学习记忆训练对全脑缺血大鼠认知能力的影响

目的探讨学习记忆训练对全脑缺血大鼠空间学习记忆能力的影响及检测脑源性神经营养因子的变化。方法选用健康雄性SD大鼠90只随机分为假手术组、对照组和训练组,采用改良Pulsinelli’s 4血管闭塞法(4-VO)制作全脑缺血大鼠模型,术后1周以Y型电迷宫训练大鼠,分别在训练7d、14d、21d后应用Y型电迷宫检测比较3组大鼠的空间学习记忆能力的差异;HE染色观察CA1区神经元变化;免疫组化检测脑源性神经营养因子的表达。结果训练21d后,对照组与假手术组和训练组比较,Y型电迷宫全天总反应时间和潜伏期明显延长(P<0.05),错误反应次数明显增多(P<0.05)。对照组CA1区脑源性神经营养因子的光密度值明显低于训练组(P<0.05)。结论学习记忆训练可以改善全脑缺血大鼠的空间学习记忆能力,提示应用学习记忆训练方法可以改善全脑缺血损伤后引起的学习记忆障碍。     

NGF、BDNF在脑梗死及糖尿病合并脑梗死大鼠脑中的表达

目的探讨神经生长因子(nerve growth factorNGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neu— rotropic factor,BDNF)在大鼠单纯性脑梗死时脑中的表达情况及糖尿病对它的影响。方法将SD大鼠分成对照组、单纯脑梗死组和糖尿病合并脑梗死组,采用线栓法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,2％链脲佐菌素按60mg／ kg腹腔注射制作糖尿病模型,用免疫组化SABC方法检测脑组织NGF、BDNF蛋白表达。结果正常脑组织有少量NGF、BDNF的表达。局灶性脑缺血后24h,NGF、BDNF在梗死的缺血边缘区均有表达上调,其中单纯脑梗死比糖尿病合并脑梗死的NGF、BDNF表达更为明显。NGF、BDNF表达见于缺血边缘区神经元及胶质细胞的胞浆。结论 NGF、BDNF在脑梗死时表达上调是机体对缺血性损伤的内源性代偿机制。糖尿病合并脑梗死时NGF、BD- NF表达上调的不明显,NGF、BDNF表达不足可能与糖尿病加重梗死有关。     

预防性应用尼莫地平对面神经损伤大鼠BDNF及GDNF表达的影响

目的探讨预防性应用尼莫地平对面神经损伤大鼠脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响。方法 96只SD大鼠随机分为假手术组、单纯损伤组、尼莫地平预处理组、尼莫地平后处理组,每组24只。假手术组不损伤面神经,单纯损伤组建立大鼠面神经损伤模型。尼莫地平预处理组在模型建立前给予尼莫地平,持续给药到术后2周。尼莫地平后处理组在模型建立后给予尼莫地平,持续给药2周。应用Western blot方法观察大鼠面神经损伤后1、3、6个月BDNF和GDNF的表达。结果与单纯损伤组相比,尼莫地平后处理组造模后1个月大鼠BDNF、GDNF的表达均升高(均P<0.05)。尼莫地平预处理组和后处理组BNDF和GDNF的表达在各时间点差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论预防性应用尼莫地平可以调节面神经损伤大鼠GDNF和BDNF的表达,充分发挥其神经保护作用。     

反复惊厥对P77PMC大鼠脑内BDNF蛋白表达的影响

采用免疫组织化学方法观察了反复听源性惊厥（ＡＣＳ）对遗传性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ脑内脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）蛋白表达的影响。结果发现,在未发生ＡＣＳ的Ｐ７７ＰＭＣ大鼠脑内,ＢＤＮＦ蛋白的基础表达可见于海马齿状回门区神经元、ＣＡ３区锥体细胞及大脑皮质神经元的胞浆内,在经过３０次ＡＣＳ发作后,鼠脑内齿状回门区、ＣＡ１－ＣＡ３区以及皮质区免疫标记阳性的的神经元数目增多,标记强度增强。除了胞体,在神经元突起上也可见明显的免疫标记。这表明在Ｐ７７ＰＭＣ这种遗传性癫痫易感大鼠模型中,非人为伤害因素造成的惊厥反复发作能导致脑内ＢＤＮＦ表达显著增高。     

