阻断TGF α—EGFR自泌环对胰腺癌细胞体外生长的影响

目的 研究阻断ＴＧＦα－ＥＧＦＲ自泌环对胰腺癌细胞生长的影响。方法 构建了反义ＥＧＦＲ 表达载体ｐＣＭＶ－ＡＳ－ＥＧＦＲ。转染反应反义ＴＧＦα转化的胰腺癌ＰＣ－７细胞,经Ｇ４１８筛选,获得稳定的双重转化细胞系ＰＣ－７／ＡＳ－ＴＧＦα／ＡＳ－ＥＧＦＲ。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ,Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ,＾１２５Ｉ－ＥＧＦ结合试验分析双重转染细胞系基因的整合及表达。ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞术,。原位     

表皮生长因子受体反义基因转染对人恶性胶质细胞体外生长的影响

目的 探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞Ｕ８７ＭＧ体外生长的影响,方法 构建ＥＧＦＲ反义基因表达载体,应用脂质体转染法将其导入Ｕ８７ＭＧ细胞,ＰＣＲ方法鉴定转染单克隆,Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交检测ＥＧＦＲ蛋白表达水平。通过绘制生长曲线和软琼脂集落形成实验测定反义ＥＧＦＲ基因对恶性胶质瘤细胞体外生长的抑制作用,结果 转染反义ＥＧＦＲ基因的细胞克隆株ＡＳ１－ＡＳ６的ＥＧＦＲ蛋白     

表皮生长因子受体反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞体外生长的影响

目的探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞Ｕ８７ＭＧ体外生长的影响。方法构建ＥＧＦＲ反义基因表达载体，应用脂质体转染法将其导入Ｕ８７ＭＧ细胞；ＰＣＲ方法鉴定转染克隆；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交检测ＥＧＦＲ蛋白表达水平；通过绘制生长曲线和软琼脂集落形成实验测定反义ＥＧＦＲ基因对恶性胶质瘤细胞体外生长的抑制作用。结果转染反义ＥＧＦＲ基因的细胞克隆株ＡＳ１ＡＳ６的ＥＧＦＲ蛋白表达水平均有不同程度的降低；ＡＳ１ＡＳ６细胞体外生长明显减慢，ＡＳ１ＡＳ６细胞克隆形成率明显降低。表明Ｕ８７ＭＧ细胞体外生长速度和恶性转化能力均与ＥＧＦＲ表达呈正相关。结论反义ＥＧＦＲ基因转染可以明显抑制Ｕ８７ＭＧ细胞生长，ＥＧＦＲ对Ｕ８７ＭＧ细胞生长具有重要的调控作用     

rhG—CSF cDNA表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

目的：构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的重组质粒。方法：利用化学合成引物，进行ＰＣＲ，对人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ５ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后，重组人表达载体ｐＥＤ，构建成质粒ＰＥＤ－ＧＣＳＦ，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，ＥＬＩＳＡ法定量测定ｒｈＧ－ＣＳＦ表达水平。结果：转染ＣＯＳ７细胞后４８ｈ收集的上清ｒｈＧ－ＣＳＦ表达量为５     

表达反义N-myc逆转录病毒载体对神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的影响

目的研究反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染后人神经母细胞瘤细胞在神经生长因子处理后的诱导分化情况,探讨Ｎ－ｍｙｃ在神经生长因子诱导分化中的意义。方法用基因重组技术构建表达反义Ｎ－ｍｙｃ的逆转录病毒载体。用ＴｒａｎｓｆｅｃｔａｍＲｅａｇｅｎｔ等多种基因转染方法,转染已经基因转染恢复了神经生长因子受体表达的人神经母细胞瘤系,建成表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系。用神经生长因子处理转化细胞系,观察ＮＧＦ是否能诱导分化。同时用ＴＵＮＥＬ原位凋亡检测技术及超微结构技术研究表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系凋亡的情况。结果表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系经单链ＲＮＡ探针杂交,证实其Ｎ－ｍｙｃ的表达明显降低。用神经生长因子处理这些转化细胞系,细胞出现明显的形态学分化。ＴＵＮＥＬ技术及超微结构研究表明,经反义Ｎ－ｍｙｃ转染的细胞系细胞凋亡增多。结论反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能有效抑制Ｎ－ｍｙｃ的表达,进而促进神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞的分化。反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能使神经母细胞瘤细胞凋亡增多。     

