胚胎干细胞上清液诱导Tca8113细胞发生上皮-间充质转化的实验研究

目的:采用胚胎干细胞培养上清液诱导口腔鳞癌细胞发生上皮-间充质转化,初步探讨其意义.方法:应用129小鼠胚胎干细胞培养上清液诱导培养舌鳞癌Tca8113细胞.分别在1周和2周后,采用免疫荧光和免疫细胞化学检测诱导前、后Tca8113细胞中Oct4、角蛋白(CK)和波形丝蛋白(vimentin)的表达情况.半定量反转录PCR检测snail、slug、E-cadherin和CD44、Bmi-1、hTERT表达随诱导时间的变化情况.结果:Tca8113细胞经条件培养基诱导后,细胞形状逐渐由铺路石样变为长梭形;Oct4集中表达在细胞核中,vimentin转变为阳性表达,CK表达无明显变化;上皮-间充质转化标记snail mRNA表达上调,E-cadherin下调,slug无明显变化.同时,癌干细胞标记CD44、Bmi-1和hTERT mRNA表达上调.结论:口腔鳞癌细胞经胚胎干细胞培养上清液诱导后,可发生上皮-间充质转化,从而可能具备部分干细胞特性.     

顺铂诱导舌鳞癌细胞发生上皮-间充质转化及获得肿瘤干细胞样特性的实验研究

目的: 建立舌鳞癌顺铂耐药株,观察其是否具有肿瘤干细胞样特性以及是否发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法: 使用顺铂梯度浓度递增法构建舌鳞癌顺铂耐药细胞株,通过MTS、流式细胞术和球囊培养对比舌癌顺铂耐药株和其亲本细胞株化疗耐药性及肿瘤干细胞特性的变化,通过qRT-PCR和Western 免疫印迹检测肿瘤干性因子SOX2、OCT4、BMI1和ABCG2的表达,以及舌癌顺铂耐药株和其亲本细胞株中EMT的指标E-cadherin和Vimentin的表达水平,通过Transwell侵袭迁移实验研究侵袭和迁移能力的变化。采用SPSS 17.0 软件包对数据进行统计学处理。结果: 成功构建了2株舌鳞癌顺铂耐药株CAL27-res和SCC9-res,2株细胞对顺铂具有更强的耐药性。与亲本的舌癌细胞CAL27和SCC9相比,CAL27-res和SCC9-res细胞呈现间充质表型, E-cadherin显著下调(P<0.001),Vimentin和N-cadherin显著上调(P<0.001),侵袭、迁移能力显著增强(P<0.001)。同时,CAL27-res和SCC9-res细胞球囊形成能力增强,肿瘤干性因子SOX2、OCT4、BMI1和ABCG2上调(P<0.001),CD44⁺/CD24^-细胞的比例增高(P<0.001)。结论: 顺铂诱导的舌鳞癌耐药细胞发生EMT且获得了肿瘤干细胞样特性。     

白细胞介素8在口腔鳞癌上皮-间充质转化中的研究进展

白细胞介素8是CXC趋化因子家族的一员,除具有趋化免疫细胞的作用外,对于肿瘤组织的发生、发展更是有着显著影响。本文简述白细胞介素8的生物学特点,分析其促进口腔鳞癌上皮-间充质转化行为的现象和原因,目前白细胞介素8在该领域的主要研究进展,并提出未来的研究方向。     

上皮-间充质转化相关蛋白在小鼠磨牙Hertwig's上皮根鞘的表达

目的 观察小鼠下颌第一磨牙牙根发育过程中,上皮间充质转化(EMT)相关蛋白在上皮根鞘(HERS)中表达情况,深入探讨HERS的生物学性质.方法 取新生第5、7、10、15天的ICR小鼠下颌骨标本,利用Masson染色显示其组织学形态,免疫荧光双染、免疫组织化学及阳性表达定量分析观察EMT相关标志物(CK14、波形蛋白、...     

口腔鳞状细胞癌患者循环肿瘤细胞上皮-间充质转化状态的研究

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)患者与外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)状态的关系。方法:采用CanPatrolTM CTC-二代捕获技术联合RNA多重原位杂交分析(RNA in situ hybridization, RNA-ISH),检测32例OSCC患者术前1 d外周循环血中的肿瘤细胞。CTCs将根据EMT的相关标志物进行分型鉴定。结果:根据EMT相关标志物的表达情况,将检测出的CTCs分为上皮型CTCs(epithelial CTCs, e-CTCs),混合型CTCs(epithelial-mesenchymal-mixed CTCs, mix-CTCs)及间质型CTCs(mesenchymal CTCs, m-CTCs)。CTCs总数为198,其中e-CTCs为56(28.3%),mix-CTCs为128(64.6%),m-CTCs为14(7.1%)。每位患者的CTCs平...     

