沉默胆固醇调节原件结合蛋白2基因对炎症因子所致HepG2细胞内胆固醇异常积聚的影响

目的 探讨沉默胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)2对炎症因子所致HepG2细胞内脂质异常积聚的影响.方法 通过脂质体转染SREBP2-shRNA质粒、G418抗性筛选HepG2细胞,建立沉默SREBP2的HepG2稳定细胞株(SREBP2 shRNA-HepG2)及阴性对照质粒HepG2稳定细胞株(NC shRNA-HepG2).对两种细胞分别给予无血清培养处理(对照组)、炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)α20ng/ml]、高脂[低密度脂蛋白(LDL) 100 μ g/ml]和联合干预(20ng/ml TNFα +100μg/ml LDL)处理.油红O染色及酶法检测细胞中脂质积聚情况,实时定量PCR和Western blot 分别检测SREBP2及其下游靶基因低密度脂蛋白受体(LDLr)和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMGCoA)还原酶的基因和蛋白表达情况.对数据用单因素方差分析及2×2×2析因设计方差分析比较. 结果 成功建立阴性对照稳定细胞株NC shRNA-HepG2及抑制SREBP2表达的稳定细胞株SREBP2shRNA-HepG2.在NC shRNA-HepG2细胞中,TNF α处理使细胞内胆固醇积聚增加,并能上调SREBP2下游靶基因LDLr、HMGCoA还原酶基因和蛋白的表达,其mRNA相对表达量分别为1.68±0.03、1.31±0.05,F值分别为107.42,59.08,P值均＜0.01 ;其蛋白相对表达量分别为1.49±0.10、1.54±0.06,F值分别为46.24,247.10,P值均＜0.01.而在SREBP2 shRNA-HepG2细胞中,TNFα对胞内胆固醇沉积的作用可以被明显减弱,进一步基因和蛋白检测结果显示,炎症因子TNF α对LDLr、HMGCoA还原酶的上调作用亦被明显抑制. 结论 炎症因子通过促进SREBP2及其下游靶基因表达致HepG2细胞内胆固醇异常积聚,而通过RNA干扰抑制SREBP2的表达,可以明显减轻炎症因子所致的细胞内胆固醇的异常积聚.     

炎症对C57BL/6J小鼠肝脏胆固醇积聚及纤维化的影响

目的 观察炎症对小鼠肝脏内胆固醇蓄积、内质网应激及纤维化的影响.方法 将8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=6)和炎症组(n=6),均以高脂饮食,炎症组小鼠隔天皮下注射0.5ml 10％酪蛋白以建立慢性炎症模型,对照组注射等量等渗盐水,14周处死.收集血清和肝组织样本,测定血清及肝组织中炎症因子及脂质水平;油红O、天狼猩红和Masson三色染色观察肝脂质沉积、形态改变以及纤维化程度;荧光实时定量PCR检测肝组织单核细胞趋化蛋白1、肿瘤坏死因子(TNF)α 、胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)2、低密度脂蛋白受体、3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶、活化转录因子6、葡萄糖调节蛋白(GRP)78、骨形成蛋白(BMP)7、转化生长因子(TGF)β、层黏连蛋白、Ⅰ/Ⅳ型胶原的mRNA水平.对数据进行两样本均数t检验或近似t检验.结果 血清中,炎症组白细胞介素(IL)6的水平[(32.41±7.42)pg/ml]高于对照组[(12.55±4.75)pg/ml],t=5.522,P＜ 0.01;总胆固醇水平为(10.62±0.48)mmol/L,低于对照组的(14.82±1.56)mmol/L,t=6.303,P＜0.01.肝组织中,炎症组TNFα的mRNA相对表达水平为2.12±0.72,高于对照组的1.05±0.35,t=3.132,P＜0.01;总胆固醇水平为(23.21±8.75)μg/mg,高于对照组的(12.10±2.57)μg/mg,t=2.984,P＜0.05.油红O染色表明,炎症组肝脏脂滴沉积异常增多;天狼猩红和masson三色染色可见炎症组有更为明显的肝纤维化改变.荧光定量PCR检测表明炎症组SREBP-2、GRP78的mRNA相对表达水平分别为2.63±0.13、2.21±0.99,高于对照组的1.01±0.19、1.07±0.47,t值分别为15.641和2.031,P值均＜0.05.TGF β、Ⅰ型胶原的mRNA相对表达水平分别为1.38±0.28、1.71±0.51,高于对照组的1.01±0.14、1.02±0.27,t值分别为3.032和3.152,P值均＜0.05.BMP-7的mRNA相对表达水平为0.55±0.25,低于对照组的1.01±0.15,t=3.765,P＜0.01.结论 慢性炎症可以明显促进小鼠肝脏胆固醇沉积而加重肝细胞损害,刺激内质网应激,从而增加促纤维化因子表达、抑制抗纤维化因子表达,促进肝纤维化发生.     

