分析16S rRNA基因部分序列鉴定一株乳酸菌

目的 利用聚类分析16S rRNA基因部分序列的方法对乳酸菌进行鉴定.方法 在表型鉴定的基础上,应用已发表的16S rRNA基因序列设计引物,扩增L.sp.L5菌株16S rRNA基因,并进行测序,将结果与同属及非同属的乳酸菌进行同源性比较.结果 L.sp.L5菌株与同属的乳酸乳球菌同源性为85.5%以上,尤其与乳酸乳球菌叶蝉亚种NCDO 2181T同源性为99.5%,与不同属的肉明串珠菌、漫游球菌、嗜盐四联球菌同源性分别为77.5%、82.8%、79.0%.结论 菌株L.sp.L5为乳酸乳球菌.     

两株耐酸耐胆盐人肠源菌株的鉴定及系统发育分析

目的对两株来源于健康人肠道的耐酸耐胆盐菌株R92-2和R111进行鉴定和系统发育分析，以筛选优良的宿主菌株为最终构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌奠定基础。方法表型特征分析后，利用16S rDNA两端的保守序列作为PCR引物，扩增两株菌的16S rDNA序列并测序，测序结果于GenBank中Blastn并构建系统发育树。结果表型特征分析初步鉴定两株菌为乳酸菌。R92-2的16S rDNA序列与Weissella cibaria的16S rDNA序列同源性为100％；R111的16S rDNA序列与Enterococcus faecium的16S rDNA序列同源性为100％。结论R92-2为Weissella cibaria；R111为Enterococcus faeciura。两株菌有望用于构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌。     

两株耐酸耐胆盐人肠源菌株的鉴定及系统发育分析

目的对两株来源于健康人肠道的耐酸耐胆盐菌株R92-2和R111进行鉴定和系统发育分析,以筛选优良的宿主菌株为最终构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌奠定基础。方法表型特征分析后,利用16SrDNA两端的保守序列作为PCR引物,扩增两株菌的16S rDNA序列并测序,测序结果于GenBank中Blastn并构建系统发育树。结果表型特征分析初步鉴定两株菌为乳酸菌。R92-2的16S rDNA序列与Weissella cibaria的16SrDNA序列同源性为100%;R111的16S rDNA序列与Enterococcus faecium的16S rDNA序列同源性为100%。结论R92-2为Weissella cibaria;R111为Enterococcus faecium。两株菌有望用于构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌。     

16S rDNA测序鉴定β溶血性G群链球菌

目的 对一起群聚性儿童肾小球肾炎暴发事件中分离到的26株β溶血性G群链球菌进行16S rDNA测序鉴定,探讨该方法在病原学鉴定方面的意义.方法 分别采用API20 Strep生化鉴定系统、部分和全序列测定16S rDNA鉴定26株β溶血性G群链球菌;使用Mega V3.1软件,采用Neighbour-joining 方法和boot-strap test对部分菌株的全序列进行树状图分析.结果 API20 Strep生化鉴定率低,未能鉴定出目的菌;采用16S rDNA测序,结果均为咽峡炎链球菌(S.anginosus),鉴定率大于97%.其中4株G群的全序列树状图分析显示,G群链球菌均与咽峡炎链球菌聚类在同一簇.结论 16S rDNA序列鉴定能提供详细明确的核苷酸信息,能区分G群链球菌不同的种,显示其在菌株鉴定方面的独特优势.     

2011-2012年肠球菌医院感染分布和耐药现状分析

肠球菌原属链球菌属d组,随着分子微生物学的发展,现已根据其DNA同源性,将其列为肠球菌。肠球菌广泛分和在自然界,肠球菌是圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰氏阳性球菌,无芽胞、无鞭毛,生长温度为30-40℃,适宜pH为5．0-7．5,最适温度为35-38℃。肠球菌和多数乳酸菌一样,     

致病性粪肠球菌YN771的分离鉴定及其生物学特性

目的从临床再治疗根管中分离出致病性粪肠球菌,鉴定种属并分析研究其生物学特性。方法通过稀释涂布平板阀对细菌进行分离,对致病菌进行革兰氏染色、透射电镜观察、16S rRNA基因序列分析、同源系统发育进化的构建和生物学特性研究。结果分离得到一株G+菌,菌体圆形或椭圆形,链状排列,直径0.9～1.1μm。经16S rRNA基因测序分析初步鉴定为粪肠球菌的菌株,命名为Enterococcus faecalis YN771。该菌的最适生长条件为:BHI培养基,37℃,pH 7,在此条件下代时约18 min耐药性实验表明该菌对克林霉素耐药、奎奴普丁药敏性不高,而对青霉素G等10种抗生素敏感。结论成功分离鉴定一株致病性粪肠球菌YN771并开展其生物学特性研究,为临床治疗难治性根尖周炎提供研究材料。     

