大黄拮抗CpG DNA有效成分的分离制备及活性研究

目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,至今无有效的治疗手段。细菌Cp6DNA是引起脓毒症的主要病原分子。CpGDNA通过与TLR9结合,介导单核／巨噬细胞的活化,是介导脓毒症发生的重要途径。本研究以CpGDNA为靶点,从中药中定向分离具有拮抗CpGDNA和治疗脓毒症作用的活性物质。方法：（1）应用生物传感器技术、建立以CpGDNA为靶点的筛选抗炎中药的技术平台并对78种中药进行筛选;（2）利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析技术,从大黄中定向分离与CDGDNA具有较高结合活性的组分,并对得到的组分进行初步的活性评价,确定活性组分;（3）在体外实验中,测定活性组分与CpGDNA、lipidA的结合能力,观察活性组分对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264．7细胞分泌炎症介质的抑制作用,在体内实验中,观察活性组分对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用。（4）利用反相HPLC技术对活性组分进行制备分离,获得活性单体化合物;（5）在体外实验中,检测单体化合物与CpGDNA和lipidA的结合能力．观察化合物对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264．7细胞分泌炎症介质的抑制作用。结果：（1）建立了以CpGDNA为靶点应用生物传感器筛选抗炎中药的技术平台;从78种中药中筛选出大黄等14种中药与CpGDNA具有较高结合能力;（2）利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析等技术从大黄水提物中定向分离得到与CpGDNA有较高结合活性大黄D组分;（3）在体外,大黄D组分与CpGDNA、LipidA均具有较高的结合活性,对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF-α有显著的抑制活性,并呈现良好的量一效关系。在体内,大黄D组分对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用,并呈现良好的量-效关系;（4）通过反相HPLC从D组分中分离得到单体化合物大黄酸和大黄素;（5）在体外,大黄酸和大黄素与CpGDNA均具有较高结合能力,均能单独或协同对CpGDNA及LPS刺激RAW264．7细胞分泌TNF—Q产生显著抑制作用。结论：（1）应用生物传感器、以病原分子CpG DNA为靶点,成功地建立了筛选抗炎中药的技术平台;（2）从大黄中分离得到与CpGDNA有较高结合活性的大黄D组分,体内、外生物学活性评价结果显示：大黄D组分对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF—α具有显著的抑制活性,并对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用;（3）从大黄D组分中分离得到单体化合物大黄酸和大黄素,生物学活性评价结果显示,大黄酸和大黄素对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264．7细胞分泌TNF—α具有显著的抑制活性,提示大黄酸和大黄素可能是D组分以及大黄提取物拮抗cpGDNA和脓毒症的主要物质基础。     

青蒿琥酯通过降低TLR4和TLR9mRNA表达保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠

目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用，探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型，观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响；采用ELISA法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠血清TNF-α及内毒素水平的影响；采用小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264．7细胞从离体水平观察青蒿琥酯对不同致炎因子LPS、CpG ODN和热灭活大肠杆菌诱导细胞因子TNF-α和IL-6释放的影响；采用生物传感器技术、流式细胞技术及RT-PCR分别研究青蒿琥酯与LPS和cpG ODN的直接结合、对细胞表面结合及内吞及TLR4和TLR9mRNA表达的影响。结果：青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌脓毒症小鼠具有明显保护作用，可明显降低血清TNF-α及内毒素水平；青蒿琥酯在体外不能直接中和或结合LPS和cpGODN，但可抑制抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODNl826诱导的促炎细胞因子TNF-α、IL-6的释放；青蒿琥酯对细胞内吞或表面结合没有影响，但可抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODNl826诱导的RAW264．7细胞TLR4和TLR9 mRNA高表达。结论：青蒿琥酯可通过降低血清TNF-α释放及内毒素水平保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠，其作用可能与降低TLR4和TLR9 mRNA表达有关。     

栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究

目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症,其中内毒素（LPS）是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物,经过6年的应用评估,其疗效已被否定,迄今脓毒症治疗仍缺乏有效药物。本文通过从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分京尼平苷,研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法：以LPS活性中心LipidA为靶点,采用生物传感器技术,从传统清热中药中筛选出具有LipidA结合活性的栀子,进而利用现代色谱技术分离出具有拮抗LPS活性的单体京尼平苷,通过鲎试剂法检测京尼平苷对LPS的体内外中和作用;RT-PCR法检测京尼平苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4和TNF—αmRNA表达的影响;ELISA法检测京尼平苷对LPS刺激RAW264．7细胞产生细胞因子（TNF—α）的抑制作用;观察京尼平苷对脓毒症模型小鼠的保护作用。结果：京尼平苷在体外对LPS具有直接的中和作用,并呈现出较好的剂量效应关系：同时可剂量依赖的抑制LPS刺激引起的RAW264．7细胞的活化（TLR4和TNF-αmRNA的表达下调,细胞因子TNF-α的产生减少）;在体内可降低LPS血症模型动物血中的LPS水平;对致死剂量热灭活大肠埃希氏菌攻击的小鼠具有显著的保护作用。     

