经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠大脑皮层雌激素受体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(Premenstrual Syndrome,PMS)肝气郁证大鼠大脑皮层雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达水平的影响。方法:束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验对模型评价,RT-PCR和Western blot方法分别检测大鼠大脑皮层ERα、ERβ的mRNA及蛋白的表达。结果:经前舒颗粒给药后大鼠旷场实验得分显著升高,大脑皮层中ERα、ERβ的mRNA和蛋白表达均显著降低。结论:大鼠大脑皮层中ER是经前舒颗粒的作用靶点之一,经前舒颗粒可能通过降低大脑皮层中ERα、ERβ的表达而发挥疗效。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠下丘脑和海马雌激素受体α,β mRNA表达的影响

目的:研究中药复方经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑和海马中雌激素受体α(ERα)和β(ERβ)mRNA表达的影响.方法:以情志刺激多因素法复制PMS肝气郁证大鼠模型,使用中药复方经前舒颗粒进行干预治疗,采用RT-PCR法检测大鼠下丘脑和海马中ERα和ERβ mRNA表达变化.结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠下丘脑和海马中ERα和ERβmRNA表达量高于正常组(P＜0.05);与模型组大鼠相比,经前舒颗粒给药组大鼠下丘脑和海马中ERα和ERβ mRNA表达量则显著降低(P＜0.05),与正常组无差异.结论:经前舒颗粒可下调下丘脑和海马中ERα和ERβmRNA表达水平,这可能是其治疗PMS肝气郁证的作用机制之一.     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证大鼠下丘脑ERα,ERβ分布与表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑不同核团雌激素受体(ER)α,ERβ蛋白分布及表达的影响,研究经前舒颗粒治疗该病症的中枢作用机制.方法:将30只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型给药组,每组10只.采用慢性束缚应激造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型.造模同时,模型给药组按10 g·kg-1剂量ig给药.造模结束后,通过免疫组织化学技术ABC法检测各组大鼠雌激素受体α,β在下丘脑中的定位分布并分析其积分吸光度(IA);HPLC检测各组大鼠下丘脑中5-羟色按(5-HT)含量.结果:3组大鼠雌激素受体ERα,ERβ主要分布在下丘脑的腹内侧区(VMH)核团,分布区域无差异.模型组VMH区ERα,ERβIA分别为163605±27284和147318±24924与正常组IA(130156±32579,105430±28641)相比显著升高(P ＜0.05,P＜0.01);给药组ERα,ERβIA为122020±21 287和77482±31112,与模型组相比显著降低(P＜0.01,P＜0.01).模型组大鼠下丘脑5-HT含量(454.51 ±65.18)μg·L-1与正常组(144.47±42.20) μg· L-1相比显著升高(P＜0.01),给药组(234.11±14.38)μg·L-1与模型组相比5-HT含量显著下降(P＜0.01).结论:下丘脑VMH区ERα,ERβ蛋白表达升高可能是PMS肝气郁证发病的中枢机制之一.经前舒颗粒可有效改善这种状态,提示下丘脑ERα,ERβ可能是该药治疗PMS肝气郁证的部分作用靶点.     

