X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系基因突变研究

目的 研究X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(X-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDL)患者的发病机理,并探讨该病的快速基因诊断方法.方法 应用逆转录聚合酶链反应,结合序列分析方法,对一个X-SEDL家系2例患者及育龄女性进行SEDL基因突变分析.结果 cDNA序列分析显示患者为G209A突变,并对突变所在第4外显子进行PCR扩增并测序进一步证实.患者女儿为该突变的携带者.结论 由于SEDL基因较小,直接对患者提取总RNA,逆转录后直接进行PCR扩增、测序,可直接发现基因阅读框内的多种类型的突变,相对于针对每一个外显子单独扩增检测更加直接、快速.     

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系SEDL基因突变研究

目的：确定中国汉族中一个X－连锁迟发性脊椎骨骺发育不良（spondyloepiphyseal dyskplasia tarda,SEDL)大家系SEDL基因突变类型，探讨SEDL发病的分子基础。方法：用聚合酶链反应扩增产物双向直接测序方法检测了患者构成SEDL基因可读框的第3－6外显子及相邻侧翼区的DNA序列，将测序结果与GenBank公布的SEDL基因正常序列对比找出突变。然后在家系其他成员中证实该突变。结果：在2例患者（Ⅳ15、Ⅴ3）SEDL基因第2内含子剪接受体处发现了IVS2－2A→C突变，4个外显子的核苷酸序列未见改变。该突变在4例女性携带者得到证实，她们的基因型表现为野生型与突变型杂合现象。家系中2名未受累男性和15名无关健康个体未检测到这一突变。在该家系还检测出4个无症状的携带者。结论：首次发现SEDL基因IVS2－2A→C突变。该突变引起SEDL基因第2内含子3'端剪接受体改变，使之不能与外显子3正常剪接，可能是SEDL发病的分子基础。检测该突变可进行基因诊断，有重要的临床价值。     

X连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系SEDL基因突变分析

目的 鉴定中国西南地区一个4代迟发性脊椎骨骺发育不良大家系的分子遗传缺陷.方法 采用X染色体荧光标记微卫星标记物进行连锁分析,并通过直接序列分析筛查SEDL基因突变.结果 DXS987与DXS8051之间呈现连锁(最大LOD值:3.82;θ=0),致病基因定位于Xp22.2-Xp23.1;序列分析发现SEDL基因第4外显子发生点突变(c.239A＞G),导致在第80位编码氨基酸由组氨酸置换为精氨酸(H80R).结论 SEDL基因与此中国迟发性脊椎骨骺发育不良大家系表型完全连锁,并发现该基因新的致病突变(H80R).     

X连锁迟发性脊柱骨骺发育不良快速基因诊断方法的研究

目的探讨建立X连锁迟发性脊柱骨骺发育不良（SEDT）快速基因诊断的方法。方法发现一个4代68人累及8例患者的SEDT大家系,呈X连锁隐性遗传。在应用PCR和DNA测序方法对SEDL进行基因突变分析后,提取外周血淋巴细胞RNA,应用RT-PCR扩增cDNA直接测序,建立快速基因诊断方法。结果RT-PCR结果显示,家系8例患者均为SEDL基因外显子6插入突变（c.370-371ins A,）,并发现1例无症状患儿携带相同突变（症状发生前）,6例女性携带者为杂合突变,家系其他成员和正常对照中均未见该插入突变。结沦RT-PCR检测扩增SEDL基因cDNA直接测序是一种快速基因诊断的方法。     

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良遗传学研究进展

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(X-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda SEDL,OMIM313400)是一种罕见的遗传性骨软骨发育不良性疾病,遗传方式为X连锁隐性遗传。临床特点为轻中度非匀称性矮小和早发骨关节炎。SEDL的致病基因—SEDL基因定位于:Xp22.2,cDNA全长2836bp,编码含140个氨基酸残基的蛋白质,其功能尚未完全明确。51.2％的SEDL基因突变发生在外显子4和外显子5,有多种类型的突变可导致SEDL的临床表型,其中缺失突变最常见,占56.1％。SEDL基因型与临床表型之间有一定的相关性,但也存在表型异质性。     

