熊果酸对蛋白质体外非酶糖基化反应的影响

目的 研究熊果酸(ursolic acid,UA)对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响.方法 采用L16(45)正交设计,以牛血清白蛋白(BSA)浓度,d-葡萄糖浓度和孵育时间3因素4水平正交试验,筛选出体外蛋白质非酶糖基化的最佳反应条件.并以此条件用荧光分光光度法观察UA对晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)形成的影响.同时,采用NBT法测定UA在体外对AGEs中间产物果糖胺(Amadori产物之一)形成的影响.结果 正交试验结果显示,5 g/LBSA,50 mM d-葡萄糖及40 d的孵育时间是蛋白质非酶糖基化反应的最佳条件,荧光分光光度法结果表明,UA(10、20、40μM)对AGEs的形成有明显的抑制作用((P<0.05 or 0.01 vs模型组),且呈剂量依赖性.但UA在体外不能抑制果糖胺的形成.结论 UA可通过干扰早期糖基化产物-Amadori产物的深度糖基化来抑制AGEs形成,这可能是UA减轻糖尿病血管损伤的重要机制之一.     

复方中药组分对糖尿病大鼠非酶糖基化的影响

目的:证实复方中药组分防治糖尿病及糖尿病肾病、糖尿病心肌病的有效性以及探讨其作用机制。方法:应用链尿菌素复制大鼠糖尿病模型,对复方中药组分进行了药效学实验观察,并对各组动物的血液及某些组织作了一系列相关的指标测定。结果:复方中药组分具有一定的降血糖作用,并可降低血红蛋白、心肌、肾脏的糖化值。结论:复方中药组分通过抑制糖尿病大鼠的非酶糖基化,可防治糖尿病肾病和糖尿病心肌病。     

蛋白质非酶糖基化导致理化性状改变

目的 观察蛋白质糖基化后理化特性的改变。方法 牛血清白蛋白（ＢＳＡ）与葡萄糖在体外共同孵育中,经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）及荧光分光光度计测定荧光值和挪描荧光光谱。结果 糖基化ＢＳＡ荧光光谱改变,糖基化终产物（ＡＧＥｓ）荧光值增加;单体ＢＳＡ在ＰＡＧＥ上向正极泳动加速,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ近负极段出殃新的弥散带。结论 蛋白质非酶糖基化可导致棕色变、阴电荷增加、分子量增大、荧光光谱改变。     

抗氧化中药对蛋白质非酶糖基化反应的影响

目的　观察中药胡黄连和贯叶连翘对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响 ,评价其抗氧化作用与非酶糖基化反应的关系。分析它们治疗糖尿病并发症的可能性。方法　将牛血清白蛋白和葡萄糖在体外共同孵育建立体外蛋白非酶糖基化反应体系 ,并将反应液分成对照组和不同的药物浓度组 ,在 37℃孵厢中孵育 6 0d ,以激发波长 (EX) 370nm/发射波长(EM) 4 4 0nm测定各组荧光值。结果　不同浓度的胡黄连和贯叶连翘以剂量依赖方式明显抑制AGEs的形成。结论　胡黄连和贯叶连翘可以抑制蛋白质的非酶糖基化 ,可能与其抗氧化作用有关。      

氨基胍、槲皮素等对蛋白质非酶糖基化的影响

蛋白质非酶糖基化反应(Maillard反应)可以生成许多有毒、抗原性的糖基化终末产物(Advanced glycation end products，AGEs)。其生成对于糖尿病慢性并发症的发生发展起着重要的作用，同时也是导致衰老和Alzheimer’s症的重要原因。因此，对于AGEs的生成和作用机制的研究越来越受到重视。     

糖尿病慢性并发症的病理基础(蛋白质非酶糖基化反应)