Gli1调控口腔鳞状细胞癌上皮-间充质转化的研究进展

HH(hedgehog)信号通路轴由:hedgehoge配体(Shh、Ihh和Dhh)、Patch和Smo两个膜蛋白形成复合物以及下游锌指核转录因子Gli组成,HH信号通路中锌指核转录因子Gli家族以Gli1为主导并起到决定性作用.上皮-间充质转化与包括口腔鳞状细胞癌在内的多种肿瘤的侵袭和转移密切相关,关于口腔鳞状细胞癌与Shh/Gli1信号轴的作用研究报道较少见,现就口腔鳞状细胞癌发生上皮-间充质转化与Gli1的相关性研究进展作一综述.     

细胞凋亡及上皮-间充质转化在腭胚突融合过程中的作用探讨

目的: 探讨细胞凋亡及上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）在腭胚突融合中的作用。方法: 选用8周龄C57BL/6J近交系小鼠作为研究对象。于E13.5、E14.0、E14.5、E15.5及E17.5 d获取胎鼠腭胚突组织,在腭胚突融合的关键阶段,应用免疫组织化学和TUNEL方法检测EMT过程中蛋白变化和细胞凋亡率。每个时间点选择3张图片,应用image J软件进行图片灰度分析,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析。结果: 免疫组织化学和TUNEL法检测发现在腭融合的关键阶段（E14.5）,腭中嵴上皮（medial edge epithelium, MEE）中出现纤连蛋白和波形蛋白表达和细胞凋亡,前中后腭部MEE细胞也出现细胞凋亡,中后部细胞凋亡率显著高于前部。结论: 在体内腭胚突融合的关键阶段,EMT过程和细胞凋亡均参与了腭中嵴上皮带的退化消失,且前中后腭部的融合机制基本一致。     

永生化外胚间充质干细胞的生物学特性

目的：探讨端粒酶催化亚基(hTEBT)介导的永生化外胚间充质干细胞的生长、增殖特性及转化特征．方法：测定永生化外胚间充质干细胞的生长曲线、群体倍增时间；流式细胞术检测细胞增殖周期；绘制细胞累计生长曲线；榆测细胞的平板克隆形成率、软琼脂克隆形成情况；胰蛋白酶-Giemsa染色法分析染色体核型；接种于裸鼠皮下检测细胞的致瘤性．结果：永生化外胚间充质干细胞越过衰老期，增殖较活跃．S期细胞比例明显增加；该细胞不能在软琼脂内形成细胞克隆；第25代细胞染色体形态结构正常，为二倍体核裂；在裸鼠皮下不能形成肿瘤。结论：永生化外胚间育质干细胞增殖旺盛，核型正常，无悬浮生长能力，在裸鼠体内不具成瘤性，是正常细胞而非转化细胞，可以作为组织工程的种子细胞。     

miR-181a抑制舌鳞癌细胞上皮-间充质转化及化疗耐药机制的研究

目的:探讨miR-181a调控上皮-间充质转化(EMT)促进舌鳞状细胞癌细胞顺铂耐药的机制。方法:分别在CAL27/CDDP、CAL27中转染miR-181a mimics、miR-181a LNA,免疫印迹及免疫荧光检测E-cadherin、Vimentin的表达;免疫印迹检测Twist1、Slug的表达;Transwell及划痕实验检测细胞的侵袭、迁移能力;MTT法检测细胞对顺铂的半抑制率。利用生物信息学方法:预测Twist1可能为miR-181a的靶基因。构建包含Twist1结合序列片段的荧光素酶报告基因质粒,进行双荧光素酶报告基因实验。采用SPSS17.0软件包对结果进行单因素方差分析。结果:转染miR-181a mimics可逆转CAL27/CDDP的EMT表型,E-cadherin表达增强,Vimentin、Twist1及Slug表达降低,细胞的侵袭、迁移能力显著降低,IC₅₀下降47.57%±6.23%（P<0.05）。转染miR-181a LNA可诱导CAL27细胞发生EMT,E-cadherin表达降低,Vimentin、Twist1及Slug表达增强,细胞侵袭、迁移能力显著增强,IC₅₀升高55.61%±7.20%（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,Twist1是miR-181a的靶基因。结论:miR-181a靶向调控Twist1,从而抑制舌鳞癌细胞上皮-间充质转化与顺铂耐药。     

