高效液相色谱法测定大鼠血浆中马钱子碱与血浆蛋白的结合率

目的 研究马钱子碱与大鼠血浆蛋白的结合率.方法 采用大鼠血浆平衡透析法,HPLC法测定透析袋两侧溶液中马钱子碱的质量浓度,计算马钱子碱的血浆蛋白结合率.结果 马钱子碱在质量浓度为2.5,1,0.4μg·mL-1时与血浆蛋白结合率分别为59.679%,59.935%,56.387%.结论 高效液相色谱法用于马钱子碱的生物样品测定具有简便、快速、灵敏与选择性高的特点;马钱子碱具有中等强度的血浆蛋白结合率.     

牡荆素血浆蛋白结合率的测定

目的:建立血浆中牡荆素浓度的分析方法,测定牡荆素血浆蛋白结合率。方法:采用平衡透析法透析,利用HPLC测定血浆中牡荆素浓度,计算牡荆素与人血浆蛋白结合率,并比较大鼠和人血浆中牡荆素的血浆蛋白结合率。结果:在2～16 mg.L-1,药物浓度对血浆蛋白结合率无显著影响,但牡荆素在大鼠和人的血浆蛋白结合率存在显著性差异,牡荆素与人的血浆蛋白结合率高于与大鼠血浆蛋白结合率。结论:牡荆素与血浆蛋白具有较强的结合。     

蟾毒灵血浆蛋白结合率的测定

目的:建立血浆中蟾毒灵浓度的分析方法,测定蟾毒灵血浆蛋白结合率.方法:采用平衡透析法测定蟾毒灵血浆蛋白结合率,利用HPLC测定血浆中蟾毒灵浓度,测定并比较大鼠和人血浆中蟾毒灵的血浆蛋白结合率.结果:在0.1~1.0mg·L~(-1),药物浓度对血浆蛋白结合率无显著影响,蟾毒灵与大鼠和人的血浆蛋白结合率存在显著性差异,蟾毒灵与人血浆蛋白结合率高于与大鼠血浆蛋白结合率.结论:蟾毒灵与血浆蛋白具有较强的结合.     

平衡透析法测定大黄游离蒽醌大鼠血浆蛋白结合率的研究

目的:研究5种大黄游离蒽醌(FRAs)共存条件下的大鼠血浆蛋白结合率(PBR)。方法:以体外方式,用平衡透析法模拟5种大黄游离蒽醌体内与血浆蛋白结合的过程,并以高效液相色谱法测定低、中、高三个浓度混合大黄游离蒽醌在透析袋内血浆中的质量浓度与透析袋外缓冲液中的质量浓度,计算血浆蛋白结合率。结果:5种大黄游离蒽醌与大鼠血浆均呈现高蛋白结合率(>80%),且在实验浓度下,大黄酸和大黄素的血浆蛋白结合率与其浓度成反比,大黄素甲醚的血浆蛋白结合率与其浓度成正比。结论:5种大黄游离蒽醌成分间存在竞争性抑制,其竞争能力与化合物脂溶性和酸性有关。     

平衡透析法测定丹参素血浆蛋白结合率

目的:探讨丹参素的血浆蛋白结合率.方法:采用平衡透析法模拟丹参素在人体内与血浆蛋白结合的过程,并以高效液相色谱法测定丹参素在透析袋内血浆中的药物质量浓度与透析袋外缓冲液中的质量浓度.结果:丹参素的血浆蛋白结合率在20％～30％,浓度依赖性不明显.结论:丹参素属于低血浆蛋白结合率药物,大部分药物以游离形式发挥药效.     

吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的HPLC分析

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)测量中药吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量的方法.方法:以乙酸乙酯为溶剂用超声震荡提取法提取吴茱萸碱和吴茱萸次碱.提取液用HPLC法分析,色谱柱:YWG-C18(10μm,250mm×4.6mm).流动相:水-甲醇-乙腈(42:20:38).流速1.0ml·min-1.柱温:30℃.检测波长:260nm.结果:吴茱萸碱的回归方程为Y=56.47X 29.89,相关系数为0.9997,线性范围为5～1000μg·mL-1,回收率为99.83%,日内和日间RSD分别为0.85%和1.40%;吴茱萸次碱的回归方程为Y=49.08X 27.10,相关系数为0.9999,线性范围为4.5～900μg·mL,回收率为98.72%,日内和日间RSD分别为0.63%和1.17%.本文所用吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量分别为0.387%和0.309%.结论:方法稳定,重现性好,操作简单,耗费时间短.是检测吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱较理想的方法.     

