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1.
目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)骨髓和外周血细胞的BCR/ABL融合基因的临床价值。方法:应用FISH对正常对照组及CML患者骨髓和外周血细胞BCR/ABL融合基因进行检测和分析。结果:慢性期CML患者骨髓和外周血细胞该融合基因阳性细胞率分别为(61.9±22.3)%和(68.4±19.8)%,加速期为(77.2±16.7)%和(86.8±12.1)%,急变期为(80.6±17.5)%和(81.4±18.0)%,两者细胞中BCR/ABL基因的阳性率未见统计学差异(P>0.05),且骨髓和外周血细胞之间融合基因阳性细胞比率呈直线正相关。同时发现在完全临床缓解患者中,经伊马替尼治疗的CML患者(71.4%)较经干扰素和羟基脲联合治疗者(10.0%)有更高的分子生物学缓解(P<0.05)。结论:通过FISH对CML患者骨髓和(或)外周血细胞融合基因进行监测,有助于CML的诊断、治疗及微小残留白血病的监测。 相似文献
2.
bcr/abl融合基因酪氨酸激酶活性异常在慢性粒细胞白血病发病分子机制中起重要作用,其表达物bcr/abl融合蛋白是慢性粒细胞白血病分型的重要依据,检测此基因对慢性粒细胞白血病的诊断、治疗和病情观察具有重要临床意义. 相似文献
3.
bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断及残留病灶监测中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨bcr/abl融合基因检测在诊断慢性粒细胞性白血病(CML)和监测CML残留病灶中的意义。方法采用巢式逆转录PCR(RT-PCR)检测337例CML患者bcr/abl融合基因的表达,并对所有患者进行残留病灶的动态监测,共检测632人次。其中移植(包括外周血干细胞移植、骨髓移植和脐血移植)患者26例;服用格列卫的患者22例;其它治疗方案患者289例。结果在337例CML初诊患者中bcr/abl基因表达阳性者325例,阳性率为96.4%;其中b3a2型转录本占58.5%(190/325),b2a2型转录本占41.2%(134/325),b3a3型转录本占0.3%(1/325)。未发现b2a3型转录本。移植患者bcr/abl融合基因转阴率为88.5%(23/26),时间在30~201 d之间,中位数为55 d;服用格列卫患者融合基因总转阴率59.1%(13/22),转阴时间在用药后90~365d之间,中位数为210 d;其它治疗组患者转阴12例,转阴率为4.1%(12/289)。结论bcr/abl融合基因的检测及动态观察,对CML的临床诊断、疗效及预后判断具有重要意义。 相似文献
4.
慢性髓系白血病不同bcr/abl融合基因转录子与临床关系的研究 总被引:9,自引:5,他引:9
目的研究慢性髓系白血病(CML)bcr/abl融合基因转录子类型与临床的关系.方法采用RT-PCR技术检测537例临床怀疑CML的患者新鲜骨髓标本三种bcr/abl(M、m及μ型)融合基因的表达.结果 479例CML患者 M-bcr/abl阳性,其中慢性期(CP)370例,加速/急变期(AP/BC)109例,CP期和AP/BC期患者表达b2a2型融合基因转录子的百分率分别为32.4%(370例中120例)及36.7%(109例中40例)(P>0.05),急淋变及急髓变患者b2a2型百分率分别为52.6%(19例中10例)及33.3%(90例中30例) (P>0.05);b3a2型患者初诊时外周血血小板数明显高于b2a2型患者[(485.9±333.8)×109/L] vs [(380.5±321.9)ⅹ109/L](P<0.05);66.0%CP及64.4%AP/BC患者同时表达M-bcr/abl及m-bcr/abl;1例单纯m-bcr/abl(+)患者表现为急性髓系白血病(AML);2例μ-bcr/abl(+)患者均具有典型CML表现.结论典型CML患者几乎均为M-bcr/abl融合基因阳性,大部分患者同时伴有m-bcr/abl表达,个别CML患者可以为μ型;除了急性淋巴细胞白血病(ALL)外,单纯m-bcr/abl(+)也可见于AML或CML急粒变的患者; b3a2型患者初诊时更易有血小板数增高表现. 相似文献
5.