<正>糖尿病患者持续高血糖状态,可使组织蛋白发生普遍的非酶糖基化,是形成慢性并发症的病理基础,本文仅就此作一综述.1 长期糖基化终末产物(AGE)的致病机制1912年Mailard报道氨基酸可以与还原糖形成稳定的酮胺化合物(ketoamine),这个反应称之为Mailard反应.之后陆续发现这种反应存在于奶类及食品中,往往使其变为棕色,因而称之为Browning反应.当将其加热时,葡萄糖可与蛋白质结合,形成醛亚胺(aldimine),即Shiff碱.两者之间的结合.不需要酶的作用,在体内发生的相当广泛.一般认为,长期糖基化终末产物(advanced glycation end-products AGE)在糖尿病慢性并发症中起重要作用.它来自糖化血红蛋白(GHb)的葡萄糖与氨基结合后,通过1-氨基l-去氧酮糖,3-去氧葡萄糖醛酮,再结合氨基而形成.有人认为:AGE通过以下三种机制起作用:①影响细胞外基质,改变信息传导途径;②AGE与细胞内特异性受体结合,改变信息传递物的浓度,如细胞因子、激素和游离基;③糖基化     

泥鳅分泌多糖抗蛋白质非酶糖基化活性研究

目的 探讨泥鳅分泌多糖对蛋白质非酶糖基化反应的干预作用.方法 通过NBT还原实验、二羰基化合物测定实验、非酶糖基化终产物(advanced glycation end products, AGEs)的荧光性测定实验,以氨基胍为阳性对照,从糖基化反应的三个不同阶段分别测定泥鳅分泌多糖对糖基化的干预作用.用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)检验泥鳅分泌多糖对糖基化反应的干预结果.结果 泥鳅分泌多糖可以从糖基化反应的3个阶段来抑制AGEs的生成,表现出很强的抑制作用,尤其对二羰基化合物的生成抑制作用显著,在浓度为200 μg/mL时,抑制率为57.4%,与阳性对照氨基胍比较无显著性差异(P>0 05).电泳结果表明在分子量90 kD处出现明显的糖基化蛋白条带,泥鳅分泌多糖对糖基化蛋白生成的抑制作用与氨基胍比较无显著性差异(P>0 05).结论 泥鳅分泌多糖对蛋白质糖基化有显著的抑制作用.     

西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的抑制作用

目的研究西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的影响。方法以牛血清白蛋白(BSA)质量浓度、葡萄糖质量浓度及温孵时间为3因素,采用3因素4水平正交设计,通过方差分析寻找体外非酶糖基化的最适反应体系,以此最适体系观察西红花酸对非酶糖基化的影响。结果糖基化蛋白产量与BSA质量浓度、葡萄糖质量浓度、温孵时间呈正相关;方差分析结果提示,5 g/L BSA、4.5 m g/mL葡萄糖及14 d的温孵时间为蛋白质体外非酶糖基化的最佳条件;荧光值测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE s)均表明西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化具有显著的抑制作用。结论西红花酸对体外蛋白质的非酶糖基化具有明显的抑制作用;这可能是西红花酸具有广泛的心血管药理活性及改善胰岛素抵抗的重要机制之一。     

原花青素-B2对体内外蛋白质非酶糖基化反应的影响

目的 观察原花青素B₂（proanthocyanidin-B₂,PC-B₂）对体内外蛋白质非酶糖基化终产物（AGEs）形成的影响。方法 用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型,ig不同剂量（25、50、100 mg/kg）PC-B₂ 12周,检测血糖和AGEs的量。同时将不同质量浓度PC-B₂分别与葡萄糖和牛血清白蛋白、半乳糖和牛血清白蛋白在37 ℃孵育60 d,用荧光光度法测定AGEs的荧光值。结果 PC-B₂能明显降低糖尿病大鼠血糖（P＜0.01）,抑制AGEs的形成（P＜0.05）,并呈明显的剂量依赖性。PC-B₂对体外AGEs的生成也有明显的抑制作用（P＜0.01）。结论 PC-B₂可明显降低糖尿病大鼠血糖,对体内外AGEs的形成具有明显的抑制作用。     