肝X受体α、胆固醇调节元件结合蛋白1c介导脂质代谢紊乱在子痫前期中的作用及机制

目的研究子痫前期患者血清和胎盘中肝X受体α(LXRα)及其靶基因胆固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)的表达与脂质代谢紊乱的关系及机制。方法入选子痫前期患者32例(轻度子痫前期15例和重度子痫前期17例)、正常妊娠30例和正常未孕30例。测定各组血脂水平,计算动脉硬化指数[动脉硬化指数=(总胆固醇-高密度脂蛋白胆固醇)/高密度脂蛋白胆固醇];酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组血清中LXRα及SREBP-1c蛋白水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化技术(IHC)检测胎盘中氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)、LXRα及SREBP-1c的mRNA和(或)蛋白表达水平。结果子痫前期组与正常妊娠组比较,总胆固醇[(6.78±1.56)比(5.20±0.96)mmol/L]、三酰甘油[(3.92±1.35)比(2.48±0.78)mmol/L]、极低密度脂蛋白胆固醇[(1.85±0.53)比(1.12±0.35)mmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[(4.31±1.23)比(3.01±0.55)mmol/L]、动脉硬化指数(3.10±1.22比1.88±0.74)增高,高密度脂蛋白胆固醇降低(P0.01或P0.05);正常妊娠组,轻、重度子痫前期组血清及胎盘中oxLDL、LXRα、SREBP-1c的mRNA和(或)蛋白的表达逐步升高(P0.01或P0.05)。相关分析显示,血清LXRα蛋白与血清SREBP-1c蛋白、总胆固醇、三酰甘油、动脉硬化指数呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关。结论子痫前期患者血清及胎盘LXRα表达明显增强,促进其靶基因SREBP-1c的转录和翻译,介导母体及胎盘的脂质代谢紊乱。     

炎症诱导低密度脂蛋白受体表达失调在终末期肾病患者桡动脉泡沫细胞形成中的作用

目的 观察微炎症状态下低密度脂蛋白受体(LDLr)途径在终末期肾病(ESRD)患者泡沫细胞形成及动脉粥样硬化(AS)进展中的作用,并初步探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路激活在炎症致LDLr途径失调中的作用机制.方法 根据血清C反应蛋白(CRP)水平将30例ESRD患者分为对照组(16例)和炎症组(14例),取动-静脉内瘘手术时部分切除的桡动脉组织,观察脂质沉积情况;免疫组化检测肿瘤坏死因子α(TNFα)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1),同时检测mTOR、LDLr及其基因转录调节相关因子的表达,如固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)及SREBP裂解激活蛋白(SCAP);免疫荧光染色检测SCAP与高尔基体的共转位情况.结果 两组患者在病因、年龄、体重、血红蛋白、总蛋白、白蛋白、血糖、血脂谱等指标之间差异无统计学意义(P值均＞0.05);炎症组患者桡动脉TNFα及MCP-1表达增加,并伴随大量泡沫细胞形成和脂质沉积;炎症组患者桡动脉LDLr表达及SCAP由内质网膜向高尔基体的转位显著增加(P＜0.05).进一步分析显示,炎症组LDLr表达增加与mTOR表达上调具有较高的相关性(r=0.733,P＜0.05);且炎症组mTOR与SREBP-2共表达明显高于对照组(P＜0.05).结论 微炎症状态下,ESRD患者AS进展加速,其机制可能与炎症诱导mTOR通路激活,破坏LDLr负反馈调节,导致泡沫细胞形成增加有关.     

苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成及小肠胆固醇转运相关基因表达的影响

目的 探讨苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠胆固醇转运相关基因表达的影响,阐明苦瓜蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用机制.方法 选用36只6周龄的雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为普食组(对照组)、高脂高胆固醇饲料组(高脂组)、高脂高胆固醇+苦瓜蛋白组(苦瓜蛋白组).喂养12周后处死,比较各组血脂水平,苏丹Ⅳ染色观察全主动脉粥样硬化病变程度,主动脉窦冰冻切片油红O染色检测脂质沉积,逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别检测ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达.结果 高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平比对照组明显升高(P＜0.05),而苦瓜蛋白组总胆固醇(14.52±1.06 mmol/L比18.21±1.95 mmol/L)、甘油三酯(0.51±0.11 mmol/L比0.92±0.07 mmol/L)和低密度脂蛋白胆固醇(4.12 mmol/L±0.95比7.16±0.98 mmol/L)水平显著低于高脂组(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇的水平与高脂组比差异无显著性(P＞0.05).苦瓜蛋白组主动脉斑块面积(31.2%±3.6%比69.6%±4.8%)和主动脉窦脂质面积(26.02±3.07 μ m2/比45.23±11.2 μm2)比高脂组显著减少.苦瓜蛋白组小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的mRNA和蛋白表达都比高脂组明显升高(P＜0.05).结论 苦瓜蛋白可通过增加载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中ATP结合盒转运体G5和G8的表达,降低血脂水平,减少主动脉斑块及主动脉窦脂质沉积.     

成纤维生长因子21对载脂蛋白E基因敲除小鼠脂质代谢的影响及机制

目的探讨外源性成纤维生长因子21(fibroblast growth factor,FGF21)对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠血脂和动脉粥样硬化形成的影响及可能机制。方法雄性apoE-/-小鼠24只,随机分为2组:模型组12只和FGF21组12只,另外12只雄性C57BL/6J小鼠作为对照组。3组均给予高脂饮食8周诱导动脉粥样硬化斑块形成。采血测定血脂,通过HE和油红O染色观察斑块的形态,基因和蛋白表达分别应用实时荧光PCR和Western blot进行检测。结果模型组血管内膜增厚,内膜及中膜均可见巨噬细胞、细胞外脂质沉积及脂质侵蚀。与模型组比较,FGF21组TG[(1.82±0.37)mmol/L vs(2.56±0.39)mmol/L]、TC[(6.27±0.62)mmol/L vs(9.27±0.85)mmol/L]、LDL-C[(2.73±0.26)mmol/L vs(4.37±0.77)mmol/L]明显降低,HDL-C[(1.49±0.25)mmol/L vs(0.99±0.23)mmol/L]、过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA[(4.753±0.648)vs(1.348±0.158)]和FGF受体1mRNA[(145.064±33.203)vs(8.505±11.196)]明显升高(P<0.01)。结论FGF21能降低apoE-/-小鼠血脂及斑块形成,机制可能是通过增加过氧化物酶体增殖物活化受体γ的表达。     

高脂饮食性非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏陷窝蛋白-1的变化

目的 探索陷窝蛋白-1在高脂饮食性非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病中的作用.方法 给予12只10周龄雄性C57BL/6小鼠高脂高胆固醇饮食14周,建立NAFLD的动物模型作为实验组.同时,普通饮食饲养同种系小鼠6只作为对照组.第14周末处死全部小鼠,比较两组体质量、肝质量和血脂变化.分别用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹法检测陷窝蛋白-1在NAFLD小鼠肝组织中的基因和蛋白表达水平变化.苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察小鼠肝脏的脂肪变性情况,免疫组织化学染色后观察陷窝蛋白-1在肝组织中分布的变化.采用t检验比较两组肝组织中陷窝蛋白-1 mRNA及蛋白水平的差异,Mann-whitney U检验分析不同程度脂肪肝小鼠的肝脏陷窝蛋白-1表达的免疫组织化学积分差异.结果 实验组小鼠在高脂高胆固醇饮食14周后全部发生NAFLD,其中重度9只,中度3只.与对照组比较,实验组小鼠的血清TC[(1.940±0.300) mmol/L比(3.771±0.800) mmol/L,t=-3.760]、高密度脂蛋白胆固醇[(1.120±0.066)mmol/L比(2.224±0.420) mmol/L,t=-5.474]、低密度脂蛋白胆固醇[(0.510±0.191) mmol/L比(1.241±0.660) mmol/L,t=-3.332]均显著升高(P均＜0.01),但TG差异无统计学意义(P＞0.05).实验组小鼠肝脏陷窝蛋白[1的mRNA(1.536±0.226比0.980±0.272,t=3.371,P＜0.05)和蛋白水平(0.643±0.240比0.100±0.130,t=-4.847,P＜0.01)均显著高于对照组.免疫组织化学结果显示,表达增加的陷窝蛋白-1主要分布于肝细胞膜、脂滴膜和细胞质中.结论 高脂高胆固醇饮食诱导的NAFLD小鼠肝脏陷窝蛋白1水平上调,可能参与了NAFLD的发病机制.     

