FasL蛋白阳性染色细胞指数及Fas基因的mRNA表达水平均明显增加,心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量升高,Ca2+-ATP酶活性降低。牛磺酸能明显降低心肌细胞凋亡指数,Fas基因mRNA表达及Fas/FasL蛋白阳性染色细胞指数,抑制心肌组织MDA的生成,提高Ca2+-ATP酶活性。结论牛磺酸对心肌缺血的心肌细胞凋亡与Fas/FasL基因表达水平增高有较好的拮抗作用。     

毛蕊异黄酮抑制氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡研究

目的研究毛蕊异黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法将对数生长期PC12细胞随机分为4组:正常对照组(Control)、模型组(Model)、毛蕊异黄酮组(Calycosin,0.07μmol·L~(-1))和尼莫地平组(Nimodipine,5.00μmol·L~(-1),阳性对照药组)。用CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡率和凋亡指数;免疫荧光染色检测细胞Bax/Bcl-2比值;Western blot检测细胞凋亡蛋白caspase-3表达。结果与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05);与Model组相比,Calycosin组和Nimodipine组细胞存活率均明显升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数均明显降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论毛蕊异黄酮可明显提高氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞存活率,抑制细胞凋亡,其作用机制与毛蕊异黄酮调控凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达有关。     

甲状腺功能亢进患者胰岛β细胞状态的观察

目的 探讨胰岛β细胞功能障碍在甲亢合并糖代谢紊乱发病过程中的影响.方法 对8例正常对照(NC组)、58例不同糖代谢紊乱的甲亢患者进行研究,测定空腹、1-h,2-h血糖、胰岛素,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、胰岛素敏感指数(ISI).结果 甲亢合并糖代谢紊乱组HOMA-IR明显高于NC组(P＜0.05);甲亢糖尿病组HOMA-β明显低于NC组(P＜0.05).结论 甲亢合并糖代谢紊乱患者的胰岛素敏感性降低,严重患者胰岛β细胞功能降低;甲亢治疗后上述指标有所好转.     

脐血来源树突状细胞增强CIK细胞对肺癌细胞株的杀伤作用

目的探讨肺癌细胞株A549肿瘤冻融抗原负荷脐血来源树突状细胞(DCs)与CIK细胞混合培养后对A549细胞杀伤活性的影响作用。方法取对数生长期的A549细胞制备肿瘤抗原(Ag),用脐血单个核细胞(CBMC)分别制备DCs和CIK细胞;用负荷Ag的DCs和CIK细胞共培养,诱导Ag-DC-CIK细胞。用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测CBMC、CIK、Ag-CIK和Ag-DC-CIK对A549肿瘤细胞株的杀伤活性。结果脐血DCs高表达CD86、CD40,中度表达CD83和CD80,低表达CD11c。实验组细胞(Ag-DC-CIK)对A549细胞的杀伤能力(62%)明显高于对照组(P<0.01),结论肿瘤抗原负荷的DCs能增强CIK细胞对靶细胞的杀伤活性,为DCs的免疫治疗提供了新的思路。     

细胞DNA定量分析在宫颈癌分期中的应用

目的探讨细胞DNA定量分析在宫颈癌分期中的应用价值。方法选择2012年6月至2014年12月于我院门诊行宫颈癌筛查的649例妇女。对其同时进行宫颈细胞DNA定量分析及宫颈液基细胞学检查,同时对上述任一检查出现阳性者进行宫颈病理组织切片活检,并对宫颈组织病理分期与细胞DNA指数评分进行分析。结果宫颈细胞DNA定量分析阳性率为20.34%高于宫颈液基细胞检查12.63%,差异有统计学意义(χ~2=13.9885,P=0.0002)。以宫颈组织病理学诊断结果为标准,宫颈细胞DNA定量分析阳性符合率为56.06%高于宫颈液基细胞学检查的36.59%,差异有统计学意义(χ~2=11.9881,P=0.0005)。宫颈组织病理分期与细胞DNA指数评分呈正相关关系(r=0.2469,P=0.0339)。结论细胞DNA定量分析对宫颈癌诊断的特异性和敏感性均高于宫颈液基细胞检查,且DNA指数可作为宫颈癌分期的潜在诊断依据。     