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良遗传学研究进展

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(X-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda SEDL，OMIM 313400)是一种罕见的遗传性骨软骨发育不良性疾病，遗传方式为X连锁隐性遗传。临床特点为轻中度非匀称性矮小和早发骨关节炎。SEDL的致病基因—SEDL基因定位于Xp22、2，cDNA全长2836bp，编码含140个氨基酸残基的蛋白质，其功能尚未完全明确。51．2％的SEDL基因突变发生在外显子4和外显子5，有多种类型的突变可导致SEDL的临床表型，其中缺失突变最常见，占56．1％。SEDL基因型与临床表型之间有一定的相关性，但也存在表型异质性。     

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良SEDL基因剪接受体突变导致潜在剪接位点激活

目的 深入研究X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良（X-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDL）的发病机理，为最终防治本病提供依据。方法 应用逆转录-PCR及克隆测序方法对1例涉及SEDL基因第5内含子剪接受体缺失的SEDL患者进行mRNA表达研究。结果 该患者存在2个不同片段长度的mRNA表达产物，与GenBank正常序列进行BLAST比较后发现，393bp的表达产物是第6外显子内一个新的潜在剪接位点激活后形成的产物；433bp的表达产物与8号染色体的部分基因组序列完全一致。结论 SEDL基因第5内含子剪接受体位点及其后的第6外显子共13个碱基的缺失突变导致第6外显子内一个新的潜在剪接受体位点激活，使转录后的mRNA丢失了第6外显子内47bp的编码序列，并使紧接其后的2个密码子产生移码，导致翻译的提前终止（D109-S123del；S124fsX126）。另外，该突变可能激活了8号染色体上假基因SEDLP2的转录，从而部分地补偿了SEDL蛋白的功能。     

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良SEDL基因新突变

目的　研究X 连锁迟发性脊椎骨骺发育不良 (X linkedspondyloepiphysealdysplasiatarda ,SEDL)的发病机理。方法　应用聚合酶链反应 单链构象多态及变性聚丙烯酰胺测序凝胶电泳技术 ,并结合DNA序列分析方法 ,对 5例SEDL患者及 3 0名正常对照SEDL基因的全部编码外显子及其邻近序列进行突变分析。结果　在 1例SEDL患者中发现了致病突变 ,并经DNA序列分析证实 ,SEDL基因第 5内含子剪接受体处IVS5 2— 1delAG紧接第 6外显子 3 2 2— 3 3 2delTTTTCAATGAA共 13个碱基缺失。结论该突变系国内外尚未见报道的新突变 ,这一突变可引起SEDL。     

两个X连锁少汗性外胚层发育不良家系的基因突变分析

目的 对两个X连锁隐性遗传少汗性外胚层发育不良(X-linked hypohidrotic ectodermal dysplasia,XLHED)家系进行ED1基因突变分析,为罹患家庭提供遗传咨询及产前诊断.方法 综合应用序列分析及多重连接依赖性探针扩增方法,对两个家系的先证者进行ED1基因突变分析,并针对检测到的突变位点对女性成员进行检测.采集家系1胎儿的羊水细胞进行产前诊断,包括致病突变位点的分析、ED1基因内4个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点的单倍型连锁分析、性别鉴定及核型分析.结果 家系1先证者缺失ED1基因第1外显子及下游2个STR位点DXS8269,DXS1422区域,其余外显子序列分析未见异常,其女儿为该缺失突变的携带者;结合连锁分析、性别鉴定及核型分析结果,家系1胎儿为男性非ED1基因缺失突变携带者,胎儿足月分娩后随访,为健康个体.家系2先证者经序列分析检测到ED1基因第3外显子c.463C＞T(R155C)错义突变,母亲为c.463C＞T(R155C)杂合突变携带者.结论 ED1基因第1外显子区域缺失和错义突变R155C是导致2个少汗性外胚层发育不全家系患者临床表型的主要原因,ED1基因的突变检测结合单倍型分析,能准确地对该类家系提供产前诊断.     

一个Wiskott-Aldrich综合征家系融S基因的突变分析CSCD

目的探讨1个汉族Wiskott-Aldrich综合征（Wiskott-Aldrich syndrome）家系WAS基因的突变情况。 方法PCR扩增WAS基因的外显子及外显子与内含子的连接区域,对PCR产物直接进行正、反向测序并与数据库进行比对,确定有无WAS基因突变以及突变的位点。测定家系成员B细胞活化因子（B-cell activating factor, BAFF）的水平。结果家系中2例患者均携带WAS基因第2外显子c.257G〉A的半合子突变,先证者的母亲为c.257G〉A的杂合突变携带者,其他表型正常家系成员均未检测到该突变,经查阅人类基因突变数据库证实该突变为已知致病突变。家系中患者血清BAFF水平明显高于表型正常的成员。结论WAS基因c.257G〉A的突变可能是该Wiskott-Aldrich综合征家系的致病原因。     