rhG-CSF cDNA高表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

目的：构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的重组质粒。方法：利用化学合成引物，进行ＰＣＲ，对人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ５＇ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后，重组入表达载体ｐＥＤ，构建成质粒ｐＥＤ－ＧＣＳＦ，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，ＥＬＩＳＡ法定量测定ｒｈＧ－ＣＳＦ表达水平。结果：转染ＣＯＳ７细胞后４８ｈ收集的上清ｒｈＧ－ＣＳＦ表达量为５２ｎｇ／ｍｌ，７２ｈ为２３０ｎｇ／ｍｌ，显示ｒｈＧ－ＣＳＦ获得了暂时性高表达。结论：ｐＥＤ－ＧＣＳＦ是一个能在哺乳动物细胞中高效表达ｒｈＧ－ＣＳＦ的真核表达质粒。     

贮脂细胞TGF-1反义基因转移及对细胞外基质合成的抑制作用

目的探讨ＴＧＦβ１在肝纤维化贮脂细胞激活和细胞外基质产生中的作用。以及对细胞外基质基因的表达和自身ｍＲＮＡ表达的作用。方法将ＴＧＦβ１的基因序列反向插入逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ,构建反义ＴＧＦβ１的逆转录病毒载体ｐＬＡＴＳＮ,用ＰＡ３１７包装细胞包装,获得高滴度的逆转录病毒。将携有反义ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＬＡＴＳＮ导入人的贮脂细胞株ＬＩ９０内,选择稳定转染的贮脂细胞株培养,应用ＰＣＲ、ＲＴＰＣＲ检测反义基因的表达,用ＥＬＩＳＡ、免疫组织化学和原位杂交等方法检测ＴＧＦβ１和细胞外基质的产生。结果贮脂细胞株ＬＩ９０内有反义ＴＧＦβ１的表达,且其合成分泌ＴＧＦβ１和细胞外基质如ＦＮ、ＣｏｌＡ１降低。结论反义ＴＧＦβ１ＲＮＡ可以抑制贮脂细胞的激活和内源性ＴＧＦβ１和细胞外基质的产生,为抗纤维化基因治疗提供理论基础     

H—2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

目的 克隆Ｈ－２Ｋ＾ｂｃＤＮＡ及研究其在多种真核细胞中的表达。 方法 ＲＴ－ＰＣＲ法扩增Ｈ－２Ｋ＾ｂｃＤＮＡ,克隆入双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ,ＰＡ３１７包装出重组病毒后,分别感染ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＯＳ７及ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ,ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ分析目的基因表达,ＦＡＣＳ分析Ｈ－２Ｋ＾ｂ在细胞膜上的表达。结果 以双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ介导,分别建立了Ｈ－２Ｋ＾ｂ基因转导细胞：ＮＩＨ３Ｔ     

人结肠癌中EGFR、EGF及TGF－α的基因表达

本文报道了人结肠癌细胞系（ＬＳＴ１７４、ＨＴ１０、Ｌｏｖｏ）中表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）及其配体即表皮生长因子（ＥＧＦ）和转化生长因子（ＴＧＦα）的基因表达。从人结肠癌细胞系细胞提取总ＲＮＡ，经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ吸印转移后，用［α－３２Ｐ］－ｄＣＴＰ标记的ＥＧＦ、ＴＧＦα及ＥＧＦＲｃＤＮＡ探针进行杂交，放射自显影结果表明三个结肠癌细胞系中均有ＥＧＦｍＲＮＡ及ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达。ＬＳＴ１７４ＨＴ１０中亦有ＴＧＦα的基因表达，Ｌｏｖｏ无ＴＧＦα的表达。结果说明人结肠癌存在生长因子自泌循环。这些癌细胞系中自泌的生长因子作用于自身的ＥＧＦＲ，不断地刺激其自身增殖，这可能是癌细胞自主无休止生长的主要原因之一。     