高血压脑出血患者血清SF、MMP-9、BDNF的表达及意义

目的探讨高血压脑出血(HICH)患者血清铁蛋白(SF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及脑源性神经营养因子(BDNF)的表达及意义。方法选取2016年6月至2019年6月期间收治的90例HICH患者,检测患者血清SF、MMP-9及BDNF水平,分析不同神经缺损程度患者血清SF、MMP-9、BDNF水平差异,探讨血清SF、MMP-9及BDNF表达与HICH预后的关系。结果随着神经缺损程度的加重,HICH患者血清SF、MMP-9水平逐渐升高,而血清BDNF水平则明显降低(P0.05);HICH患者血清SF、MMP-9水平与NIHSS评分显著正相关,血清BDNF水平与NIHSS评分则呈负相关关系(P0.05)。不同预后患者血清SF、MMP-9及BDNF水平存在差异统计学意义(P0.05)。Logistic回归分析显示,血清SF、MMP-9、BDNF表达是影响HICH患者预后的重要因素(P0.05)。联合检测血清SF、MMP-9、BDNF对评估HICH不良预后的AUC为0.960,灵敏度为93.5%,特异度为89.8%。结论血清SF、MMP-9、BDNF水平与HICH患者病情和预后存在密切关系,检测以上三种指标对HICH患者预后评估具有参考作用。     

糖氧剥离对海马神经元Furin、BDNF表达水平的影响

目的 探讨海马神经元在糖氧剥离时原蛋白转化酶Furin是否介导了脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平的变化。方法 通过OGD模拟缺血缺氧诱导海马神经元,采用免疫印迹观察OGD诱导后不同时间点BDNF、Furin动态表达水平变化。结果 海马神经元经OGD诱导后再灌注12 h内BDNF表达水平下调约30%(P<0.01); 再灌注24 h BDNF表达水平下调50%(P<0.01); 再灌注48 h其下降约70%,72 h下调70%; 与对照组比较有明显差异(P<0.001)。Furin表达水平呈进行性升高,即再灌注12 h内Furin表达水平上调约1.3倍(P>0.05); 再灌注24 h时Furin表达水平上调2.1倍(P<0.001); 再灌注48 h其上调2.5倍,72 h上调3.14倍; 与对照组比较有明显差异(P<0.001)。结论 经OGD诱导的海马神经元BDNF表达水平随再灌注时间呈进行性下降而Furin表达水平呈逐步上调。这一现象提示糖氧剥离时Furin未介导海马神经元内BDNF的细胞内分泌过程,在缺血缺氧时BDNF复杂的酶切过程有待进一步研究证实。     

银杏提取物对衰老小鼠学习记忆能力及海马BDNF表达的影响

目的探讨银杏提取物（EGb）对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力及海马区脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法用D-半乳糖皮下注射制备衰老小鼠模型,同时腹腔注射不同剂量的EGb治疗。六周后,用开阔行为试验检测小鼠在新异环境中的自发行为,用westernblot检测海马BDNF蛋白表达水平。结果50mg/kg和100mg/kgEGb均可显著增加D-半乳糖致衰老小鼠在新异环境中的自发活动和探究行为（P〈0.05）,抵御D-半乳糖对小鼠大脑学习记忆功能损伤作用（P〈0.05）,并可显著提高衰老小鼠海马组织中BDNF的表达（P〈0.05）。结论EGb可显著提高D-半乳糖所致衰老小鼠的学习记忆能力,并提示这种提高可能与上调其海马BDNF的表达有关。     

基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定

目的构建脑源性神经营养因子（BDNF）基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达，以获取高产量、低成本、高纯度且具有生物学活性的BDNF蛋白。方法以人的全长BDNF cDNA为模板，用PCR方法扩增成熟区BDNF的cDNA，应用基因重组技术将人BDNF cDNA克隆到质粒pET-30a（＋）中，进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）LysS，经IPTG诱导表达后，用Ni-NTA亲和层析纯化获取蛋白，用SDS-PAGE和western blot方法鉴别，噻唑蓝（MTT）法检测重组蛋白对PC12细胞增殖的影响。结果扩增出的人BDNF cDNA片段克隆进了原核表达载体，经酶切和核酸测序鉴定，得到了正确的重组质粒pET-BDNF，并在大肠杆菌中获得了表达。纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带；用抗BDNF的抗体进行western blot分析证明目的蛋白获得了表达。基因重组BDNF蛋白能够促进PC12细胞增殖。结论本研究成功构建了表达基因重组人BDNF的原核表达载体，基因重组人BDNF蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化，所获得的基因重组蛋白具有较好的生物学活性。     