非酒精性脂肪性肝病小鼠肝组织与脂质代谢相关基因FAS、ACC和SREBP-1水平分析*

目的 探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝组织脂质代谢相关基因水平变化。方法 采用高脂饲料喂养20小鼠,构建小鼠NAFLD动物模型,观察小鼠肝组织病理学变化,检测血清总胆固醇(TCH) 和甘油三酯(TG)含量,采用RT-PCR法检测小鼠肝组织胆固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, FAS)基因变化。结果 10只NAFLD模型小鼠肝细胞排列不整齐,肝细胞内出现大小不等的脂滴;NAFLD模型小鼠血清TG和TCH水平分别为(0.63±0.13)mmol/L和(7.23±0.7)mmol/L,显著高于10只对照组[(0.28±0.06)mmol/L和(2.78±0.6)mmol/L,P<0.001];在实验24 w末,NAFLD组小鼠肝组织FAS 和SREBP-1 mRNA水平分别为(3.9±1.1)和(1.8±0.7),对照组则分别为【(1.0±0.3)和(1.0±0.4),FAS: t = 6.231, P<0.001; SREBP-1: t =2.431, P =0.035】,差异显著,而NAFLD组小鼠肝组织ACC mRNA水平为(1.2±0.5),与对照组【(1.0±0.4), t=0.765, P=0.462】比,无显著差异。结论 NAFLD模型小鼠肝组织与脂质代谢相关基因显著上调,为进一步研究NAFLD的发生发展机制奠定了基础。     

芹菜素对大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体表达的影响

目的 探讨芹菜素对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)表达的影响. 方法 采用高脂饲料喂养的方法复制大鼠NASH模型,成模后分为正常组,模型组,多烯磷脂酰胆碱组,芹菜素低剂量组、中剂量组和高剂量组.实验结束后,进行胰岛素敏感性测定;腹腔静脉取血测定生物化学指标ALT、AST、总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS);计算肝指数和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);提取肝组织,运用免疫组织化学和RT-PCR测定各组大鼠肝组织PPAR α 、PPAR γ蛋白和mRNA表达情况.多组间的比较采用单因素方差分析.结果 胰岛素敏感性的变化:各组之间差异均有统计学意义,两两比较结果显示,正常组明显高于其他组,而芹菜素组高于模型组,尤其是高剂量组;生物化学指标检测结果显示:与模型组ALT[(163.1±15.5) U/L、AST (284.6±23.5) U/L]活性和TC[(2.23±0.76)mmol/L]、TG[(1.94±0.33) mmol/L]、LDL-C[(2.63±0.18) mmol/L]、HDL-C[(0.77±0.51)mmol/L]、FBG[(8.64±1.02) mmol/L]和FINS[(3.48±1.41) U/L]含量相比,芹菜素组尤其是高剂量组能减少ALT [(95.4±7.3)U/L]、AST [(183.7±14.3)U/L]活性和TC [(1.61±0.25)mmol/L]、TG[(1.23土0.21) mmol/L、LDL-C[(1.86±0.13) mmol/L、FBG[(5.29±1.45)mmol/L和FINS[(0.76±0.86) U/L]的含量,升高HDL-C[(1.04±0.17) mmol/L]的含量;与模型组大鼠肝指数(3.75±0.25)和HOMA-IR (1.34±0.06)相比,芹菜素组尤其是高剂量组能够显著减低肝指数(2.90±0.17)和HOMA-IR(0.18土0.04,P＜0.05);免疫组织化学染色和RT-PCR结果显示:与模型组相比,芹菜素组PPAR α 、PPARγ蛋白和mRNA表达增加,尤其是高剂量组,PPAR α 蛋白和mRNA相对表达量分别为18.27±4.05和0.63±0.02,PPAR γ蛋白和mRNA相对表达量分别为8.48±5.05和0.39±0.02,P＜0.05. 结论 芹菜素能改善胰岛素抵抗和糖脂代谢,减轻肝脏脂肪变性和炎症坏死,降低血清TC、TG、LDL-C、FBG、FINS和HOMA-IR水平,提高HDL-C水平,推测其可能对大鼠NASH具有保护作用.     

