实时荧光RT-PCR在SARS病毒定量检测中的应用

目的建立实时荧光定量PCR技术检测患者SARS病毒含量。方法通过高效样品处理方法提取血清、漱口液中SARS-CoV RNA,采用简巢式PCR和TaqMan荧光探针标记技术检测SARS-CoV核酸,阳性扩增产物制备重组质粒,重组质粒系列稀释后标定作为定量标准曲线。结果本法具有很好的特异性、重复性,灵敏度达到1×105copies/L。132例漱口液标本中,40例SARS患者SARS-CoV核酸的检出率为65%(26/40),疑似病人检出率为11.5%(6/52),40例健康人均未检出;39例SARS患者的血清标本中SARS-CoV核酸检出率为25.6%(10/39),3例疑似病人血清均未检出。对52例疑似病人漱口液阳性的6例样本的基因扩增产物进行测序确认,与BJ01 AY278488标准序列一致,检测结果与临床表现基本相符。结论本法快速、特异,适用于临床样本中SARS冠状病毒的检测,同时为滴度低、取样困难的病原体的检测探索了一种新的方法。     

实时荧光定量RT-PCR技术在疾病相关mRNA定量检测方面的应用进展

实时荧光定量逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)技术作为一项高度敏感、程序结束无需后处理和可高通量检测的新型技术已广泛用于基因表达的定量检测.为了更好地将这一技术应用于临床研究的各领域,本文就荧光定量RT-PCR检测基因表达的原理、绝对定量与相对定量的区别、实时荧光定量RT-PCR技术检测核糖核酸(mRNA)存在的几个问题,以及目前该技术在临床研究方面的应用进展作一综述.     

实时荧光定量RT-PCR技术在疾病相关mRNA定量检测方面的应用进展

实时荧光定量逆转录多聚酶联反应（RT—PCR）技术作为一项高度敏感、程序结束无需后处理和可高通量检测的新型技术已广泛用于基因表达的定量检测。为了更好地将这一技术应用于临床研究的各领域,本文就荧光定量RT—PCR检测基因表达的原理、绝对定量与相对定量的区别、实时荧光定量RT-PCR技术检测核糖核酸（mRNA）存在的几个问题,以及目前该技术在临床研究方面的应用进展作一综述。     

两种麻疹病毒和风疹病毒三重实时荧光RT-PCR检测试剂应用比较的研究

目的比较评价两种含内质控三重实时荧光RT-PCR检测试剂检测麻疹病毒和风疹病毒结果的差异。方法对江西省市级麻疹风疹实验室上送的麻疹病毒或风疹病毒核酸阳性咽拭子标本进行复核,同时用两种含内质控的麻疹病毒和风疹病毒三重荧光RT-PCR试剂盒检测,并对检测结果进行比较分析。结果麻疹病毒和风疹病毒核酸阳性咽拭子标本符合率分别为95.12%和100.00%;两种试剂检测麻疹病毒特异度和灵敏度均较好;试剂A和试剂B检测风疹病毒特异度较好,灵敏度分别为71.43%和100%;试剂A和试剂B检测人RNase P核酸灵敏度分别为100%和92.73%。结论试剂A在对麻疹病毒核酸检测方面具有较高的敏感度及特异度,有较高应用和推广价值。     

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的 探讨荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M)ELISA法检测的临床价值。方法 选取2013年4~12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用ELISA法对其血液标本进行HBV-M模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HbsAb)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)、乙型肝炎E抗体(HbeAb)、乙肝表面核心抗体(HbcAb);再采用FQ-PCR法进行HBV-DNA定量检测,观察不同HBV-M模式检测结果。结果 HBsAg、HbeAg、HbcAb检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1(+)、3(+)、5(+)模式]和[1(+)、3(+)模式]的HBV-DNA阳性率分别为97.97%、94.74%,显著高于其他模式的HBV-DNA阳性率(P<0.05)。大三阳的HBV-DNA表达水平(5.59×106±2.42×105)copies/mL,明显高于其他模式(P<0.05)。结论 联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的：探讨荧光定量 PCR 法（FQ-PCR）检测乙肝病毒 DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）ELISA 法检测的临床价值。方法选取2013年4～12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用 ELISA 法对其血液标本进行 HBV-M 模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HbeAg）、乙型肝炎 E 抗体（Hbe-Ab）、乙肝表面核心抗体（HbcAb）;再采用 FQ-PCR 法进行 HBV-DNA 定量检测,观察不同 HBV-M 模式检测结果。结果 HB-sAg、HbeAg、HbcAb 检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1（＋）、3（＋）、5（＋）模式]和[1（＋）、3（＋）模式]的 HBV-DNA 阳性率分别为97．97％、94．74％,显著高于其他模式的 HBV-DNA 阳性率（P ＜0．05）。大三阳的 HBV-DNA 表达水平（5．59×10^6±2．42×10^5）copies/mL,明显高于其他模式（P ＜0．05）。结论联合 HBV-M 定性及 HBV-DNA 定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

