浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3生长抑制的研究

目的：探讨脂肪酸合成酶（FAS）的抑制剂浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3的生长抑制作用。方法：采用人前列腺癌细胞株PC-3在体外实验中用MTT法观察浅蓝菌素对细胞株的生长抑制作用;流式细胞术（FCM）对细胞株的凋亡及细胞周期的变化进行检测;蛋白免疫印迹（W estern b lotting）法检测浅蓝菌素对PC-3细胞中FAS蛋白水平表达的影响。结果：PC-3细胞在浅蓝菌素的作用下,细胞增殖被明显阻遏,并呈现剂量效应关系,在浓度为2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的浅蓝菌素作用下,PC-3细胞24h的抑制率分别为（34.78±2.47）%、（46.76±3.18）%、（58.13±3.55）%、（65.31±2.81）%,与对照组比较有统计学意义（P〈0.05）。流式细胞仪显示,细胞经浅蓝菌素作用后,细胞凋亡增多,PC-3细胞在浅蓝菌素浓度5.0mg/L三个时间组（24h,48h,72h）的细胞凋亡率分别为（28.29±1.88）%、（44.73±2.69）%、（61.25±1.43）%;且G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例减少。蛋白免疫印迹实验中,随着浅蓝菌素作用时间的延长,PC-3细胞中的FAS蛋白水平表达量明显减少,药物作用时间与细胞中蛋白水平表达量呈负相关。结论：浅蓝菌素能抑制PC-3细胞生长,且其呈现时间和浓度依赖性。     

TRAIL抑制人前列腺癌细胞PC-3M体外生长的实验研究

 目的　观察TRAIL对前列腺癌细胞PC 3M的生长抑制作用。方法　采用MTT法检测不同浓度TRAIL对人非激素依赖性前列腺癌细胞株PC 3M的生长抑制率 ,原位末端酶标记技术检测细胞凋亡。免疫组化法观察bcl 2的表达。结果　TRAIL可有效地抑制PC 3M细胞生长 ,具有时间、浓度依赖性特点。经药物作用后 ,前列腺癌细胞凋亡明显增多 ,凋亡率随作用时间的延长而增高 ,PC 3M细胞中的bcl 2基因表达无显著变化。结论　TRAIL蛋白可显著抑制前列腺癌细胞PC 3M生长 ,其诱导细胞凋亡不依赖bcl 2基因表达     

新型棉酚衍生物ApoG2对人前列腺癌PC-3移植瘤生长的抑制

目的:探讨棉酚衍生物ApoG2对前列腺癌的抑制作用,并了解其作用机理.方法:建立人前列腺癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,在ApoG2作用下观察其对皮下移植瘤生长的抑制作用,通过免疫组化方法检测肿瘤组织中bcl-2、PCNA及caspase-3、-8的表达.结果: ApoG2可明显抑制前列腺癌皮下移植瘤生长速度,肿瘤体积明显减小,ApoG2能增加肿瘤组织中caspase-3、8的表达,减少PCNA表达.结论: ApoG2对人前列腺癌有显著的生长抑制作用.     

新型棉酚衍生物ApoG2对人前列腺癌PC-3移植瘤生长的抑制

目的：探讨棉酚衍生物ApoG2对前列腺癌的抑制作用,并了解其作用机理。方法：建立人前列腺癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,在ApoG2作用下观察其对皮下移植瘤生长的抑制作用,通过免疫组化方法检测肿瘤组织中bcl-2、PCNA及caspase-3、-8的表达。结果：ApoG2可明显抑制前列腺癌皮下移植瘤生长速度,肿瘤体积明显减小,ApoG2能增加肿瘤组织中caspase-3、8的表达,减少PCNA表达。结论：ApoG2对人前列腺癌有显著的生长抑制作用。     