水杨酸血浆蛋白结合率测定方法的研究

目的:探讨水杨酸血浆蛋白结合率的测定方法。方法:以大鼠血浆、全血和家兔血浆为实验对象,采用平衡透析后用紫外分光光度法测定透析袋外游离水杨酸的浓度,计算血浆蛋白结合率。结果:用袋内加入标准品法时用大鼠血浆测得的水杨酸血浆蛋白结合率为23.2%,用袋外加入标准品法时用大鼠全血、大鼠血浆测得的水杨酸血浆蛋白结合率分别为23.1%、23.2%,用袋外加入标准品法时用家兔血浆为研究对象测得家兔的水杨酸血浆蛋白结合率为44.0%。结论:用大鼠血浆、全血和家兔血浆为研究对象,结果重复性好,可以用大鼠全血代替大鼠血浆,可以将水杨酸标准品加于透析袋外代替加于透析袋内。水杨酸血浆蛋白结合率在大鼠与家兔之间存在种属差异。     

HPLC测定吴茱萸及其制剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

 目的:建立吴茱萸药材及其制剂华佗再造丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量测定方法。方法:反相高效液相色谱法。主要色谱条件包括:吴茱萸药材:流动相为乙腈-水(50∶50),流速1.0ml·min^-1,内标物为醋酸甲羟孕酮;华佗再造丸:流动相为乙腈-水(40∶60),流速1.0ml·min^-1,内标物为联苯;紫外检测波长均为225nm。结果:吴茱萸药材中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的线性浓度范围均为5～50μg·ml^-1;回收率分别为96.6%和96.4%;批内RSD分别为0.8%～1.5%和1.1%～2.3%(n=6);批间RSD分别为2.3%～3.6%和2.5%～3.9%(n=6)。华佗再造丸中二组分的线性浓度范围均为0.5～20μg·ml^-1;回收率分别为97.6%和94.6%。经测定,同种不同产地的4种吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量分别为0.118%和0.092%,0.213%和0.106%,0.581%和0.609%,0.478%和0.459%;华佗再造丸中二组分的含量分别为0.1123mg·g^-1和0.0981mg·g^-1。结论:该方法可用于吴茱萸药材及其制剂的质量控制。     

微透析法测定葛根素的体外血浆蛋白结合率

目的:采用微透析技术测定葛根素的体外血浆蛋白结合率,并与超滤法比较。方法:微透析探针依次浸入含葛根素20、60、200μg/mL的大鼠、人血浆中,灌注器以2.5μL/min的流速依次灌注含葛根素0、10、30、100、300μg/mL的林格氏液,每15分钟收集1次样品,HPLC分析葛根素浓度。以灌注液与透析液中葛根素的浓度差对灌注液浓度进行线性回归,计算血浆中游离葛根素的浓度,进而计算葛根素的血浆蛋白结合率,并与超滤法进行比较。结果:微透析法测定葛根素与大鼠、人血浆蛋白结合率平均值分别为31.14%、29.92%,超滤法分别为28.57%、28.83%,两种方法结果比较接近。结论:葛根素与大鼠、人血浆蛋白有较低的结合率,微透析法和超滤法结果一致。     

