蓖麻蛋白诱导HeLa细胞凋亡的分子机制(英文)

目的:研究蓖麻蛋白引起的Hela细胞凋亡的形态变化及机制。方法:扫描电镜,透射电镜,Western blot,细胞周期分析、细胞毒性和细胞相对存活率测定。结果:蓖麻蛋白0.05μmol·L~(-1)引起HeLa细胞发生典型的凋亡。凋亡细胞主要表现为胞浆膜起泡,核染色质浓缩,形成新月状核或膜包裹核染色质的凋亡小体;Western blot未检测到p53、Bax和ICE的p20活性亚基,而检测到CPP32的p17活性亚基,CPP32活性升高,而ICE活性无显著改变。结论:CPP32参与了蓖麻蛋白诱导的HeLa细胞凋亡过程。     

蓖麻中毒与检测方法的研究进展

目的为进一步研究蓖麻中毒性成分的快检方法及在医药领域中的应用提供参考。方法查阅近年来公开发表的论文、专著等资料,对蓖麻碱和蓖麻毒蛋白的提取检测进行概述。结果明确了蓖麻中毒性成分蓖麻碱和蓖麻毒蛋白的理化性质及提取、纯化方法,总结了这2种毒性物质的提取、分离和检测方法。结论建立快速有效的检测鉴定方法对蓖麻中毒的解救是十分必要的。     

聚乙二醇修饰对苦瓜籽中RIP抗肿瘤活性及免疫学特性的影响

目的 探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白(RIP)经聚乙二醇(PEG)修饰后的体外及动物体内免疫学特性的变化.方法 用MTT法测定RIP和RIP-PEG结合物对小鼠黑色素瘤细胞的抑制率;通过间接ELISA法测定RIP和RIP-PEG结合物在小鼠体内的免疫原性;以全身主动过敏实验(ASA)和被动皮肤过敏实验(PCA)来比较二者在豚鼠和大鼠体内的过敏毒性.结果 RIP-PEG结合物对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制率约为RIP的70%,产生的特异性IgG与RIP比较显著下降(P<0.01),诱发的过敏反应也显著降低.结论 苦瓜籽RIP经PEG修饰后,其抗肿瘤活性、免疫原性和过敏毒性均显著降低.     

泊洛沙姆407修饰对聚乙烯亚胺的毒性和转染性质的影响

目的:考察泊洛沙姆407修饰对聚乙烯亚胺(PEI)的毒性和转染性质的影响.方法:使用琥珀酰亚胺碳酸脂法将P407连接在PEI的氨基上,得到新聚合物,通过1H-NMR确定新聚合物的结构,将该聚合物与DNA形成复合物,测定复合物的zeta电位,MTT法考察复合物的细胞毒性,使用质粒pGL3-lus作为报告基因,测定虫荧光素酶活性评价复合物对Hela细胞的转染效率.结果:1H-NMR结果表明合成的聚合物具有较高的纯度.复合物的Zeta电位随氮/磷比(N/P)值的增加而增高.复合物的细胞毒性随着N/P值的增加而增大,新聚合物其细胞毒性显著低于未修饰的PEI.新聚合物在高N/P值时仍能保持较高的转染效率.结论:泊洛沙姆407修饰的PEI可以作为一种有效的非病毒基因栽体.     

用被阻断的蓖麻蛋白制备的免疫毒素:适于治疗应用的一种天然植物毒素

一个多世纪以来,从蓖麻种子分离的毒素,蓖麻蛋白(R)的强力毒性与细胞毒性引起了人们的兴趣。R对小鼠Ehrlich腹水瘤有很强抗肿瘤效应的发现、单克隆抗体的出现以及将强力药物有目标地运送到发生病变的组织(如肿瘤)的可能性,为R毒性的治疗性应用铺平了道路。     

