玉竹对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

目的:探讨玉竹水提液对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:用64mJ.cm-2的UVB照射人皮肤角质形成细胞建立光老化细胞模型,以不同浓度玉竹提取物处理光老化细胞,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌量。结果:UVB照射角质形成细胞后,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高,TNF-α、IL-6分泌量增加(P<0.01),玉竹水提液中(100μg.ml-1)、高(200μg.ml-1)剂量组能显著提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少TNF-α、I L-6分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:玉竹水提液可在一定程度上减轻UVB对角质形成细胞的损伤,其机制可能与其抑制氧化损伤,增强细胞抗氧化能力,减少炎症细胞因子分泌有关。     

中波紫外线对人角质形成细胞MMP-9 mRNA的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）诱导的永生化人角质形成细胞中MMP-9 mRNA的表达,探讨其与UVB照射所致的细胞损伤的关系。方法：绘制细胞生长曲线,采用MTT方法测定UVB照射后细胞的增殖活性,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定UVB照射后HaCaT细胞中MMP-9 mRNA的表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞的增殖活性受到抑制,MMP-9 mRNA表达增强;随UVB剂量增加,照射组的MMP-9 mRNA表达逐渐增多,与未照光组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：UVB照射可引起HaCaT细胞中MMP-9 mRNA表达显著增加,且与UVB照射剂量呈正相关,与光老化的发生有一定的关系。     

虾青素对HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨虾青素对长波紫外线（UVA）辐射诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：采用人角质形成细胞HaCat细胞构建体外模型,MTT法测定细胞活力,酶生化法测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—px）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果：虾青素能提高受UVA辐射的HaCaT细胞的增殖活力,提高胞质SOD和GSH-px的活性,降低细胞内MDA的含量。结论：虾青素对受UVA辐射的HaCaT细胞氧化应激损伤有一定的保护作用。     

中波紫外线对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的：探讨中波紫外线（UVB）对HaCaT细胞损伤的影响。方法：取对数生长期的HaCaT细胞,用0、30、60、90 mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0、24、48、72h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在30～60mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,细胞的增值活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论：UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

甘草次酸对光老化HaCaT细胞的保护作用及NF-κB信号通路影响

目的:研究甘草次酸对光老化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及NF-κB信号通路的影响。方法:用30m J/cm2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型;用不同浓度(10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol·L~(-1))的甘草次酸处理光老化HaCaT细胞24h。MTT法检测甘草次酸对细胞活性的影响;试剂盒法检测各组细胞上清SOD、GSH活性及MDA含量;Western Blot法检测各组细胞NF-κBP50和NF-κBP65蛋白表达量。结果:模型组细胞与空白组细胞相比,模型组细胞增殖率显著降低(P0.01);GSH、SOD活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01);NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达量显著升高(P0.01)。甘草次酸处理的HaCaT细胞与模型组细胞相比,甘草次酸组细胞增殖率显著升高(P0.01);GSH、SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(P0.01);NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达显著下降(P0.05,P0.01)。结论:甘草次酸能显著保护UVB诱导的HaCaT细胞光老化,其机制可能与其抑制氧化损伤,阻断NF-κB信号通路,抑制NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达有关。     

康复新液对光老化HaCaT细胞保护作用的研究

目的:观察康复新液对中波紫外线(UVB)照射损伤后皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)的影响,初步探讨其作用机制。方法:采用UVB辐射HaCaT细胞进行造模,分为空白组、模型组、药物组。空白组不给予处理,模型组、药物组分别予不同剂量UVB辐射,药物组在模型组基础上给予康复新液。以CCK8法测定细胞增殖活力,酶生化法测定过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶含量。结果:与模型组比较,同等UVB剂量下药物组乳酸脱氢酶含量下降(P0.01),超氧化物歧化酶含量及细胞增殖活力升高(P0.01)。结论:康复新液可通过减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损伤,从而达到对HaCaT细胞的保护作用。     

十精丸对UVA致ESF-1细胞光老化保护作用的研究

目的:研究十精丸抗紫外线致ESF-1细胞光老化作用,并初步探讨其作用机制。方法:用40J/cm2的UVA照射人皮肤成纤维细胞建立光老化细胞模型,以不同浓度十精丸提取物处理光老化细胞,MTT法检测细胞活力,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TBA法检测丙二醛(MDA)含量。结果:UVA照射成纤维细胞后,细胞活力下降,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P<0.01),十精丸水提液中(100μg/ml)、高(200μg/ml)剂量组能显著提高成纤维细胞细胞活力、SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论:十精丸水提液可抑制UVA引起的成纤维细胞活性下降,推测其机制为通过提高SOD活力、加速氧自由基的清除和减少氧自由基的产生,使细胞的脂质过氧化损伤程度降低有关。     

