荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及临床价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应法定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应定量检测1962例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平并与血清HBV标志物进行比较,并对35例乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前后血清HBV DNA含量及相关指标作动态观察。结果乙型肝炎患者HBVDNA定量范围在6.79×102～1.95×109拷贝/毫升之间,在HBeAg阳性患者,其检出率和定量拷贝数较高。拉米夫定治疗后患者外周血HBV DNA载量下降明显。结论荧光定量PCR法是一种相对准确、灵敏度高、特异性强的定量检测HBV DNA的技术,对乙型肝炎诊断、指导、临床用药和疗效监测方面具有实用价值。     

定量聚合酶链反应检测慢性HBV感染者HBVDNA的临床意义

自1999年4月至2000年2月我院采用目前较灵敏的定量聚合酶链反应(PCR)技术共对320例慢性HBV感染患者进行了HBV DNA定量检测,并与HBV M指标,肝纤维化指标进行了比较,现将结果报告如下。 1.将320份病例分为HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性组,HBsAg、抗-HBe和抗-HBc阳性组,HB-sAg和抗-HBc阳性组,抗-HBe和抗-HBc阳性组及     

HBeAg、HBV DNA联合定量检测对HBeAg阳性不同程度慢性乙型肝炎的临床意义

目的：探讨 HBeAg与 HBV DNA 联合定量检测对 HBeAg 阳性的不同程度慢性乙型肝炎的临床意义。方法选择47例慢性乙型肝炎、12例乙型肝炎肝硬化和7例肝细胞癌患者）,χ2检验、t检验及秩和检验分析比较两组患者的年龄、性别、肝功能、HBeAg、HBV DNA 等指标。采用 ROC 曲线评价 lgHBV DNA、lgHBeAg、lgHBV DNA/lgHBeAg诊断乙型肝炎肝硬化、肝癌的准确性。结果慢性乙型肝炎组 HBeAg 定量高水平组与低水平组,在性别、年龄、HBV DNA、TBil、ALT、Alb、PT,差异无统计学意义（P〉0.05）。HBV DNA 定量高水平组与低水平组在性别、年龄、HBeAg、TBil、ALT、Alb、PT,差异无统计学意义（P〉0.05）。慢性乙型肝炎组的 HBeAg、HBV DNA 水平高于乙肝肝硬化及肝癌组（P〈0.05）。lgHBV DNA/lgHBeAg诊断乙肝肝硬化肝癌的准确性比其中单一种准确性高,最佳截断值12.31,灵敏度0.412,特异度0.867。结论单一 HBeAg作为判断 HBV复制的活跃及预测疾病进展有一定局限性,故在临床联合检测 HBV DNA和 HBeAg定量,对 HBeAg阳性不同程度的慢性乙型肝炎有更好的临床指导意义。     

两种实时荧光定量聚合酶链反应检测血清HCV RNA的比较

目的 比较全自动病毒载量检测系统(COBAS TaqMan)和国产荧光定量PCR试剂盒对血清HCV RNA载量的检测结果,探讨两种检测方法在临床诊断和治疗中的应用价值.方法 收集26例慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前和治疗过程中2、4、8、12、24、36和48周的系列血标本,共168份,采用COBAS TaqMan 48全自动分析系统和广州某国产TaqMan实时PCR试剂盒分别检测系列血清中的HCV RNA载量.统计学处理采用x2检验和t检验.结果 当血清HCV RNA≥1×104IU/mL时(0周),COBAS检测和国产试剂盒均能很好测定HCV载量,而且国产试剂盒检测值为1.35×107IU/mL高于COBAS检测值2.21×106IU/mL,差异有统计学意义(t=2.05,P<0.05);血清HCV RNA<1×104IU/mL时(2～48周),COBAS检测出的HCV阳性率为21.4%(30/140),远高于国产试剂盒的1.4%(2/140),差异有统计学意义(t=3.66,P<0.01);治疗4周时,COBAS检测26例患者中14例血清HCV为阳性,12例病毒载量低于检测下限,获得快速病毒学应答(RVR);国产试剂盒检测结果为3例血清HCV为阳性,23例获得RVR.COBAS与国产试剂盒梧比,转阴率差异有统计学意义(x2=10.575,P<0.01).治疗12周时,COBAS检测完全早期病毒学应答(cEVR)率为95.7%(22/23),国产试剂盒检测的cEVR为100%(17/17),差异无统计学意义(x2=0.726,P>0.05).结论 国产荧光定量PCR试剂盒可用于HCV疑似患者的筛查和高HCVRNA载量者的确诊,对于低HCV RNA载量的疑似患者和抗病毒治疗过程中HCV载量的检测,COBAS则更为敏感.