自组装修饰在不同细胞系中对聚酰胺-胺介导的基因递送的影响

目的:通过自组装方法使用蛋白质分子修饰聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM)与DNA形成的转染复合物,并考察其性质。方法:使用人血白蛋白(HSA)和表皮生长因子(EGF)修饰PAMAM-DNA转染复合物,测定复合物粒径及Zeta电位;通过DNA固缩程度测定试验和DNaseI消化试验考察修饰后复合物的稳定性;HEK 293T细胞与MCF-7细胞转染质粒,测定其荧光素酶表达水平;MTT检测修饰后复合物对细胞毒性的变化。结果:自组装修饰后的复合物的粒径无显著变化,Zeta电位显著降低,性质稳定;HSA修饰可显著提高复合物在HEK 293T和MCF-7细胞中的转染效率,EGF修饰仅显著提高复合物在MCF-7细胞中的转染效率;两种修饰都能降低PAMAM-DNA复合物对细胞的毒性。结论:自组装修饰方法快速、简便、有效,不影响PAMAM-DNA复合物的稳定性,并且能够实现提高转染效率、靶向递送、降低毒性等目的。     

两种壳聚糖修饰材料细胞相容性及蛋白吸附行为的评价

目的对甘油明胶/壳聚糖(CGG)和玉米醇溶蛋白/壳聚糖(ZC)两种壳聚糖修饰生物材料的细胞相容性和蛋白吸附作用进行初步评价。方法应用M TT比色法,评价两种材料对L 929小鼠细胞的细胞毒性,测定他们对大鼠原代表皮细胞的细胞粘附率和细胞增殖率;同时应用考马斯亮兰G-250染色法测定材料对牛血清蛋白的吸附作用。结果本实验结果显示,两种壳聚糖修饰材料对L 929细胞生长抑制反应级别为1级或0级,属于无明显毒性作用。大鼠皮肤成纤维细胞在CGG上的粘附率和增殖率分别达到88.8%和96.0%;在ZC上的粘附率和增殖率分别达到80.7%和94.7%。两种材料不同时间对蛋白的吸附量存在有差异。结论两种修饰材料具有良好的细胞相容性,其中CGG在细胞体外增殖作用和蛋白吸附作用方面要优于单纯壳聚糖和ZC。     

聚乙烯亚胺非病毒基因载体结构修饰研究进展

聚乙烯亚胺（PEI）作为最经典的非病毒基因载体之一,由于其高转染效率,在基因递送领域受到极大的关注,但其毒性限制了聚乙烯亚胺的应用。本文综述了对聚乙烯亚胺进行不同的结构修饰,如多糖修饰、PEG修饰和低分子聚乙烯亚胺衍生物等,以实现在不显著降低转染效率的前提下减少细胞毒性。     

B型肉毒毒素重链C端基因的克隆与表达

目的:扩增B型肉毒毒素重链C端基因并将其在大肠杆菌中表达.方法:首先克隆B型肉毒毒素重链C端片段(BoNTB/Hc),经IPTG诱导,在大肠杆菌中进行天然序列的表达.构建原核表达载体pET32/Hc后进行融合蛋白的表达.对5′端引物进行修饰,最终进行N端修饰蛋白的表达.结果:扩增得到的BoNTB/Hc与已知序列同源性达99%,未得到天然序列的表达,获得了融合蛋白和N端修饰蛋白的表达.Western blot鉴定结果表明,融合蛋白和N端修饰蛋白都可以和特异性抗体发生反应.结论:获得了B型肉毒毒素重链C端基因的表达,为肉毒毒素相关研究奠定了基础.     

聚乙二醇修饰对仅α-苦瓜素抗肿瘤活性的影响

目的 探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC)经聚乙二醇(PEG)修饰后,其体外细胞毒性和体内抗肿瘤活性的变化.方法 用MTT法测定α-MMC和PEG-α-MMC结合物对小鼠乳腺癌细胞EMT-6的抑制率;通过BALB/C小鼠模型研究药物对EMT-6细胞嫁接瘤生长的抑制作用.结果 在相同的条件下,PEG-α-MM...     