慢性乙型肝炎与非酒精性脂肪性肝病患者内皮功能检测

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和CHB合并NAFLD患者内皮功能和脂质代谢的差异。方法在CHB患者32例,NAFLD患者35例和CHB合并NAFLD患者44例,使用Endo-PAT2000内皮功能检测仪测定外周动脉张力(PAT),并计算血管反应性充血指数(RHI);检测空腹血糖(FPG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A(apo A)、载脂蛋白B(apo B)、脂蛋白a(LP-A)和游离脂肪酸(FFA)等血液生化指标。结果 NAFLD患者RHI(1.95±0.44)显著高于CHB患者[(1.68±0.28),P0.05];NAFLD和CHB合并NAFLD患者体质指数【BMI分别为(24.77±3.13)kg/m~2和(25.79±2.80)kg/m~2]、TG[(1.52±0.70)mmol/L和(1.68±0.89)mmol/L]、TC[(4.32±0.1.32)mmol/L和(4.18±1.18)mmol/L]、LDL-C[(10.72±46.51)mmol/L和(2.71±0.96)mmol/L]apo B[(0.90±0.20)g/L和(0.85±0.28)g/L]均显著高于CHB患者[(22.63±3.14)kg/m~2、(0.89±0.26)mmol/L(3.51±0.74)mmol/L(2.23±0.56)mmol/L(0.68±0.15)g/L,P0.01]。结论 CHB与NAFLD患者内皮功能和脂质代谢可能存在差异。     

水仙子提取物对高脂血症大鼠血脂调节及肝脏保护的作用

目的 观察水仙子提取物对大鼠高脂血症的预防与治疗作用,及对肝脏脂肪性病变的保护作用.方法 水仙子经组织匀浆、过滤、离心后冷冻干燥,得到提取物干粉.(1)预防性实验:在建立高脂血症模型的同时给以提取物进行干预,实验结束后检测大鼠血脂水平及观察肝脏的病理变化;(2)治疗性实验:建立高脂血症模型后,以最优预防剂量进行干预,实验结束后观察上述指标外,并检测肝脏匀浆液中的超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛水平.结果 (1)预防性实验:不同剂量提取物均可较好的抑制大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度载脂蛋白(LDL-C)的升高及高密度载脂蛋白(HDL-C)的下降,并有效地抑制肝脏的脂肪性病变;其中以高剂量组预防效果最为明显.高剂量组与阴性对照组比较,TC(3.23±0.01)mmol/L对(6.56±0.01)mmol/L、TG(2.33±0.01)mmol/L对(4.12±0.02)mmol/L、LDL-C(2.02±0.01)mmol/L对(3.91±0.02)mmol/L、HDL-C(0.98±0.01)mmol/L(0.76±0.01)mmol/L,差异均有统计学意义(P＜0.01);(2)治疗性实验:水仙子提取物可有效调节高脂血症大鼠血脂水平,治疗组与阴性对照组比较,TC(3.67±0.31)mmol/L对(6.33±0.52)mmol/L、TG(1.99±0.11)mmol/L对(4.08±0.24)mmol/L、LDL-C(1.57±0.12)mmol/L对(3.78±0.14)mmol/L、HDL-C(1.10±0.03)mmol/L对(0.77±0.02)mmol/L,均差异有统计学意义(P＜0.01);明显逆转肝脏的脂肪性病变,提高肝脏匀浆液中的SOD活力,降低丙二醛水平,高剂量组与阴性对照组比较SOD为(276.3±26.8)U/mg对(165.4±16.7)U/mg,丙二醛为(3.67±1.23)nmol/mg对(7.45±2.33)nmol/mg,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 水仙子提取物能有效防治大鼠高脂血症的发生和肝脏的脂肪变性,且有一定的抗氧化能力.     