青蒿素对CpG DNA攻击小鼠保护作用的实验研究

目的:观察青蒿素对CpGDNA攻击小鼠的保护作用及对CpGDNA诱导小鼠单核 巨噬细胞RAW2 6 4.7释放促炎细胞因子的影响。方法:清洁级昆明小鼠6 0只,随机分为CpGDNA、青蒿素(2 0 0mg·kg-1)、CpGDNA 青蒿素(5 0、10 0、2 0 0mg·kg-1)及生理盐水对照组,每组动物10只。CpGDNA及CpGDNA 青蒿素组小鼠提前1h腹腔注射D 氨基半乳糖溶液(6 0 0mg·kg-1)进行敏化。CpGDNA组尾静脉给予4mg·kg-1的CpGDNA敏化;青蒿素组,灌胃给予2 0 0mg·kg-1的青蒿素;CpGDNA 青蒿素组在给予不同剂量的青蒿素后,立即给予4 0mg·kg-1的CpGDNA敏化;生理盐水对照组仅给予相同量的生理盐水。体外培养小鼠巨噬细胞RAW2 6 4.7,加入不同浓度的青蒿素,观察其对CpGDNA刺激细胞分泌TNF α及IL 6的拮抗作用及其量效、时效关系。结果:青蒿素可降低CpGDNA引起的小鼠死亡,死亡率由80 %降至10 % (P <0 .0 1)。青蒿素在2 0g·ml-1时显著抑制CpGDNA诱导RAW2 6 4.7释放TNF α和IL 6 (P <0 .0 1)。提前给予青蒿素,其拮抗CpGDNA诱导细胞因子释放的作用非常显著(P <0 .0 1) ,但青蒿素在刺激物CpGDNA给予后再加入,也能观察到显著拮抗作用(P <0 .0 5 )。结论:青蒿素对CpGDNA攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制CpGDNA诱导的促炎细胞因子释放     

高密度脂蛋白（HDL）拮抗内毒素的实验研究

目的：通过对高密度脂蛋白（HDL）体内外生物学活性实验研究，探讨HDL对内毒素的中和作用。方法：应用勤和生物传感器技术检测HDL与LPS的结合活性，采用ELISA方法检测HDL对LPS攻击小鼠的保护作用等试验来阐明HDL对LPS的中和效果。结果：应用亲和生物传感器亲和力检测，结果发现HDL与lipidA之间具有很高的．木和能力；HDL可以显抑制LPS刺激小鼠RAW264．7细胞释放TNF—α，并成量效关系；在小鼠体内使用剂量为120mg／kg的HDL可以明显保护致死剂量LPS攻击小鼠，保护率达到70％。结论：HDL在体内外与LPS结合，从而抑制了LPS的生物学活性，被认为是一种内毒素清除剂，对防治脓毒症具有临床指导意义，     

青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用

目的：观察青蒿琥酯（Artesunate，AS）对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响.方法：采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠，于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS，观察给药后7d内小鼠的死亡率；体外培养小鼠腹腔巨噬细胞，培养体系中预先加入不同浓度AS 2h后，观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果：AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间，并降低小鼠死亡率，死亡率由100％降低至50％（P〈0．05）。预先加入的AS能明显抑制热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6，并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论：AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用，该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。     

姜黄素衍生物体外抗炎及防治小鼠脓毒症的研究

目的探讨姜黄素衍生物FM0901体外抗炎作用,及其对大肠埃希菌引起的细菌脓毒症小鼠的保护作用。方法①用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7细胞,ELISA法测定FM0901对细胞分泌TNF-α、IL-6水平的变化硝酸还原酶法测定NO的变化;②小鼠尾静脉注射大肠杆菌建立脓毒血症模型,考察FM0901对小鼠血清中TNF-α、IL-6及NO的影响,观察小鼠的活动状态及生存率。结果①FM0901显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞的TNF-α、IL-6和NO释放,并具有明显的量效关系;②FM0901降低脓毒血症小鼠血清中TNF-α、IL-6和NO的含量,改善小鼠的状态,低剂量组提高大肠埃希菌感染小鼠的生存率。结论FM0901抑制RAW264.7细胞炎症介质释放,减轻脓毒症小鼠的炎症反应,提高其生存率。     