Abstract：

Objective To compare the plasma hepatitis C virus(HCV)RNA levels detected by the fully automated viral load detection system(COBAS TaqMan)and the national real-time quantitative polymerase chain reaction(PCR)kit,and to investigate the clinical application value of these two methods in clinical practice.Methods A total of 168 serial plasma samples collected from 26 patients with chronic hepatitis C(CHC)before and at week 2,4,12,24,36 and 48 of antiviral treatment were detected by both COBAS Taqman 48 analyzing system and the national real-time quantitative PCR kit.The results of two methods were compared by chi square test and t test.Resnlts Both COBAS and national kit showed great positive detecting results when HCV RNA≥1×104IU/mL(at week O),and the virus load value detected by national kit was significantly higher than that detected by COBAS(t=2.05,P<0.05).However,when HCV RNA<1×104(at week 2-48),the positive rate of HCV detected by COBAS was significantly higher than that detected by national kit (t=3.66,P<0.01).At week 4 of treatment,the rapid virological response(RVR)rate was 46.2 % (12/26)detected by COBAS,while that was 88.5%(23/26)detected by national kit,and the difference was significant(x2=10.575,P<0.01).At week 12 of treatment,the complete early virological response(cEVR)was 95.7%(22/23)detected by COBAS,while that was 100%(17/17)detected by national kit,and the difference was not significant(x2=0.726,P>0.05).Conclusions The national TaqMan real-time quantitative PCR kits could be used to screen the suspected cases of HCV infecrion and to diagnose CHC cases with high HCV virus load.COBAS detection is more sensitive in cases with low HCV virus load and in on-treatment monitor during anti-HCV therapy.     

慢性乙型肝炎患者的血清HBeAg定量研究

本研究选择一组慢性乙型肝炎患者进行HBeAg定量检测,并与其它指标对比,分析临床意义.     

广东省东莞地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型分析

目的探讨东莞地区乙型肝炎患者HBV基因型的分布特点。方法采用PCR-微板核酸杂交-ELISA法检测HBVA—F基因型，采用荧光定量-聚合酶链反应法检测血清HBVDNA定量。结果在295例乙型肝炎患者中检出HBV基因型247例（83．7％），其中HBV基因C型占62．3％（154／247）、B型15．4％（38／247）、D型6．9％（17／247）、B／C混合型4．9％（12／247）、C／D混合型5．3％（13／247）、B／D混合型5．3％（13／247），48例未检出基因型；基因C型感染者之间无性别差异（x^2=0．043，P〉0．05）；各基因型患者血清HBVDNA水平无显著性相差，但与48例未检出基因型者比，后者HBVDNA水平明显降低（P〈0．01）。结论PCR-微板核酸杂交-ELISA法检测HBV基因型具有特异、敏感、简单和实用的特点，东莞地区乙型肝炎患者HBV基因型以C型为主，混合型比例相对较高，HBV复制强弱与病毒基因型无关。     

定量聚合酶链反应检测肝病患者血清HBV DNA及治疗意义

本文采用定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３２７例乙型肝炎及肝癌患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ含量和部分病例治疗前后其含量的变化。结果显示,慢肝组〉急肝组,且均明显高于肝硬化组,肝癌组与肝硬化组相似;ＨＢｅＡｇ（＋）组血甭ＨＢＶ ＤＮＡ含量明显高于ＨＢｅＡｇ（－）组;血清ＨＢＣ ＤＮＡ含量与黄疸及转氨酶无关。特异性 继细胞免疫疗一完全反应者、部分瓜者及无反应者其血清ＨＢ发ＤＮＡ含量变化不同。结果表明;血清Ｈ     

多聚酶链式反应在慢性乙型肝炎血清学标志物检测中的应用

作者应用多聚酶链式反应检测９５例慢性乙型肝炎患者的血清标本，ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性组，ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性组，ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性组，抗－ＨＢｓ阳性组，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ阳性组其ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别为９６．５５％（２８／２９例），７８．９５％（１５／１９例），４０％（８／２０），２０％（２／１０例），１０％（１／１０例），并提出乙型肝炎病毒复制和传染性     

以聚合酶链反应法研究乙型肝炎HBV—DNA与e系统的关系

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测了１２２例乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ。对照患者ｅ系统的模式，发现ＨＢｅＡｇ（＋），抗－ＨＢｅ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９０．９％，抗－ＨＢｅ（＋），ＨＢｅＡｇ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５０．１％，ＨＢｅＡｇ（－），抗－ＨＢｅ（－）者的ＨＢＶＤＮＡ阳性率为３５．７％。结果表明，ＰＣＲ法较ｅ系统更能准确反映了ＨＢＶ的复制情况。     

聚合酶链反应检测HBV－DNA的临床意义

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ法对２７３７例乙肝患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝病毒标志物进行检测，结果发现各组ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率：①ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为９９．２７％；②ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｅ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４４．７７％；③ＨＢｓＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４２．８６％；④ＨＢＶ标志物均阴性为１５．９２％。结果表明ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ检出先于其它乙肝病毒标志物，可早期发现乙肝。ＰＣＲ法直接检测ＨＢＶ－ＤＮＡ更有利于临床对乙肝的诊断和治疗。     

聚合酶链反应检测HGV RNA

庚型肝炎病毒(HGV)呈全球性分布。在志愿供血员中 HGV 感染率约为1.7%,职业供血员中为12.9%,在一些不明原因肝病患者中约为9%。HGV 感染可表现为急性、慢性或暴发性肝炎。目前采用聚合酶链反应检测 HGV RNA 是诊断 HGV 感染的主要手段。我们在 HGV5′端非翻译区(5′UTR)设计引物。建立了检测 HGV RNA 的逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-Nested-PCR),并用于 HGV感染的诊断。材料与方法一、标本来源     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者定量检测HBeAg的意义