流体力学介导的RNA干扰对小鼠肝脏线粒体融合素基因-2、空腹血糖和血清甘油三酯水平的影响

目的 观察流体力学介导的RNA干扰(RNAi)对小鼠肝脏线粒体融合素基因-2(Mfn2)、空腹血糖(FBS)和血清甘油三酯(TG)水平的影响.方法 将56只雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组(NC组,n=8)、阴性对照组(HK组,n=24)和Mfn2质粒干扰组(Mfn2组,n=24).HK组小鼠利用流体力学注射75μg阴性对照质粒溶液1.5 ml,Mfn2组小鼠利用流体力学注射75 μg Mfn2 shRNA质粒溶液1.5 ml.应用逆转录-聚合酶链反应和Western blot方法分别测定注射24、72、120 h后,小鼠肝脏Mfn2的mRNA和蛋白质表达;同时分别取血测定小鼠FBS和TG水平.多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用Scheffe's t检验.结果 质粒注射72、120 h后,Mfn2组小鼠肝组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.03和1.01±0.053,较HK组(分别为1.14±0.07和1.18±0.07)明显下降(f值分别为4.027和4.234,P值均＜0.01); Mfn2蛋白分别为7.81±0.80和8.05±0.15,较HK组(分别为8.01±0.08和8.56±0.01)也明显下降(f值分别为2.941和4.883,P值均＜0.05).注射24 h后,Mfn2组小鼠FBS低于HK组[(2.65±0.70)mmol/L比(5.28±0.82)mmol/L,t=6.879,P＜0.01],TG高于HK组[(1.96±0.32)mmol/L比(1.12±0.16)mmol/L,t=-6.711,P＜0.01)],HK组与NC组之间FBS和TG差异无统计学意义(F值分别为1.412和2.711,P值均＞0.05);注射72、12h后,Mfn2组小鼠FBS高于HK组(7.23±0.82)mmol/L比(5.18±0.69)mmol/L,t=2.050,P＜0.01;(7.00±0.67)mmol/L比(6.05±0.76)mmol/L,t=3.57,P＜0.05)],血清TG高于HK组,但差异无统计学意义[(1.53±0.27)mmol/L比(1.37±0.18)mmol/L,t=0.160,P＞0.05;(1.84±0.30)mmol/L比(1.52±0.37)mmol/L,t=0.330,P＞0.05)].结论 流体力学介导的RNAi在干扰72、120h后可有效抑制肝脏目的基因的表达,抑制Mfn2表达可导致小鼠葡萄糖和脂肪代谢异常.     

老年人不同甲状腺功能状态下脂代谢特征与氧化应激的关系

目的 探讨老年人不同甲状腺功能状态下脂代谢特征与氧化应激的关系.方法 初诊老年甲状腺疾病患者86例[甲状腺功能亢进(甲亢)47例,甲状腺功能减退(甲减)39例]、非老年甲状腺疾病患者83例(甲亢43例,甲减40例)和老年健康对照组20例.检测空腹血浆丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD),氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)水平,同时测定血脂指标及甲状腺功能,计算SOD/MDA比值.结果 老年甲亢组血脂各组分均高于非老年甲亢组、低于老年对照组(P＜0.05或P＜0.01);老年甲亢组与非老年甲亢组、老年对照组比较,丙二醛[分别为(10.23±6.29)、(7.37±4.58)μmol/L和(3.66±2.53)μmol/L]、游离脂肪酸(FFA)[分别为(0.86±0.58)、(0.61±0.46)mmol/L和(0.45士0.12)mmol/L]和SOD显著升高(P＜0.01或P＜0.05).老年甲减组与非老年甲减组和老年对照组比较,MDA[(9.03±5.98)、(6.59±3.18)μmol/L和(3.66±2.53)μmol/L]、OX-LDL[(387.36±71.04)、(355.22±45.01)μg/L和(324.53±56.19)μg/L]及部分血脂组分均显著增高(P＜0.05或P＜O.01).老年甲亢组、甲减组SOD/MDA比值均低于老年对照组和非老年组(均为P＜0.01).多元回归分析,甲亢组游离甲状腺素(FT4)和FFA是影响MDA的因素,甲减组非HDL-C和LDL-C与MDA独立相关.结论 初诊老年甲亢和甲减患者氧化应激增强,氧化损伤程度与脂代谢紊乱有关.     