16S rDNA序列分析在临床不常见细菌鉴定中的初步应用

目的建立细菌16S rDNA序列分析技术并探讨其在临床不常见细菌鉴定中的应用价值。方法收集经全自动微生物分析系统鉴定其可靠率在99%及以上的常见细菌10株和常规方法难以鉴定或少见菌17株,通过PCR扩增16S rDNA v3-v4区基因片段并进行序列测定,序列与16SpathDB 2.0数据库上已知细菌的16S rDNA序列进行比对分析确定细菌种属。当v3-v4序列片段不能明确鉴定细菌时,结合16S rDNA长片段测序及管家基因dnaJ和rpoB的序列做进一步分析。结果经16S rDNA v3-v4区序列分析,10株(100%)临床常见菌都能鉴定到种水平,其可靠性大于98.0%。17株不常见菌株中,10株(58.8%)细菌只与1种菌相似性大于98.0%,成功鉴定到单个种水平;6株(35.3%)细菌与不止1种菌的相似比大于98.0%;1株菌与已知菌相似性在96.0%~98.0%之间只能鉴定到属(棒状杆菌)。进一步结合16S rDNA长片段及管家基因dnaJ和rpoB的序列分析,所有菌株均可鉴定到单个种水平。结论结合16S rDNA和管家基因序列分析,可用于临床常见及不常见细菌的分子鉴定。     

前列腺组织中细菌16S rRNA基因、IL-1β、TNF-α和IgA的表达及意义

目的 探讨细菌在慢性前列腺炎(CP)中的致病作用.方法 前列腺标本取自2002-2008年192例猝死于非前列腺疾病的器官捐献者,年龄20～38岁.取周围带组织并分两块,一块前列腺组织行病理检查及白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、免疫球蛋白A(IgA)的免疫组化分析;另一块行细菌16S rRNA基因(16S rDNA)PCR分析.结果 33.3%(64/192)的前列腺组织病理呈CP改变.细菌16S rDNA总阳性率为19.8%(38/192),而在CP标本中16S rDNA阳性率为50.0%(32/64),非CP标本中16S rDNA阳性率为4.6%(6/128),CP组16S rDNA阳性率高于非CP组(x2=55.185,P<0.001).IL-1β、TNF-α和IgA的表达在CP组中明显高于非CP标本(P<0.01),且三者表达呈正相关(P<0.01);在64例CP组织标本中,16S rDNA阳性者IL-1β、TNF-α和IgA的表达明显高于16S rDNA阴性者(P<0.01).结论 前列腺组织中细菌16S rDNA、细胞因子和免疫球蛋白A的表达增加和前列腺组织病理炎症改变相关,提示细菌感染可能是CP的重要病因.     

雾霾中检出1例西宫微球菌的报告

目的对分离自雾霾的一株溶血性细菌进行种属鉴定。方法使用自然沉降法收集某地雾霾环境下的微生物进行培养,对分离的细菌纯化培养后进行革兰氏染色、16S rDNA序列分析和生化鉴定。结果从雾霾中分离获得一株革兰氏阳性球菌,经生理生化反应鉴定为西宫微球菌,16S rDNA测序分析与生化结果一致。结论雾霾空气中存在条件致病菌西宫微球菌,鉴定该菌对研究和防治公共卫生安全有重要意义。     

尿道炎尿道气球菌感染药敏结果分析

尿道气球菌 (aerococcusurinae)为革兰氏阳性球菌气球菌属 ,是易引起有典型尿路感染症状的条件致病菌 ,该菌在血平板上生长良好 ,有类似草绿色链球菌的α溶血环 ,镜下形态呈簇状排列 ,生化反应有触酶阴性 ,无动力 ,β葡萄糖苷酶阳性 ,分解D 葡萄糖、蔗糖 ,不分解乳糖、麦芽糖等。我们分析了尿道炎尿道气球菌的感染状况及耐药性 ,结果报告如下。1　材料与方法1.1　标本来源　男性患者 2 81例 ,年龄 35岁～ 6 8岁 ,临床确诊为尿道炎。1.2　标本采集及分离鉴定　清洁尿道口 ,取中段尿及时送检 ,标本经接种、培养 ,分离到纯菌落后 ,用API鉴定…     

