羊脾转移因子对人淋巴细胞体外抗原特异及非特异免疫活性的影响

一般认为TF具有抗原不依赖免疫活性。但是,它是否还具有抗原特异活性,仍有争论。由于抗原依赖活性检测方法的局限性,对这种活性的证实尚待进一步研究。我们建立了~3H-亮氨酸(~3H-Leu)白细胞粘附抑制(LAI)实验方法,用它检测由免疫的羊脾制备的TF的免疫活性,结果表明,它可在体外使人淋巴细胞产生对相应抗原的粘附抑制效应,说明此TF具有依赖抗原的免疫活性,从而为制备动物抗肿瘤TF和体外检测TF的抗原依赖免疫活性提供了实验方法。此外,羊脾与人脾TF对人淋巴细胞转化的增强效应基本相同,也为羊脾TF对人无种属特异性补充了新资料。     

HSV-1特异转移因子对小鼠脾细胞~3H-Leu参入的影响

用HSV-1特异的小鼠脾TF(TFHSV-1)进行小鼠脾细胞[~3H] Leu参入试验,观察到TFHSV-1明显增加HSV-1特异抗原介导的小鼠脾细胞[~3H] Leu参入。如加热处理TFHSV-1,其影响[~3H]-Leu参入的抗原特异活性丧失。经紫外光吸收值测定和游离氨基酸分析,发现热处理TFHSV-1的紫外光吸收值增高,TFHSV-1中的游离氨基酸含量增加。这种变化与其特异活性的丧失可能有密切关系。结果表明,TFHSV-1具有增加体外小鼠脾细胞蛋白质合成的抗原特异活性的特征。其特异性成分可能是某种肽类。     

LACA小鼠脾细胞增殖试验对乙肝病毒特异性转移因子抗原依赖活性的研究

取同窝 LACA 小鼠的脾细胞,分别与乙肝病毒(HBV)抗原、乙肝病毒特异性转移因子(HBV—TF)、HBV 抗原+HBV—TF 进行体外培养,观察小鼠脾细胞增殖的能力,并对 HBV—TF 的抗原依赖活性进行了研究。经~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入 DNA 法进行了测试,HBV 抗原+HBV—TF 组的 cpm 值为13759.3±3970.4,是单独 HBV 抗原组及 HBV—TF 组 cpm 值的10倍多,与各组相比 P 均<0.01。研究结果证明,本方法对检测 HBV—TF 的生物活性具有高度的敏感性。     

乙型肝炎特异性转移因子抗原特异免疫活性的检测

参照 Hoffman 白细胞移动抑制试验,采用琼脂糖法巨噬细胞移动抑制试验(MIT),研究了乙型肝炎特异性转移因子(HBV—TF)对正常人及乙肝病人淋巴细胞转移、诱导产生巨噬细胞移动抑制因子(MLF)的抗原特异免疫活性取得了成功。结果表明 HBV—TF 具有明显的抗原依赖性免疫活性。琼脂糖法MIT 操作简单、结果敏感并且重复性较好,可以作为 HBV—TF 产品的抗原特异活性的检测指标。     

抗肿瘤多价转移因子对肿瘤患者NK及LAK活性的影响

目的：制备并观察抗肿瘤多价转移因子（M－TF）对肿瘤患者NK及LAK活性的影响。方法：分别用肝癌细胞悬液,胃癌细胞悬液免疫山羊,取其淋巴组织均匀浆透析法制备肝癌特异性转移因子（HCC－STF）和胃癌特异性转移因子（GC－STF）,用肝癌,胃癌及大肠癌混合细胞悬液免疫山羊,制备M－TF。比较其理化性质及对肿瘤患者NK及LAK活性的影响。结果：三种转移因子理化性质十分相似,肽类,核苷酸类物质及氨基酸俯含量相近。HCC－STF能明显增加肝癌患者NK,LAK活性及LAK细胞对肝癌7721细胞的特异细胞毒作用,GC－STF能明显增加胃癌和大肠癌患者NK,LAK活性及LAK细胞对胃癌7901细胞的特异细胞毒作用,M－TF能显著增加肝癌,胃癌及大肠癌的NK,LAK活性及LAK细胞对7721和7901细胞的细胞毒作用,其增加效果与HCC－STF及GC－STF比无明显差异。结论：M－TF具有免疫调节性强,抗肿瘤谱广的特性,值得推广应用。     

