层黏连蛋白受体参与缺氧诱导胃癌多药耐药的机制研究

目的：研究缺氧对胃癌细胞对于化疗药物敏感性的影响以及层黏连蛋白受体在缺氧诱导的胃癌MDR中的作用和分子机制。方法：MTT比色法、Annexin V/PI染色法和阿霉素的蓄积和潴留实验检测胃癌细胞在缺氧和常氧状态下对化疗药物敏感性的差异;Western blot和半定量RT-PCR检测缺氧条件下胃癌细胞中67Kda层黏连蛋白受体（67Kda laminin receptor,67LR）的表达;Western blot、半定量RT-PCR方法检测缺氧条件下胃癌细胞系SGC7901中67LR的表达和活性;利用siRNA干涉67LR的表达,MTT比色法、AnnexinV/PI染色法检测缺氧条件下调下胃癌细胞系67LR的表达对化疗药物敏感性的影响。结果：缺氧能够显著降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性,以及化疗药物诱导的凋亡和药物在细胞内的潴留和蓄积;缺氧能够显著上调67LR的表达和转录活性;67LR siRNA能够抑制LR的表达;抑制67LR的表达能够显著逆转缺氧诱导的胃癌的MDR表型。结论：缺氧能够增加胃癌细胞对于化疗药物的抵抗,通过上调67LR表达,加剧了缺氧诱导的胃癌多药耐药表型,抑制67LR的表达能够逆转缺氧诱导的胃癌多药耐药的发生。     

KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药中的作用

目的:探讨KLF8（Kruppel-like factor 8）在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。方法:利用Western blot和实时定量PCR的方法检测三株胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901在常氧及缺氧条件下KLF8的表达水平。Western blot和实时定量PCR检测胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR、SGC7901/ADR和亲本细胞系SGC7901中KLF8的表达水平。构建KLF8正义表达载体及KLF8小干扰RNA的慢病毒载体,将其转染入实验细胞中,用Western blot和实时定量PCR的方法检测KLF8表达量的变化。MTT、Annexin V/PI染色法及阿霉素蓄积量与潴留实验检测KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。结果:缺氧可诱导胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901中KLF8的表达升高。与胃癌亲本细胞系相比,KLF8在胃癌耐药细胞系中的表达升高,并且在SGC7901/VCR细胞中表达升高的更为明显。外源性转染KLF8后可显著增加胃癌细胞中KLF8的表达量,KLF8小干扰RNA可有效降低常氧及缺氧条件下胃癌细胞中KLF8的表达。常氧条件下,外源性转染KLF8的正义表达载体可增加胃癌细胞对不同化疗药物的耐受性,降低化疗药物诱导的胃癌细胞凋亡指数,同时可增加细胞内阿霉素的泵出率。缺氧条件下,KLF8小干扰RNA能够逆转胃癌细胞中上述现象的发生。结论:初步实验结果发现了一个新的缺氧反应分子-KLF8。表型试验证实该分子在缺氧诱导胃癌多药耐药中发挥作用。     

层黏连蛋白及其受体在胃癌中的表达及其与侵袭和转移的关系

目的 :探讨层黏连蛋白 (LN)和LN受体 (LN R)的表达与胃癌侵袭和转移的关系。方法 :应用免疫组织化学S P法检测 68例胃癌组织中LN和LN R的表达。结果 :LN在有淋巴结转移组中阳性表达率明显低于无转移组 ,P <0 0 1;LN在其他各组中的表达差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;LN R的阳性表达率有随肿瘤分化水平的降低、浸润深度的增加而增高 ,P <0 0 1;淋巴结转移组中的LN R表达明显高于无淋巴结转移组 ,P <0 0 0 1。结论 :LN的低表达与肿瘤的转移有关 ,LN R的高表达与肿瘤分化、侵袭和转移的关系十分密切。LN和LN R可作为胃癌进展的重要生物学指标之一。     

胃癌多药耐药研究新进展

胃癌在我国是造成死亡人数最多的恶性肿瘤，手术是目前治疗胃癌的主要方法，但在我国胃癌的手术切除率仅为50％～70％，对失去手术机会、术后复发转移及发生残胃癌的患者，化疗是其主要治疗方法。另一方面，手术作为一种局部的治疗手段也有不足之处，如手术难以发现和处理潜在的亚临床转移灶、手术操作本身也有可能会促使癌细胞的扩散和转移等，     

