乙型肝炎病毒e抗原阴性的乙型肝炎患者乙型肝炎病毒大蛋白检测分析的意义

<正>乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large envelope protein,HBV-LP)存在于感染性颗粒(Dane颗粒)和亚病毒管状颗粒上,是病毒形成完整外膜的重要标志,与病毒复制、病毒颗粒组装和从细胞内释放调节密切相关。近年来,发现它对反映乙型肝炎病毒(HBV)在体内感染及复制状况具有越来越重要的临床意义[1-5]。本文对乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性的乙型肝炎患者血清标本分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA、酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HBV-LP。对HBV-LP在反映HBV感染与复制等方面的作用进一步研究,现报告如下。     

B型肝炎及D型肝炎

病毒简介 B型肝炎病毒属于DNA病毒,其核心中之基因体只有3.2kbp,构造非常独特,为不完全之双链DNA(图1)。患者血中所含之病毒颗粒有两大类:(1)Dane particles为完整的球形病毒颗粒,具感染性,大小约42-47nm;(2)不完整病毒颗粒,仅含病毒之表面抗原,不含病毒基因体,为球形或杆状,大小约16-25nm。血中不完整病毒颗粒之数量为完整病毒颗粒之1000倍以     

SARS冠状病毒RNA聚合酶编码区分析

SARS冠状病毒(SARS coronavirus ,SARS CoV)和同家族的其他冠状病毒一样,是一类单链的正义RNA病毒 ( single-stranded, (+)sense RNA virus).与其他种类的病毒(如负义RNA 病毒)相比,这类病毒有两个最重要的特征:(1)在其成熟的病毒颗粒中并没有RNA聚合酶(viral RNA polymerase)存在,即病毒复制、转录所需的病毒特有的RNA聚合酶,是在侵入宿主细胞之后才合成的. 而且,只是在病毒的扩增阶段,保留在宿主细胞内行使功能,并不参与病毒颗粒的组装.     

感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(sARS)患者感染的Vero细胞,为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料.方法标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞,对培养液负染色标本和Vero细胞超薄切片标本进行TEM观察.结果在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒,病毒颗粒为圆形或椭圆形,外周有冠状排列的纤突,病毒颗粒直径约80～160 nm,纤突长度约20～40 nm.感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中,主要在内质网和空泡内,可见群集的大小较一致的病毒颗粒.结论本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARS冠状病毒(SARS-CoV)相符.     

HPV16 L1作为肿瘤疫苗载体的研究及进展

病毒样颗粒是近几年发展起来并具有潜在临床应用前景的一类肿瘤疫苗载体[1].所谓的病毒样颗粒(VLP),是一类由某些病毒的衣壳蛋白组分自发装配而成,不含病毒遗传物质,具有类似病毒立体构象(多为20面体结构)的颗粒的总称.现已发现约有30多种病毒的衣壳蛋白组分都可形成VLPs,如人类乳头状病毒(HPV)、乙型和丙型肝炎病毒(HBV,HCV)、SV40、JC等[2].     

毛蚶传播甲型肝炎的病原学证据——核酸分子杂交和免疫电镜初步结果

本文应用cDNA-RNA分子杂交技术和免疫电镜法,检测上海市1988年初甲型肝炎(甲肝)流行期前的市售毛蚶。将毛蚶鳃和消化腺研碎,经酚-氯仿提取和乙醇沉淀法提取RNA,用~(32)P标记的pHAV(LB) 228甲肝病毒cDNA探针进行杂交。从7份毛蚶样品中检出一份甲肝病毒RNA阳性。另外将毛蚶鳃和消化腺的粗制悬液与甲肝病人恢复期血清孵育后电镜观察,看到形态大小一致的成堆病毒样颗粒,直径约为27mm,与甲肝病人粪便样品中所见病毒样颗粒相似。在7份毛蚶样品中还见到几种不同形态颗粒,大的病毒样颗粒直径可达45mm。     