实时荧光定量PCR法在儿童巨细胞病毒感染诊断中的应用分析

目的 分析实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法在人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）感染诊断中的应用价值。方法 选取2021年1月至2023年3月我院收治的88例疑似HCMV感染患儿,于清晨采集患儿空腹静脉血5ml及新鲜晨尿的中段尿5ml,采用ELISA法测定HCMV-IgM,采用FQ-PCR法测定HCMV-DNA。统计病毒培养法诊断结果;以病毒培养法诊断结果作为金标准,计算HCMV-IgM、HCMV-DNA诊断HCMV感染结果,并计算诊断HCMV感染结果与病毒培养法诊断结果的一致性。结果 88例疑似HCMV感染患儿中经病毒培养法诊断HCMV感染60例;以病毒培养法诊断结果作为金标准,HCMV-IgM诊断阳性34例,阴性54例,其中漏诊28例,误诊2例,HCMV-IgM诊断结果与病毒培养法诊断结果一致性差（Kappa=0.370,P=0.000）;HCMV-DNA诊断阳性52例,阴性36例,其中漏诊9例,误诊1例,HCMV-DNA诊断结果与病毒培养法诊断结果一致性极好（Kappa=0.757,P=0.000）;HCMV-DNA诊断灵敏度、准确度均高...     

荧光定量RT-PCR检测手足口病病原及其临床分析

【目的】采用荧光定量RTPCR法检测手足口病患儿病原,并对手足口病临床特点分析。【方法】利用荧光定量PCR核酸检测试剂盒对,临床诊断手足口病的咽拭子、粪便标本32份进行总肠道病毒和EV71、CoxA16检测,并对所致的临床特点分析。【结果】在32份样本中,肠道病毒通用核酸阳性22份,肠道EV71病毒核酸阳性10份,其他肠道病毒核酸阳性12份,无CoxA16核酸阳性;EV71与其他肠道病毒的早期临床特点和辅助检查结果基本相同。【结论】荧光定量RT-PCR法可早期对手足口病的病原学诊断,不同病原早期临床特点和辅助检查结果基本相同。     

ROX参比荧光在实时荧光定量RT-PCR检测Nrf2mRNA中的应用

目的 建立大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法,评价ROX参比荧光在其分析中的归一化校正作用.方法 采用Taq Man探针法构建大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法;取大鼠混合cDNA的Nrf2 PCR产物,经凝胶电泳和测序鉴定反应特异性;取PCR标准品10个浓度梯度(2.0×109～2.0×100)各1份进行实时荧光定量RT-PCR检测,分析ROX参比荧光校正与否的标准曲线的线性范围的变化;取高、中、低值重组质粒样本各1份进行批内重复20次和批间连续20次实时荧光定量RT-PCR检测,分析ROX参比荧光校正与否的批内、批间重复性差异.结果 成功建立大鼠Nrf2 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法;大鼠混合cDNA的Nrf2 PCR扩增片段与预期122 bp相符,测序结果扩增片段序列正确,PCR特异性好;标准品PCR扩增结果的标准曲线线性范围未经ROX参比荧光校正为2.0×109～2.0×102拷贝/μl(R2＞0.99),校正后为2.0×109～2.0×100拷贝/μl(R2＞0.99),校正后线性范围变宽100倍.高、中、低值样本重复性分析结果显示未经ROX参比荧光校正批内Ct变异系数(CV)为4.1%、2.7%、2.1%,批间CV为4.3%、3.0%、2.4%,校正后批内CV为0.7%、0.5%、0.4%,批间CV为1.0%、0.8%、0.7%,ROX参比荧光校正后样本Ct离散程度均低于未校正组,批内、批间的高值、中值浓度样本(高值组批内和批间t值分别为4.843、2.566,中值组批内和批间t值分别为4.293、4.423,P均＜0.05),但低浓度组的Ct离散度的差异无统计学意义(低值组批内和批间t值分别为0.753、1.279,P均＞0.05).结论 在构建大鼠Nrf2实时荧光定量RT-PCR检测方法中,加入ROX参比荧光,可加宽PCR标准曲线的线性范围,提高检测重复性,为准确分析大鼠模型Nrf2 mRNA表达水平奠定了基础.     