非酶糖基化对人血清白蛋白磁共振成像造影剂的影响

目的：本研究旨在评估HSA的非酶糖基化可能对一些钆螯合物相对该蛋白的亲和力造成的影响。方法：利用标准的反转恢复序列,在Minispect mq-20磁共振分析仪中（0.47 T和310 K实验条件）测量了纵向的质子弛豫速率。结果：人血清白蛋白（HSA）的非酶糖基化（NEG）会让钆塞酸二钠（1）和MS-325（2）的亲和力稍微降低,但是它对MP2269（3）的的亲和力不造成任何影响。结论：人血清白蛋白（HSA）被糖基化时,钆塞酸二钠（1）和MS-325（2）相对该蛋白的亲和力略微减弱,足以忽略。因此,存在被糖基化人血清白蛋白（HSA）的情况下,所研究的三种造影剂的效能实际上不受影响。糖尿病患者的效能与药物动力学特性不会存在特别明显的差异。     

水飞蓟素对糖尿病大鼠主动脉非酶糖化及氧化的抑制作用

糖尿病动脉血管病变同高血糖引起蛋白非酶糖化及氧化应激反应密切相关。糖尿病患者体内晚期糖化终产物（AGEs）、糖氧化产物Pentosidine和脂质过氧化物（LPO）明显升高，导致动脉血管病变。当前尚缺乏有效手段控制糖尿病慢性并发症发展。本研究观察了水飞蓟素、氨基胭对糖尿病大鼠非酶糖化及氧化抑制作用。1材料和方法1．1试剂和仪器链腺佐菌素（STZ），牛血清白蛋白（BSA），V、VI型胶原酶，氨基肌均为美国Sigma公司产品；水飞蓟素为上海朝晖制药厂产品；OneTouchR血糖仪为美国Lifescan公司产品；高速冷冻离心机和850型荧光分光光…     

糖化终末产物对内皮细胞氧化应激的影响

目的研究糖化终末产物(AGEs)对猪髂动脉内皮细胞(PIEC)氧化应激的影响。方法不同浓度AGEs干预PIEC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力变化。运用活性氧(ROS)捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平。结果随着AGEs浓度的增加和作用时间的延长,PIEC活力明显下降(P<0.05);细胞活力下降与作用浓度及时间呈显著正相关(r=0.927,P<0.01)。经DCFH-DA孵育后流式细胞仪检测显示,AGEs处理组细胞内DCF平均荧光强度较空白对照组明显升高。结论AGEs抑制内皮细胞活力,使细胞内ROS生成明显增加,直接诱导内皮细胞的氧化应激。     

Nrf2活化下调AGEs诱导的内皮细胞活性氧水平

目的探讨激活红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)对晚期糖基化终末产物(AGEs)作用下的内皮细胞内活性氧(ROS)水平的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),通过Nrf2激动剂莱菔硫烷(SFN)激活Nrf2,观察AGEs刺激下HUVECs细胞ROS生成情况。结果 Nrf2活化可显著降低AGEs刺激后内皮细胞ROS水平(P<0.05)。结论增强Nrf2信号通路活性,能起到拮抗AGEs诱导内皮细胞氧化损伤的作用,从而为动脉粥样硬化尤其是糖尿病心血管并发症的防治提供新的思路和靶点。     