名词解释

1.HBV:乙型肝炎病毒。1970年Dane等人从乙型肝炎病人血清中查到直径42nm的球形颗粒。现已证实是一双壳病毒,目前认为是乙型肝炎病毒的完整颗粒(以往也有称之为Dane颗粒的)。 2.HBsAg:乙型肝炎表面抗原。现以证明HBV颗粒是由内核与外套二部分形成的双壳病毒颗粒。外套由蛋白质,脂体和碳水化合物组成,在乙型肝炎病毒表面,称为HBsAg。     

甲型肝炎病毒(HAV)的性质

已经确认,HAV 是一种有立方对称性的小病毒(25—28毫微米)。在形态上它与含 RNA的小核糖核酸病毒(picornaviruses)和含 DNA 的微小病毒(parvovirus)相似。HAV 已经在人、黑猩猩、狨的粪便中,在黑猩猩的胆汁中以及急性甲型传染性肝炎病人、黑猩猩和狨的血清中查到过。虽然其他大小与形态特点的病毒样颗粒也曾在受染者的粪便标本中找到过,但只有约为27毫微米大小的颗粒显得在血清学上和时间上与 HAV 感染有关。在免疫电镜下可见到不着色的实颗粒和着色的空颗粒。还没有发现病毒的囊膜,也没有确证含有亚单位成分。     

感染Vero细胞中SARS病原体的电镜观察

目的 用透射电子显微镜(TEM)观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染的Vero细胞，为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料。方法 标本为上海市疾病控制中心送检的SARS患者鼻咽拭子接种感染的Vero细胞．对培养液负染色标本和vero细胞超薄切片标本进行TEM观察。结果 在负染色标本和超薄切片标本中均可观察到病毒．病毒颗粒为圆形或椭圆形，外周有冠状排列的纤突，病毒颗粒直径约80～160nm，纤突长度约20～40nm、感染细胞的病毒颗粒分布在细胞质中，主要在内质网和空泡内，可见群集的大小较一致的病毒颗粒。结论 本例电镜所见病毒颗粒大小、形态与文献报道的SARs冠状病毒(SARS—CoV)相符。     

鹅血清中发现鸭乙型肝炎病毒样颗粒

用DNA斑点杂交、电镜、免疫电镜和斑点酶免疫法(Dot EIA),在鹅血清中发现一种与鸭乙型肝炎病毒(DHBV)相似的病毒颗粒。用DNA斑点杂交法和Dot EIA在鹅群中测得DHBV DNA和DHBsAg的阳性率均为32.43%(12/37)。对阳性血清进行电镜观察,见到直径30～60nm的球型颗粒,形态与DHBV相似。抗DHBsAg能使病毒颗粒发生凝聚。用CsCl密度梯度法对DHBV阳性血清进行超速离心,发现病毒颗粒分布在1.16～1.24g/ml的密度范围内,与DHBV的密度范围(1.15～1.25g/ml)接近一致,表明鹅血清中的病毒颗粒,不仅在形态学上与DHBV相似,且核酸序列与DHBV也有同源性,由其编码产生的表面抗原成分与DHBsAg有共同的抗原性。作者提出,这种病毒可能是1.独立存在于鹅体内的一种新的DNA病毒,与肝脏的关系有待探讨;2.作用于不同宿主的DHBV;3.DHBV的不同亚型。     

青海喜马拉雅旱獭类人乙型肝炎疫毒的发现(摘要)

本研究应用电镜、血清学和分子生物学技术,对青海喜马拉雅旱獭(Marmotahimalayana)血清进行了检测,发现类人乙型肝病毒颗粒,见照片并与人乙型肝炎病毒有血清学交叉反应,从而在国内首次证实在喜马拉雅旱獭中存在类人乙型肝炎病毒,推测很可能是旱獭肝炎病毒(WHV) 一、病毒形态电镜可见成簇的直径为20～28nm球形颗粒,并有少量20×40-100丝状体,形态类似人乙型肝炎表面抗原颗粒,偶而可见个别不典型的Dane颗粒。     

