环孢菌素A对慢性再生障碍性贫血患者T-bet、GATA-3、相关信号分子、细胞因子及Th1/Th2的影响

本研究探讨转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(CAA)免疫发病中的作用,从Th细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平研究环孢菌素(CsA)治疗慢性AA的免疫调节机理。采用实时荧光定量PCR(real-time FQ-PCR)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达;采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平,并与正常人进行比较。结果表明:慢性AA患者PBMNC T-bet、STAT4mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、Th1/Th2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(p0.01),经CsA治疗6月后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降,但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,GATA-3、STAT6mRNA表达、Th2比例、IL-4表达在治疗前后与正常人比较均无明显差异(p0.05)。结论:IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及Th平衡向Th1型偏移在AA免疫异常的发病过程中起到关键的作用;CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及纠正Th1过度极化而减轻AA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。     

去白细胞输血对急性淋巴细胞白血病患者外周血Th1/Th2细胞平衡影响

目的:探讨去白细胞输血对急性淋巴白血病(ALL)患者外周血Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:选取2016年3月至2017年8月在我院治疗的57例ALL患者,其中31例ALL患者接受常规输血治疗,纳入A组,26例患者接受去白细胞输血治疗,纳入B组,并选择同期在本院体检正常者36例为对照组;记录患者的基本临床特征,采用流式细胞术分析患者外周血Th1/Th2细胞比例;采用ELISA分析患者血清IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平;采用RT-PCR分析淋巴细胞T-bet和GATA-3的mRNA表达水平;采用Western blot分析淋巴细胞T-bet和GATA-3蛋白水平。结果:ALL患者外周血Th1/Th2比例与患者的年龄、风险等级明显相关(P0.05);A组患者在接受治疗后Th1/Th2比例变化与治疗前相比无统计学差异(P0.05);B组患者在接受治疗后Th1/Th2比例升高(P0.05)。A组ALL患者Th1和Th2细胞分泌的IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平变化无统计学差异(P0.05);B组ALL患者Th1细胞分泌的IL-2和IFN-γ水平均上升,Th2细胞分泌的IL-4和IL-10水平均下降,差异有统计学意义(P0.05)。通过RT-PCR和Western blot检测发现,A组ALL患者T-bet mRNA和T-bet蛋白水平低于对照组,B组ALL患者T-bet mRNA和T-bet蛋白水平高于A组,差异有统计学意义(P0.05)。A组ALL患者GATA-3 mRNA和GATA-3蛋白水平高于对照组,B组ALL患者GATA-3 mRNA和GATA-3蛋白水平低于A组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:去白细胞输血有助于改善外周血Th1/Th2细胞平衡,提高患者的免疫功能,这可能与T-bet和GATA-3表达密切相关。     

原发性免疫性血小板减少症患者外周血microRNAs的表达及与Th1/Th2失衡的关系

目的:探讨原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血micoRNAs的表达量与Th1/Th2失衡的关系。方法:纳入30例ITP患者(ITP组)及15例健康人(对照组),采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测2组外周血中6种miRNA(miR-107、miR-205-5p、miR-138-5p、miR-326、miR-1827、miR-185-5p)和Th1特异性转录因子T-bet、Th2特异性转录因子GATA-3的表达水平,采用流式细胞术检测Th1、Th2细胞,Aim Plex流式细胞术高通量技术检测Th1细胞因子TNF-α、IFN-γ以及Th2细胞因子IL-4、IL-10含量。比较2组间miRNAs、mRNA、Th1、Th2细胞及其分泌的主要细胞因子的差异,分析ITP患者miRNAs与Th1、Th2细胞及其分泌的主要细胞因子的相关性。结果:与对照组相比,ITP组miRNA(miR-107、miR-205-5p、miR-138-5p、miR-326、miR-1827、miR-185-5p)和Th2细胞特异性转录因子GATA-3的表达水平均显著降低(P0.05); Th1细胞、Th1细胞特异性转录因子T-bet及Th1细胞因子TNF-α表达水平均显著升高(P0.05),T-bet/GATA-3和Th1/Th2比值均显著升高(P0.05)。ITP患者miR-107、miR-205-5p、miR-138-5p相对表达量与Th2细胞均呈负相关(P0.05,r=-0.411; r=-0.593; r=-0.403); miR-1827相对表达量与TNF-α呈负相关(r=-0.390)。结论:ITP患者外周血6种miRNAs表达水平显著降低,导致T-bet mRNA/GATA-3mRNA比值升高,Th1/Th2失衡。     