首发精神分裂症患者感觉门控P50的随访研究

目的 随访首发精神分裂症患者感觉门控P50的特征,并分析P50指标与其临床症状间的关系.方法 对58例首发精神分裂症患者(患者组)和108名正常对照(对照组)应用美国Nicolet Brova脑诱发电位仪进行听觉诱发电位P50检测,同时应用阳性和阴性症状量表(PANSS)对患者的精神症状评估,并随访3个月.结果 (1)入组时,患者组感觉门控P50存在异常,表现为S2/S1高于对照组[Cz:对照组:0.43(0.27,0.58);患者组:0.77(0.58,1.04);Z=-9.23,P<0.01],S1-S2的值小于对照组[Cz:对照组:2.65(1.55,4.79)μV;患者组:0.92(-0.13,2.32)μV;Z=-6.01,P<0.01],(1-S2/S1)低于对照组[Cz:对照组:0.57(0.43,0.73);患者组:0.23(-0.04,0.42);Z=-10.61,P<0.01].(2)随访期间,患者组仍存在感觉门控P50异常.与对照组相比,患者组在Cz、Fz、Pz脑区的S2-P50波幅高,S2/S1高,S1-S2和(1-S2/S1)小,差异均有统计学意义(P<0.05-0.01).与入组时相比,患者随访期间在3个脑区的S2-P50波幅、S2/S1、S1-S2、(1-S2/S1)等指标无显著变化(P>0.05).患者组入组时的S1-P50波幅在Cz和Fz脑区低于对照组(Cz:患者组:4.1 μV±2.1μV,对照组:5.6μV±3.3 μV,t=-1.47,P=0.001;Fz:患者组:3.9 μV±2.1μV,对照组:5.6μV±3.9μV,t=-1.63,P=0.003),随访到第3个月末时,Cz脑区的S1-P50波幅恢复正常,但Fz脑区的S1-P50波幅仍低于对照组(患者组:3.9 μV±1.9 μV,对照组:5.6μV±3.9μV,t=-1.62,P=0.03).(3)随访到第3个月末时患者组的精神症状有所缓解和改善,表现为PANSS总分、阳性量表分、阴性量表分、一般精神病理量表分均有所减少(其分值分别为:入组时:138分±15分,33分±7分,41分±5分,65分±8分;随访3个月时:80分±15分,17分±4分,24分±4分,38分±9分;均P<0.01).相关分析显示,入组时,患者组P50指标与PANSS无相关性(P>0.05),经过治疗后患者组的S2/S1和(1-S2/S1)与阳性量表分和思维障碍相关(P<0.05),S1-S2与思维障碍呈正相关(P<0.05).结论 首发精神分裂症患者感觉门控异常与其思维障碍密切相关,可能是精神分裂症的重要发病机制.感觉门控P50缺损可能是首发精神分裂症的一个素质标记.     

RP-HPLC法同时测定虎杖提取物中4种组分含量

目的 建立RP-HPLC法测定虎杖提取物中白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素和大黄素甲醚的含量.方法 采用Kromasil C8色谱柱,以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱.流速为1 mL/min;检测波长为290nm;进样量为20μL;柱温为30℃.结果 虎杖提取物中白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素和大黄素甲醚分别在10.54...     

复方阿托伐他汀依折麦布胶囊的质量控制

目的:建立复方阿托伐他汀依折麦布胶囊的质量控制方法。方法:利用HPLC法测定复方阿托伐他汀依折麦布胶囊中主药的含量与制剂的含量均匀度,色谱条件为:TIANHE? Kromasil C18 色谱柱(5 μm,200 mm×4.6 mm);流动相为甲醇-0.05 M KH2PO4(磷酸调节pH至3.0)-乙腈(5:45:50);检测波长为λ=236 nm;流速1.0 mL/min;进样量20 μL;柱温为25 ℃。结果:阿托伐他汀在1.12~16.8 μg/mL的浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),依折麦布在1.14~17.1 μg/mL的浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9);阿托伐他汀和依折麦布的平均加样回收率分别为100.58%和100.64%,RSD分别为1.18%和0.92%。结论:该HPLC测定条件和含量测定方法,能够有效测定样品的含量,且简便易行。     

纳米氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的增殖影响

目的：研究纳米氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的毒性作用和对细胞的增殖影响;考察纳米氧化铈作用于细胞的生物效应是否存在剂量和粒径效应。方法：不同终浓度200、100、50、20、10、5、2.5、1.25、0.625μg/m L的20.8 nm Ce O2-NPs体外作用于96孔板中NR8383细胞24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;四种粒径20nm、50-100 nm、300-500 nm、1-5μm Ce O2分别以四种终浓度100、50、20、10μg/m L作用于NR8383细胞24 h,采用CCK-8试剂盒检测检测细胞活力。结果：不同浓度20.8 nm Ce O2-NPs作用于NR8383细胞,与对照组相比,除1.25、2.5、5μg/m L外,其他浓度下细胞存活率随浓度增大而升高,100、200μg/m L最明显;有剂量效应。四种粒径四种浓度的纳米氧化铈作用于NR8383细胞,50-100 nm的20μg/m L浓度和1-5μm的50、10μg/m L浓度Ce O2-NPs抑制细胞增殖,但不明显;其他各组均促进细胞增殖,其中20 nm的20μg/m L,50-100 nm的50μg/m L、100μg/m L最明显。剂量尺寸效应不明显。结论：小粒径纳米氧化铈对NR8383细胞增殖有促进作用,无明显毒性;微米级氧化铈有些浓度下细胞存活率降低,可能对细胞造成毒性。     