层黏连蛋白及其受体与肿瘤的浸润转移

浸润别的组织并进而扩散到全身形成新的肿瘤是癌细胞导致宿主死亡的主要原因,而这现象都是癌细胞与宿主细胞及细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）之间相互作用的结果.基底膜（basement membranes,BMs）是ECM中的一层薄膜,它将上皮细胞与其连接组织隔离开来,并且还包裹着管状内皮细胞、肌肉细胞、脂肪细胞和雪旺氏细胞.它对组织起机械性支持作用,对于维持细胞的极性和组织性,介导细胞黏附、迁移、增殖和分化起重要作用.癌细胞在其转移过程中会穿过几层BMs：脱离母瘤,渗入及渗出血管,浸入别的组织如肌肉或神经.层黏连蛋白（laminin,LN）是构成BMs的主要成份之一,它除了参与ECM的构建外,还与肿瘤的浸润转移息息相关.     

层黏连蛋白受体反义核酸对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究67 kD层黏连蛋白受体(67kDLN-R)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对卵巢癌细胞HRA体外侵袭转移能力的影响.方法:采用流式细胞仪、RT-PCR及Transwell小室的方法检测反义核酸对67 kD LN-R基因和蛋白表达影响,及转染前后细胞体外侵袭转移能力变化.结果:67 kD LN-R ASODN可从蛋白质和mRNA水平下调67kDLN-R的表达,且下调作用呈剂量依赖性.与正义组及对照组相比差异有显著性(P＜0.05).体外侵袭实验证实转染后HRA穿透人工基底膜的能力显著降低并呈现剂量依赖性.结论:67kDLN-R ASODN可降卵巢癌细胞体外侵袭转移能力,有望为卵巢癌治疗提供新方向.     

胃癌组织中组织蛋白酶D和层黏连蛋白受体的表达及意义

 目的　研究组织蛋白酶D、层黏连蛋白受体在胃癌中的表达,探讨其与胃癌侵袭及淋巴结转移的关系。方法　采用免疫组织化学SP法,检测96例胃腺癌组织中组织蛋白酶D和层黏连蛋白受体的表达情况。结果　组织蛋白酶D在浆膜层、有淋巴结转移及低分化胃癌组织中的表达明显高于浸润肌层以下、无淋巴结转移及高、中分化的胃癌（分别为P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05）。经四格表χ2检验,层黏连蛋白受体在胃癌组织中的高表达与浸润深度、分化程度密切相关（分别为P＜0.05和P＜0.01）,与淋巴结转移无关（P＞0.05）。胃癌组织中层黏连蛋白受体和组织蛋白酶D之间的相关性分析显示,组织蛋白酶D阳性表达与层黏连蛋白受体阳性表达之间呈正相关（P＜0.05）。结论　胃癌组织中层黏连蛋白受体高表达、组织蛋白酶D高表达与胃癌侵袭转移密切相关。     

胃癌多药耐药研究新进展

胃癌在我国是造成死亡人数最多的恶性肿瘤 ,手术是目前治疗胃癌的主要方法 ,但在我国胃癌的手术切除率仅为 5 0 %～ 70 % ,对失去手术机会、术后复发转移及发生残胃癌的患者 ,化疗是其主要治疗方法。另一方面 ,手术作为一种局部的治疗手段也有不足之处 ,如手术难以发现和处理潜在的亚临床转移灶、手术操作本身也有可能会促使癌细胞的扩散和转移等 ,故手术亦需与化疗配合以取得更好疗效。据估计 ,约 2 /3胃癌患者在疾病的不同阶段有化疗的指征 ,更有人建议 ,对所有胃癌患者均应辅以化疗 ,可见化疗在胃癌的治疗中占据重要地位。但是 ,肿瘤的多…     

层黏连蛋白与其α6整合素受体对人肝癌细胞表型的调控作用

目的 利用自制的抗整合素α6亚基胞外区的单克隆抗体(IA6ED McAb)研究人肝癌细胞表面α6整合素胞外区对人肝癌细胞系BEL-7402黏附、铺展的影响以及在控制细胞增殖与分化中的作用。方法 以层黏连蛋白(LN)、纤黏连蛋白(FN)、Matrigel分别作为细胞外基质,检测IA6ED McAb对人肝癌细胞系BEL-7402细胞在不同基质上的黏附、铺展的影响;以MTT法检测McAh对BEL-7402细胞存活或增殖的影响;以明胶酶谱法检测McAb对BEL-7402细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响;以微粒子免疫吸附法检测对AFP分泌的影响。结果 LN可以明显促进BEL-7402细胞AFP及MMPs的分泌;IA6ED McAb的封阻不但可以特异性抑制BEL-7402细胞在LN上的黏附及铺展,而且对BEL-7402细胞以LN为基质的存活或增殖、去分化及异常分化表型有非常显著的抑制作用。结论 人肝癌BEL-7402细胞的增殖、分化表型受LN及整合素α6的调节。人肝癌组织细胞外基质成分中LN及细胞表面整合素α6的过表达,可以增强肝癌细胞的去分化及异常分化表型;而用IA6ED McAb阻断IN与肝癌细胞表面α6β1整合素受体的相互作用,可以逆转其去分化及异常分化表型,从而可能降低癌细胞的转移潜能。     

VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达及意义

目的：探讨VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达及意义。方法：采用免疫组化SP法检测VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达及与分化程度的关系;比较VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达相关性。结果：VEGFR1在高、中、低度分化胃癌的表达率依次为15／53（28％）、19／43（44％）、37／54（68％）;在低分化胃癌组织中的表达明显高于高分化和中分化胃癌组织（P〈0．05）。MDR1在高、中、低度分化胃癌的表达率依次为18／53（34％）、21／43（48％）、41／54（76％）;在低分化胃癌组织中的表达明显高于高分化和中分化胃癌组织（P〈0．05）。结论：VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达具有一致性,可能在胃癌的多药耐药中扮演重要角色。     

MicroRNA调控胃癌多药耐药的研究进展

晚期胃癌最常用的治疗方法是化疗,但患者存在对化疗药物原发或继发的多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象,使患者很难获得长期生存.大量研究证实,microRNA是转录后基因表达调节的关键分子,在肿瘤的多种生物学行为中起着关键性作用,本文就microRNA调控胃癌多药耐药的相关研究进展做一综述.     

Livin、Ki-67蛋白在胃癌中的表达及意义

目的:通过检测胃癌组织中Livin、Ki-67表达与其临床病理指标的关系,探讨两者表达的相关性及在癌变发生发展中的意义。方法:采用免疫组织化学方法测定Livin、Ki-67在40例胃癌中的表达,分析与胃癌临床病理指标的关系。结果:Livin和Ki-67与淋巴结转移、分化程度有统计学关联(P<0.05);与性别、年龄、不同浸润深度、不同临床分期间无关(P>0.05)。Livin、Ki-67在胃癌组织中的表达无关联(P>0.05)。结论:Livin、Ki-67可能有助于判断胃癌的恶性程度及进展情况,对于胃癌手术的根治和术后化疗有一定指导意义。     

Livin、Ki-67蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：通过检测胃癌组织中Livin、Ki-67表达与其临床病理指标的关系,探讨两者表达的相关性芨在癌变发生发展中的意义。方法：采用免疫组织化学方法测定Livin、Ki-67在40例胃癌中的表达,分析与胃癌临床病理指标的关系。结果：Livin和Ki-67与淋巴结转移、分化程度有统计学关联（P〈0．05）;与性别、年龄、不同浸润深度、不同临床分期间无关（P〉0．05）。Livin、Ki-67在胃癌组织中的表达无关联（P〉0．05）。结论：Livin、Ki-67可能有助于判断胃癌的恶性程度及进展情况,对于胃癌手术的根治和术后化疗有一定指导意义。     

Role of miR-27a,miR-181a and miR-20b in gastric cancer hypoxia-induced chemoresistance

Despite the search for new therapeutic strategies for gastric cancer (GC), there is much evidence of progression due to resistance to chemotherapy. Multidrug resistance (MDR) is the ability of cancer cells to survive after exposure to chemotherapeutic agents. The involvement of miRNAs in the development of MDR has been well described but miRNAs able to modulate the sensitivity to chemotherapy by regulating hypoxia signaling pathways have not yet been fully addressed in GC. Our aim was to analyze miR-20b, miR-27a and miR-181a expression with respect to (epirubicin/oxaliplatin/capecitabine (EOX)) chemotherapy regimen in a set of GC patients, in order to investigate whether miRNAs deregulation may influence GC MDR also via hypoxia signaling modulation. Cancer biopsy were obtained from 21 untreated HER2 negative advanced GC patients, retrospectively analyzed. All patients received a first-line chemotherapy (EOX) regimen. MirWalk database was used to identify miR-27a, miR-181a and miR-20b target genes. The expression of miRNAs and of HIPK2, HIF1A and MDR1 genes were detected by real-time PCR. HIPK2 localization was assessed by immunohistochemistry. Our data showed the down-regulation of miR-20b, miR-27a, miR-181a concomitantly to higher levels of MDR1, HIF1A and HIPK2 genes in GC patients with a progressive disease respect to those with a disease control rate. Moreover, immunohistochemistry assay highlighted a higher cytoplasmic HIPK2 staining, suggesting a different role for it. We showed that aberrant expression of miR-20b, miR27a and miR-181a was associated with chemotherapeutic response in GC through HIF1A, MDR1 and HIPK2 genes modulation, suggesting a possible novel therapeutic strategy.     