用血清药理学为芝浸膏GLE的抗肿瘤作用机制

目的：探讨灵芝浸膏（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ Ｅｘｔｒａｃｔ，ＧＬＥ）的抗作用及其机制。方法；采用血清药理学与体内外抑癌实验相结合方法。ＭＴ衍测肿瘤细胞增殖程度，流式细胞仪测细胞凋亡。同时采用生物法测ＴＮＦ－α，ＥＬＩＳＡ测定ＩＦＮ－γ，并用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ表达。结果：（１）ＧＬＥ（５、１０、２０ｇ．ｋｇ＾－１）灌胃显抑制小鼠移植发现从瘤Ｓ１８０的生长；（２）ＧＬＥ直接加入     

增殖细胞核抗原和表皮生长因子受体及c-erbB_2蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达

目的观察ＰＣＮＡ、ＥＧＦＲ和ｃ－ｅｒｂＢ２基因蛋白在宫颈鳞状上皮癌中的表达，探讨其意义。方法对４５例宫颈鳞状细胞癌进行免疫酶标记，并设２０例宫颈慢性炎标本作对照。结果正常鳞状上皮仅少数基底细胞表达ＰＣＮＡ、ＥＧＦＲ和ｃ－ｅｒｂＢ２呈可忽略的弱阳性；在鳞状上皮癌组织中ＰＣＮＡ表达明显高于正常及化生的鳞状上皮且和细胞分化呈显著负相关，２５／４５例、１３／４５例分别过度表达ＥＧＦＲ、ｃ－ｅｒｂＢ２蛋白。结论ＰＣＮＡ、ＥＧＦＲ、ｃ－ｅｒｂＢ２蛋白的表达在判断良恶性病变、肿瘤的恶性程度推测其预后具有一定的价值，特别是对活检标本进行标记可为临床选择进一步治疗的方法提供依据。     

小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

幽门螺杆菌感染的高增殖状态及其与TGF—α,EGFR表达的关系

本研究采用免疫组化ＬＳＡＢ法对幽门螺杆菌阳性和阴性胃粘膜增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）转化生长因子α（ＴＧＦ－α）表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达进行对比分析，结果表明ＨＰ阳性胃粘膜ＰＣＮＡ，ＴＧＦ－α，ＥＧＦＲ的表达显著高于ＨＰ阴性胃粘膜（Ｐ〈０．０５），且在不典型增生时达高峰，结果提示ＨＰ感染的胃粘膜处于高增殖状态，粘膜高增殖状态可能与ＴＧＦ－α／ＥＧＦＲ过量表达有关，这也是ＨＰ致胃癌发生的机制之     

大肠癌上皮c-myc蛋白、表皮生长因子受体和增殖细胞核抗原的表达及其与预后意义

应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ｃ－ｍｙｃ、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）对有随访资料的大肠癌的表达。结果提示：ｃ－ｍｙｃ阳性表达中，大肠癌（７０４９％）明显高于正常粘膜（２６６％，Ｐ＜０．０５）。正常大肠粘膜未发现ＥＧＦＲ阳性表达，而大肠癌有较高表达（７７０４％）。ＰＣＮＡ阳性表达中，大肠癌（４６４０±２６．５）％明显高于正常粘膜（１５１２±５．４４）％，Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ表达与大肠癌Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。ＰＣＮＡ表达与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。大肠癌４年生存率ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达＞６５％组均明显低于＜２５％组（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦＲ－ＬＩ和ＰＣＮＡ－ＬＩ与生存期均有明显负相关。结论表明：ｃ－ｍｙｃ、ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的大肠癌细胞增殖有相关性。ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的生存期均有明显负相关，该两项指标对大肠癌临床诊治和预后的评估有重要价值。     