经前期综合征肝气郁证大鼠海马雌激素受体α和β研究

目的研究经前期综合征（premenstrual syndrome,PMS）肝气郁证大鼠海马雌激素受体（estrogenreceptor,ER）α和β分布模式、蛋白表达和功能活性的改变情况以及调肝方药经前舒颗粒的相应作用靶点,为深入探索PMS肝气郁证病机和经前舒颗粒的作用机制提供线索。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组和给药组,每组7只。模型组和给药组采用居住入侵法进行造模。给药组大鼠造模同时给予经前舒颗粒10 mL/kg灌胃;模型组和正常组大鼠给予同等体积灭菌水灌胃,均每天1次,连续5天。运用免疫组织化学法、Western blot和葡聚糖-活性炭单点测定法分别检测各组大鼠海马中ERα和ERβ定位、蛋白水平及与雌激素的结合活性。结果各组大鼠海马中ERα和ERβ分布无明显差异;海马整体及CA1、CA3区内ERα和ERβ蛋白水平以及与雌激素结合活性方面,模型组较正常组均明显升高（P〈0.05）,给药组较模型组则明显下降（P〈0.05）。结论海马高雌激素水平及ERα、ERβ表达和活性增强可能是PMS肝气郁证的重要病机和经前舒颗粒的作用靶点。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠海马和下丘脑5-HT1A受体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠海马下丘脑5-羟色胺1A受体( serotonin receptor-1A,5-HT1AR)表达水平的影响.方法:束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验评价模型,RTPCR和Western blot方法分别检测大鼠海马和下丘脑5-HT1AR的mRNA及蛋白的表达.结果:经前舒颗粒给药后大鼠旷场实验得分显著升高,海马、下丘脑5-HT1AR mRNA和蛋白表达均显著升高.结论:经前舒颗粒可上调海马和下丘脑中5-HT1AR的表达,这可能是其治疗PMS肝气郁证的作用机制之一.     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证 大鼠海马和下丘脑5-羟色胺转运体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠海马、下丘脑5-羟色胺转运体(5-HTT)表达的影响,从分子水平探讨经前舒颗粒的作用机制。方法:雌性SD大鼠随机分为正常对照组、肝郁模型组、经前舒颗粒给药组(10 g.kg-1)和氟西汀给药组(0.002 5 g.kg-1),束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,给药组大鼠ig给药5 d后,旷场实验、糖水偏好实验对模型进行评价,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术分别检测大鼠海马和下丘脑5-HTT的mRNA及蛋白的表达。结果:与肝郁模型组相比经前舒和氟西汀给药组大鼠糖水偏好指数及旷场实验得分均显著升高(P<0.05,P<0.01);经前舒和氟西汀给药均能显著上调海马和下丘脑中5-HTT的mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),两给药组间无显著性差异。结论:经前舒颗粒的作用机制可能是通过调节海马、下丘脑中5-HTT的表达而发挥作用。     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB表达水平的影响

目的 通过研究PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB基因的表达,探讨PMS肝气郁证的微观发病机制及中药经前舒颗粒的作用靶点.方法 束缚法制备PMS肝气郁证模型大鼠,用经前舒颗粒干预治疗,运用半定量RT-PCR和Western Blotting方法检测正常组、模型组、给药组大鼠下丘脑区MAOA、MAOB mRNA及其蛋白表达水平;通过单因素方差分析及LSD法统计数据.结果 与正常组相比,PMS肝气郁证模型组大鼠MAOA mRNA在下丘脑表达显著升高(P<0.05),蛋白表达极显著升高(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与模型组相比,MAOA mRNA在下丘脑表达降低(P<0.05),蛋白表达显著降低(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与正常组相比,MAOA、MAOB mRNA及蛋白在大鼠下丘脑中表达均无统计学差异(P>0.05).结论 模型组大鼠与正常组大鼠相比,下丘脑MAOA基因表达升高,通过经前舒颗粒干预后,恢复正常.说明MAOA基因与PMS肝气郁证相关,并且可能是经前舒颗粒治疗该证的作用机制之一.     

经前舒颗粒对PMS肝气郁证模型大鼠海马中雌激素受体蛋白表达及活性的影响

目的 探讨经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证模型大鼠海马雌激素受体(ER)蛋白表达及与配体结合活性的影响。方法 以情志刺激为主多因素造模法复制经前期综合征肝气郁证大鼠模型,使用中药复方经前舒颗粒进行干预治疗,采用免疫组织化学实验和放射性受体配体结合实验,分别检测了正常对照组、PMS肝气郁证组、经前舒干预组大鼠海马中的ER半定量表达水平和与E2的结合活性。结果 与正常组相比,模型组大鼠海马CA1、CA3区ER蛋白表达水平显著升高(P＜0.01,P＜0.05),ER与配体的结合活性也显著增强(P＜0.05,P＜0.05);给药组的差异无统计学意义。结论 大鼠海马中的雌激素受体表达量及与配体结合活性异常升高是经前期综合征肝气郁证的病机之一,也是调肝方药经前舒颗粒的可能作用靶点。     