洋川芎内酯Ⅰ与血浆蛋白结合率的测定

目的:研究洋川芎内酯Ⅰ与大鼠和人血浆蛋白结合情况。方法:采用平衡透析法测定洋川芎内酯Ⅰ与大鼠和人血浆蛋白结合率,以液相质谱联用法测定透析内外液中洋川芎内酯Ⅰ的浓度,计算其血浆蛋白结合率。结果:血浆中其他成分对测定无干扰,洋川芎内酯Ⅰ在0.05~10μM浓度范围内线性关系均良好,精密度及稳定性结果均符合方法学要求;实验选择紫杉醇为阳性对照,孵育8 h后,紫杉醇与大鼠和人血浆蛋白结合分别为92.3%~94.5%和93.8%~97.2%,与文献报道的范围88%~98%一致。孵育8 h后,洋川芎内酯Ⅰ与大鼠血浆蛋白结合率为83.5%~86.5%;与人血浆蛋白结合率为82.1%~83.9%。结论:该方法操作简便、快速,灵敏度高,能满足生物样品的分析要求。洋川芎内酯Ⅰ与大鼠和人血浆蛋白结合较强(>80%)。     

超滤法测定丹酚酸A的血浆蛋白结合率

目的:建立血浆样品中丹酚酸A浓度的分析方法,并测定丹酚酸A的血浆蛋白结合率,为进一步展开丹酚酸A的代谢和药动学研究及指导临床用药提供参考。方法:采用超滤法和HPLC测定丹酚酸A在牛血清白蛋白(BSA),大鼠血浆,新西兰兔血浆和比格犬血浆中的蛋白结合率。结果:丹酚酸A在0.01～2.5 mg.L-1线性良好,标准曲线方程为Y=0.807 3X+0.013 2(r=0.999 4)。丹酚酸A与BSA,大鼠血浆,新西兰兔血浆和比格犬血浆在5.0,50.0,100.0 mg.L-1的含药血浆中其平均蛋白结合率分别为(99.79±0.02)%,(99.79±0.03)%,(99.73±0.06)%,(99.81±0.03)%。结论:所建立的方法灵敏度高,专属性和重复性好,操作简单,能够满足定量分析测试要求。丹酚酸A与血浆蛋白有很强的结合,且在已考察的血药浓度范围内其血浆蛋白结合率无明显浓度依赖性和种属差异性。     

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??OBJECTIVE To establish an analytical method for determination of mesaconine in rat plasma or dialysate, and study the rat plasma protein binding rate of mesaconine. METHODS The equilibrium dialysis method was applied to determine the in vitro plasma protein binding rate of mesaconine. A UPLC-MS/MS method was established to determine mesaconine in the intra- and extra- dialysis samples and then the plasma protein binding rate was calculated. RESULTS The specificity of the established UPLC-MS/MS method was very good. The calibration curve of mesaconine had good linearity over the range of 0.156 3-10 ??g??mL^-1. The intra-day and inter-day precisions and recovery met the requirements of methodology. The plasma protein binding rates of mesaconine were 18.73%, 20.20%, 26.59%, and 23.68% at the concentrations of 0.2, 0.5, 2.0, and 5.0 ??g??mL^-1, respectively. CONCLUSION The method is simple, accurate and sensitive, and can meet the requirement for analysis method of biological samples. Mesaconine has a low rat plasma protein binding rate.     

白头翁皂苷D与不同血浆蛋白的结合率测定

目的：研究白头翁皂苷D与不同血浆蛋白的结合率。方法：采用HPLC与平衡透析法相结合的方法测定白头翁皂苷D与牛血清、人血浆及大鼠血浆中蛋白的结合率,COSMOSIL 5C₁₈-MS-Ⅱ色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相甲醇-水-甲酸（80：20：0.02）,检测波长203 nm。结果：白头翁皂苷D质量浓度为0.06,0.11,0.25 g·L^-1时与牛血清白蛋白的结合率分别为（78.45±0.89）%,（77.61±1.14）%,（77.16±0.29）%,与人血浆蛋白的结合率分别为（68.91±0.54）%,（67.68±0.87）%,（67.88±0.71）%,与大鼠血浆蛋白的结合率分别为（78.15±0.76）%,（78.61±0.97）%,（78.24±0.93）%。结论：建立的白头翁皂苷D蛋白结合率测定方法简便、稳定、可靠。白头翁皂苷D是一种中等程度的蛋白结合药物,结合率不具有质量浓度依赖性。     