CpG-N ODN对CpG-S ODN诱导hPBMC释放TNF-α的抑制作用

目的明确抑制性CpGODN208（CpG-NODN）对刺激性CpGODN1826（CpG-SODN）诱导单核／巨噬细胞分泌TNF-α的影响，为通过拮抗细菌DNA达到防治脓毒症的目的提供实验依据。方法选用本室前期筛选出的对CpG。SODN活化RAW264．7细胞有抑制作用的CpG-NODN，观察其对CpG-SODN诱导hPBMC释放TNF-α的影响；应用流式细胞术观察CpG-NODN对CpG-SODN与hPBMC表面结合和内化的影响。结果浓度比为1：1的CpG-NODN对刺激性CpG-SODN诱导hPBMC分泌TNF-α具有抑制作用，并呈一定时效关系；CpG-NODN对CpG-SODN在hPBMC细胞表面的结合和内化具有抑制作用。结论CpG-NODN对CpG-SODN活化hPBMC具有抑制作用，这个作用可能与其影响hPBMC的表面结合和内化CpG-SoDN有关。     

原花青素对脂多糖诱导RAW2647细胞COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨原花青素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞COX-2酶活性及蛋白表达的影响。方法放射免疫法检测COX-2酶活性，RT-PCR检测COX-2 mRNA表达，Western blotting检测COX-2蛋白表达。结果原花青素(0.8，4和20 mg·L^-1)不影响LPS诱导RAW264.7细胞COX-2酶活性，可下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA表达；原花青素(4和20 mg·L^-1)下调LPS诱导RAW264.7细胞COX-2蛋白表达。结论原花青素不影响LPS诱导RAW2647细胞COX-2酶活性，但对LPS诱导RAW264.7细胞COX-2 mRNA及蛋白表达抑制作用明显。     

小剂量CpG ODN预处理对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其机制探索

目的:研究CpGODN对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其部分作用机制。方法:建立细菌脓毒症小鼠模型,给予不同剂量的CpGODN后,再给予热灭活E .coli攻击小鼠,观察各组小鼠的死亡情况;有效剂量的灭活E .coli攻击小鼠后收集血清,测定血清中TNF α浓度。结果:10mg·kg-1CpGODN预处理小鼠,可缩短灭活E .coli攻击后小鼠的死亡时间;提前给予3d 2mg·kg-1CpGODN ,能提高灭活E .coli攻击小鼠的存活率;CpGODN预处理能有效抑制细胞因子TNF α的释放。结论:适当剂量的CpGODN预处理对灭活E .coli攻击小鼠具有保护作用,其机制可能与抑制Th1型细胞因子TNF α的释放有关。     

金黄色葡萄球菌细胞壁可溶性肽聚糖的分离纯化和鉴定

目的：从金黄色葡萄球菌中提取纯化可溶性肽聚糖并鉴定其活性。方法：采用小剂量青霉素作用金黄色葡萄球菌（ATCC25923），诱导合成可溶性肽聚糖（PGN）粗品，经Sephadex G-100凝胶层析进一步分离纯化；采用SLP试剂盒对纯化的可溶性PGN定性，ELISA法检测纯化的可溶性PGN对小鼠RAW264．7细胞的活化作用。结果：分离纯化的可溶性PGN经SLP试剂检测阳性，该可溶性PGN可刺激RAW264．7细胞释放TNF-α，并具有明显的量效关系。结论：采用青霉素诱导结合凝胶层析技术可从金黄色葡萄球菌获取纯度及生物学活性较高的可溶性PGN。     

水合氯醛诱发 RAW264.7巨噬细胞凋亡及其机制

目的：探讨水合氯醛处理对RAW264．7巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法：以不同浓度的水合氯醛对RAW264．7巨噬细胞处理不同时间,采用形态学观察、AnnexinV－FITC／PI双染细胞凋亡检测试剂、Hochest33258染色和DNA1adder试剂检测RAW264．7巨噬细胞的凋亡情况,并检测Fas／FasL表达情况。结果：水合氯醛处理后RAW264．7巨噬细胞形态由梭形变圆直至脱落悬浮;AnnexinVFITC／PI双染检测显示水合氯醛处理可诱导RAW264．7巨噬细胞从早期向晚期凋亡,Hochest33258染色和DNA1ad－der检测均显示诱导凋亡;同时高表达Fas,但不表达FasL。结论：水合氯醛可通过Fas／FasL途径诱导RAW264．7巨噬细胞细胞凋亡。     