本文旨在研究MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达,同时观察P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶对MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2 mRNA表达的影响.在bcr/abl融合基因阴性和阳性慢性髓系白血病细胞中,采用半定量RT-PCR方法检测MIP-1α、MCP-1、CCR-1、CCR-2mRNA的表达水平.结果表明MIP-1αmRNA和CCR-1 mRNA在bcr/abl融合基因阳性细胞中不表达,但在bcr/abl融合基因阴性细胞中表达,而MCP-1 mRNA和CCR-2mRNA在bcr/abl融合基因阳性和阴性细胞中均不表达.当P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶被抑制后,MIP-1α和CCR-1的mRNA表达水平恢复至正常水平.结论:P210bcr/abl融合蛋白抑制慢性髓系白血病细胞中MIP-1α和CCR-1 mRNA的表达,但对MCP-1和CCR-2mRNA的表达无影响. 相似文献
6.
目的:克隆bcr/abl融合基因融合位点基因片段。方法:以慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株总RNA作为模板,采用RT—PCR方法扩增包含Bcr/abl(b3a2)融合位点基因片段。将RT—PCR物按正确的阅读框架,定向克隆到pEGFP—N3的下游,将重组质粒转化大肠杆JM109大肠杆菌,用PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定,并进行序列的测定。结果:扩增出470bp的Bcr/abl融合位点基因片段,构建重组质粒pEGFP—bcr/abl,酶切产物的大小分别与预期相符。结论:成功地扩增bcr/abl融合位点基因片段及构建真核表达重组质粒pEGFP—bcr/abl,为在体外表达重组bcr/abl蛋白奠定基础。 相似文献
7.
目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)错配修复(MMR)基因的表达水平及调控机制。方法 用半定量RT-PCR方法检测62例CML患者及K562细胞的5个MMR基因(hMSH2、hMSH3、hMSH6、hMLH1、hPMS2)mRNA的表达;用RT-PCR方法动态检测26例进行异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)及4例使用伊马替尼治疗的CML患者ber-abl及MMR mRNA的表达水平;用伊马替尼体外作用于CML患者的单个核细胞(MNC)及K562细胞后,用Western blot方法检测BCR—ABL融合蛋白的酪氨酸磷酸化水平,RT-PCR方法检测MMR mRNA表达水平。结果 与正常人比较,CML患者及K562细胞的hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达明显降低(P〈0.05);26例行allo—PBSCT及4例使用伊马替尼治疗的CML患者,其hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达随着bcr—abl mRNA的表达降低而升高;伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后,其hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达随着BCR—ABL融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而升高。结论 CML患者、K562细胞hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA比正常人降低,bcr—abl融合基因抑制hMSH2、hMSH3、hMLH1 mRNA的表达。 相似文献
8.
目的 慢性髓系白血痛(CML)的细胞遗传学特征是具有Ph染色体,即t(9;22)(q34;q11),其结果在分子水平上形成bcr/abl融合基因探讨慢性髓性白血病Ph染色体及bcr/abl融舍基因检测对CML早期诊断、分型诊断及指导治疗的临床意义.方法 用直接法或24h短期培养法常规G显带后分析,观察有无Ph染色体,PCR方法检测bcr/abl融合基因,结合形态学特征对51例CML进行分型诊断.结果 51例患者中Ph+/bcr/abl+或Ph-/bcr/abl+共48例诊断为典型慢性粒细胞白血病(CGL)占94%,其中1例为妊娠合并慢拉白血病;Ph-/bcr/abl-3例占6%,其中2例为非典型慢性粒细胞白血病(a-CML),1例为慢性粒单棱细胞白血病(CMML).结论 Ph染色体及ber/abl融合基因检测将CML患者进一步区分为三型:典型(Ph+/ bcr/abl+或Ph-/bcr/abl+)慢性粒细胞白血病(CGL)、非典型(Ph-/bcr/abl-)慢性粒细胞白血痛(a-CML)、慢性粒单核细胞白血病(CMML).对慢性髓系白血病的明确诊断、早期有效治疗具有重要的临床意义. 相似文献
9.