穿琥宁抑制流感病毒诱导狗肾传代细胞凋亡

目的 :探讨穿琥宁对流感病毒诱导狗肾传代细胞 (MDCK)的影响。方法 :采用观察细胞形态学改变 ,计算细胞凋亡的百分数及流式细胞仪 (FCM )测定法。结果 :病毒感染组细胞在光镜下可见细胞核产生凋亡的形态变化 ,细胞凋亡百分率 (凋亡指数AI)高于正常细胞 (P <0 .0 1) ,且A/南昌 / 692 / 97(H1 N1 )高于B/南昌 / 495 / 97毒株 (P <0 .0 1) ,说明流感病毒可诱导细胞凋亡 ,而H1 N1 型株比B型株强 ;H1 N1 型和B型流感病毒感染细胞组的AI明显高于穿琥宁与流感病毒同时作用的细胞组(P <0 .0 1)。结论 :穿琥宁可抵抗流感病毒诱导细胞凋亡 ,其抑制效率类似利巴韦林。     

以Annexin V/PI法检测新风胶囊对AA大鼠滑膜、胸腺及胃黏膜细胞凋亡的影响

目的观察以Annexin V/PI法检测新风胶囊对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)大鼠滑膜、胸腺及胃黏膜细胞凋亡的影响,探讨新风胶囊的作用机制.方法采用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,设立正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤(MTX)对照组、雷公藤多苷(triperygium wilfordii polycoride tablet, TPT)对照组和新风胶囊(xinfeng cepsule, XFC)治疗组.记录各组大鼠的关节炎指数及体重变化,应用流式细胞仪(FCM)以Annexin V/PI法测定各组大鼠滑膜、胸腺及胃黏膜细胞凋亡率.结果与治疗前相比,XFC、TPT及MTX组治疗后大鼠的关节炎指数显著降低(P<0.05～0.01),XFC组治疗后AA大鼠体重增加(P<0.05),而TPT及MTX组体重无变化(P>0.05);模型组滑膜及胸腺细胞凋亡率低于胃黏膜细胞凋亡率,高于正常对照组(P<0.05),XFC组滑膜及胸腺细胞凋亡率高于胃黏膜细胞凋亡率,低于模型组、TPT及MTX组(P<0.05～0.01).结论XFC与MTX、TPT一样能降低AA大鼠关节炎指数,在增加AA大鼠体重、促进滑膜、胸腺细胞凋亡及抑制胃黏膜细胞凋亡方面优于MTX和TPT.新风胶囊的作用机制是促进滑膜细胞凋亡,抑制滑膜增生;促进胸腺细胞凋亡,抑制自身免疫反应以及抑制胃黏膜细胞凋亡,保护胃黏膜.     

对氨基水杨酸钠对铅诱导体外培养PC12细胞凋亡的影响

目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对铅诱导PC12细胞凋亡的影响。方法 PC12细胞培养至其对数生长期后,正常对照组和正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组细胞于正常培养液中培养24 h后弃培养液,前者加入正常培养液、后者加入PAS-Na继续培养24 h。醋酸铅模型组及醋酸铅+PAS-Na 20,100和500μmol·L~(-1)组先与醋酸铅(终浓度10μmol·L~(-1))共培养24 h后弃培养液,再加入相应浓度PAS-Na继续培养24 h。用MTT法测定细胞存活率,试剂盒方法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Hoechst33342荧光染色检测凋亡率,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测PC12细胞早期凋亡率,Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和P53蛋白水平。结果与正常对照组比较,醋酸铅模型组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡形态变化典型,细胞早期凋亡率增高(P<0.05),细胞内GSH含量降低(P<0.01),P53蛋白水平升高(P<0.01),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01);正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组上述指标未见明显变化。与醋酸铅模型组比较,醋酸铅+PAS-Na组细胞存活率增高(P<0.05),细胞凋亡率和早期凋亡率均降低(P<0.05),细胞内GSH含量增高(P<0.01),P53蛋白水平和Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05)。结论 PAS-Na对铅致PC12细胞凋亡有一定的拮抗作用,其机制可能与PAS-Na抗脂质过氧化损伤和降低Bax/Bcl-2比值有关。     

木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞的影响

目的研究木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞体外增殖的抑制和诱导凋亡作用。方法不同浓度木犀草素作用于指数生长期膀胱肿瘤T24细胞后应用MTS比色法检测细胞增殖的抑制作用。通过DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况。结果浓度为0.01～0.04mg/mL的木犀草素对体外培养的膀胱肿瘤T24细胞有明显的抑制作用。DNA凝胶电泳结果显示:空白对照组没有出现DNA"梯带";其他4组(除木犀草素0.004mg/mL组)均出现不同程度的DNA"梯带",显示出细胞凋亡的特征。结论木犀草素在浓度为0.01～0.04mg/mL时对膀胱肿瘤T24细胞有通过诱导细胞凋亡的方式抑制细胞生长的作用,可能具有治疗膀胱肿瘤的临床价值。     