病毒性肝炎的研究进展

近年来国内外对病毒性肝炎的研究取得较大的进展,现综述于下。病原学一、甲型肝炎(一) 甲型肝炎抗原的发现:近年来用免疫电镜从急性甲型肝炎病人的粪便中,发现一种在血清学与甲型肝炎相关的病毒样颗粒(抗原),其直径为27mμ,而在感染前的粪便则不发现,以这种颗粒为抗原可在甲型肝炎病人血清中检出相应的抗体。这些抗体可凝集粪便中的病毒样颗粒,但对HPsAg与HBcAg则不起反应。此种抗原(HAAg)感染黑猩     

秋季婴幼儿腹泻病原学研究

1973年 Bishop 等用电镜方法从急性非细菌性婴幼儿胃肠炎病儿十二指肠粘膜上皮细胞中发现了新的病毒颗粒。同时Flewett 等也从病儿粪便中发现类似颗粒,并认为此病毒在形态上不同于呼肠病毒(Reovirus)和环状病毒(Orbivirus),     

1981～1982年朝鲜出血热病毒的研究进展

<正> 两年前,作者曾对朝鲜出血热病毒(KHFV)的研究简史和进展进行了详细介绍。本文将就KHFV近二年的研究简要介绍如下: 一、KHFV的形态结构和理化性质 1.形态结构. 从二种不同的KHFV敏感细胞(Vero细胞E-6克隆系和A-549细胞系)提纯的病毒颗粒经免疫电镜检查发现,KHFV(Hantaan病毒)颗粒呈圆球形或卵圆形,具有包膜,直径80～115nm(平均92.5nm)或80～110nm(平均95nm)。病毒颗粒周围有空心状表面     

克山病心肌电子显微镜初步观察总结(摘要)

急、亚、痨三型克山病心肌,均有特殊结构和细胞膜系统(包括间盘、肌膜及横管)的广泛病变。特殊结构有三型,该结构与已知的心肌颗粒(糖元、脂褐素及核蛋白体等),以及心房肌特殊颗粒和心室肌的棱形小体不同,而与酒精性心脏病心肌出现的类似 Polio 和 Coxsaokie 一类病毒的病毒样颗粒相近似。但与此种病毒样颗粒尚有若干明显的差别,故特殊结构恐非此种病毒样颗粒的同系物。它可能是一种特殊的蛋白性物     

对乙肝两对半检测质量控制的一点看法

乙型肝炎病毒(HBV)抗原,最初由Blumbeyg氏(1963年)在澳大利亚土著人血清中发现的,因此称为澳大利亚抗原,后经过进一步研究发现,乙型肝炎病毒为一球型颗粒,相当于过去发现的Dane颗粒,与HBV相关的颗粒有3种,大球形、小球形及管形,是DNA病毒之一,人体感染了乙型肝炎病毒后,血清中可能存在有3种不同的抗原抗体系统.     

小鼠腹水型网状细胞肉瘤的电子显微镜观察

1963年,中国医学科学院输血及血液学研究所建立了小鼠腹水型网状细胞肉瘤(Ascitic reticulumsarcoma,ARS)模型,并发现瘤细胞的超薄切片里有池内型病毒样颗粒。1966年和1969年曾分别报道应用ARS瘤细胞制成的无细胞提取液注射新生的昆明种乳鼠,相应地诱发了小鼠淋巴细胞性白血病(代号L6565)和粒细胞性白血病(代号T638)。我们在进一步研究这两种白血病与ARS瘤株的病毒病因关系时发现,ARS瘤细胞内除有已报道过的池内A型病毒样颗粒外,还发现有C型病毒样颗粒存在。现将电子显微镜观察结果简略报道如下。     