转录因子T-bet、GATA-3及炎性因子在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及意义

[目的]探讨转录因子T-bet和GATA-3及炎性因子在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)筛窦黏膜组织中的表达及意义.[方法]选取2015年1月至2016年6月在本院治疗的CRSwNP患者52例(观察组),同时选取上颌窦或蝶窦囊肿患者50例作为对照组,采用免疫组织化学和RT-PCR检测黏膜组织中T-bet和GATA-3表达,采用ABC-ELISA法检测黏膜组织中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的水平.[结果]观察组筛窦黏膜组织IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ分别为(7.01±1.52)pg/mg、(3.60±0.87)pg/mg、(7.51±1.34)pg/mg和(8.70±1.67)pg/mg,明显高于对照组(P<0.05);观察组筛窦黏膜组织T-bet和GATA-3表达的阳性细胞数分别为(25.40±5.11)个和(17.52±4.08)个,明显高于对照组(P<0.05);观察组筛窦黏膜组织T-bet和GATA-3 mRNA相对表达量分别为(3.012±0.816)和(2.841±0.973),明显高于对照组(P<0.05).[结论]CRSwNP患者T-bet、GATA-3表达明显升高,同时Th1和Th2细胞因子表达明显升高,提示可能存在Th1和Th2型免疫反应.     

血必净对心肺复苏后转录因子GATA-3和T-bet表达调节的实验研究

目的 探讨血必净对心肺复苏后转录因子GATA-3和T-bet表达的调节作用.方法 建立心肺复苏大鼠模型,30只SD大鼠动物随机(随机数字法)分为三组:假手术组(B组),仅进行麻醉和气管切开插管、血管穿刺,不进行窒息及心肺复苏;常规复苏组(C组),常规复苏+生理盐水4 mL/kg;血必净治疗组(D组),常规复苏+血必净4mL/kg.动态观察血清GATA-3和T-betmRNA表达及白介素-12(IL-12)、白介素-4(IL-4)、r-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的变化.多组间均数比较采用单因素方差分析,方差齐则采用成组设计资料的t检验,两两比较用SNK法;如方差不齐,则采用随机区组设计的秩和检验(Wilcoxon检验),P<0.05为差异有统计学意义.结果 C,D组复苏后6 h与对照组、复苏后即刻比较,IL-12,IFN-γ,TNF-α水平均升高(P<0.01);C组复苏后6 h GATA表达下调(P>0.05),T-bel表达上调(P<0.01),GATA-3/T-bet下降(P<0.05).D组复苏后6 h T-bet表达上调(P>0.05),GATA表达上调(P<0.01),GATA-3/T-bet升高(P<0.05);D组复苏后6h与C组同时点比较,IL-12,IFN-γ,TNF-α水平低于C组(P<0.01),GATA-3表达上调、T-bet表达下调、GATA-3/T-bet升高均有统计学意义(P<0.01).结论 心肺复苏后存在转录因子T-bet和GATA-3失衡表达,血必净可调节GATA-3/T-bet趋向平衡及细胞因子IL-12,IFN-γ,TNF-α水平.     

当归芍药散对外周血单个核细胞GATA-3和T-bet mRNA表达的影响

目的:研究中药当归芍药散对外周血T淋巴细胞转录因子GATA-3和T-bet mRNA表达的影响,初步探讨其用于治疗不明原因反复自然流产的可能性。方法:体外分离提取11例志愿者外周血单核细胞,在含有或不含当归芍药散的培养液中培养24h,用实时定量PCR技术检测GATA-3和T-bet mRNA的表达。结果:用10μg/mL浓度当归芍药散处理后,单核细胞中GATA-3 mRNA的含量与对照组比较显著增高(P<0.05)。当归芍药散处理细胞后,T-bet mRNA的表达水平呈降低趋势,当浓度为100μg/mL时,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:当归芍药散可上调转录因子GATA-3mRNA的表达或下调T-bet mRNA的表达,从而可能通过调节Th2/Th1平衡向Th2偏移、对于Th1反应异常增强的不明原因反复自然流产有一定的治疗潜能。     

尖锐湿疣疣体内TLR9表达水平与免疫应答和细胞凋亡的相关性研究

目的研究尖锐湿疣(CA)疣体内Toll样受体9(TLR9)表达水平与免疫应答和细胞凋亡的相关性。方法选择2014年8月至2018年7月期间在葫芦岛市中心医院诊断为初发CA和复发CA的患者、分别作为初发组和复发组,另取同期接受包皮环切术的患者作为对照组。收集CA病灶和正常包皮组织,测定TLR9、Th1/Th2/Th17/Treg转录因子、凋亡基因的mRNA表达水平及Th1/Th2/Th17/Treg细胞因子的含量。结果初发组、复发组CA病灶内TLR9、T-bet、RORγt、增殖细胞核抗原(PCNA)、Survivin的mRNA表达水平及干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-17的含量明显高于对照组,GATA-3、FOXP3、Fas、FasL、Caspase-3的mRNA表达水平及IL-4、IL-10的含量明显低于对照组;且复发组CA病灶内TLR9、T-bet、RORγt、Fas、FasL、Caspase-3的mRNA表达水平及IFN-γ、IL-17的含量明显低于初发组,GATA-3、FOXP3、PCNA、Survivin的mRNA表达水平及IL-4、IL-10的含量明显高于初发组。CA病灶内TLR9的mRNA表达水平与IFN-γ、IL-17的含量及T-bet、RORγt、Fas、FasL、Caspase-3的mRNA表达水平呈正相关,与IL-4、IL-10的含量及GATA-3、FOXP3、PCNA、Survivin的mRNA表达水平呈负相关。结论 TLR9表达水平的改变与尖锐湿疣的发生、复发及免疫应答紊乱、细胞凋亡异常有关。     