晚期糖基化终产物对足细胞内肾素-血管紧张素系统的影响

目的 观察晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对足细胞内肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的影响及作用机制.方法 不同浓度的AGEs干预小鼠足细胞24h,分别检测肾素(renin)、血管紧张素原(renin-angiotensin system,AGT)、血管紧张素Ⅱ1型、2型受体(AT1R、AT2R)的表达,血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)的活性和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)的浓度,观察蛋白激酶B(Akt)的磷酸化,然后分别加入磷酸肌醇3激酶抑制剂LY294002、Iosartan、captopril和chymastatin,观察足细胞粘附性的变化.结果 与对照组相比,AGEs(80 μg/mL)明显上调AGT和AT1R的表达[(183.0±19.0)％ vs 100％,(179.0±17.0)％ vs100％,P＜0.05],裂解液中ACE活性明显增加[(142.8 ±10.3)U/μgvs (85.0 ±9.2)U/μg,P＜0.05],细胞上清中AngⅡ的浓度明显增加[(11.2±0.8) pg/mL vs(7.0±0.7)pg/mL,P＜0.05];Akt的磷酸化上调100％ (P ＜0.05),而LY294002可减轻AGEs介导的足细胞内RAS的激活;与AGEs组相比,LY294002可改善AGEs介导的足细胞粘附性的下降[(82±13)％ vs (40±12)％;(78±14)％vs(42±13)％,P＜0.05].结论 AGEs可能通过磷酸肌醇3激酶途径激活足细胞内的RAS,降低足细胞粘附性.     

人巨细胞病毒和糖基化终产物共同作用对血管内皮细胞的影响

目的：观察人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）和糖基化终产物（advanced glycation end products, AGEs）共同作用对血管内皮细胞（vein endothelial cells，ECV）氧化应激的影响及对糖基化终产物受体（the receptor for advanced glycation end products, RAGE）表达的影响，明确HCMV和AGEs在致内皮细胞损伤作用中是否具有协同效应，探讨HCMV和AGEs致动脉粥样硬化 （AS）发生和发展的可能机制。方法：用HCMV和AGEs分别及共同作用于ECV，将实验对象分为：对照组、HCMV组、牛血清白蛋白（BSA）组、AGEs组、AGEs＋HCMV组5组；用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧（ROS）的改变；采用RT-PCR方法检测血管内皮细胞RAGEmRNA的表达。结果：HCMV感染ECV后，对照组荧光强度和BSA组荧光强度均较弱，两组间比较差异无统计学意义（P>0.05）；AGEs组和HCMV组荧光强度强于对照组（P<0.01）；AGEs＋HCMV组荧光强度高于AGEs组和HCMV组（P<0.05），两者联合作用存在协同效应。对照组和BSA组ECV细胞RAGEmRNA均有低水平表达，两组之间比较无差异（P>0.05）；AGEs组和HCMV感染组RAGEmRNA表达量高于对照组（P<0.01）；AGEs＋HCMV组表达量高于AGEs组和HCMV组（P<0.01）。在相同病毒滴度感染的情况下，随AGEs浓度增加RAGEmRNA的表达增高，呈浓度依赖性；在相同AGEs浓度作用时，随HCMV感染滴度增加RAGEmRNA的表达水平升高，呈滴度依赖性。各组之间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：HCMV和AGEs均能够增强血管内皮细胞氧化应激，促进RAGEmRNA的表达，两者共同作用时呈协同效应。HCMV和AGEs有可能通过协同增强氧化应激、进一步上调RAGEmRNA的表达，介导血管内皮细胞的炎症反应，促进动脉粥样硬化的发生、发展。     

贝那普利对糖尿病大鼠体内非酶促糖化反应的影响

目的探讨血管转换酶抑制剂贝那普利对糖尿病大鼠体内非酶促糖化反应的作用及机制。方法以链脲佐菌素诱发的单侧肾切除糖尿病大鼠为模型,检测４周糖尿病大鼠血胰岛素水平、肾功能指标、血清及肾组织糖化产物水平在贝那普利用药后的改变。结果用药的糖尿病大鼠,肾功能指标、血清糖化蛋白水平以及动脉胶原含量明显下降,肾小球ＥＣＭ积聚被抑制、非酶糖化反应程度也明显改善。血浆游离胰岛素水平升高,高血糖程度有轻度改善。结论贝那普利抑制糖尿病大鼠体内蛋白非酶糖化程度,其作用途径与其部分改善胰岛功能、降低血糖或其他不依赖于血糖浓度降低的作用有关。