目的探讨拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者血清HBeAg和HBV DNA载量的变化规律。方法采用免疫化学发光和荧光定量聚合酶链反应技术分别检测了64例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者在接受拉米夫定治疗过程中血清HBeAg和HBV DNA水平的变化。结果治疗12个月,HBV DNA完全转阴49例(76.6%),HBeAg转阴17例(26.6%),他们的HBV DNA和HbeAg水平呈同步下降趋势;11例治疗无效的患者血清HBV DNA和HBeAg水平也呈下降趋势,但始终未转阴;4例HBV DNA短暂转阴的患者,在治疗6个月后又转为阳性,HbeAg也未阴转。结论在拉米夫定抗病毒治疗过程中动态检测HBeAg水平可用于评估抗病毒的效果。     

慢性乙型肝炎患者血清HBsAg浓度与HBV DNA定量及HBeAg滴度的关系分析

目的:定量检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中乙肝病毒(HBV)表面抗原(HBs Ag)、e抗原(HBe Ag)浓度、HBV DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等4项指标,并探讨之间的关系。方法:收集437例CHB患者HBs Ag阳性血清,应用化学发光微粒子免疫分析法定量检测HBV血清学标志物和荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA载量。结果:将HBs Ag按浓度由低到高依次分为5组,并分别与HBV DNA、HBe Ag和ALT比较分析。统计结果显示,不同HBs Ag浓度组之间HBV DNA定量水平差异有显著性意义(F=119.753,P0.01),组间两两分别比较,各组之间差异有显著性意义(P0.01);不同HBs Ag浓度组间HBe Ag滴度的比较,差异有显著性意义(F=175.457,P0.01),各组间两两比较,差异有显著性意义(P0.01)。不同HBs Ag浓度组间ALT水平的比较,差异无统计学意义(F=2.545,P=0.056)。结论:HBs Ag在高浓度时(10 000IU/ml)与HBV DNA的关联性较高,当HBs Ag浓度达到1 000IU/ml以上时与HBe Ag有较高的关联性,而HBs Ag浓度与血清ALT活性无关联性。所以在HBs Ag浓度下降后,坚持检测HBs Ag、HBV DNA及HBe Ag,将对治疗方案的调整和监测疗效提供更加全面的参考依据。     

以聚合酶链反应法研究乙型肝炎HBV－DNA与e系统的关系

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测了１２２例乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ。对照患者ｅ系统的模式，发现ＨＢｅＡｇ（＋），抗－ＨＢｅ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９０．９％，抗－ＨＢｅ（＋）、ＨＢｅＡｇ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５０．１％，ＨＢｅＡ（－）、抗－ＨＢｅ（－）者ＨＢＶＤＮＡ阳性率为３５．７％。结果表明，ＰＣＲ法较ｅ系统更能准确反映ＨＢＶ的复制情况。     

聚合酶链反应检测慢性丁型肝炎血清HDV RNA的实验研究和临床观察

本文建立一种高度敏感和特异性的检测丁型肝炎病毒(HDV)RNA的方法,提高了丁型肝炎的诊断水平。以HDV RNA保守区ORF5′末端第929～1640位核苷酸为靶基因设计一对引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了35例慢性丁型肝炎患者血清HDV RNA,并同时检测HBVM。35例中共检出HDV RNA421例(60％),10例HDAg阳性者HDV RNA全部阳性,25例抗-HD阳性者中有11例HDV RNA阳性(44％)。表明采用RT-PCR可以准确、快速、敏感地检测出HDV RNA,具有很强的特异性。35例中HBV DNA的检出率为34.2％,而HDV RNA的检出率为60％,HBV DNA和HDV RNA同时阳性者共9例占25.7％,提示慢性乙型肝炎病人合并丁型肝炎时,HBV的复制受到不同程度的抑制而HDV的复制较为活跃。     

慢性乙型肝炎患者HBV血清标志物与HBV DNA的相关性分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者HBV血清标志物(HBV serum markers,HBV-M)HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb和HBcAb IgM含量与HBV DNA水平的相关性,为临床诊断和治疗提供依据。方法采用化学发光微粒子免疫测定法和荧光定量聚合酶链反应分别检测446例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者血清HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb含量和HBV DNA水平,同时检测54例HBcAb IgM阳性患者的血清HBV DNA水平,统计分析HBV-M含量与HBV DNA水平的相关性。结果①CHB患者血清中,HBsAg和HBeAg含量与HBV DNA水平呈正相关(P<0.05),HBeAb和HBcAb含量与HBV DNA水平未见相关性(P>0.05);②HBcAb IgM阳性患者中HBcAb IgM含量与HBV DNA水平亦未见相关性(P>0.05)。结论 CHB患者血清HBsAg和HBeAg含量与HBV DNA水平呈正相关。定量检测HBV-M和HBV DNA能更好地了解HBV的动态变化,对诊断和治疗有重要指导意义。