丙氨酸转移酶升高的2型糖尿病患者伴有更多的心血管风险因素

根据血丙氨酸转氨酶(ALT)水平将4 509例2型糖尿病患者分为A组(n=449,ALT增高)和B组(n=4 060,ALT正常),ALT升高的患者为10%.与B组患者相比,A组患者相对年龄更轻[(48.5±11.3对55.7±11.4)岁,P＜0.01]、糖尿病病程更短[(36.8±45.0对56.2±58.8)个月,P＜0.01]、体重指数以及腰臀比更大[(27.7±3.9对25.8±3.4)kg/m2,P＜0.01;0.95±0.06对0.93±0.07,P＜0.01].两组之间的血压存在差别[收缩压(132±19对131±21)mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa,P=0.60;舒张压(78±10对75±10)mm Hg,P＜0.01].A组的空腹血糖[(9.04±2.91对8.63±3.05)mmol/L,P=0.008]、餐后血糖[(13.85±4.67对13.07±4.92)mmol/L,P=0.002]、HbA1C(8.11%±1.82%对7.74%±1.96%,P＜0.01)、空腹胰岛素[(10.59±7.31对7.97±7.18)mU/L,P＜0.01]和餐后胰岛素[(48.96±43.80对35.25±32.37)mU/L,P＜0.01]及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR,4.11±2.85对3.00±2.92,P＜0.01)、甘油三酯[(2.77±2.50对2.19±2.99)mmoL/L,P＜0.01]明显增高,高密度脂蛋白胆固醇[HDL-C,(1.20±0.30对1.29±0.83)mmol/L,P=0.01]更低.Logistic回归分析说明,HbA1C、餐后胰岛素、HOMA-IR、尿酸和尿白蛋白与ALT水平正相关,HDL-C则为负相关.提示ALT增高的2型糖尿病患者发病年龄更轻,有更严重的胰岛素抵抗和更多的心血管危险因素.     

乙型肝炎病毒对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白表达的影响

目的 探讨HBV对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)表达的影响.方法 收集我院感染科诊断为CHB合并肝脂肪变的患者55例,根据患者外周血清HBV DNA载量的不同分为3组:A组:HBV DNA≤103拷贝/ml的患者(15例);B组:103拷贝/ml＜HBV DNA＜105拷贝/ml的患者(18例); C组:HBV DNA≥105拷贝/ml的患者(22例).将C组抗病毒治疗后HBV DNA≤103拷贝/ml的10例患者分为C1组(治疗前)和C2组(治疗后);将C组抗病毒治疗后HBV DNA≥105拷贝/ml的12例患者分为C3组(治疗前)和C4组(治疗后).用油红O染色观察肝组织脂滴的变化;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c及SREBP-2 mRNA的表达;免疫组织化学法检测SREBP-1c及SREBP-2蛋白的表达.多组间比较用单因素方差分析及q检验,配对样本t检验进行抗病毒前后两组间数据的比较.结果 (1)A、B、C组脂滴表 达的红色积分吸光度值分别为1004.27±218.63、1937.01±401.47、4133.79±389.28,各组间油红O红染程度不同(F=385.69,P＜0.01);C1、C2、C3、C4组脂滴表达的红色积分吸光度值分别为4020.84±326.64、1012.02±244.89、4189.18±329.21、4121.76±304.09,与C1组比较,C2组油红O红染程度下调,t=22.55,P＜0.01,差异有统计学意义;C4组与C3组比较,差异无统计学意义.(2)与A组比较,B组与C组SREBP-1c mRNA分别上调(1.218±0.130)倍、(1.798±0.118)倍,A、B、C组SREBP-1c mRNA表达水平比较,F=297.47,P＜0.01,差异有统计学意义.与A组比较,B组与C组SREBP-2 mRNA分别下调95.6%±11.8%、97.2%±15.3%,A、B、C组间SREBP-2 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义.与C1组比较,C2组SREBP-1c mRNA表达水平下调71.4%±8.1%,t=11.224,P＜0.01,差异有统计学意义;与C1组比较,C2组SREBP-2 mRNA表达水平上调(1.034±0.155)倍,差异无统计学意义.与C3组比较,C4组SREBP-1c mRNA表达水平上调(1.012±0.206)倍,差异无统计学意义;与C3组比较,C4组SREBP-2 mRNA表达水平下调99.8%±18.3%,差异无统计学意义.(3)A、B、C组SREBP-1c蛋白表达量分别为36257.21±5709.79、50413.47±4989.28、71025.83±6047.13,3组SREBP-1c蛋白比较,F=178.26,P＜0.01,差异有统计学意义;A、B、C组SREBP-2蛋白表达量分别为32913.52±3951.21、32625.91±4025.06、34173.44±5316.25,3组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-1c蛋白表达量分别为69832.16±4941.36、48735.47±5471.41、70871.69±5083.14、68913.32±5343.22,C1组与C2组比较,t=10.260,P＜0.01,差异有统计学意义;C3与C4组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-2蛋白表达量分别为33980.21±4081.80、34011.50±3859.27、33610.12±4761.10、32915.66±5023.61,C1组与C2组比较,差异无统计学意义,C3组与C4组比较,差异无统计学意义.结论 HBV DNA可能通过干扰SREBP-1c的表达而参与了肝细胞脂肪变性的形成.     