目的探讨格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病病人后骨髓Ph染色体及bcr/abl融合基因表达的变化。方法采用R显带和半定量RTPCR分别检测11例慢性粒细胞白血病病人服用格列卫前后骨髓标本中Ph染色体和bcr/abl基因的表达。结果用药后9例慢性期慢性粒细胞白血病病人,7例分别在用药3~24个月后染色体检查为Ph染色体阴性,1例用药1个月后其Ph染色体仍为阳性,后失访;1例用药2个月后Ph染色体阳性率为30%;1例急变期慢性粒细胞白血病病人用药6个月后其Ph染色体阳性率为70%;1例加速期慢性粒细胞白血病病人用药12个月后Ph染色体阳性率为60%。服用格列卫的CML病人Ph染色体转阴后仍能检测到bcr/abl基因的表达,但其表达水平较用药前明显降低,差异有显著性(t=3.77、5.13,P〈0.01),随着用药时间的延长bcr/abl基因表达逐渐降低。结论格列卫能有效治疗Ph染色体阳性的慢性粒细胞白血病病人,并且对其预后具有重要的意义。 相似文献
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RT—PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因 总被引:2,自引:0,他引:2
应用RT-PCR一步法检测了42例慢性粒细胞白血病(CML)患者的bcr/abl融合基因,均显示bcr/abl基因阳性,其中21例为168bp扩增带,18例为93bp扩增带,3例同时具有168bp和93bp二条扩增带。bcr/abl融合基因检测,对CML的诊断、治疗及预后判断均有重要意义。RT-PCR一步法特异性好,敏感性高,简单快速,可节省试剂,值得推广应用。 相似文献
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慢性粒细胞白血病细胞中Skp2的表达及其临床意义 总被引:5,自引:0,他引:5
目的研究慢性粒细胞白血病(CML)细胞中S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达及其与p27的关系.方法用免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测CML细胞中Skp2和p27蛋白水平及转录水平的表达.结果免疫细胞化学染色显示,CML细胞Skp2蛋白表达增高(14.3%±2.9%),与正常对照(8.6%±0.9%)相比有显著性差异(P<0.05);CML细胞中Skp2蛋白和p27蛋白呈负相关(r=-0.75,P=0.001).但RT-PCR结果显示,Skp2蛋白过度表达的CML细胞中p27 mRNA未见明显变化.结论 Skp2在调控p27蛋白表达过程中起重要作用,Skp2表达异常可能与CML病程进展有关. 相似文献
13.
慢性粒细胞白血病慢性期与急变期基因表达差异的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究慢性粒细胞白血病 (CML)不同临床阶段的基因表达差异 ,为阐明CML演变的可能机制提供依据。方法 应用DNA芯片技术 ,对CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞的基因表达差异进行了检测。结果 在检测的 1176个基因中 ,有 6 8个基因显示急变期较慢性期明显上调 ,其中转录因子 16个 (2 3.5 % ) ,细胞表面抗原 15个 (2 2 .1% ) ,细胞调节蛋白 13个 (19.1% ) ,其它 2 4个(35 3% )。在差异表达的基因中 ,有 17个基因仅在急变期表达 ,而在慢性期不表达 ,11个 (16 .2 % )与G蛋白基因有关。结论 CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞基因表达谱存在显著差异 ,基因高表达是CML急变期的特征之一。G蛋白相关基因在CML急变过程中可能起着重要作用。 相似文献
15.
目的探讨慢性粒细胞性白血病(CML)bcr/abl基因检测的临床意义。方法采用荧光定量PCR(FQPCR)检测112例CML患者bcr/abl融合基因的表达。结果对照组bcr/abl基因表达均为阴性。112例CML患者bcr/abl基因表达阳性率为88.39%(99/112),表达值范围(3.2~7.8)×107copies/L;67例CML患者费城染色体(Ph染色体)分析结果中,51例为Ph(+)/bcr(+),5例为Ph(-)/bcr(+),9例Ph(+)/bcr(-),2例Ph(-)/bcr(-);17例CML患者α干扰素(INFα)治疗前bcr/abl基因表达均值为(2.60±0.9)×107copies/L,INFα治疗后为(1.82±0.57)×107copies/L,两者具有显著性差异(P<0.05)。结论bcr/abl基因表达水平的定量检测及动态观察,对CML的临床诊断、疗效判断及预后具有重要意义。 相似文献
16.