一株高耐受性乳酸菌的分离及其在木质纤维素发酵生产高浓度L-乳酸中的应用

利用资源丰富的纤维质原料生产新一代可降解聚乳酸塑料的单体原料L乳酸,是目前一个极为重要的研究热点和产业方向。从高温纤维乙醇发酵介质中分离到一株高耐受性乳酸菌,经16S rDNA分子生物学鉴定为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）,并命名为P. acidilactici DQ2。此菌株具有极为优异的耐高温和耐受高浓度木质纤维素降解产物的特性,这一特性可能与母株的环境变异和体系中存在的调控物质有关。利用该乳酸菌以稀酸预处理后的玉米秸秆为原料进行同步糖化与乳酸发酵,发酵液中的乳酸质量浓度为75 g/L,乳酸对纤维素得率达到0.63 g/g,具备了纤维素乳酸产业化生产的潜力。     

5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮平衡溶解度及油水分配系数的测定

目的 考察5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮在水和缓冲溶液中的平衡溶解度及表观油水分配系数.方法 采用HPLC法测定5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮在不同介质中的平衡溶解度,摇瓶法测定表观油水分配系数.结果 在37 ℃下,5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮及龙须藤总黄酮中的5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮在水中的平衡溶解度分别为0.603、77.702 μg/mL,相应的表观油水分配系数为246.24(lg Papp=2.39)、257.51(lg Papp=2.41).结论 5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮水溶性极差,脂溶性适中.与单体相比,龙须藤总黄酮中的5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮水溶性增大.     

RP-HPLC法测定人血浆中替考拉宁的浓度

目的 建立测定人血浆替考拉宁的HPLC法,供血药浓度监测用,指导临床安全合理用药.方法 色谱柱为Wondasil C18柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05 mol/L KH2 PO4溶液(体积比28∶72,pH=3.2),检测波长为240 nm,流速为1.0 mL/min;柱温为25℃....     

叶酸口腔速溶膜剂的质量控制

目的:建立叶酸口腔速溶膜剂的质量控制方法。方法:利用HPLC法测定叶酸口腔速溶膜剂的含量及膜剂的含量均匀度。色谱条件:Innoval ODS-2 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）;流动相:甲醇-0.054 mol/L磷酸二氢钾溶液（调节pH=6.3±0.1）（8:92）;检测波长:λ=254 nm;流速1.0 mL/min;进样量为20 μL;柱温为(30±1 )℃。结果:叶酸在40.0～260.0 μg/L的浓度范围内线性关系良好（R=0.999 8）,平均加样回收率为99.02%,RSD为0.41%。结论:该色谱测定条件及含量测定方法能够简单有效地测定叶酸口腔速溶膜剂的含量及含量均匀度。     

HPLC法同时测定复方参芎滴丸中4种成分的含量

目的 建立同时测定复方参芎滴丸中丹参素钠、丹酚酸B、丹参酮ⅡA和阿魏酸4种成分质量分数的HPLC法. 方法 采用Welchrom-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为体积分数0.1%甲酸水溶液-甲醇-乙腈(体积比40∶60),梯度洗脱;流量为1.0 mL/min;检测波长为286 nm;柱温为25 ℃. 结果 丹参素钠、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA分别在1.92~30.7 μg/mL (r=0.999 4)、1.12~18.0 μg/mL(r=0.999 1)、3.50~56.0 μg/mL(r=0.999 4)、4.25~68.0 μg/mL(r=0.9997)范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为104.4%、101.0%、99.6%、96.4%,RSD值分别为1.955%、2.520%、2.154%、1.458%. 结论 该方法简便、精确、重复性好,适用于复方参芎滴丸中4种成分的测定.     

HPLC法测定尼莫地平自微乳化软胶囊含量

目的建立尼莫地平自微乳化软胶囊含量测定方法。方法采用高效液相色谱法：色谱柱为Diamonsil C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为水-甲醇-乙腈（体积比25：35：40）,检测波长为237nm,柱温为40℃,流速为1．0mL／min。结果尼莫地平在10．16～81．28μg/mL范围内线性关系良好,r=0．9999,平均回收率为100．6％,RSD为0．71％。结论建立的方法准确、重现性好,可作为尼莫地平自微乳化软胶囊的质量控制方法。