一种新的数学模型在肺炎克雷伯菌氨基糖甙类耐药指数拟合与推测中的应用

目的 构建派生于灰色模型与神经网络模型的灰色神经网络模型,探讨其在肺炎克雷伯菌氨基糖甙类耐药指数拟合及推测的应用.方法 收集中国期刊全文数据库(CNKI)及国内相关数据库文献报道的1995-2009年期间肺炎克雷伯菌氨基糖甙类药物的耐药性数据,分别应用灰色模型GM(1,1)、BP神经网络模型进行拟合推测,最后构建派生于这两种模型的GBP神经网络模型.以x2拟合优度检验及平均绝对误差(MAE)、误差标准差(RSE)、平均绝对百分误差(MAPE)衡量拟合及推测结果的合理性及准确性.结果 1995-2009年期间肺炎克雷伯菌氨基糖甙类药物的耐药指数经三种模型拟合,显示拟合优度检验结果均为x2＜x2 0.995,P＞0.995,且对比2007-2009年推测值各精度衡量标准MAE、SDE、MAPE值以GBP模型最小,提示其推测效果最佳.结论 灰色神经网络模型能以较高精度(MAPE＜5％)拟合细菌耐药性发展趋势,提高了拟合与推测结果的稳定性及可靠性,有利于为抗菌药物的选择应用及细菌耐药性控制提供参考依据.     

连接蛋白32及细胞缝隙连接对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的研究连接蛋白32及细胞缝隙连接对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响。方法以A2780为亲代细胞,采用药物浓度递增法构建对顺铂耐药的卵巢癌细胞系(A2780-CDDP),CCK8法测定顺铂对肿瘤细胞的IC50,计算耐药指数(resistance index,RI)。"细胞接种荧光示踪法"检测卵巢癌细胞耐药行程过程中细胞的缝隙连接功能及Cx32的表达情况;调节A2780-CDDP细胞Cx32的表达,观察耐药性的变化;提细胞膜及胞浆蛋白,用Western印迹分别检测Cx32在A2780和A2780-CDDP的表达分布情况。结果本研究建立了顺铂耐药人卵巢癌细胞株A2780-CDDP,亲代细胞IC50为4.7 mg·L~(-1),A2780-CDDP的IC50为33.8 mg·L~(-1),耐药指数为7.2。同时,随着耐药性的增强,Cx32表达量逐渐增加,增强A2780-CDDP细胞中的GJ功能可提高顺铂的细胞毒性。此外,尽管Cx32在A2780-CDDP细胞中表达增加,但它更多地定位于细胞质而不是细胞膜,并且在A2780-CDDP细胞中下调Cx32的表达可以使其对顺铂治疗敏感。结论 Cx32参与顺铂耐药,Cx32在胞质中的定位对卵巢癌顺铂耐药有重要意义。     

绿原酸跨细胞转运机制研究

目的利用Caco-2和MDCK细胞单层模型研究绿原酸(chlorogenic acid,CGA)的跨细胞转运过程及其机制。方法①Caco-2和MDCK细胞单层模型建立:Caco-2、MDCK细胞分别按密度1×105、5×104个细胞/cm2接种到Milli-cell-CM culture plate inserts上培养,待细胞单层达到一定致密程度后进行透过实验。②透过实验:用M2e酶标仪测定CGA在不同方向、不同浓度下的跨细胞转运情况并计算累积透过量。结果在两种细胞模型上CGA均有不同程度的双向跨细胞转运(吸收和分泌),P-gp抑制剂维拉帕米能明显减少CGA的分泌。结论CGA跨细胞转运同时存在吸收和分泌的动力学过程。P-gp部分参与CGA的分泌机制。     