人肾癌组织EGFR和TGF—α的分布及其意义

对肾癌组织的表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和转化生长因子α（ＴＧＦ－α）的表达及ＥＧＦＲ基因的转录进行研究,方法采用ＬＳＡＢ免疫组化和Ｄｉｇｏｘｉｎ标记原位杂交法,结果显示：４６例肾癌组织ＥＧＦＲ和ＴＧＦ－α的表在阳性率明显高于３８例癌旁对照正常肾脏组织,ＥＧＦＲ为５４．３％和２１．０％,ＴＧＦ－α为３９．１％和１３．２％,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）;部分癌组织ＥＧＦＲ和ＴＧＦ－α同时表达;ＥＧＦ     

人血小板生成素cDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的：克隆人血小板生成素（ｈＴＰＯ）ｃＤＮＡ，并研究其在ＣＯＳ－７细胞中的表达。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ法获得ｈＴＰＯ ｃＤＮＡ，测序后克隆到真核表达载体ｐＥＤ上，以ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，巨核细胞集落形成培养法测表达产物活性。结果和结论：获得的ｈＴＰＯ ｃＤＮＡ和献报道的序列一致。转染细胞ＲＮＡ斑点杂交结果显示ＴＰＯ ｃＤＮＡ获得转录，转染后４８和７２ｈ的细胞上清均可测到Ｔ     

人结肠癌中EGFR,EGF及TGF—a的基因表达

本文报道了人结肠癌细胞系中表皮生长因子受体及其配体即表皮生长因子和转化生长因子的基因表达。从人结肠癌细胞系细胞提取总ＲＮＡ，经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ吸印转移后，用［ａ－＾３２Ｐ］－ｄＣＴＰ标记的ＥＧＦ、ＴＧＦａ及ＥＧＦＲｃＤＮＡ探针进行杂交，放射自显影结果表明三个结肠癌细胞系中均有ＥＧＦｍＲＮＡ及ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达。ＬＳＴ１７４、ＨＴ１０中亦有ＴＧＦａ的基因表达，Ｌｏｖｏ无ＴＧＦａ的表达。结果说明人     

HCV重组体转染细胞系的研究

目的：建立ＨＣＶ重组体转染ＳＭＭＣ７７２１肝缲细胞模型。方法：采用ＦＵＧＥＮＥ＾ＴＭ６转染法，然后用ＲＴ－ＰＣＲ法测定细胞内重组体ｍＲＮＡ瞬时表达情况：结果：６７．５％的培养孔可筛选到转染细胞表达重组体ｍＲＮＡ。结论：该转梁法效率高，建立的细胞模型可用于筛选抗病毒转录的药物。     

热休克蛋白90反义核酸抑制人消化道肿瘤细胞生长的作用

近年来,热休克蛋白90(ＨＳＰ90)的生物学作用受到人们的关注。ＨＳＰ90为胞浆分子伴侣的主要成员,其在肿瘤细胞生长、增殖中的作用值得研究。我们将反义ＨＳＰ90重组子转染人胃癌细胞系ＳＧＣ7901、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ7901/ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ7402及人食管癌细胞系Ｅｃ109,研究了ＨＳＰ90蛋白在这些细胞中的表达及其对细胞生长的影响。一、材料及方法1细胞系:人胃癌细胞系ＳＧＣ7901、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ7901/ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ7402及人食道癌细胞系Ｅｃ109;ＨＳＰ90反义核酸转染细胞ＡＨＳＧＣ7901、ＡＨ…     

EGF、EGFR及PCNA在肺癌中的表达

用Ｓ－Ｐ免疫组化方法对５２例原发性肺癌作ＥＧＦ、ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ检测。结果显示,４６例ＮＳＣＬＣ中ＥＧＦ、ＥＧＦＲ的阳性表达率分别为６０．９％和６３％,６例小细胞癌和正常肺组织无表达。有转移的肺癌组ＥＧＦＲ的阳性表达率高于无转移组（Ｐ〈０．０５）。５２例肺癌中ＰＣＮＡ的阳性表达率为７８．８％。ＮＳＣＬＣ中ＥＧＦ、ＥＧＦＲ的表达与肺癌分期、病理分级以及ＰＣＮＡ的表达呈正相关。以上结果提示ＥＧＦ、Ｅ