开发防治脓毒症的抗核心脂多糖疫苗

革兰阴性菌脂多糖(LPS)在脓毒症病理中起重要作用，早期研究发现被动输入抗LPS保守区抗体有高度保护作用。将大肠杆菌O111：B4加热灭活制成全菌体疫苗，其诱生的保护性抗体被动输入脓毒症中性白细胞减少大鼠模型作为治疗，能使大鼠抵抗致死性假单胞菌性脓毒症而存活。由脱毒的J5LPS和B群脑膜炎球菌外膜蛋白构成的亚单位疫苗的人体Ⅰ期临床试验显示，疫苗能被耐受，而且能诱生抗内毒素抗体。疫苗应答者的血浆能减少LPS诱导的细胞因子产生。因此，一种有效的抗内毒素疫苗能用于脓毒症的防治。     

青蒿素对脓毒症大鼠肝脏脂质过氧化损伤的影响

目的：观察青蒿素对脓毒症大鼠肝脏脂质过氧化损伤的影响.方法：采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture,CLP）制作大鼠脓毒症模型,观察青蒿素治疗对CLP大鼠术后2、6、12、24、48、72 h 大鼠血清内毒素（lipopolysaccharide, LPS）含量以及肝组织中超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase, SOD）、丙二醛 （malondialdehyde, MDA）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平的影响.结果：青蒿素治疗降低大鼠CLP术后血清LPS以及肝组织中MDA、TNF-α和IL-6的峰值,维持SOD接近正常水平.结论：青蒿素可减轻CLP大鼠肝脏的脂质过氧化损伤,减少脓毒症大鼠肝脏的炎症反应损害.     

TREM-1siRNA对内毒素刺激巨噬细胞杉RAW264．7分泌炎性因子影响

目的探讨靶向小鼠髓样细胞触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）的小分子干扰RNA（small inter-feting RNA,siRNA）在体外对内毒素刺激小鼠巨噬细胞株RAW264．7分泌肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白纽胞介素1p（interleukin1B,IL-1β）的抑制作用。方法合成1条靶向小鼠TREM-1分子的siRNA序列,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告因子,荧光显微镜观察EGFP的荧光强度,验证siRNA序列的干扰率。以pLKO1-1为载体构建针对TREM-1的pLKO1．1-TREM1-shRNA干扰质粒。将小鼠巨噬细胞株RAW264．7分为4组：空白组;内毒素组（LPS组）;空质粒组（pLKO1．1组）：采用脂质体法将pLKO1．1转染细胞;干扰组（siRNA组）：将pLKO1．1-TREM1-shRNA转染细胞;转染72h后用内毒素刺激24h,并以实时定量PCR分别检测TREM．1、TNF-α与IL-1β的表达;以ELISA分别检测上清液中TNF-α、IL-1β含量。结果与LPS组比较,siRNA组中TREM．1、TNF—α、IL-1β的mRNA显著下降（P〈0．01）,上清液中TNF-α、IL-1β含量明显降低（P〈0．01）。结论小分子干扰RNA可能通过抑制TREM-1基因的表达而减少内毒素诱导小鼠巨噬细胞264．7中TNF-α、IL-1β的分泌。     

苦瓜多糖抗肿瘤及免疫增强活性的研究

目的：研究苦瓜多糖的体内抗肿瘤及增强免疫作用,探讨可能作用机制。方法：通过建立小鼠S180肉瘤、H22肝癌肿瘤模型观察苦瓜多糖的抗肿瘤作用．此外应用MTT法观察苦瓜多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响．应用比色法观察苦瓜多糖对小鼠单核巨噬细胞RAW264．7吞噬功能的影响．运用Gfiess试剂检测苦瓜多糖促进小鼠单核巨噬细胞RAW264．7分泌No含量的变化。结果：苦瓜多糖高中低剂量组能明显抑制小鼠S180肉瘤、H22肝癌肿瘤的生长,同时能明显增加荷瘤小鼠的脾腺指数和胸腺指数。此外苦瓜多糖能显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖．明显提高小鼠单核巨噬细胞RAW264．7吞噬中性红的能力,明显促进小鼠单核巨噬细胞RAW264．7分泌No。结论：推测苦瓜多糖具有较强的免疫增强活性并可能通过刺激淋巴细胞、并增强巨噬细胞的活化来调节机体的免疫功能．从而抑制肿瘤细胞的生长。     

