单克隆抗体Dot-ELISA诊断日本血吸虫病的现场观察

<正> 随着我国血吸虫病防治工作的深入开展,以粪检方法查病已不能适应需要,费时、费力,漏检率高。近年来,以检测抗体为主的血清学方法虽不断有所改进,但清查病情仍采用几种复杂的综合方法进行,基层单位难以照办。最近我国应用单克隆抗体(McAb)检测血吸虫病循环抗原的研究已获可喜成果。近来,我们应用抗循环阴极抗原(CCA)单克隆抗体Ⅲ D10,作斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),现场检测日本血吸虫病循环抗原,获较满意结果,现报道如下。     

抗AFP单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制及应用

甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是一种癌胚抗原,在胚胎期由肝细胞和卵黄囊合成并出现在胎儿血清中,出生后血清中AFP的含量很低,正常人血清中的AFP浓度在20μg/L以下。当机体发生原发性肝癌时,肝癌细胞可合成和分泌大量AFP,在癌组织提取液、血清及腹水中均可检出高水平的AFP,现已作为肝癌的标志物,广泛应用于肝癌的普查、诊断、     

抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 :制备抗磺胺嘧啶 (SD)的单克隆抗体 (mAb) ,并研制SD快速检测试剂盒。方法 :以SD BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb。并用抗SDmAb和SD HRP酶标抗原 ,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA。结果 :获得 5株可分泌抗SDmAb的杂交瘤细胞 1A1、1B8、1E4、2C1和 3D9。其中 1A1、1B8和 1E4为IgG1,2C1和 3D9为IgG2。试剂盒的半数抑制率 (I5 0 )为 9.3μg/L ,理论最低检出量达到 0 .6μg/L ,对于不同样品中SD的回收率均高于 60 %。除与SD反应以外 ,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于 3 %。结论 :成功地制备了抗SD的mAb ,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒     

人组织激肽释放酶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 制备人组织激肽释放酶(human tissue kallikrein,HK)单克隆抗体(McAb),并研制检测人尿中HK含量的ELISA试剂盒.方法 以一段HK特异多肽和血蓝蛋白(KLH)的耦联物作为抗原免疫BALB/c小鼠,并采用杂交瘤技术制备抗HK的单克隆抗体.然后建立快速检测HK含量的间接竞争ELISA试剂盒.结果 获得了8株可分泌抗HK的杂交瘤细胞株,其产生的抗体效价为1:25 600;经1:1600倍稀释后的竞争抑制率为0.88;经纯化后的纯度为100%,其标准曲线对线良好(r=0.990).结论 成功制备了高效价、高特异性和高纯度的抗HK的单克隆抗体.同时建立了一种可以快速检测人尿中HK含量的ELISA试剂盒.

Abstract：

Objective To prepare monoclonal antibody(McAb) against human tissue kallikrein (HK) and develop an ELISA kit allows for the in vitro quantitative determination of human tissue kallikrein in urine. Methods To generate a monoclonal antibody specific for TK, the synthetic TK peptide consisting of 12 amine acids(12P), was fused to keyhole limpet hemocyanin(KLH) and used for immunization. Using hybridoma screening, monoclonal secreting cell lines were identified and used to generate ascites in BALB/c mouse. Antibody was purified by affinity column chromatography. 12% SDS-PAGE and Western blot were used to visualize the purified antibody. This kit employs indirect competitive ELISA technique and BiotinAvidin System. 12P was fused to bovine serum albumin(BSA) and has been pre-coated onto a microplate at first. Standards and samples were added to the appropriate microplate wells with a biotin-conjugated McAb croplate well. A TMB substrate solution is added to each well. The enzyme-substrate reaction is terminating by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of tissue kallikrein in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve. Results 8 hybridoma cell lines secreting mAbs special to HK,SDS-PAGE and Western blot demonstrated successful preparing and purification of McAb( 100% ). The linearity of this ELISA kit is demonstrated(r =0. 990). The range of detection of the assay is 0.008 μg/ml to 0. 5 μg/ml. The assay remained stable, with no change in the values measured, over five cycles of freezing and thawing. Conclusion 8 McAbs against HK have been prepared successfully and possess high titer and specificity. The development of an ELISA kit for detecting HK can meet the needs of detection of HK in urine samples.     