流行性出血热病毒特异性转移因子的研究

对流行性出血热病毒(EHFV)特异性转移因子(EHFV-TF)的制备、特性及在小鼠体内的活性作用进行了研究。其理化性状与普通 TF 非常相似,能激活淋巴细胞的 E 受体(激活率为65.54%),明显提高 Et-RFC 的形成率。E-HFV-TF 还具有特异性抗原依赖活性:①促进 BALB/C 小鼠和 NIH 裸鼠特异性抗体的产生;②促进 LACA 小鼠脾细胞对 EHFV 反应的特异性应答;③促进脾细胞在 EHVF 存在时对 PHA 诱导下的增殖反应(促时率为151.3%)。EHFV—TF可推迟动物感染 HEFV 后的发病期,延长病程和推迟死亡时间;减轻发病动物脑肺充血、出血、水肿现象和肝肾病理损害程度。结果表明 EHFV-TF 不仅具有提高细胞免疫的非特异活性,而且具有对 EHFV 抗原的依赖活性。本研究提示,E-HFV-TF 可用于 EHFV 感染病人的治疗。     

乙型肝炎特异性转移因子的研究

我们用纯化的人乙肝疫苗免疫健康成猪制备含有特异性转移因子(HBV-TF)的白细胞透析物(DLE)。HBV-TF是与TF-p非常相似的化学制剂,都具有无毒性。HPLC法分析结果发现,HBV特异TF的第6峰偏高,充分证实经免疫后的猪细胞中TF活性有增高趋势,HBV-TF对PHA诱导的人淋巴细胞增殖的影响看出,HBV-TF具有依赖抗原的特异性活性,在7例HBsAg阳性的乙肝患者的周围血淋巴细胞中加入HBV-TF,对淋转表现出抑制作用。制剂的注射结果说明,HBV-TF注射组的小鼠抗乙肝特异性抗体显著增长,HBV-TF可特异地转移免疫信息给纯种鼠,而TTH-TF则无此作用。实验提示,抗体的产生是多细胞的行为,HBV-TF不仅可增强受者的细胞的免疫应答,亦可增强与调节特异抗体的产生。我们对97例乙肝HBsAg慢性携带者、慢迁肝、慢活肝进行实验性治疗观察,用HBV-TF配合中药齐墩果酸片不仅能改善机体临床症状和体征,亦能改善机体免疫状态,降低乙肝传染性指标,使HBeAg阴转率达53.3％～56％。     

羊脾转移因子体外对人淋巴细胞的活性作用

本文介绍匀浆透析法制备山羊脾TF,经化学分析、紫外光谱扫描、高压液相层析、葡聚糖凝胶G—25层析和其分离组分的薄层层析、游离氨基酸分析等,初步说明与同法制备的人脾TF具有基本相似的组成成份。在体外非特异性活性反应中,羊脾TF显示出与人脾TF相似的活性,两者均能刺激人淋巴细胞内环核苷酸水平变化,使cGMP水平增高,cAMP水平不变或略下降,cGMP/cAMP比值显著增高,并能非常显著地促进37℃温育后人淋巴细胞与绵羊红细胞结合作用的恢复,提示羊脾TF作为免疫增强或触发剂,具有实际运用的可能性。     