校正超滤法测定木香烃内酯和去氢木香内酯的大鼠血浆蛋白结合率

目的:同时测定木香烃内酯和去氢木香内酯的大鼠血浆蛋白结合率。方法:采用加标血浆样品测定超滤管对药物的非特异吸附系数,对超滤法进行校正,并用已知血浆蛋白结合率的药物紫杉醇验证、校正超滤法的准确性。结果:测得木香烃内酯大鼠血浆蛋白结合率为88.25%~92.14%,去氢木香内酯大鼠血浆蛋白结合率为85.34%~89.37%。结论:木香烃内酯的血浆蛋白结合率略高于去氢木香内酯,该校正超滤法可以广泛应用于药物的血浆蛋白结合率测定。     

RP-HPLC同时测定左金丸中盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

目的:建立同时测定左金丸中盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的液相色谱方法。方法:采用Agilent ODS C18柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈-0.3%磷酸-0.3%三乙胺为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0mL.min-1;柱温为40℃;检测波长为225nm。结果:盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在5.00～500.00(R2=0.9992)、1.13～30.00(R2=0.9999)、1.25～50.00(R2=1)μg.mL-1范围内有良好的线性关系,平均回收率分别为105.04%(RSD=3.04%)、92.98%(RSD=1.23%)、97.90%(RSD=1.44%)。结论:本方法准确、可靠、灵敏度高、重复性好,可用于左金丸制剂的质量控制。     

吴茱萸碱和吴茱萸次碱在家兔体内的药动学研究

 目的建立家兔血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱同时测定的液质联用方法,并用于口服给药后的药动学研究。方法血浆样品经甲醇沉淀除去蛋白,高效液相色谱-电喷雾质谱联用方法测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的血药浓度,并用3P87程序计算两者的药动学参数。结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在0.32～32.0(r=0．999 6)和1.0～40.0 μg·L^-1(r=0.999 2)内呈良好线性关系,平均提取回收率在80%以上。吴茱萸碱和吴茱萸次碱的血药浓度-时间曲线均符合一室模型,曲线下面积(AUC) 分别为(183.2±76.2)和(453.5±191．0)μg·min·L^-1。结论该方法简便、准确、灵敏度高,可用于家兔口服给药后吴茱萸碱和吴茱萸次碱的血药浓度测定及其药动学研究。     

液相色谱-质谱法同时测定吴茱萸水提物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

目的:建立同时测定吴茱萸水提物中吴茱萸碱(Evodiamine,EVO)和吴茱萸次碱(Rutaecarpine,RUT)的LC/MS方法。方法:液相色谱采用Welch Materials Xtimate-C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm),以甲醇-10 mmol/L乙酸铵水溶液(85∶15)为流动相,流速0.2 mL/min,柱温30℃。质谱采用正离子全扫描模式,m/z:0~1000,电喷雾离子化源(ESI)。雾化气为氮气,雾化压力为40 psi;喷雾电压4000 V,源温度为100℃;去溶剂气为氮气,温度350℃,流速为10 L/min。结果:吴茱萸碱在2.02~504 ng/mL(r=0.9992),吴茱萸次碱在1.97~493.33 ng/mL(r=0.9999)线性关系良好,回收率分别为87.8%~97.04%和86.35%~98.22%,日内、日间精密度均10%。结论:该方法简便、可靠、灵敏度高,可用于同时测定吴茱萸水提物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量及药代动力学研究。     

异土木香内酯在不同血浆中蛋白结合率的HPLC测定

目的应用平衡透析法测定异土木香内酯的蛋白结合率。方法采用HPLC法测定异土木香内酯在大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白(BSA)中的总浓度及游离药物浓度,并分别计算蛋白结合率。结果结果表明体外异土木香内酯与大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白(BSA)的蛋白结合率均较高。结论异土木香内酯与血浆蛋白具有较强的结合,临床上与其它药物配伍应用时需注意交互影响。     

超滤法测定表没食子儿茶素没食子酸酯人血浆蛋白结合率

 目的测定表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)的人血浆蛋白结合率。方法采用超滤法对EGCG的血浆蛋白结合率进行测定。结果当质量浓度为5.0,10.0,20.0 mg·L^-1时,EGCG平均血浆蛋白结合率分别为86.1%,91.4%,94.9%。结论EGCG与人血浆蛋白具有较强的结合。