探讨临床医学血液细胞检验的质量控制措施

目的探究临床医学血液细胞检验的质量控制措施。方法资料随机选择2013年1月至2013年3月在本院进行血液细胞检测者48例,检测中抗凝试剂选择EDTA-K2,分析不同比例稀释浓度及不同温度下,血液细胞检验血样各参数项目的检测结果情况。结果对不同稀释比例的血样进行血液细胞的检测中,比例正常及比例不准两组的血液检测中血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、红细胞(RBC),比较差异明显具有统计学上的意义(P<0.05);在低温和室温环境下血液细胞的检测中,随着时间的变化血液检验的结果,会出现明显改变,比较差异均具有统计学上的意义(P<0.05)。结论临床医学的血液细胞检验过程中,数据结果受到很多不同因素影响,需严格控制临床医学血液细胞检验过程中的质量,从而提供更可靠和准确的临床疾病诊断数据信息。     

特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对B16黑色素瘤多途径抑瘤作用的研究

目的探讨特异性抗原致敏的树突状细胞(dentritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)细胞对B16黑色素瘤的作用。方法采用特异性肿瘤抗原致敏的DC与CIK细胞共同培养,分析其免疫表型,计算抑瘤率;流式细胞(FCM)检测癌细胞增殖周期中G0/G1期、S期、G2/M期细胞比率和细胞凋亡指数(apoptosis Index,AI)、细胞增殖指数(proliferation Index,PI)的变化;透射电镜观察形态学变化;并用MTT法检测其对肿瘤细胞的杀伤力。结果特异性抗原致敏的DC-CIK细胞组抑瘤率高于DC-CIK组和CIK组;FCM检测G0/G1期细胞比率、AI显著升高,S期无明显变化,G2/M期细胞比率、PI显著下降;特异性抗原致敏的DC-CIK细胞组杀伤活性明显升高(P<0.05)。结论特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对B16黑色素瘤的抑瘤作用明显高于DC-CIK细胞和单纯CIK细胞。     

应用细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒药物

目的探讨采用已建立的细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒(HIV)药物的可靠性。方法以齐多夫定为阳性对照,使用HIV-1急性感染系统(MT-4/HIV-1ⅢB)、HIV-1耐药性毒株系统(MT-4/3TC耐药株)、HIV-1慢性感染系统(H9/HIV-1ⅢB)和HIV-1临床分离株感染系统(PBMC/HIV-1GX02),分别测定药物的细胞毒性和抗HIV-1活性,计算药物的半数细胞毒性浓度(TC50)、半抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI)。同时对4种药物DPC961、牛膝多糖、艾乃吉1号和痰热清注射液进行了抗HIV活性检测。结果测定了齐多夫定在4种细胞-病毒系统的TC50,IC50和TI与文献报道相近。DPC961在4种细胞/病毒培养系统的TI分别为979,5348,3912和2745;牛膝多糖分别为323,223,2777和173;艾乃吉1号仅在MT-4/HIV-1ⅢB模型上T1为2.6。结论使用本细胞模型通过检测药物的TC50,IC50及TI进行药物初筛是可靠的。药物DPC961、牛膝多糖和艾乃吉Ⅰ号具有不同程度的体外抗HIV-1活性,痰热清注射液未检测到抗HIV-1活性。     

贲门癌及癌前病变中细胞凋亡与FasL表达的关系

目的研究贲门癌前病变及贲门癌中细胞凋亡与FasL表达的关系,探讨细胞凋亡在贲门癌发生中的作用。方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组化染色对正常胃黏膜10例,慢性胃炎72例和贲门癌50例中凋亡细胞及FasL表达状态进行原位观察和比较。结果萎缩性胃炎、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠化生及异型增生的凋亡细胞指数(12.8%,17.0%,14.6%,9.6%,8.0%)显著高于正常黏膜(3.4%)和癌(5.8%)(P<0.01及P<0.05);异型增生组织凋亡细胞指数(8.0%)显著低于萎缩性胃炎和Ⅰ型、Ⅱ型肠化生(12.8%,17.0%,14.6%;P<0.05及P<0.01);Ⅲ型肠化生的凋亡细胞指数(9.6%)显著低于Ⅰ型、Ⅱ型肠化生(17.0%,14.6%;P<0.01及P<0.05)。正常胃黏膜无FasL表达,贲门癌前病变及贲门癌中均有不同程度的FasL表达。FasL表达阳性肠化生、异型增生和贲门癌中的凋亡细胞指数(19.8%,10.0%,8.3%)显著高于其阴性组(12.6%,6.1%,3.4%;P<0.05及P<0.01)。结论FasL对贲门癌前病变及贲门癌组织细胞凋亡具有促进性调控作用,细胞凋亡调控异常在贲门癌发病中可能起重要作用。