经前平颗粒对经前期综合征肝气逆证大鼠下丘脑和海马μ阿片受体表达的影响

目的探讨经前期综合征(PMS)肝气逆证的发病机制及经前平颗粒的干预机制。方法将30只处于非接受期的SD大鼠随机分为正常组、模型组、给药组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用数字脉冲电刺激噪音干扰仪刺激5天,制备PMS肝气逆证模型。同时,正常组和模型组灌胃生理盐水1ml/100g体重,给药组予经前平颗粒(0.16g/100g体重)。每天1次,连续5天。检测各组大鼠下丘脑和海马μ阿片受体mRNA和蛋白表达。结果 PMS肝气逆证大鼠下丘脑和海马μ阿片受体mRNA和蛋白表达均显著升高,经前平颗粒可使恢复至近似正常水平。结论下丘脑和海马μ阿片受体表达升高是经前期综合征的发病机制之一,经前平颗粒可通过抑制该受体表达而发挥疗效。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型大鼠下丘脑类固醇激素受体表达的影响

目的 观察白香丹胶囊对模型大鼠下丘脑类固醇激素受体表达的影响,探讨该药治疗经前期综合征（PMS）肝气逆证的中枢作用靶点.方法 以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆证大鼠模型,经中药白香丹胶囊干预,采用免疫荧光标记结合激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测下丘脑中主要的类固醇激素受体（雌激素受体α、孕酮受体）的蛋白水平表达量及定位分布模式.结果 白香丹胶囊能够显著上调PMS肝气逆证模型大鼠下丘脑中类固醇激素受体（雌激素受体α、孕酮受体）的蛋白表达水平.结论 下丘脑中雌激素受体α、孕酮受体是白香丹胶囊的两个重要作用靶位,该药可能通过上调上述两种受体的蛋白表达水平发挥其疗效.     

经前期综合征肝气逆证模型大鼠脑雌激素α受体蛋白水平的表达

目的研究经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠不同脑区雌激素α受体蛋白水平的表达差异,探讨PMS肝气逆证的发病机制。方法以电刺激法复制PMS肝气逆证大鼠模型,采用免疫荧光标记结合激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体的蛋白表达量及定位分布模式。结果模型组大鼠下丘脑和顶区皮质中雌激素α受体蛋白表达水平与正常组相比有明显降低(P0.01),经前平颗粒干预后大鼠下丘脑和顶区皮质中该受体表达水平较模型组明显升高(P0.01,P0.05)。结论 PMS肝气逆证模型大鼠会出现下丘脑和顶区皮质雌激素α受体蛋白表达下调,经前平颗粒干预后可改变异常下调状态。     

经前期综合征肝气郁证猕猴模型评价指标

目的:探索经前期综合征(PMS)肝气郁证猕猴模型评价指标.方法:拟定复制肝气郁证猕猴模型的造模方法进行试验.模型评价指标采用表情行为定性与血清单胺类神经递质水平毛细管电泳检测.结果:模型具有稳定性和重现性,受试猕猴月经前呈现近似该病证的临床表现,血清中单胺类神经递质含量发生变化.结论:借助<雌性实验猕猴情绪评价量表>,确立PMS肝气郁证猕猴模型宏观、微观评价指标.     

经前期综合征肝气逆证大鼠造模及用药后行为学观测与分析

目的:探讨居住入侵法制备经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠模型适用性。方法:采用居住-入侵法造模,记录并分析大鼠行为变化,经前平颗粒与白香丹胶囊药物干预反证模型可靠性。结果:造模组大鼠混合攻击行为得分为37.22±9.80,得分显著高于正常组;用药组大鼠行为学混合攻击行为得分分别为16.75±7.77和15.17±4.24,行为学指标在用药后均得到明显纠正;旷场实验中的水平得分、垂直得分及总分,造模组与正常组和用药组均有显著性差异(P<0.01)。结论:该模型是理想的PMS肝气逆证大鼠模型,经前平颗粒与白香丹胶囊对PMS肝气逆证均有较好的治疗效果。     