逆转录聚合酶链反应检测风疹病毒

为了早期诊断风疹感染，应用逆转录。聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对８０例临床怀疑风疹感染患者的咽拭物检测风疹病毒。ＰＣＲ阳性者４３例，占５３％；同时用酶联免疫吸附法对每份血清作了ＩｇＭ检测，阳性者１２例，占１５％。统计学处理（Ｐ＜０．０１），表明两种检测方法差异有显著性。扩增产物的特异性通过地高辛标记探针的点杂交分析得到证实。该ＲＴ－ＰＣＲ方法具有快速、早期、灵敏度高和特异性强的特点，有希望发展成为临床诊断胎儿风疹感染的一种重要手段，并为产前咨询提供可靠的依据。     

实时荧光定量聚合酶链反应在丙型肝炎诊断中的临床应用价值

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)荧光定量检测在丙型肝炎诊断中的临床应用价值。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测358例血清中HCV RNA载量及抗-HCV。结果 358例慢性丙型肝炎患者抗-HCV和HCV RNA检出率分别为78.8%和54.2%,经χ2检验差异有统计学意义(P<0.05),HCV RNA的平均载量为4.85×105 copies/mL。结论FQ-PCR检测血清中HCV RNA的载量,是判定HCV感染的直接证据,它反映HCV的活动性和复制程度,有利于抗病毒治疗的疗效观察。抗-HCV和HCV RNA联合检测对丙型肝炎病毒的早期诊断有重要临床应用价值。     

实时荧光定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株PAX5 mRNA表达

目的　建立实时定量逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测6个血液肿瘤细胞株中PAX5和CD19的 mRNA相对表达量。方法　一系列稀释的反转录自NAMALWA细胞株总RNA的cDNA被用于构建PAX5、CD19 和GAPDH扩增的标准曲线。实验证实靶基因(PAX5和CD19)与管家基因(GAPDH)的扩增效率一致,因此可 以用比较循环数(Ct)法对PAX5和CD19的表达进行相对定量。结果　在NAMALWA(B细胞系)细胞株中, PAX5和CD19mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在其他T细胞和髓系细胞株中几乎不表达。结论 　本研究中所建立的实时定量RT PCR能简单、快速、方便地对PAX5和CD19mRNA表达水平进行定量,且适 用于对大量、不同种血液恶性肿瘤患者进行观察研究。     

实时荧光定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株PAX5 mRNA表达

目的建立实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测6个血液肿瘤细胞株中PAX5和CD19的mRNA相对表达量。方法一系列稀释的反转录自NAMALWA细胞株总RNA的cDNA被用于构建PAX5、CD19和GAPDH扩增的标准曲线。实验证实靶基因(PAX5和CD19)与管家基因(GAPDH)的扩增效率一致,因此可以用比较循环数(Ct)法对PAX5和CD19的表达进行相对定量。结果在NAMALWA(B细胞系)细胞株中,PAX5和CD19 mRNA相对表达量分别为2．35％和2．52％;而在其他T细胞和髓系细胞株中几乎不表达。结论本研究中所建立的实时定量RT—PCR能简单、快速、方便地对PAX5和CD19 mRNA表达水平进行定量,且适用于对大量、不同种血液恶性肿瘤患者进行观察研究。     

荧光定量PCR检测HBV—DNA和ELISA法检测乙肝六项的一致性分析

目的对临床病人血清同时进行荧光定量PCR和ELISA检测，分析两种方法检测乙肝的一致性。方法分别使用Kappa检验、线性回归分析和ROC曲线法对两种测试方法结果进行分析。结果以定性方式处理两种方法测试结果时，Kappa检验结果显示乙肝病毒DNA的PCR检测结果和ELISA法检测的HbsAg、HbsAh、HbeAg及HbeAb结果存在一致性．而和Hbcab及preS2Ag结果不存在一致性；以定量方式处理式处理两种方法测试结果时，线性同归分析和ROC曲线法都显示乙肝病毒DNA的PCR检测结果和ELISA法检测的HbeAg存在一致性，而和HbsAg、HbsAb、HbeAb、HbcAb及preS2Ag结果不存在一致性。结论证实PCR检测乙肝病毒DNA和ELISA检测HbeAg存在良好的一致性，而和ELISA检测乙肝六项其他项目的一致性较差，除方法学本身的局限导致的差异外，由于荧光定量PCR法和ELISA法分别从基因水平和蛋白质水平对乙肝病毒进行测定，测定成分的差异也是影响结果一致性的重要因素．     