单克隆抗体组建黄曲霉毒素酶免疫检测试剂盒的研究

单克隆抗体组建黄曲霉毒素酶免疫检测试剂盒的研究季永镛，林国妹，叶敏（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）陆建华，李文广（江苏启东肝癌防治研究所，江苏启东２２６２００）本文报告以高亲和力抗黄曲霉毒素（ＡＦ）单克隆抗体为基础组建的ＡＦＮ免疫...     

胶体金快速免疫试剂盒检测沙眼衣原体的性能观察

沙眼衣原体(Chlamvdia trachomatis,CT)引起的泌尿生殖道感染是我国目前最常见的性传播疾病之一。细胞培养分离沙眼衣原体检测细胞内包涵体的存在,是其传统的实验室诊断“金标准”。但该方法操作繁琐,所需时间长,故难以普遍应用。以前．实验室广泛采用的方法是检测标本中衣原体抗体。如今胶体金标记快速免疫试验,直接免疫荧光试验等可直接检测样品中的衣原体抗原,而且检测抗原的基因诊断(如PCR)方法已被广泛认可为新一代“金标准”方法。     

三种检测SARS抗体试剂盒的临床使用效果比较

目的 :对重组双抗原夹心法ELISA、全病毒间接法ELISA和免疫荧光分析法 3种SARS抗体诊断试剂盒进行临床应用效果评价 ,比较不同试剂的使用效果。方法 :使用 3种试剂检测了 2 5 7例临床确诊SARS患者的血清标本 2 79例和其他非SARS患者标本 2 4例、健康体检者血清标本 80份。结果 :临床确诊SARS患者发病 1～ 2 0d的病例中双抗原夹心法ELISA检出率最高 ,间接免疫荧光法与其接近 ,全病毒间接法ELISA检出率最低。在发病 2 0d后 ,三者检出率接近 (94 %左右 ) ,3种方法的符合率在 97%以上。在 10 4例非SARS病例中 ,双抗原夹心法ELISA和免疫荧光法均未见出阳性结果 ,全病毒间接法ELISA检出阳性结果 3例 ,假阳性率 2 .9%。结论 :检测SARS抗体双抗原夹心法ELISA试剂盒、免疫荧光试剂盒具有类似的灵敏度和特异性 ,其灵敏度和特异性高于全病毒间接法ELISA。     

人类染色体检测试剂盒的研制

目的为了研究保存时间长,效果稳定,贮存,携带及运输方便等优点的染色体检测试剂盒.方法采用适合不同细胞生长的基础培养原料,添加多种细胞分裂增殖所必需的多种营养成分和刺激因子,以及稳定剂和冻干保护剂等制成冻干复合培养基,然后配制配套的溶解剂和有丝分裂抑制剂等组成染色体检测试剂盒.结果通过多项实验,证明该试剂盒在培养过程中,细胞分裂相多,质量稳定,保存时间12个月以上,贮存及运输方便.结论该配套试剂盒可满足临床需要,可以推广应用.     

肝复康治疗家兔血吸虫病肝硬化的效果观察

肝复康系由王浆与蜂蜜混合而成,含有丰富的蛋白质、氨基酸、脂肪及多种糖类、酶、维生素。我们用肝复康治疗感染血吸虫病的家兔,观察其治疗血吸虫病肝硬化的效果。感染3～4个月的家兔,肝脏表面呈明显迹或龟板状,边缘不整,质较硬,切面见灰     

用酶免疫法试剂盒检测血清ErbB-2的临床观察

０５４　用酶免疫法试剂盒检测血清ＥｒｂＢ－２的临床观察［日］／营野康吉／／癌化学疗法。一１９９４，２１（８）．一１２５５～１２５９用夹心式酶免疫法（ＥＩＡ）检测乳腺癌及其他各种恶性肿瘤与良性疾病患者的血清ＥｒｂＢ－２蛋白水平，并作临床评估。据３６４例...     