骨髓间充质干细胞

骨髓是一个复合体 ,它由红细胞、白细胞、它们的前体细胞及被称为基质 (ｓｔｒｏｍａｌ)的结缔组织网架组成。来自基质的细胞 ,在形态上分别与成纤维细胞、网状细胞、脂肪细胞和内皮细胞的形态相似[1] ,这些细胞被称为骨髓基质干细胞。它们在体外能被不同的诱导因子诱导 ,分化为骨、软骨、肌肉、脂肪等[2 ] 。干细胞的主要特点是结构比较简单 ,是不具有特定机能的原始细胞 ,能以自我复制的方式增生 ,在一定的条件下能向特定的方向分化 ,产生几个亚系的前体细胞[3 ] 。骨髓基质干细胞就能分化为不同的间充质细胞 ,如成骨细胞、软骨细胞、肌肉…     

肿瘤微环境与上皮-间质转化的机制

上皮—间质转化是恶性肿瘤浸润和转移的重要机制,而此过程的诸多环节均受肿瘤微环境的影响。因此,研究肿瘤微环境和上皮—间质转化的机制,建立相应的阻断途径,不仅对肿瘤的临床诊断和治疗方案的选择以及预后评估具有重要的意义,而且有可能为其设计新的抗浸润和转移治疗奠定理论和实验基础。下面就上皮—间质转化和肿瘤微环境及其两者间的关系作一综述。     

上皮间质转化相关蛋白在口腔黏膜下纤维化及其癌变组织中的表达

目的：探讨上皮间质转化相关标记蛋白E－cadherin和β－catenin在口腔黏膜下纤维化组织（oral submu－cous fibrosis,OSF）及其癌变组织中的表达特点及作用。方法：应用免疫组化SP法检测60例OSF患者,15例OSF癌变患者以及5例正常对照者的口腔黏膜组织中E－cadherin和β－catenin的表达并用IPP图像处理软件分析其平均光密度值。结果：①E－cadherin免疫组化阳性反应基本位于细胞膜,在正常黏膜和OSF早、中、晚期以及OSF癌变组织中其异常表达率分别为0、5％、20％、35％和53．3％;其平均光密度值分别为0．125±0．004,0．116±0．0006,0．109±0．008,0．103±0．009与0．095±0．008,各组之间表达均有显著性差异（P＜0．05）。②β－catenin免疫组化阳性反应在正常细胞基本位于细胞膜,而在OSF各组病变组织细胞中出现膜表达减少而质核表达增加的现象。在正常黏膜和OSF早、中、晚期以及OSF癌变组织中其异常表达率分别为0、60％、80％、90％和93．3％;其平均光密度值分别为0．105±0．007,0．098±0．009,0．106±0．012,0．114±0．007与0．119±0．003,β－catenin蛋白含量在早期组略有下降,但与正常组相比,表达无显著性差异（P＞0．05）;而OSF病变组间比较,表达均有显著性差异（P＜0．05）。结论：OSF及其癌变组织中E－cadherin的表达降低,β－catenin胞质核表达明显升高,EMT可能参与OSF及其癌变过程。     

乙醇诱导舌鳞状细胞癌上皮细胞间质转化

目的探讨乙醇对舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞上皮间质转化的影响。 方法乙醇诱导TSCC细胞株SCC9和SCC15,倒置显微镜下观察处理前后细胞形态及排列情况;Wound healing和Transwell实验检测乙醇处理前后细胞迁移和侵袭能力;Western blot和免疫荧光检测E-cadherin和Vimentin表达情况。数据分析采用SPSS 19.0统计软件,计数资料之间比较采用卡方检验,E-cadherin和Vimentin蛋白表达变化采用单因素方差分析。 结果倒置显微镜下可见乙醇诱导后的SCC9和SCC15细胞由上皮细胞形态向间质细胞形态转化,细胞失去极性和紧密连接,由多边形、铺路石样转变为类似成纤维细胞样形态,细胞呈梭形,部分伸出伪足,细胞间隙增宽甚至丧失,排列较为杂乱、松散;Wound healing实验中,乙醇处理后的SCC9和SCC15细胞划痕愈合更快,迁移能力明显增强（χ²_{SCC9,24 h}= 15.668,P_{SCC9,24 h}= 0.001;χ²_{SCC15,24 h}= 4.703,P_{SCC15,24 h}= 0.028;χ²_{SCC9,48 h}= 3.391,P_{SCC9,48 h}= 0.042;χ²_{SCC15,48 h}= 2.386,P_{SCC15,48 h}= 0.136）;Transwell实验则证实乙醇处理后的SCC9和SCC15细胞的侵袭能力明显增强,SCC9相对侵袭率为384.24%（χ²= 26.917,P<0.001）,SCC15相对侵袭率为428.49%（χ²= 32.880,P<0.001）;Western blot和免疫荧光结果显示乙醇诱导后SCC9和SCC15细胞E-cadherin表达下调（F= 131.533,P_SCC9<0.001,P_SCC15= 0.001）,Vimentin表达上调（F= 355.388,P_SCC9<0.001,P_SCC15<0.001）。 结论乙醇可诱导TSCC细胞发生上皮间质转化,促进其侵袭和迁移。     