荧光定量PCR检测HBV—DNA和ELISA法检测乙肝六项的一致性分析

目的 对临床病人衄清同时进行荧光定量PCR和EUSA检测,分析两种方法检测乙肝的一致性.方法 分别使用Kappa检验、线性回归分析和ROC曲线法对两种测试方法结果进行分析.结果 以定性方式处理两种方法测试结果时,Kappa检验结果显示乙肝病毒DNA的PCR检测结果和ELISA法检测的HbsAg、HbsAb、HbeAg及HbeAb结果存在一致性,而和Hb-cAb及preA2Ag结果不存在一致性;以定量方式处理式处理两种方法测试结果时,线性回归分析和ROC曲线法都显示乙肝病毒DNA的PCR检测结果和EUSA法检测的HbeAg存在一致性,而和HbsAg、HbsAb、HheAb、HbcAb及preS2Ag结果不存在一致性.结论 证实PCR检测乙肝病毒DNA和ELISA检测HbeAg存在良好的一致性,而和EUSA检测乙肝六项其他项目的一致性较差,除方法学本身的局限导致的差异外,由于荧光定量PCR法和EUSA法分别从基因水平和蛋白质水平对乙肝病毒进行测定,测定成分的差异也是影响结果一致件的霞要因素.     

实时荧光RT-PCR快速检测肠道病毒RNA及其临床意义

目的应用实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法快速检测肠道病毒RNA,为手足口病的早期诊断提供临床依据。方法采用实时荧光RT-PCR法检测手足口病患儿粪便、脑脊液中肠道病毒通用型、柯萨奇病毒A组16(CA16)和肠道病毒71型(EV71)RNA。结果 234份粪便标本中肠道病毒通用型阳性214例,检出率为91.45%;CA16阳性56例,阳性率为23.50%;EV71阳性87例,阳性率37.17%,其中有4例同时检出CA16和EV71。2份脑脊液标本中3种肠道病毒核酸结果均为阴性。结论实时荧光RT-PCR能对肠道病毒RNA进行快速检测,为手足口病的早期诊断提供诊断依据,并对手足口病患儿的病情分析、治疗及预后观察起到指导作用。     

实时荧光定量RT—PCR技术在疾病相关mRNA定量检测方面的应用进展

实时荧光定量逆转录多聚酶联反应（RT—PCR）技术作为一项高度敏感、程序结束无需后处理和可高通量检测的新型技术已广泛用于基因表达的定量检测。为了更好地将这一技术应用于临床研究的各领域，本文就荧光定量RT—PCR检测基因表达的原理、绝对定量与相对定量的区别、实时荧光定量RT-PCR技术检测核糖核酸（mRNA）存在的几个问题，以及目前该技术在临床研究方面的应用进展作一综述。     

乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量与乙型肝炎病毒血清免疫学标志相关性的研究

荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)的特点是敏感性、特异性好。许多研究证明，乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量检测是衡量乙型肝炎传染性的最精确指标．是确定HBV感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。有关FQ-PCR法进行HBV-DNA定量与HBV血清免疫学标志相关性研究较少见报道。我们用FQPCR检测了635例患者     

改良ELISA快速检测风疹病毒IgM抗体方法的建立

目的　建立快速检测风疹病毒特异性IgM抗体的改良ELISA法。 方法　利用聚乙二醇 (PEG )能加速抗原抗体反应 ,促使其沉淀的特点 ,在常规间接ELISA法的一抗和二抗中加入 4%的PEG ,以缩短反应时间。结果　用该法测定 39份风疹阳性血清和 183份阴性血清的风疹病毒IgM抗体 ,阳性血清检出率为 97.4% ,与常规间接ELISA检测结果 (92 .3% )一致 ;阴性血清的检出率为 95 .1% ,高于间接ELISA(87.5 % ) ,经配对资料的 χ2 检验 ,差别有统计学意义。结论　在风疹IgM间接ELISA法稀释液中加入PEG ,可以缩短试验时间 ,提高检测的准确性     

一步法实时RT-PCR检测技术在手足口病病原学检测中的应用

目的 探讨一步法实时逆转录聚合酶链反应检测技术在手足口病病原学检测中的应用.方法 对378例手足口病患者采集咽拭子(305份)、脑脊液(36份)、疱疹液(37份)标本,分别采用常规逆转录聚合酶链反应、一步法实时逆转录聚合酶链反应检测,比较两种方法检测EV71、CoxA16阳性率,比较一步法实时逆转录聚合酶链反应检测EV...