亲和层析法纯化抗大肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体

目的制备和纯化鼠源性抗人大肠肿瘤单克隆抗体(单抗),分析其相应抗原在大肠肿瘤细胞中的表达。方法常规方法免疫BALB/c小鼠制备腹水,应用G蛋白亲和层析柱对小鼠腹水样品进行分离纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。用免疫细胞化学、流式细胞术和免疫组织化学技术S-P法检测其相应抗原在大肠肿瘤细胞株和组织中的表达。结果还原性SDS-PAGE显示所获抗体为单一组分。应用间接ELISA检测抗体效价为1∶106,纯化后的抗体对大肠肿瘤细胞株具有特异结合活性,并在高分化大肠腺癌组织中表现出更高选择性(P<0.01)。结论G蛋白亲和层析法操作简便,所得单抗的纯度高,特异性强,生物学活性好。对临床上早期诊断大肠肿瘤将具有较大的意义。     

脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养;建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-C3、2-G9、3-H9;进而在小鼠体内诱生腹水,并用rprotein A亲合层析法纯化;经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上,建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果纯化的单抗用SDS-PAGE测定纯度,在Mr为150 000左右呈现一条带;Western blot测定显示1-C3、2-G9、3-H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF,经免疫球蛋白(Ig)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgG1;用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)pg/mL。结论用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立,为TF的制备纯化和检测奠定了基础,也使TF的临床深入化研究成为可能。     

山羊心肌可透析提取物对小鼠脾淋巴细胞RNA合成的影响

山羊心肌可透析提取物能增强conA刺激的小鼠脾淋巴细胞体外RNA合成。在最适浓度下,这种作用较由同一山羊淋巴组织制备的转移因子(TF)为强(P<0.05),而与免疫所用抗原无关。由免疫与非免疫山羊心肌制备的可透析提取物的增强作用无差异。TF与山羊心肌可透析提取物混合使用呈现无关作用。作者认为心肌可能成为制备TF类似物新的原料来源。该提取物对特异性免疫反应的影响有待进一步研究。     

免疫核糖核酸连续传递肿瘤特异性LAI反应

用S_(180)瘤细胞免疫的豚鼠淋巴组织提取的RNA(iRNA)注射给受体小鼠后,再从小鼠脾脏提取RNA(iRNA_1),它能够传递对S_(180)肿瘤抗原的特异性白细胞粘附抑制反应(LAI),而不能传递对正常组织抗原(NAg)及不相关的H_(22)肿瘤抗原(HAg)的LAI反应;将iRNA注射给第2受体鼠,从其脾脏来源的iRNA(iRNA_2)也具有上述活性。如此重复,iRNA_3也具有特异性免疫活性。在传递过程中,其免疫特异性及免疫反应强弱无改变。上进各种iRNA体内抑瘤实验表明:实验动物肿瘤发生时间稍延迟,发病率略下降,~(125)I标记的iRNA体内追踪实验显示脾脏标记物存留时间延长,大分子标记物比例随时间延长而增高。     

卵巢癌特异性转移因子的制备与鉴定

目的：为了卵巢癌手术后免疫治疗的需要,我们用透析法从用癌组织免疫的山羊脾及淋巴结制备了卵巢癌特异性转移因子（ＳＴＦ）。方法：按中国药典及白细胞粘附抑制试验（ＭＴＴ法）对ＳＴＦ的理化性质和免疫学性质进行了检测和鉴定。结果：所制备的卵巢癌ＳＴＦ符合转移因子质量具有对卵巢癌细胞抗原的特异性。在１５例卵巢癌病人的临床应用中,未发现任何毒副反应。结论：用该法制备的卵巢癌ＳＴＰ,可以安全地应用于卵巢的癌的免疫     

乙型肝炎特异性转移因子的研制及临床应用

用乙型肝炎疫苗免疫山羊,待其产生免疫后,放血取脾制备乙型肝炎特异性转移因子(GS-TFhbv)。产品经过鉴定,质量符合全国第一届TF会议制定的人TF制检规程要求。对112例慢性乙型病毒性肝炎病人和40例对照组进行临床治疗观察,证实GS-TFhbv治疗组在细胞免疫功能改善、HBsAg、HBeAg的阴转率及抗-HBe阳转率、甲皱微循环的改善及转归上优于对照组。     