黄芩苷和川芎对UVB辐射皮肤成纤维细胞的影响

目的：研究中药活性成分黄芩苷，川芎对中波紫外线（UVB）辐射损伤成纤维细胞保护作用的影响及相关作用机制。方法：采用0mJ／cm^2，30mJ／cm^2，60mJ／cm^2，90mJ／cm^2剂量UVB照射培养的原代人皮肤成纤维细胞，同时加入黄芩苷和川芎干预处理，观察细胞损伤的形态学变化，以MTT法检测细胞活性，以酶联免疫吸附实验（ELISA）检测IL-10，IL-12和TNF—α的分泌量。结果：UVB照射后，细胞损伤程度与照射剂量呈正相关，增殖活性下降；此外，UVB照射后IL-10等细胞因子分泌增加，而加入所试中药干预可明显抑制细胞损伤和相关细胞因子分泌。结论：黄芩苷、川芎有一定的光保护作用，抑制炎症细胞因子IL-10，IL-12，TNF-α的分泌可能是其减轻UVB光损伤的机制之一。     

莲子提取物对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的影响研究

目的：研究莲子提取物对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的影响,并初步探讨其作用机制,为将来应用于临床提供理论依据。方法：选用健康雄性SD大鼠30只随机分为三组：假手术组（ Sham组）、缺血再灌注损伤组（ RIRI组）、莲子提取物给药组（ LE组）。再灌注24 h 后,检测大鼠血清中丙二醛（ MDA ）、超氧化物歧化酶（ SOD ）、血清肌酐（ Scr ）和尿素氮（ BUN）,肾组织中MDA含量和谷胱甘肽过氧化物酶（ GSH-Px）的活性,并采用肉眼和光镜下观察肾脏组织病理学切片以及肾小管计分等病理变化。结果：与肾脏缺血再灌注组相比,莲子提取物给药组大鼠血清中MDA、 Scr、 BUN含量均显著降低（P〈0.01）,血清中SOD含量升高（P〈0.01）、肾小管计分明显降低（P〈0.01）,肾组织中MDA含量降低（P〈0.01）、GSH-Px活性增强（P〈0.01）。结论：莲子提取物对急性肾缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗自由基损伤和减轻脂质过氧化、抗血栓形成有关。     

茶多酚单体和黄芩苷对紫外线辐射皮肤成纤维细胞的影响

目的：研究中药活性成分茶多酚单体没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、黄芩苷对紫外线辐射损伤的成纤维细胞形态、增殖活性及产生IL-6、TNF-α的影响,探讨其光保护作用.方法：采用30mJ/cm^2、60mJ/cm^2、90mJ/cm^2剂量UVB照射体外培养的原代人皮肤成纤维细胞,以中药单体EGCG和黄芩苷进行干预处理,倒置相差显微镜观察细胞受损程度,以甲唑盐比色试验（MTT法）检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液TNF-α、IL-6分泌量.结果：UVB照射引起皮肤成纤维细胞形态受损,其损伤程度呈剂量依赖性,细胞增殖活性下降28%-44%,其下降程度与照射剂量成正相关（P＜0.05）,UVB照射后细胞因子分泌增加,加入中药单体处理后细胞活性有不同程度恢复（4%～22%）,IL-6、TNF-α分泌量显著下降,差异均有统计学意义.结论：EGCG、黄芩苷具有光保护性能,抑制炎症细胞因子IL-6、TNF-α分泌可能是其减轻紫外线辐射损伤的机制之一.     

咖啡因增强UVB辐射诱导的HaCaT细胞凋亡的研究

目的：观察咖啡因对中波紫外线（Ultraviolet B,UVB）辐射诱导的HaCaT细胞凋亡的影响。方法：在DMEM中培养HaCaT细胞,将细胞分成空白对照组（A组）,1mM咖啡因处理组（B组）,5mM咖啡因处理组（C组）,UVB（20mJ/cm2）辐射组（D组）,UVB辐射（20mJ/cm2）＋1mM咖啡因处理组（E组）,UVB辐射（20mJ/cm2）＋5mM咖啡因处理组（F组）,Annexi n V/PI观察各组细胞凋亡比例,Westernblot检测各组细胞p21和BCL-2表达情况。结果：20mJ/cm2UVB能诱导HaCaT细胞凋亡增加（A组凋亡率5.43%,D组凋亡率20.67%）,而1mM和5mM咖啡因能进一步促进HaCaT细胞凋亡（E组凋亡率22.25%,F组凋亡率36.61%）,UVB抑制细胞p21和BCL-2蛋白表达,咖啡因能进一步抑制21和BCL-2蛋白表达。结论：UVB辐射能诱导HaCaT细胞凋亡,抑制p21和BCL-2蛋白表达,咖啡因则能进一步促进凋亡,抑制p21和BCL-2蛋白表达。     