FLT3基因表达水平及内部串联重复突变与急性髓系白血病的关系及临床意义 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究FLT3基因表达水平及内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变与急性髓系白血病(AML)的关系及临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR技术检测129例AML患者治疗前后共152份骨髓标本单个核细胞FLT3 mRNA,应用RT-PCR技术检测其中75例初发未治AML患者的FLT3/ITD突变.结果 80例初发未治AML患者FLT3 mRNA表达水平为0.1041(0~33.8736),10名正常人骨髓FLT3 mRNA表达水平为0.0020(0.0006~0.0040),差异有统计学意义(P=0.001).75例初发未治AML患者检出FLT3/ITD突变者11例,突变率14.7%,FLT3/ITD突变组的FLT3 mRNA表达水平为0.2200(0.0297~33.8736),与FLT3/ITD阴性组[0.0975(0~26.2200)]比较,差异无统计学意义(P=0.093).在M,患者中,FLT3/ITD阳性者缓解率显著低于FLT3/ITD阴性者(P=0.015).FLT3/ITD阴性的非M3患者中FLT3 mRNA高表达组(表达水平>0.04)患者的化疗缓解率(37.5%)显著低于低表达组(缓解率100%).追踪观察20例患者,完全缓解组的FLT3 mRNA表达水平迅速或缓慢下降至少1个对数级,未缓解组的FLT3 mRNA表达水平无明显变化.结论 AML患者FLT3 mRNA的表达量及FLT3/ITD突变,可作为评价AML患者治疗效果、估计预后的指标,为微量残留病监测、观察AML患者病情变化提供有用工具. 相似文献
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目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)病人Mcl—l基因和Bcr/Abl融合基因的表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测了4l例cML病人(包括慢性期15倒、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例)骨髓标本Mel—l基因、Ber/Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照。结果CML各组Mcl—I和Bcr/AblmRNA的表达水平差异均有显著性(X2=19.12—36.08,P〈0.05)。伊马替尼治疗组与正常对照组Mel—lmRNA的表达明显低于其他各组(z=2.547—3.254,P〈0.05);加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl—lmRNA的表达水平差异无显著性(z=0.481一1.922,P〉0.05),但均明显高于慢性期(z=2.65—3.465,P〈0.05)。Ber/AblmRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性(z=0.48—1.196,P〉0.05)。CML患者Mel—l与Bcr/AblmRNA的表达水平呈正相关(r=0.68,P〈0.05)。结论Mcl—l和Ber/Abl与CML的病情密切相关,参与cML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物。 相似文献
18.
目的 探讨接合物蛋白(CRKL)的磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)中的临床意义.方法 分别采用筑巢式PCR扩增ABL激酶区序列、实时荧光定量PCR法、流式细胞术检测35例CML患者不同时期52份骨髓标本ABL激酶区点突变、BCR-ABL基因转录水平、CRKL磷酸化水平,分析CRKL磷酸化水平与前两者的关系.结果 15例伊马替尼耐药患者中6例(40.0%)检测到ABL激酶区点突变,涉及四种类型氨基酸的改变,分别为Y253H 1例、E255K 1例、T315I 3例、F317L 1例,其中2例(T315I、Y253H)处于急变期,3例(E255K、T315I、F317L)处于加速期,1例(T315I)处于慢性期.初诊组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.01);伊马替尼耐药组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组(P=0.03);伊马替尼耐药组BCR-ABLmRNA水平与初诊组差异无统计学意义(P=0.18).伊马替尼耐药组与初诊组磷酸化CRKL阳性细胞百分率及平均荧光强度(MFI)均明显升高,两组差异无统计学意义(P=5.130;P=3.178);但初诊组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.01),伊马替尼耐药组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高(P=0.000;P=0.02);磷酸化CRKL阳性细胞百分率、MFI与BCR-ABL mRNA表达水平存在正相关关系(P<0.05).