膜联蛋白Ⅱ在胃癌组织中的表达及其在胃癌转移中的作用

目的：探讨膜联蛋白Ⅱ（AnnexinⅡ）在胃癌组织中的表达及其在胃癌转移中的作用。方法采用免疫组织化学法检测AnnexinⅡ在51例胃癌组织和24例癌旁组织中的表达,并统计AnnexinⅡ阳性表达与胃癌患者临床特征的关系。用AnnexinⅡ特异性siRNA在胃癌HGC-27细胞抑制AnnexinⅡ的表达,应用黏附实验、侵袭实验检测抑制AnnexinⅡ表达后对胃癌细胞的黏附、侵袭能力的影响。结果 AnnexinⅡ蛋白在胃癌组织中阳性率为82.4%,在癌旁组织中阳性率为37.5%,两组比较差异有统计学意义（P﹤0.01）;并且AnnexinⅡ阳性表达与患者的性别与年龄无关（P﹥0.05）,而与肿瘤大小、组织分化程度、临床分期、淋巴结转移临床特征有关,差异具有统计学意义（P﹤0.05）。在胃癌HGC-27细胞转染AnnexinⅡsiRNA后,细胞中AnnexinⅡ的蛋白和mRNA水平均下降,差异有统计学意义（P﹤0.05）。并且抑制AnnexinⅡ表达后,胃癌HGC-27细胞的黏附、侵袭能力下降,差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论 AnnexinⅡ在胃癌组织中高表达,AnnexinⅡ蛋白表达与肿瘤大小、组织分化程度、临床分期、淋巴结转移临床特征有关,并且AnnexinⅡ高表达可促进胃癌转移。因此,AnnexinⅡ可以作为抑制胃癌转移的潜在靶点,开发靶向AnnexinⅡ的药物可能成为治疗胃癌转移的新方法。     

VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达及意义

目的:探讨VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法检测VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达及与分化程度的关系;比较VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达相关性.结果:VEGFR1在高、中、低度分化胃癌的表达率依次为15/53(28%)、19/43(44%)、37/54(68%); 在低分化胃癌组织中的表达明显高于高分化和中分化胃癌组织(P＜0.05).MDR1在高、中、低度分化胃癌的表达率依次为18/53(34%)、21/43(48%)、41/54(76%); 在低分化胃癌组织中的表达明显高于高分化和中分化胃癌组织 (P＜0.05).结论:VEGFR1和MDR1在胃癌中的表达具有一致性,可能在胃癌的多药耐药中扮演重要角色.     

LncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨lncRNA-AK058003在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:SGC7901、MKN45、MKN28三个胃癌细胞系,分别经常氧/缺氧孵育24h后,Trizol法提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异。通过差异倍数、邻近编码基因信息分析、长度特征分析等策略初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测lncRNA-AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中相对于常氧条件下的表达水平,进一步检测其在20例胃癌临床标本中相对于癌旁组织的表达水平。构建小干扰RNA慢病毒,稳定下调AK058003在SGC7901及MKN45中的表达。Transwell、划痕实验、裸鼠尾静脉注入不同胃癌细胞等体外和体内实验检测抑制AK058003后对常氧和缺氧条件下胃癌侵袭转移的影响。结果:高通量lncRNA 芯片比较发现:缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28与常氧条件下的细胞相比,有84个分子的表达在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调(P<0.05),其中差异倍数在3倍以上的共有5个。多重筛选策略提示AK058003可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果显示: AK058003在缺氧诱导的胃癌细胞中显著上调,其分别在SGC7901缺氧16h,MKN45缺氧24h,MKN28缺氧48h时达到峰值。进一步RT-PCR结果发现,AK058003在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。缺氧条件下的Transwell实验结果显示缺氧能够显著增加SGC7901和MKN45的侵袭转移力,而抑制AK058003的表达后,胃癌细胞侵袭转移力明显下降。结论:通过高通量 lncRNA芯片比较,首次发现了一系列胃癌细胞中缺氧相关的lncRNAs 分子。通过临床标本验证以及功能缺失试验证实lnc-AK058003是系列分子中影响缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNAs分子之一。