新生霉素诱导前列腺癌PC-3细胞自噬的研究

目的:通过体外细胞实验,观察新生霉素是否抑制了前列腺癌PC-3细胞的增殖,并在分子水平和形态学上证实新生霉素通过细胞自噬抑制了前列腺癌PC-3细胞的增殖.为新生霉素应用于去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)的临床治疗提供理论和实验依据.方法:设置对照组和不同浓度的新生霉素实验组,作用前列腺癌PC-3细胞24小时后,利用MTT法测定对照组和不同浓度实验组的增殖率,并计算出新生霉素的半抑制率.透射电镜观察对照组及实验组细胞内的自噬体.利用免疫荧光技术,在荧光显微镜下观察对照组和不同浓度实验组发生细胞自噬时的自噬标志性蛋白LC-3Ⅱ和自噬底物蛋白p62的不同.利用RT-PCR在mRNA水平上检测对照组和不同浓度实验组的自噬相关基因LC-3Ⅱ、Beclin-1的表达.结果:MTT结果示新生霉素能使PC-3细胞的增殖明显受到抑制(F=569.26,P=0.000),其抑制率随着药物浓度的增加而增加,根据公式计算出其IC50=1.52mmol/L.透射电镜观察可见实验组PC-3细胞质内自噬体和自噬溶酶体数量较对照组多,且随着浓度的增加自噬体数量增加.自噬体在细胞中的分布通过绿色荧光FITC标记的自噬特异性蛋白LC-3Ⅱ在荧光显微镜下清晰显示,在细胞膜附近有绿色荧光呈散点状分布,随着实验组新生霉素浓度的增加荧光强度增加.而绿色荧光FITC标记的自噬底物蛋白p62在荧光显微镜下的强度随着药物浓度的增加而降低.RT-PCR在mRNA水平上检测到随着药物浓度的增加自噬相关基因LC-3Ⅱ、Beclin-1的表达量升高.结论:在体外细胞实验中,新生霉素能够在一定浓度范围内呈浓度依赖性的抑制PC-3细胞增殖.新生霉素能在mRNA水平上增强Beclin-1、LC-3Ⅱ的表达.新生霉素可能是通过诱导细胞自噬性死亡来抑制前列癌PC-3细胞的增殖.     

前列腺癌PC-3多西紫杉醇耐药细胞株的蛋白组学分析

  目的  比较前列腺癌PC-3细胞株对多西紫杉醇(docetaxel)耐药前后的蛋白质差异性表达, 了解前列腺癌PC-3细胞株耐药性产生机制。  方法  利用逐渐加量的方式培养前列腺癌PC-3多西紫杉醇耐药细胞株, 利用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)定量筛选PC-3细胞敏感株与耐药株的差异蛋白, 并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF/TOF-MS)对差异位点蛋白进行成分鉴定。  结果  利用DIGE结合MALDI-TOF/TOF-MS质谱技术分析, PC-3细胞耐药株较敏感株成功分离出49种差异表达蛋白质, 29种表达上调, 20种表达下调。其中ATP synthase、Galectin-1等参与肿瘤血管的生成, Calreticulin、CathepsinD、Coflin-1蛋白参与肿瘤的转移; 78 kDa glucose-regulated protein(GRP78)、Microtubule-associated protein-6等参与肿瘤的耐药性调节。  结论  人前列腺癌PC-3细胞株多西紫杉醇耐药前后存在蛋白质的差异性表达, 为进一步发现前列腺癌转移及耐药性的分子机制以及晚期激素非依赖性前列腺癌的靶向药物治疗提供实验依据。      

左旋棉酚对裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤的生长抑制作用

目的:探讨左旋棉酚对裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤的生长抑制作用及其机制.方法:建立裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤模型,将移植瘤裸鼠80只随机分成4组,每组20只,分别为10.0mg/kg、5.0mg/kg、2.5ng/kg左旋棉酚治疗组和对照组,进行疗效分析与组织病理形态学观察,同时检测肿瘤组织内PCNA、bcl-2、caspase-3和caspase-8的表达.结果:左旋棉酚可使人前列腺癌PC-3细胞荷瘤裸鼠存活率提高,肿瘤体积缩小,肿瘤组织坏死明显,PCNA与bcl-2表达减少,caspase-3和caspase-8表达增加,但高剂量左旋棉酚对PC-3荷瘤裸鼠肝脏和肠道有一定毒性.结论:当治疗剂量大于5.0mg/kg时,左旋棉酚可通过增殖抑制和诱导凋亡,明显抑制裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤的生长.     

硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响

目的：研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC-3生长和增殖的影响。方法：用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3进行药物处理，然后用MTT法测定细胞的活力，用^3H-TdR掺入法测定细胞的增殖情况。结果：24小时作用时，硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组，高剂量组A值与对照组有极显著差异。48小时作用时，硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组，中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异；48小时的硒酸钠处理抑制PC-3细胞的增殖，中剂量组与对照组相比有显著差异，高剂量组与对照组有极显著差异。结论：硒酸钠可抑制PC-3细胞的活力，抑制细胞增殖，并且这两种作用都呈剂量依赖效应。     

重组分泌型人PSP94对前列腺癌细胞株PC-3抑制作用的研究

目的：探讨重组分泌型人PSP94（rsHPSP94）对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3生长的作用和作用机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测rsHPSP94对PC－3的抑制率。流式细胞仪检测细胞周期分布的变化。结果：rsHPSP94以剂量和时间依赖性抑制PC－3的增殖，流式细胞仪分析表明细胞增殖阻滞在G1期，并出现凋亡。结论：本实验结果表明rsHPSP94通过使细胞阻滞在G1期抑制PC－3细胞的增殖。     