电针对脑出血大鼠神经功能、学习记忆能力及GAP-43表达的影响

目的研究电针对脑出血大鼠神经功能、学习记忆能力及GAP-43表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、假手术组及电针组,每组各10只大鼠,模型组及电针组大鼠采用Rosenberg法制备大鼠脑出血模型,电针组于制备模型后24h给予电针治疗,连续治疗21d后采用NSS神经缺损体征评分法检测大鼠神经功能,水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测出血周边区GAP-43的表达水平。结果与模型组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分明显降低,逃避潜伏期显著缩短,而出血周边区GAP-43表达显著增加（P均〈0．01）。结论电针可能通过增加大鼠出血周边区GAP-43表达而促进神经元重塑,进而改善其神经功能及学习记忆能力。     

脑溢安对脑出血大鼠脑内bFGF表达的影响

目的：探讨国家三类新药－脑溢安颗粒（NYA）对脑出血大鼠脑出碱性成纤维因子（bFGF）蛋白和mRNA表达的影响，从而为治疗脑出血，促进 神经功能的修复提供理论依据。方法：用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，并进行行为学计分，免疫组化、Northern blot4及吸光度扫描。结果：模型组的行为学计分在术后24h时开始降低，7d时逐渐减弱，脑溢安组在各个时间的表达均强于模型组，结论：脑溢安治疗脑出血有增强bFGF的表达，从而使行为学得到改善，这可能是脑溢安促进神经功能修复的主要机制之一。     

Deprivation of endogenous brain-derived neurotrophic factor results in impairment of spatial learning and memory in adult rats

Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) is abundantly expressed in the hippocampus and cerebral cortex and is involved in synaptic plasticity and long-term potentiation (LTP). The present study was under taken to investigate whether endogenous BDNF was required for spatial learning and memory in a rat model. Antibodies to BDNF (anti-BDNF, n=7) or control immunoglobulin G (control, n=6) were delivered into the rat brain continuously for 7 days with an osmotic pump. The rats were then subjected to a battery of behavioral tests. The results show that the average escape latencies in the BDNF antibody treated group were dramatically longer than those of the control (F=13.3, p<0.001). The rats treated with control IgG swam for a significantly longer distance in the P quadrant (where the escape plane had been placed) compared with the other three quadrants (p<0.05). In contrast, anti-BDNF-treated rats swam an equivalent distance in all four quadrants. The average percentage of swimming distance in the P quadrant by anti-BDNF-treated rats was much less than that by control IgG treated rats (p<0.001). These results suggest that endogenous BDNF is required for spatial learning and memory in adult rats.     

脑出血大鼠脑红蛋白表达与脑含水量变化

目的：观察脑出血大鼠脑组织内脑红蛋白（Ngb）的表达,探讨其与脑出血后脑水肿之间的关系。方法：将大鼠随机分为3组：正常对照组,假手术组和脑出血组。脑出血组和假手术组动物在模型建立后1、6、24、48、72h5个时间点各随机分为5个亚组。采用立体定向技术将自体血注入大鼠尾状核建立脑出血模型（假手术组注入生理盐水）,用干湿重法测定脑出血后脑含水量的变化,用Western blot检测脑出血后不同时间脑组织内Ngb的表达。结果：与假手术组或正常对照组比较,脑出血组1h时血肿周围脑组织内Ngb表达开始增高（P〈0.05）,24h时脑含水量开始升高（P〈0.05）,二者均在48h时达到高峰并持续至72h（P〈0.01）。结论：脑出血后脑组织内Ngb表达上调。脑出血后Ngb表达水平的变化与脑水肿的发生、发展在时间上不完全同步。     