HBsAg转移因子对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞增殖反应的影响

应用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）免疫山羊，取其脾脏及淋巴结经匀浆透析法制备ＨＢｓＡｇ特异性转移因子（ＨＢｓＡｇ－ＳＴＦ）。在体外观察了其对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。结果显示：慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞增殖率明显低于正常人。ＨＢｓＡｇ－ＳＴＦ可明显促进患者外周血淋巴细胞的增殖反应，而正常转移因子（ＮＴＦ）对其作用则不明显。提示：慢性乙型肝炎患者的细胞免疫处于抑制状态。特异性转移因子可解除或缓解这种抑制状态。     

胃癌单克隆抗体MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv的制备

目的 获得胃癌单克隆抗体（简称单抗）MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv（抗－Id ScFv），为研制MG7的抗－Id ScFv重组胃癌瘤苗奠定基础。方法 以MG7单抗与匙孔血蓝蛋白（KLH）的交联物免疫Balb/c小鼠，取脾分离mRNA。以逆转录聚合酶链反应技术分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VL），经linkerDNA连接ScFv基因片段。将ScFv DNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1。在辅助噬菌体M13K07的作用下，获得重组噬菌体抗体ScFv。以单抗MG7对重组噬菌体抗ScFv进行四轮筛选后，随机挑取克隆，经噬菌体ELISA筛选抗－IdScFv单克隆，并对其所属抗－Id类型进行初步鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分析约为340、320和750bp。经富集后，在随机筛检的60个克隆中得到24个噬菌体呈现型抗－IdScFv单克隆，阳性率为40％。在24个克隆中，有5个为β或γ型抗－IdScFv。结论 用噬菌体抗体技术能够成功地获得单抗MG7的抗－IdScFv，为开展用抗－IdScFv防治胃癌的研究创造了条件。     

穿心莲内酯对胃癌AGS细胞增殖侵袭的影响

目的观察穿心莲内酯（AD）对胃癌细胞增殖侵袭以及Na＋-K＋-ATP酶活性的影响。方法体外培养胃癌细胞系AGS,分别用1.0、3.0、5.0μmol/L穿心莲内酯作用24～72 h,无机磷法检测AGS细胞Na＋-K＋-ATP酶活性改变情况;MTT和ELISA分析AGS细胞的增殖与断裂DNA含量;同时采用ELISA检测血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子β1（TGF-β1）的水平;荧光共振能量转移法检测基质金属蛋白酶9（MMP-9）的活性;小室侵袭实验检测细胞侵袭。结果 1.0～5.0μmol/L穿心莲内酯能显著降低Na＋-K＋-ATP酶活性,并能在此浓度下抑制AGS细胞生长增殖以及增加断裂DNA水平。同时,穿心莲内酯也能减少VEGF和TGF-β1的水平（P〈0.05）,降低MMP-9酶的活性,并能有效减少癌细胞的侵袭（P〈0.05）。结论穿心莲内酯是一种有效的抗胃癌药物,它可能具有阻碍胃癌细胞侵袭的能力。     

RUNX3启动子甲基化与胃癌发生发展的关系

目的检测胃癌RUNX3基因启动子区域甲基化情况,探讨RUNX3基因在胃癌发生和发展过程中的意义。方法采用DNA甲基化特异性聚合酶链反应[methylation-specific polymerase chain reaction,PCR（MSP）]技术对30例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织RUNX3基因启动子区域甲基化进行检测。结果 RUNX3基因甲基化率在胃癌中为70.0%（21/30）,其癌旁组织中为16.7%（5/30）,有统计学差异（P〈0.05）。结论 RUNX3的甲基化可能是癌症特异性的,其启动子区甲基化与胃癌的发生、发展密切相关。