“肝郁气滞”及“肝郁脾虚”型抑郁症动物模型建立初探

目的:建立中医"肝郁气滞"型抑郁症、"肝郁脾虚"型抑郁症动物模型。方法采用慢性不可预见性应激加孤养法、束缚法、束缚加喂食食醋法建立传统抑郁症、"肝郁气滞"型抑郁症、"肝郁脾虚"型抑郁症动物模型,并考察了小鼠一般状况、体重变化、强迫游泳实验、开阔场实验以及自主活动等行为学指标的变化。结果造模组、气滞组和脾虚组较空白组小鼠均出现出现懈怠懒动、皮毛粗糙等现象。第35 d空白组同其他3组、模型组同气滞组、脾虚组体重变化均有极显著性差异(P<0.01);强迫游泳实验表明,空白组、模型组同其他各组均有极显著性差异(P<0.01);开阔场实验表明,空白组同其他各组的爬行格数有极显著性差异(P<0.01)。空白组同脾虚组的中央格停留时间有极显著性差异(P<0.01)。同时,空白组同气滞组、模型组同脾虚组均有显著性差异(P<0.05)。自主活动实验表明,空白组同模型组、气滞组,模型组同脾虚组的自主活动次数有极显著性差异(P<0.01)。结论本研究成功建立传统抑郁症、"肝郁气滞"型抑郁症、"肝郁脾虚"型抑郁症动物模型。四项行为学指标显示,中医不同证候抑郁症动物模型与传统抑郁症动物模型相比有显著性差异,为进一步建立科学的中医证候抑郁症模型提供参考依据。     

肝郁证模型大鼠血清蛋白质组的差异表达研究

目的:通过分析肝郁证模型大鼠血清蛋白质组的差异表达,从蛋白质组学角度探讨肝郁证的实质。方法:以束缚制动法制备肝郁证大鼠模型,二维凝胶电泳(2-DE)分离大鼠血清蛋白质,获得差异表达蛋白质;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库分析鉴定差异表达蛋白质。结果:发现9个具有明显表达差异的蛋白质斑点,经鉴定可以确定的6个蛋白质分别为:转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)、水解酶Ba1-647、血清白蛋白前体、抗乙酰胆碱受体抗体Fab片段、Ig-λ2链C区和β1球蛋白。结论:筛选出的差异表达蛋白质主要涉及免疫、神经内分泌和营养物质代谢方面,和现有研究结果相符,证实从蛋白质组学的角度研究证实质是可行的。     

柔肝法治疗肝气郁结证溃疡性结肠炎的研究

本研究以柔肝为治疗组，健脾为对照组，对肝气郁结在溃疡性结肠炎发病学中的内在联系进行了临床及实验研究。结果：治疗组总有效率为９６５，对照组总有效率为８４．４％，两线比较有显著性差异；Ｅ玫瑰花形成率、淋巴细胞转化率两组较治疗前均有显著增高，对调节植物神经功能的失调率治疗组明显优于对照组（Ｐ＜０．０１）。     

逍遥散对非酒精性脂肪性肝炎肝郁脾虚证大鼠TLR-4/TRIF信号转导通路的影响

目的:观察逍遥散对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝郁脾虚证大鼠肝细胞Toll样受体-4(TLR-4)/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号转导通路活性的影响。方法:选取32只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、逍遥散治疗组和甘氨酸治疗组(n=8)。除正常组大鼠给与基础饲料常规饲养外,其余实验组均按"高糖高脂饲料+饥饱失常+慢性束缚应激"法饲养14周以建立NASH肝郁脾虚证大鼠模型,并分别给与生理盐水2 mL·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,1 g·mL~(~(-1))逍遥散溶液按3.24 mL·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃,2.5 g·mL~(~(-1))甘氨酸溶液按2 mL·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃,给药4周后处死。大鼠处死前均计算其肝郁脾虚证证侯积分和检测尿D-木糖排泄率,无菌低温条件下提取肝脏及脑组织。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠脑组织内去甲肾上腺素(NE),5羟色胺(5-HT)的含量,苏木素-伊红(HE)染色检测肝细胞脂肪变性及炎细胞浸润程度,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测大鼠肝组织TLR-4,TRIF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型大鼠肝郁脾虚证证侯积分明显升高,而尿D-木糖排泄率和脑组织内5-HT,NE含量明显降低,肝组织HE染色可见肝细胞胞质内出现大量脂肪空泡及肝小叶内可见散在的点状坏死和炎细胞浸润,TLR-4和TRIF mRNA表达以及TLR-4和TRIF蛋白表达量明显升高(P0.05);与模型组比较,逍遥散治疗组和甘氨酸治疗组明显降低大鼠肝郁脾虚证证侯积分,明显升高尿D-木糖排泄率和脑组织内5-HT,NE的含量,明显减轻肝细胞脂肪变性程度及炎细胞浸润程度,明显降低TLR-4和TRIF mRNA表达以及TLR-4和TRIF蛋白表达量(P0.05)。结论:逍遥散可通过调节TLR-4/TRIF信号转导通路的活性以发挥"疏肝健脾"之功效,从而参与NASH肝郁脾虚证的治疗。