依维莫司对前列腺癌PC-3细胞的抑制和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨依维莫司对前列腺癌PC-3细胞凋亡及caspase-3表达的影响。［方法］ 体外培养前列腺癌细胞PC-3,使用不同浓度依维莫司(0mol/L、10-9mol/L和10-8mol/L)干预细胞,四氮唑蓝比色法(MTT)和原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测依维莫司对前列腺癌细胞PC-3生长抑制和诱导细胞凋亡的作用,流式细胞术检测其对caspase-3活化的情况。［结果］ 与对照组比较,依维莫司对前列腺癌PC-3细胞抑制和诱导凋亡作用明显(P<0.05),明显增加caspase-3的表达(P<0.05)。［结论］ 依维莫司抑制前列腺癌细胞PC-3增殖,可能通过诱导caspase-3表达活化增强,最终导致细胞凋亡。     

雷帕霉素对人前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制

背景与目的：哺乳动物细胞中雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号途径调节细胞生长、增殖、存活和凋亡。本实验是研究雷帕霉素对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制。方法：培养前列腺癌PC-3细胞,采用MTT法检测雷帕霉素1nmol／L作用24h、36h、48h、72h后PC-3细胞增殖的改变,流式细胞术检测作用不同时间细胞周期的改变,Western blot检测雷帕霉素作用PC-3细胞24h、36h、48h、72h后raptor、rietor、Akt、pS6k1-T389、pAkt-s473的表达情况。结果：MTT结果显示雷帕霉素在作用24h时,促进了PC-3细胞增殖,但在36h显著抑制PC-3细胞增殖（P〈0．01）,72h时抑制作用更明显。FCM结果显示雷帕霉素作用24h时S期细胞有所增加,但作用36、48、72h后PC-3细胞的G1期细胞逐渐增加,使PC-3细胞周期主要阻滞在G。期。Western blot检测结果显示雷帕霉素作用24h时显著抑制raptor和pS6k1-T389的表达（P〈0．01）;rictor、Akt表达并没有显著变化;pAkt-s473表达在雷帕霉素作用24h时反而显著增加（P〈0．01）,但在36h后即被显著抑制,72h几乎完全被抑制（P〈0．01）。结论：延长雷帕霉素作用时间可抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与雷帕霉素阻滞细胞周期、抑制Akt磷酸化有关。     

The Biological Effect of Hepsin on the Proliferation and Invasion of PC-3 Prostate Cancer Cells

OBJECTIVE Recent studies have shown that hepsin, a type of transmembrane serine protease, is highly upregulated in prostate cancer, but, little is known about its role in progression and invasion of this cancer. We constructed a hepsin-expressing plasmid and transfected it into PC-3 cells to investigate the effect of the hepsin gene on the biological behavior of the PC-3 cells. METHODS Plasmid pHepsin-IRES2 was transfected into prostate cancer PC-3 cells using Fugene6, and the cells with stable hepsin expression were screened and selected with Zeocin (600 mg/L). The hepsin mRNA level was measured by real-time PCR and the growth curve of the PC-3-transfected cells assessed using MTT and BrdU assays. A Boyden chamber was used to examine the difference in invasion and metastases between transfected and non-transfected cells. RESULTS The hepsin mRNA level in pHepsin-IRES2 transfected -PC-3 cells was significantly higher than that found in the control PC -3 cells. While the growth curve of the hepsin gene transfected PC -3 cells showed that there was no significant effect on proliferation, the invasive ability of the pHepsin-IRES2 transfected PC-3 cells, as compared with control cells, was significantly increased (P<0.05). CONCLUSION The results suggest that even though hepsin has no effect on the proliferation of prostate cancer PC-3 cells, it does promote cellular invasion and metastasis.Therefore hepsin may have a role in the development of prostate cancer.     

Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究

背景与目的：腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因（Ad-ING4）对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法：将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响：流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC．3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果：腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase．3基因表达和下调bcI-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37％,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论：腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。     