一种对日本血吸虫病具有诊断潜力的单克隆抗体

感染小鼠淋巴结 B细胞与小鼠骨髓瘤 SP 2/0株融合,所获单克隆抗体 ⅢD10能与血吸虫抗原形成免疫沉淀,具有属特异性,免疫荧光定位于成虫肠管。免疫电泳提示,ⅢD10为抗循环阴极抗原单抗。应用于竞争 ELISA试验,显示很高的敏感性和特异性,检测 120例烘检阳性慢性血吸虫病患者,100％阳性,204例正常人仅1例在1:10时出现阳性,与6例肺吸虫病人无交叉反应。感染动物试验,感染前30只家兔均阴性,感染后4周全部出现阳性;治疗后8周抑制滴度逐渐下降。     

单克隆抗体检测真菌毒素的研究进展

对黄曲霉毒素、赭曲毒素A、玉米赤霉烯醇、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌醇等特异的单克隆抗体(以下简称单抗)已在许多实验室制备成功,具有敏感性高、特异性高、交叉反应少、可靠性好并易生产等特点。单抗与酶联。放免以及免疫亲和层析等快速免疫学方法结合可检测最低浓度达ng/ml的真菌毒素,并应用到检测玉米、花生、花生油、牛奶、奶制品和猪肾等食品中的真菌毒素。采用这些免疫学技术,样品制作一般简化为用溶剂抽提出真菌毒素后直接溶解,不需提纯;在该情况下能检出每kg样品中1～5μg的真菌毒素。     

单克隆抗体竞争性ELISA在日本血吸虫病诊断中的应用

本文应用单克隆抗体ⅢD10竞争性ELISA,对369例粪检阳性日本血吸虫病患者(慢性316例,急性54例),检测血清内抗CCA 抗体水平,并与环卵沉淀试验和间接血凝试验对比。结果表明,C-ELISA 的敏感性为 97.75～100％,高于 CCPT(90.27％,p<0.05)。而正常人无假阳性,与肝吸虫、肺吸虫和包虫感染的突叉反应依次为1.39％、1/18和0。特异性明显高于COPT和IHA。本试验快速、简便、重复性好。     

用DNA探针试剂盒和单克隆抗体检测常规试管和置载玻片试管中培养的单纯疱疹病毒

最近发展起来的生物素化核酸探针分析技术以其高敏感度、高特异性、高商品化等优点日益受到人们重视。将单纯疱疹病毒(HSV)感染的标本接种于置载玻片培养管中,16小时后用生物素化DNA探针试剂盒做原位杂交,通过酶联免疫法检测HSV。 HSV DNA探针由三段序列拼接而成。用Bam HI从HSV-1切割出3.0和8.0kd的两个     

用DNA探针试剂盒和单克隆抗体检测常规试管和置载玻片试管中培养的单纯疱疹病毒

最近发展起来的生物素化核酸探针分析技术以其高敏感度、高特异性、高商品化等优点扫益受到人们重视。将单纯疱疹病毒(HSV)感染的标本接种于置载玻片培养管中，16小时后用生物素化DNA探针试剂盒做原位杂交．通过酶联免疫法检测HSV。     

三峡库区潜在血吸虫病流行区模拟血防干预的效果观察

目的探索三峡库区潜在血吸虫病流行危险因素下的防治模式,为制定综合防治措施提供依据。方法 2008-2010年选择重庆市万州区长江边的2个自然村为血防干预示范点,对学生和居民开展血防健康教育,选择部分居民户进行改水改厕,通过问卷调查和相关环境样品检测,观察其干预效果。结果干预后居民、学生的血防知识总及格率分别为86.3%（392/454）和87.2%（232/266）,与干预前居民3.9%（22/566）及学生9.4%（30/318）比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;改水后居民生活饮用水微生物及感官指标超标样品数下降,其中微生物超标率显著下降,改水前后样品中细菌总数超标率分别为86.5%（173/200）和20.0%（20/100）;干预前后,示范点居民常见肠道线虫总感染率分别为31.5%（63/200）和14.5%（29/200）。结论健康教育和改水改厕等模拟血防干预手段,能提高居民血防知晓率,增强血防意识,亦可在一定程度上控制虫卵入水等环节降低血吸虫病在三峡库区传播的潜在风险。     

血吸虫病免疫学检测技术的进展

血吸虫病是仅次于疟疾的最严重的热带病,严重危及沿江地区群众的身体健康.早期诊断血吸虫病对防治尤为重要,它是确定人群的感染率、感染度,以及监测传播变化,考核防治效果以制定防治策略的主要工具.