蛋白激酶C激活对口腔鳞癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:利用舌癌细胞系HN12探索激活蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对口腔鳞癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:采用质粒pCMV6-AC-GFP-P120ctn转染HN12细胞,使HN12过表达P120-连环蛋白(P120-catenin,P120ctn),再加入蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)激活剂佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA),采用实时荧光定量PCR、Western blot检测PMA处理前后PKC、P120ctn、E-cad的mRNA和蛋白表达,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验等方法检测细胞的迁移和侵袭能力.结果:当PKC被PMA活化时,细胞形态发生改变,细胞中P120ctn的表达显著降低,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)也随之降低,间质标记蛋白N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)和波形蛋白(Vimentin,Vim)的mRNA和蛋白表达水平显著升高,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力显著提高(P＜0.05).结论:PKC可能通过磷酸化调节P120ctn的表达,参与细胞黏附的调控,促进EMT,在口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭过程中发挥作用.     

上皮间质转化及其调控基因Twist在肿瘤侵袭转移中的作用

上皮间质转化(EMT)是胚胎发生、慢性炎症和纤维化以及肿瘤进展中的一个重要过程,以上皮细胞极性的丧失及其间质特性的获得为主要特征。Twist蛋白是属于碱性螺旋-环-螺旋蛋白家族中的高度保守的转录因子,最近的研究表明,Twist作为EMT过程中的关键调控因子,对肿瘤的侵袭和转移有重要影响。本文就EMT及其调控基因Twist在肿瘤侵袭转移中的作用研究作一综述。     

miRNA调控EMT与口腔癌化疗耐药关系的研究进展

化疗是口腔癌治疗的主要手段之一,但肿瘤细胞耐药常导致化疗失败。微小RNA(miRNA)广泛参与调控口腔癌的发生、发展和化疗耐药,耐药细胞株表现出上皮间质转换(EMT)的形态学改变。阐明耐药相关miRNA调控EMT与化疗耐药的相互关系,对逆转口腔鳞癌细胞化疗耐药具有重要意义。该文就近几年来国内外有关研究作一综述。     

Twist在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与 鳞状细胞癌上皮间质化的关系

目的 观察人口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中上皮间质化相关蛋白及转录因子Twist的表达,研究Twist在OSCC上皮间质化中的作用及OSCC转移情况的相关性,并探讨其在人OSCC中的临床意义。方法 通过免疫组织化学及原位杂交的方法分别检测30例OSCC组织中上皮源性标记物E-钙黏蛋白（E-cad）和细胞角蛋白（CK）,间质源性标记物N-钙黏蛋白（N-cad）,转录因子Twist蛋白及mRNA的表达情况,并与临床病理资料作对照分析。结果 免疫组织化学结果：在OSCC组织中,Twist、N-cad的表达明显高于正常组织,E-cad及CK的表达明显低于正常组织（P<0.05）;在OSCC中低分化组,Twist、N-cad的表达高于高分化组,E-cad及CK的表达明显低于高分化组（P<0.05）;在有淋巴结转移组中,Twist、N-cad的表达高于无淋巴结转移组,E-cad及CK的表达低于无淋巴结转移组（P<0.05）。原位杂交结果：Twist mRNA在OSCC中低分化组,T3、T4组和有转移淋巴结组的表达分别高于高分化组,T1、T2组和无淋巴结转移组,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 OSCC组织中存在上皮间质化,Twist可使肿瘤细胞的侵袭力增加,促进OSCC的浸润和转移。联合检测Twist、E-cad和N-cad的表达可能会更有效地判断和预测OSCC的转移。