大剂量阿托伐他汀预防对比剂肾病

目的 研究大剂量(80 mg)阿托伐他汀在对比剂肾病预防中的作用.方法 将100例行冠状动脉介入诊断与治疗的患者随机分为大剂量组和小剂量组,在全部采用水化治疗和给予阿托伐他汀10 mg/d的基础上,大剂茸组术前12～24 h阿托伐他汀加量至80 mg口服.观察术前、术后血清肌酐(Scr),内生肌酐清除率(Ccr),血β2-微球蛋白,尿N-乙酰-β-D-葡萄糖酸苷酶(NAG)/尿肌酐(Cr),尿渗透压的改变情况.结果 血β2-微球蛋白于术后1、3、5 d时,大剂量组显著低于小剂量组[(2.35±0.52)mg/L比(2.67±0.64)mg/L,P=0.008]、[(2.49±0.55)mg/L比(2.80±0.64)mg/L,P=0.011]、[(2.29±0.53)mg/L比(2.56±0.66)mg/L,P=0.026];尿NAG/Cr于术后1、3、5 d时,大剂量组显著低于小剂量组[(1.19±0.30)U/mmol比(1.46±0.34)U/mmol,P＜0.001]、[(1.30±0.30)U/mmol比(1.59±0.33)U/mmol,P＜0.001]、[(1.10±0.30)U/mmol比(1.34±0.35)U/mmol,P=0.001];Ccr术后1、3 d大剂量组显著高于小剂量组[(73.69±20.99)ml/min比(65.19±18.72)ml/min,P=0.035]、[(64.04±15.82)ml/min比(56.79±14.50)ml/min,P=0.019].结论 血管造影前使用大剂最(80 mg)的阿托伐他汀可能有助于减少对比剂肾病的发生.     

C肽灌注对Wistar大鼠胰岛微循环的影响

目的 测定生理剂量重组人C肽静脉注射对雄性Wistar大鼠胰岛微循环、血糖和胰岛素分泌的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠分为C肽组和对照组,分别给予C肽(75 nmol/kg体重)和相同容积生理盐水静脉注射;每组再分为葡萄糖组和生理盐水组两个亚组.血流测定采用微球技术.结果 C肽显著增高Wistar大鼠基础胰岛血流[C肽组vs对照组:(0.156±0.018 vs 0.050±0.003)ml·min-1·g-1胰腺,P＜0.01]和胰岛/胰腺血流比值[C肽组vs对照组:(14.33±0.53vs9.16±0.64)%,P＜0.01],胰腺血流向胰岛内重分布.C肽对糖负荷后胰岛微循环无显著影响.C肽降低大鼠腹腔糖耐量试验30 min血糖[C肽组vs对照组:(7.9±0.7 vs 11.5±0.6)mmol/L,P＜0.01];增加胰岛素分泌(AUC胰岛素(0-120),C肽组vs对照组:141.36±15.00 vs 49.78±5.60,P＜0.01).结论 C肽静脉注射改善Wistar大鼠基础胰岛微循环,调节糖负荷后胰岛素分泌.