血必净注射液静脉和口服给药防治脓毒症药效特点研究

目的 比较血必净注射液（XBJ）iv和ig给药防治脓毒症的药效特点，为XBJ口服创新中药研发提供参考。方法 采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备大鼠脓毒症模型，ip脂多糖（LPS）法制备小鼠脓毒症模型，分别于造模后0、12、24、36、48、60 h利用iv和ig 2种方式给予XBJ（4 mL·kg^-1），比较2种给药方式对脓毒症模型动物死亡率的影响；通过肺湿质量/干质量、肺组织炎症因子——肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平测定，比较2种给药方式对LPS诱导脓毒症急性肺损伤（ALI）的影响；通过HE染色、FITC透过实验考察2种给药方式对LPS诱导脓毒症小鼠肠屏障功能的影响。结果 与模型组比较，XBJ iv和ig给药均可降低脓毒症实验动物死亡率，在CLP大鼠模型中，iv给药效果优于ig给药，而在LPS小鼠模型中，ig给药效果优于iv给药。与模型组比较，XBJ ig组和XBJ iv组小鼠的肺湿质量/干质量显著降低（P＜0.05）；XBJ iv组肺组织中TNF-α、IL-1β水平显著降低（P＜0.01、0.001），XBJ ig组肺组织中TNF-α水平显著降低（P＜0.001）；LPS造模后6、12 h，XBJ ig组小鼠血清FITC浓度显著降低（P＜0.05、0.01），XBJ iv组小鼠血清FITC浓度无明显变化；XBJ ig较XBJ iv具有更优改善脓毒症小鼠回肠病理改变的作用。结论 XBJ iv和ig给药均对脓毒症有明确的治疗作用，iv给药具有保护脓毒症ALI的药效特点，而ig给药具有改善脓毒症肠屏障功能障碍的药效特点。     

开发防治脓毒症的抗核心脂多糖疫苗

革兰阴性菌脂多糖(LPS)在脓毒症病理中起重要作用,早期研究发现被动输入抗LPS保守区抗体有高度保护作用.将大肠杆菌O111:B4加热灭活制成全菌体疫苗,其诱生的保护性抗体被动输入脓毒症中性白细胞减少大鼠模型作为治疗,能使大鼠抵抗致死性假单胞菌性脓毒症而存活.由脱毒的J5 LPS和B群脑膜炎球菌外膜蛋白构成的亚单位疫苗的人体Ⅰ期临床试验显示,疫苗能被耐受,而且能诱生抗内毒素抗体.疫苗应答者的血浆能减少LPS诱导的细胞因子产生.因此,一种有效的抗内毒素疫苗能用于脓毒症的防治.       

Krupple样因子6及诱导型一氧化氮合酶在铜绿假单胞菌上清液感染RAW264.7凋亡过程中的表达

目的检测Krupple样因子6 (Krupple-like factor 6,KLF6)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)在铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)上清液感染的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264. 7)中的表达水平,探讨KLF6及i NOS在PA上清液感染RAW264. 7凋亡过程中的作用。方法 MTT法检测PA上清液对RAW264. 7增殖的影响;流式细胞术检测凋亡率; Hoechst 33342染色检测RAW264. 7细胞核形态变化; Western blot检测PA上清液对KLF6、i NOS表达的影响。结果 PA上清液抑制RAW264. 7的增殖,且其抑制作用呈浓度和时间依赖性,PA上清液能够明显增加RAW264. 7的凋亡比例,促进KLF6、i NOS的表达。结论 PA能够抑制RAW264. 7的增殖,其可能通过增加KLF6及i NOS的表达,从而诱导细胞凋亡。     

栀子苷拮抗内毒素的实验研究

目的 研究栀子苷的抗内毒素/脂多糖生物学活性。方法 应用生物传感器技术检测栀子苷与LPS活性中心Lipid A的结合活性、动态比浊法鲎试验检测栀子苷(0、2.5、5.0、10.0 mg/L)对LPS(0.1 μg/L)的中和活性、ELISA法检测栀子苷(0、25、50、100 mg/L)对LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7细胞释放细胞因子的影响,进而观察栀子苷(0、10、20、40 mg/kg)对致死剂量LPS攻击模型小鼠的保护作用。结果 栀子苷与Lipid A具有结合活性,量效关系明显;栀子苷(2.5、5.0、10.0 mg/L)在体外对LPS(0.1 μg/L)具有显著的直接中和作用(P<0.01);栀子苷在50-100 mg/L浓度水平能够显著抑制LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7细胞释放TNF-α(P<0.01);40 mg/kg的栀子苷对脓毒症模型小鼠具有显著的保护作用(P<0.01)。结论 栀子苷可能通过与Lipid A结合中和LPS的活性,抑制LPS介导的细胞活化,减少细胞因子释放,进而保护脓毒症模型小鼠。