结论 应用流式细胞术检测P210BCR-ABL主要底物CRKL蛋白的磷酸化水平,是快速便捷的检测CML患者酪氨酸激酶活性的方法,CRKL磷酸化水平可作为评价伊马替尼治疗CML的疗效指标.Abstract: Objective To investigate the adaptor protein CRKL phosphorylation level( p-CRKL) and its significance in chronic myeloid leukemia(CML) treated with imatinib. Methods ABL kinase domain was amplified by nested RT-PCR, domain point mutations analysis by direct sequencing, BCR-ABL mRNA level by real time-PCR, and p-CRKL level by flow cytometry in 52 bone marrow samples from 35 CML patients,and the relationship of p-CRKL level with ABL kinase domain mutation and with BCR-ABL mRNA level was analyzed. Results In the 15 imatinib-resistant patients, ABL domain point mutations were detected in 6 with 4 types of nucleotide substitutions: T315I ( n = 3 ), Y253 H ( n = 1 ), E255 K and F317 L. The incidence of mutations in disease chronic phase ( CP), accelerated phase (AP) and blast phase (BP) was 25.00%,40.00% and 30.00%, respectively. The BCR-ABL mRNA level in newly diagnosed CML was higher than that in imatinib-responded patients (P =0.01 );and so did in imatinib-resistant patients than in imatinib-effective patients ( P = 0. 03 ). The level of BCR-ABL mRNA was not significantly different between newly diagnosed CML and imatinib-resistant patients. p-CRKL%, MFI showed a high degree of phosphorylation in newly diagnosed CML and imatinib-resistant patients(P = 5.130; P = 3.178 ). The level of p-CRKL % and MFI in newly diagnosed group was higher than that in imatinib responded group( P = 0.000; P = 0.01 ) and also higher in imatinib-effective group than in imatinib-resistant group (P = 0. 000; P = 0. 02 ). There was apositive correlation between the level of BCR-ABL expression and p-CRKL % ( and the MFI of p-CRKL)( P < 0. 05 ). Conclusion It seems that p-CRKL detection might be helpful in predicting imatinib treatment outcomes. 相似文献
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目的:探讨血浆miR-221在急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的表达及意义.方法:收集38例成人AML患者,其中初发患者12例(M2 1例,M3 3例,M4 6例,M5 2例),复发患者8例(M2 2例,M3 3例,M4 2例,M5 1例),完全缓解(complete remission,CR)患者18例(M2 2例,M3 6例,M4 6例,M5 4例)及3例正常人的外周血血浆标本.采用基于SYBR Green荧光染料法的茎环实时定量PCR(qRT-PCR),以U6为内参照,用2(-ΔCt)方法计算miR-221的相对表达量,分析血浆miR-221的表达情况.结果:qRT-PCR结果显示,较之CR组和正常对照组,AML初发组和复发组中血浆miR-221的表达量明显升高,差异均有显著性(P<0.05).初发组和复发组之间无统计学差异(P>0.05).CR组比正常对照组的表达量高,但两组差异并无统计学意义(P>0.05).结论:血浆miR-221在AML初发和复发患者中的表达量高,在CR患者及正常对照中的表达量低,提示血浆miR-221与AML肿瘤负荷呈正相关,微创的血浆miRNAs检测可作为临床微小残留病检测的新方法. 相似文献
20.
目的探讨急性髓系白血病(AML)巨核细胞系抗原(MK)表达与临床、生物学特征的关系。方法采用流式细胞仪间接免疫荧光法对成人初治AML患者211例进行检测。结果27例(128%)表达MK;AML亚型中以杂合急性白血病(HAL)和急性单核细胞白血病(M5)表达最高,分别为45.5%和24.1%。MK表达与CD34抗原、外周血高白细胞数、多药耐药糖蛋白(Pgp)高度相关(P<0.05),与染色体核型无关。MK+AML的完全缓解(CR)率为33.3%,明显低于MKAML的719%。结论巨核细胞系抗原表达可能起源于较早期造血干细胞的恶性转化,可作为临床判断疗效及预后的参考指标之一。 相似文献