三伏天灸调节支气管哮喘患者Th1/Th2比值的初步研究

目的探讨三伏天灸治疗支气管哮喘能否有效调节辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2比值。方法将该院接受三伏天灸治疗的30例支气管哮喘患者作为患者组,另外选取20例同期健康体检者作为对照组。用实时荧光定量PCR检测患者组三伏天灸治疗前、后以及对照组T-bet、GATA-3、Foxp3和STAT-6的mRNA表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平;采用流式细胞术检测Th1、Th2细胞百分率。结果三伏天灸治疗后,患者组Th1/Th2比值升高,IFN-γ分泌水平降低,T-bet和GATA-3表达水平明显升高,STAT-6表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论三伏天灸疗法可以通过降低Th2,调节Th1/Th2的比值,对支气管哮喘患者的治疗发挥作用。     

IL-18及其受体在特发性血小板减少性紫癜患者Th1类细胞优势应答中的作用

目的 探讨白细胞介素18(IL-18)及其受体(IL-18R)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者Th1类细胞因子优势应答中的作用.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测15例活动期和18例缓解期ITP患者外周血单个核细胞(PBMNC)中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达;应用ELISA法检测血浆中IL-18的变化;应用流式细胞术检测CD3+细胞和淋巴细胞表面IL-18R的表达.13名健康志愿者为正常对照.结果 ITP活动期患者PBMNC中T-bet mRNA表达水平(0.069±0.013)明显高于对照组(0.019±0.010)(P＜0.05),而GATA-3 mRNA的表达水平(0.002±0.001)明显低于对照组(0.005±0.002)(P＜0.05);血浆IL-18和CD3+细胞表面IL-18R表达水平较ITP缓解期患者和对照组显著增高.ITP缓解期患者T-bet与GATA-3 mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P值均＞0.05),T-bet/GATA-3比例基本恢复正常,血浆中IL-18和CD3+细胞表面IL-18R的表达水平也基本恢复正常.结论 ITP活动期患者表现为Th1优势应答,T-bet/GATA-3比例明显失衡,T-bet/GATA-3比例可作为ITP患者Th1类细胞极化的敏感指标;ITP活动期患者IL-18和IL-18R表达上调,可能为ITP患者的治疗提供一个新的治疗靶点.     

微小核糖核酸155对不稳定性心绞痛患者CD4+T淋巴细胞的调控作用

目的 探讨微小核糖核酸-155 (miRNA-155)对不稳定性心绞痛(UAP)患者外周血CD4 +T淋巴细胞的调控作用,从而阐明miRNA-155在UAP发病中的作用机制。方法 选取住院的UAP患者21例,同时以疑似不典型冠心病症状而冠脉造影正常的住院患者18例作为对照组。采用实时定量PCR检测外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155表达水平,酶联免疫法检测血清干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)表达水平。免疫磁珠法分选10例UAP患者外周血CD4 +T淋巴细胞,将分离的细胞分为对照组、miRNA-155组和miRNA-155抑制物组。对培养的细胞进行干预后,流式细胞术检测辅助性T细胞Th1和Th2数量,实时定量PCR及蛋白免疫印迹法检测IFN-γ受体α(interferon gamma receptor alpha,IFN-γRα)、T细胞表达T盒(T-box expressed in T cells,T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA-binding protein 3,GATA-3)的mRNA及蛋白表达,酶联免疫法检测细胞培养液上清IFN-γ、IL-4的表达。结果 UAP患者外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155与血清IFN-γ表达较对照组差异具有统计学意义(P＜0.01),且miRNA-155的表达与血清IFN-γ呈显著正相关(r=0.842,P＜0.01)。与对照组比较,体外培养CD4 +T淋巴细胞miRNA-155组Th1数量、T-bet mRNA及蛋白、培养液上清IFN-γ表达显著增加,IFN-γRα蛋白表达降低,差异具有统计学意义(均P ＜0.01);Th2数量、GATA-3、IFN-γRα的mRNA、GATA-3蛋白表达及培养液上清IL-4无明显改变(均P＞0.05);miRNA-155抑制物可有效地阻断miRNA-155的上述作用。结论 miRNA-155主要通过影响Th1细胞的分化和功能,参与对CD4 +T淋巴细胞的调控,在UAP发病机制中具有重要的作用。