GLA基因的新突变出现在两个典型Fabry家系

目的 报告2个Fabry家系的GLA基因突变特点。方法 2个经临床和病理检查证实的Fabry家系，家系1中连续3代有12人发病，均表现为发作性肢体疼痛；家系2中连续5代有8人发病，多数患者在经末期出现显著的多器官损害表现。对2个家系中的先证者和部分亲属进行PCR扩增其GLA基因的所有7个外显子包括侧翼序列，对PCR产物直接测序。结果 先证者1的GLA基因第1外显子G132T（TGG→TGT）突变，造成W44C替换；先证者2的第6外显子G874C（GCT→CCT），造成A292P替换。两个先证者的母亲都有同其儿子一样的突变，且均为杂合性。结论 经文献检索，两个Fabry家系各存在一个新的GLA基因点突变。同一基因的不同位点的突变导致的临床表现存在很大的差异。由于女性患者和男性一样出现症状，推测这可能是等位基因随机失活导致的显性遗传表现。     

NDP基因c.361C>T错义变异致诺里病一家系

目的分析1个诺里病家系的致病基因变异,确定其遗传学病因。方法对先证者核心家系4名成员的DNA样本进行全外显子组检测,筛选变异位点,确定致病基因。通过Sanger测序对核心家系及7名其他家系成员进行验证。结果全外显子组检测及Sanger测序结果显示先证者及另外3例男性患者的NDP基因均存在c.361C>T(p.Arg121Trp)半合子错义变异,先证者母亲、外祖母和2个表妹均为c.361C>T杂合变异携带者,正常表型男性家系成员均未检测到该变异,符合X连锁隐性遗传病的特点。结论NDP基因c.361C>T错义变异是该诺里病家系的遗传学病因。     

Identification of pathogenic mutations in two Chinese families affected with primary localized cutaneous amyloidosisCSCD

Objective: To identify potential mutations in two Chinese families affected with primary localized cutaneous amyloidosis. Methods: Peripheral blood samples of the family were collected with informed consent. Genomic DNA was extracted with a phenol-chloroform method. All of the 17 exons and their flanking splicing sites of the OSMR gene were amplified with PCR and subjected to Sanger sequencing. Suspected mutations were verified with PCR-restriction fragment length polymorphism and high-resolution melting assays. Results: A missense mutation (c. 1538G>A) was found in exon 10 of the OSMR gene in all of the six patients from family 1. A missense mutation (c. 2081C>T) was found in exon 14 of the OSMR gene in all of the four patients from family 2. The same mutations were not found among the healthy controls. Conclusion: Two missense mutations (c. 1538GG>A and c. 2081C>T) were detected in the OSMR gene in two Chinese families affected with primary localized cutaneous amyloidosis. Our findings have further confirmed the pathogenicity of such mutations. © 2018 West China University of Medical Sciences. All rights reserved.     

Analysis of DSPP gene mutation in a Chinese pedigree affected with hereditary dentinogenesis imperfectaCSCD

Objective: To analyze the clinical phenotype of a Chinese pedigree affected with hereditary dentinogenesis imperfecta and mutation of dentin sialophosphoprotein (DSPP) gene. Methods: Affected members underwent intraoral photography, dental film and panoramic radiography. Genomic DNA was extracted from peripheral venous blood samples. Coding regions of the DSPP gene were subjected to PCR amplification and Sanger sequencing. Functional effect of the mutation was predicted with SIFT and PolyPhen-2. The tertiary structure of wild type and mutant proteins were predicted by Swiss-Port. Results: A heterozygous c. 50C>T (p. P17L) mutation was identified in exon 2 of the DSPP gene in the proband and her father. The same mutation was not found among 200 unrelated healthy controls. The Pro-17 residues and its surrounding positions in DSPP are highly conserved across various species. The mutation was predicted to be damaging to the structure of DSPP protein. Conclusion: The c. 50C>T (p. P17L) mutation of the DSPP gene probably underlies the disease in this pedigree. Above finding has expanded the spectrum of DSPP gene mutations and provided a basis for genetic counseling and prenatal diagnosis for this family. © 2018 MeDitorial Ltd. All rights reserved.