骨髓间质干细胞联合脑源性神经营养因子用于大鼠脑出血的实验研究

目的观察骨髓间质干细胞(MSCs)联合脑源性神经营养因子(BDNF)治疗大鼠脑出血(ICH)的疗效。方法建立大鼠ICH模型,体外培养标记纯化的MSCs,经侧脑室植入脑部,同时局部注入BDNF。记录对照组、BDNF组、MSCs组和MSCs+BDNF组7d、14d、21d大鼠神经功能改善程度;免疫组化法检测MSCs脑内迁移及分化;电子显微镜观察神经凋亡细胞。结果 MSCs组大鼠运动功能有明显改善,MSCs+BDNF组对ICH损伤的修复作用最明显。MSCs+BDNF组各时间点MSCs阳性细胞数及NEUN、GFAP、CNP免疫阳性细胞数均高于MSCs组(P<0.01),且MSCs+BDNF组神经细胞凋亡程度最轻。结论 MSCs脑部移植可促进大鼠ICH损伤部位结构和功能修复,BDNF对其修复具有协同作用。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠脑出血后神经元凋亡的影响

目的　探讨半胱氨酸蛋白酶 (Caspase)抑制剂zVADfmk对大鼠脑出血 (ICH)后Caspase 3激活及神经元凋亡的影响。方法　应用立体定向技术 ,将自体不凝血 5 0 μl注入大鼠尾状核区制备ICH模型 ,并侧脑室注入zVADfmk,分别在不同时间点断头取脑 ,连续切片作TUNEL染色和Caspase 3免疫组化染色。结果　ICH后血肿周围组织Caspase 3表达明显增强 ,TUNEL阳性细胞数明显增加 ,与假手术组相比差异显著 (P <0 0 1)。zVADfmk治疗组Caspase 3及TUNEL阳性细胞数较对照组明显减少 (P <0 0 5 )。结论　Caspase抑制剂能明显抑制Caspase 3的激活 ,减少神经元的凋亡 ,对出血性脑损伤有保护作用。     

小剂量MK-801对大鼠参照记忆、空间工作记忆和逆反学习能力的影响

目的 探讨腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA )受体拮抗剂地卓西平马来酸盐(MK-801)对大鼠认知功能的影响.方法 成年雄性SD大鼠随机分为MK-801组和对照组,分别腹腔注射小剂量生理盐水或MK-801(0.1 mg/kg)20 min后在Morris水迷宫中评定MK-801对大鼠参照记忆、空间工作记忆和逆反学习能力的影响.结果 参照记忆任务中,与对照组相比MK-801组逃避潜伏期延长(P<0.05),且在目标象限的探索时间百分比[(22.7±2.9)%]与相邻象限[(24.0±0.9)%]和对立象限[(29.3±2.4)%]的差异无统计学意义 (P>0.05);空间工作记忆任务中,对照组匹配试次潜伏期显著短于样本试次[(37.6±6.0) vs (61.5±6.3),P<0.05],而MK-801组两试次潜伏期差异无统计学意义[(53.8±7.8) vs (62.2±7.1),P>0.05];逆反学习任务中,与对照组相比MK-801组潜伏期明显延长(P<0.05),且在空间探索中新旧目标象限探索时间百分比差值小于对照组[(-0.01±4.7) vs (23.5±6.2),P<0.01].结论 腹腔注射小剂量MK-801破坏了大鼠的参照记忆、空间工作记忆和逆反学习,提示其在多个认知维度上可模拟精神分裂症患者的认知缺陷.     

局部亚低温对大鼠脑出血后基质金属蛋白酶-9及血脑屏障通透性的影响

目的探讨局部亚低温对大鼠自体血注入法脑出血模型基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响以及局部亚低温减轻脑出血后水肿的可能机制。方法雄性Wistar大鼠240只,随机分为脑出血(ICH)组和脑出血加局部亚低温(ICH H)组。每组分为对照、脑出血后6h、24h、72h、5d、7d共6个亚组,ICH H组于注血后立即给以4h的局部亚低温治疗,各亚组分别进行血脑屏障(BBB)通透性、脑水含量的检测以及应用RT-PCR及Western印记对MMP-9进行测定。结果ICH组大鼠脑内注血后6h开始出现脑组织水含量(P<0.01)及BBB通透性(P<0.05)的显著增加,二者在72h达到高峰,然后逐渐消退,ICH组MMP-9蛋白表达量与脑含水量和血脑屏障通透性呈正相关(r=0.88和r=0.96),ICH组MMP-9 mRNA表达量也与脑含水量和血脑屏障通透性呈正相关(r=0.78和r=0.85)。ICH H组大鼠脑组织水含量、BBB通透性以及MMP-9蛋白的表达与ICH组各时间点相比较,明显降低,而MMP-9 mRNA的表达与ICH组相比仅有轻度下降。结论脑出血后MMP-9的变化与BBB通透性和脑水肿密切相关,局部亚低温可以抑制脑出血后MMP-9蛋白表达的增加以及脑水肿的形成。提示局部亚低温可能通过影响MMP-9的变化来抑制脑出血后的水肿形成。     