黄芪甲苷的抗氧化应激作用对体外高糖刺激足细胞的保护作用

目的:观察黄芪甲苷的抗氧化应激作用对体外高糖刺激下的足细胞的保护作用。方法:将条件性永生的小鼠足细胞随机分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、甘露醇高渗对照组(MA)、DMSO组及HG+不同剂量(5、15、30μg/ml)AS-IV干预组。采用CCK-8法检测各组足细胞活性,氧化应激试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;同时应用western印迹法检测细胞整合素连接激酶ILK蛋白表达量。结果:(1)足细胞活性:与NG组相比,MA组差异无统计学意义,HG组足细胞活性显著降低(P<0.05);与HG组相比,HG+30μg/mlAS-IV组足细胞活性显著升高(P<0.05),DMSO组、HG+15μg/mlAS-IV组和HG+5μg/mlAS-IV组差异无统计学意义(P<0.05)。(2)氧化应激及整合素连接激酶蛋白表达量:与NG组相比,HG组足细胞MDA含量升高,SOD、CAT和GSH-Px活性下降,ILK蛋白表达量下降(P<0.05)。与HG组相比,HG+30μg/mlAS-IV组MDA含量下降,SOD、CAT和GSH-Px活性升高,ILK蛋白表达量水平升高(P<0.05);HG+15μg/mlAS-IV组及HG+5μg/mlAS-IV组差异无统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪甲苷(30μg/ml)的抗氧化应激作用对高糖诱导的足细胞损伤具有一定保护作用,可能与下调整合素连接激酶ILK系统有关。     

中波紫外线照射对HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）照射对永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p5 3mRNA和p53蛋白表达的影响.方法：以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测照射后不同时间点的p5 3mRNA和p5 3蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后同一特定时间点p5 3mRNA和p53蛋白的表达水平.结果：30mJ/cm^2的UVB照射后HaCaT细胞的p5 3mRNA和p5 3蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至照光后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,p53mR-NA和p53蛋白表达随剂量增加而增加.结论：HaCaT细胞p5 3mRNA和p5 3蛋白表达与UVB照射存在一定的时间和剂量关系.     

UVB照射对PIG1细胞增殖活性的影响

目的：探讨UVB照射对正常人黑素细胞PIG1细胞形态及增殖活性的影响。方法：取对数生长期的PIG1细胞,分别以50、100、200、300、400、500、600和700mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0h、24h和48h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在50～200 mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,PIG1细胞的增殖活性逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了一定剂量的UVB照射可以促进细胞增殖。结论：一定剂量的UVB照射有刺激PIG1细胞增殖及树突生长的作用。     

川芎嗪对中波紫外线诱导黑素细胞黑素生成的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对不同剂量中波紫外线(UVB)诱导正常人黑素细胞黑素合成的影响,并初步探讨其机理。方法:常规分离培养正常人黑素细胞,分别用30mJ/cm2、90mJ/cm2的UVB照射细胞,然后加入100μg/ml、300μg/ml、600μg/ml的TMP孵育至72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果:30mJ/cm2的UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP能显著抑制该效应,并呈剂量依赖性;90mJ/cm2的UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP则能减轻其细胞毒作用,并也表现为剂量依赖性,以600μg/ml的TMP作用最为显著,差异有统计学意义。结论:TMP不但能抑制低剂量UVB照射诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,而且还能减轻高剂量UVB照射对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。     

Immunomodulation of vascular endothelium. 1. Ultrastructural changes following ultraviolet B irradiation of peripheral veins

Immunologic function of endothelial cells is especially important in consideration of vein allografting for arterial reconstruction and in organ allotransplantation. Ultraviolet B radiation (UVB) has previously been shown to modulate graft immunogenicity, and to alter cell surface receptor function. In this study, superficial epigastric veins were UVB irradiated with 10, 24, 40, 80, and 150 mJ/cm2 while control veins were not irradiated; all specimens were examined for endothelial ultrastructural changes. Veins were perfuse-fixed at 1, 3, 7, 14, and 28 days after irradiation, and were evaluated by transmission electron microscopy and scanning electron microscopy. Control veins had a normal appearing endothelial lining, composed of elongated, attenuated endothelial cells. Veins irradiated with more than 24 mJ/cm2 displayed injured endothelial cells characterized by altered microvilli, defects in the cell surface, and a change in cell shape. The degree of cell damage correlated closely with increasing UVB dose. At doses of 80 mJ/cm2 or greater there was moderate to severe endothelial cell separation from the underlying basement membrane and an increase in cellular lysosomes. The effects of UVB were maximal at 3 days with virtual recovery in resurfacing of all specimens with endothelium 28 days after irradiation. These data suggest that UVB has a dose-dependent effect on venous endothelium that is morphologically reversible with time. Cell membrane changes seen following exposure to UVB may contribute to altered cell surface receptor function.