人GLUT3基因RNA干扰病毒载体的构建与鉴定

目的：筛选出人GLUT3基因有效的RNA干扰(RNA interference,RNAi)序列,并构建出慢病毒RNAi载体。方法：根据GLUT3基因mRNA序列设计合成siRNA片段4个,分别定向克隆至pLV-shRNA载体上,并将构建的质粒转染HeLa细胞,运用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测GLUT3mRNA的表达量验证其干扰效果。筛选出其中有效的质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞进行包装,收获并浓缩重组慢病毒颗粒,测定病毒颗粒滴度后,将病毒感染U251胶质瘤细胞以测定感染慢病毒干扰载体后胶质瘤细胞内GLUT3的表达情况。结果：重组RNAi质粒pLV-shRNA-GLUT3-1,pLV-shRNA-GLUT3-2,pLV-shRNA-GLUT3-3,pLV-shRNA- GLUT3-4经测序证实质粒载体构建成功;4个干扰质粒在HeLa细胞中均可以明显抑制GLUT3-mRNA的表达。pLV-shRNA-GLUT3可以在293T细胞中成功包装。收集293T细胞分泌的病毒上清浓缩后测定病毒颗粒LV-GLUT3滴度为1.5×109 TU/mL。与感染阴性对照慢病毒颗粒(0.3641±0.044)相比,胶质瘤U251细胞感染慢病毒颗粒LV- GLUT3后,GLUT3蛋白相对表达明显降低(0.108±0.016,t=16.267,P<0.001)。结论：成功构建了人GLUT3基因有效的慢病毒RNAi载体,为进一步研究GLUT3的生物学功能奠定了基础。     

HTNV嵌合VLP促进小鼠骨髓细胞活化的实验研究

目的探讨嵌合有免疫刺激分子CD40配体(CD40L)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的汉滩病毒(HTNV)样颗粒(VLP)对小鼠骨髓细胞活化的影响,以确定嵌合汉滩病毒样颗粒的生物学活性。方法利用真核细胞瞬时表达VLP、VLP-CD40L、VLP-GM-CSF,纯化后与小鼠骨髓细胞共培养,通过流式细胞术检测小鼠骨髓细胞活化情况。结果三种汉滩病毒VLP均能促进小鼠骨髓细胞活化(P0.05),其中嵌合有GM-CSF因子的VLP促进小鼠骨髓细胞活化更为明显(P0.01)。结论真核细胞表达的三种汉滩病毒VLP均有一定的生物学活性,为进一步研究汉滩病毒VLP疫苗奠定基础。     

转染携带人胰岛素基因慢病毒载体提高颗粒脂肪移植物存活率的实验研究

目的探讨转染携带人胰岛素基因慢病毒载体提高颗粒脂肪移植物存活率的可行性。方法将携带人胰岛素基因慢病毒载体转染后的人脐带人间充质干细胞(hUCMSCs)与人颗粒脂肪复合分为3组:A组[移植颗粒脂肪1 mL+0.4 mL达尔伯克(氏)必需基本培养基(DMEM)],B组[颗粒脂肪1 mL+0.4 mL DMEM+2×10~5 hUCMSCs(CM-Dil标记)],C组[颗粒脂肪1 mL+0.4 mL DMEM+2×10~5hUCMSCs(CM-Dil标记+转染)]。使用2 mL注射器接16号针头注射到Wistar大鼠背部皮下。3月后,每组取6只沿被膜分离移植物,取样行湿重测定,HE、马松三色染色,荧光观察。结果 C组湿重、血管数均高于A、B组(P<0.05),存活率(移植后脂肪湿重/移植前脂肪湿重)高于A、B组(P<0.05)。结论将携带重组人胰岛素慢病毒载体转染后的hUCMSCs与脂肪颗粒复合移植能提高颗粒脂肪移植成活率。