脑缺血再灌注损伤模型大鼠大脑皮质BDNF mRNA表达减少

目的制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,并观察大脑皮质脑源性神经营养因子(BDNF)mR-NA表达的变化。方法雄性SD大鼠,采用线栓法闭塞大脑中动脉2h后进行再灌注3d,制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型。采用神经缺失评分观察大鼠的行为学表现;TTC染色检查脑组织梗死情况;HE染色观察大鼠脑组织形态结构;RT-PCR技术检测大鼠大脑皮质BDNF mRNA的表达。结果假手术组大鼠无神经功能障碍表现;脑组织未见梗死灶;脑组织神经细胞形态规则;大脑皮质BDNF mRNA的相对表达量,与正常组相比,未见明显变化。与假手术组相比,局灶性脑缺血再灌注损伤模型大鼠出现神经功能障碍;左侧半球可见梗死灶;梗死侧脑组织形态学观察显示神经细胞大量坏死脱落、胞质呈空泡变性、疏松、胞核浓缩深染;大脑皮质BDNF mRNA表达量明显减少。结论大脑中动脉闭塞2h后进行再灌注3d可造成脑缺血再灌注损伤,可能与大脑皮质BDNF mRNA的表达减少有关。     

重组人粒细胞集落刺激因子对脑出血大鼠神经功能的影响

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑出血大鼠神经功能的影响.方法 将48只SD大鼠按随机数字表法分为模型组和rhG-CSF治疗组,均应用大鼠脑立体定位仪注射自体不凝血法制作脑出血模型,其中rhG-CSF治疗组于造模后1h开始腹腔注射rhG-CSF[60μg/(kg· d)],模型组注射等量生理盐水.造模后第7天及第14天对2组大鼠分别进行神经功能评分,流式细胞仪检测外周血CD34+细胞的含量,免疫组化染色观察脑出血灶周围组织微管相关蛋白2 (MAP-2)的表达. 结果 rhG-CSF治疗组第7天及第14天的神经功能评分(0.407±0.057,0.649±0.014)、外周血CD34+细胞含量(0.381％±0.054％,0.205％±0.088％)及MAP-2表达(0.205±0.088,0.281±0.054)均明显高于模型组(0.168±0.066,0.326±0.047; 0.074％±0.028％,0.030％±0.057％;0.080±0.017,0.124±0.028),差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 rhG-CSF可促进脑出血区神经细胞的增生和修复,对出血后脑组织具有保护作用,从而改善脑出血后神经功能.     

大鼠脑出血后脑内GDNF蛋白及mRNA表达变化

目的 观察脑出血模型大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子(glial-cell line derived neuro-trophic fac-tor,GDNF)蛋白和mRNA的分布规律.方法 苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.4u建立脑出血模型,用免疫组织化学方法和原位杂交法分别观察脑出血后2h、6h、1d、4d、7d、14d共6个时间点GDNF蛋白及mRNA的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标.结果 脑出血后2hGDNF主要表达于血肿周围的反应性星型胶质细胞,1d达高峰,14d后恢复基础水平,在6h、1d、4d、7d4个时间点上,3组阳性细胞计数比较差异有显著性(P<0.01).GDNF mRNA主要表达于大脑皮质、海马、纹状体、基底前脑、黑质、胼胝体,血肿周围等区域的神经元,血肿中心区域未见表达;1d后达高峰,4d后表达开始减弱,14d后恢复至基础水平.在6h、1d、4d、7d 4个时间点上,3组阳性细胞计数比较差异有显著性(P<0.01).结论 脑出血后GDNF及mRNA的表达呈时段性增高.