PSCA表达及其单抗对PC-3M细胞生长与凋亡影响的观察

目的：观察前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen,PscA）在人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的表达状况以及PSCA特异性单克隆抗体（PSCA—mAb）对PC-3M细胞生长和凋亡的影响。方法：采用细胞免疫化学方法检测PSCA在PC-3M的表达;以O～1．0／tg／mL浓度的PSCA—mAb作用PC-3M细胞0～96h,采用细胞生长曲线、四甲基噻唑氮蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析P＆3M细胞生长及凋亡的变化。结果：PSCA在PC-3M细胞膜和细胞质呈阳性表达;0．1／μg／mLPSCA—mAb作用时的细胞生长抑制率为（11．3±2．2）％,0．2／μg／mL为（27．5±3．4）％,0．4／μg／mL为（39．4±5．8）％,0．6μg／mL为（47．7±7．4）％,0．8μg／mL为（69．3±8．2）％,l.0〉g／mL为（70．8±9．3）％,细胞凋亡率为0．1／μg／mL为（8．7±1．4）％,0．2μg／mL为（12．3±2．8）％,0．4μg／mL为（21．6±3．2）％,0．6〉g／mL为（33．6±4．9）％,0．8g／mL为（41．4土5．8）％,1．0μg／mL为（42．3土6．1）％,均显著高于相应对照组细胞生长抑制率和凋亡率,P均〈0．01;PSCA-mAb作用PC-3M细胞24h的生长抑制率为（47．8士6．4）％,48h为（59．4±7．3）％,72h为（70．3±7．9）％,96h为（71．1±9．0）％,细胞凋亡率24h为（33．6±4．3）％,48h为（36．3±5．1）％,72h为（42．7±5．7）％,96h为（43．4±6．3）％,均高于相应的对照组细胞生长抑制率和凋亡率,P均〈O．01。MTT及FCM分析结果表明,PSCA-mAb在0．6μg／mL作用72h时,细胞生长抑审l率为（71．5±6．2）％,凋亡率为（44．4±5．5）％,均达到最大。结论：PSCA在人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞呈阳性表达;PSCA-mAb能够时间一剂量依赖性地抑制PC一3M生长和诱导其凋亡。     

青蒿琥酯诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对人前列腺癌PC-3细胞株抑制作用及机制。方法:进行前列腺癌PC-3细胞培养,不同浓度Art干预,采用MTT法检测用药后细胞增殖率的改变,流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变和凋亡比。结果:与对照组比较,Art可显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.01);PC-3细胞主要被阻滞在G0/G1期,FCM检测PC-3细胞凋亡比,各实验组均明显高于对照组(P<0.01),且呈时间、剂量依赖性。结论:Art可抑制PC-3细胞增殖,其作用机制可能与调控细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

左旋棉酚体外诱导人前列腺PC-3细胞凋亡的研究

目的:研究左旋棉酚对人前列腺癌PC-3细胞体外增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测左旋棉酚对PC-3细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变,TUNEL染色观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期的改变,半定量RT-PCR检测Bcl-2及Bak mRNA的表达水平。结果:左旋棉酚能显著抑制PC-3细胞的体外增殖,并呈浓度-时间依赖性。左旋棉酚可以诱导PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变和G0/G1期阻滞,RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达水平降低,Bak mRNA表达水平升高。结论:左旋棉酚能诱导前列腺癌细胞的体外凋亡,主要可能与Bak mRNA的表达升高及Bcl-2 mRNA的表达下调有关。     

应用RNA干扰技术阻断PC-3细胞中SRC-1基因表达的意义

目的：探讨RNA干扰技术沉默SRC-1基因后对PC-3细胞生长及侵袭性的影响.方法：将设计好的siRNA,用脂质体法转染PC-3细胞,通过Q-PCR、蛋白免疫印迹检测SRC-1的表达变化,并用CCK-8法检测细胞生长情况,用transwell小室检测PC-3细胞侵袭力.结果：转染SRC-1siRNA24小时后的前列腺癌PC-3细胞系中SRC-1mRNA的相对表达量下降约42%,48小时后下降约79%,差异具有统计学意义（P＆lt;0.05）;转染24小时、48小时后PC-3细胞SRC-1蛋白的表达量（24h 0.5536±0.071、48h 0.3419±0.025）与阴性对照组（24h 0.8562±0.092、48h 0.8791±0.076）、转染试剂组（24h 0.7992±0.072、48h 0.9731±0.051）和空白对照组（24h 0.8375±0.054、48h 0.8826±0.043）相比明显减少（P＆lt;0.05）.在转染24小时、48小时、72小时、96小时后PC-3细胞生长情况（吸光度A值：24h 0.324±0.0252、48h 0.689±0.0141、72h 1.0032±0.0166、96h 1.4650±0.0327）与阴性对照组（24h 0.3216±0.0152、48h 0.7014±0.017、72h 0.9902±0.0272、96h 1.4596±0.0141）、转染试剂组（24h 0.3222±0.0343、48h 0.6904±0.0301、72h 0.993±0.0383、96h 1.4574±0.0464）和空白对照组（24h 0.3316±0.0192、48h 0.7092±0.0265、72h 1.0136±0.0130、96h 1.4596±0.0128）比较没有明显变化（P＆gt;0.05）,但是PC-3细胞的侵袭能力明显下降,干扰实验组的细胞（38±9.01）与阴性对照组（83.33±10.78）、转染试剂组（83.67±10.016）及空白对照组（84.67±11.24）相比较,穿过小室膜的细胞数量明显减少（P＆lt;0.05）.结论：siRNA有效地阻断了PC-3细胞中SRC-1基因的表达,SRC-1基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调（P＆lt;0.01）,并使转染后的PC-3细胞的侵袭能力下降,但转染后PC-3细胞生长无明显变化.