B型肉毒毒素重链C端基因的克隆与表达

目的:扩增B型肉毒毒素重链C端基因并将其在大肠杆菌中表达.方法:首先克隆B型肉毒毒素重链C端片段(BoNTB/Hc),经IPTG诱导,在大肠杆菌中进行天然序列的表达.构建原核表达载体pET32/Hc后进行融合蛋白的表达.对5′端引物进行修饰,最终进行N端修饰蛋白的表达.结果:扩增得到的BoNTB/Hc与已知序列同源性达99%,未得到天然序列的表达,获得了融合蛋白和N端修饰蛋白的表达.Western blot鉴定结果表明,融合蛋白和N端修饰蛋白都可以和特异性抗体发生反应.结论:获得了B型肉毒毒素重链C端基因的表达,为肉毒毒素相关研究奠定了基础.     

热休克蛋白gp96-肽复合物体外对人肝癌细胞的抗肿瘤效应

目的研究热休克蛋白gp96-肽复合物修饰树突状细胞(DC)后对人肝癌细胞的体外特异抗肿瘤效应。方法从人原发性肝癌组织中提取gp96-肽复合物,用其修饰DC细胞后与T淋巴细胞共同培养,以MTT法检测该复合物介导的细胞毒性T细胞(CTL)对不同来源人肝癌细胞的抗肿瘤效应,并与粗提抗原修饰DC细胞组相比较。结果 gp96-肽复合物诱导的CTL对原代肝癌细胞杀伤效率为74.3%,明显高于粗提抗原组(42.5%)和未加抗原组(14.4%)(P<0.01),粗提抗原组对肝癌细胞杀伤效率高于未加抗原组(P<0.01)。且该复合物的抗肿瘤效应具有一定的组织特异性。结论 gp96-肽复合物修饰的DC细胞,在体外能刺激产生特异的抗肿瘤细胞毒性T细胞,因而热休克蛋白gp96在肿瘤免疫治疗中具有重要的实用价值。     

聚乙二醇修饰的蓖麻毒蛋白A链的特性研究

目的：研究两种不同相对分子质量（Mr）的单甲氧聚乙二醇（Monomethoxy polyethylene glycol，mPEG）与蓖麻毒蛋白A链（ricin A-chain，RTA）偶联后三者的免疫原性和毒性的不同。方法：从天然蓖麻籽中提取纯化的RTA，并分别与相对分子质量为5KD和10KD的mPEG反应偶联，得到两种不同的RTA-mPEG偶联物。用蛋白质印迹方法比较RTA和不同的RTA-mPEG偶联物之间的免疫原性的变化，此外通过用噻唑蓝比色法（MTT）对RTA及不同偶联物的体外细胞毒性进行评价，并通过测定半数致死量（LD50）的方法比较它们的体内毒性。结果：经聚乙二醇修饰后的RTA，其毒性有明显的下降。此外，对其免疫原性的研究表明，RTA的PEG化也能降低RTA的免疫原性。结论：聚乙二醇能遮蔽RTA，使其免疫原性和毒性有很大的降低。且下降的程度同与RTA偶联的聚乙二醇的相对分子量成正相关。     

阿司匹林抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞MMP-9表达及机制研究

目的:探讨阿司匹林对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其机制研究.方法:MTT法检测LPS诱导RAW264.7细胞作用下,阿司匹林对细胞毒性的影响.Q-RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达,免疫蛋白印迹法(western blot)检测MMP-9、p38 MAPK及磷酸化p38(Phospho-p38,P-p38)蛋白表达.特异性抑制剂SB203580(SB)阻断p38MAPK通路后,分别应用Q-RT-PCR和Western blot检测MMP-9的基因和蛋白表达.结果:阿司匹林呈剂量依赖性抑制MMP-9基因和蛋白表达.与LPS组相比,阿司匹林可明显抑制P-p38MAPK蛋白的表达,而p38MAPK总蛋白无明显变化.抑制p38MAPK通路后,MMP-9 mRNA和蛋白水平均明显下调.结论:阿司匹林抑制LPS诱导RAW264.7细胞中MMP-9表达可能与抑制p38MAPK信号转导通路有关,进而发挥其抗AS药理作用.     

一种针对mdr1基因的寡核苷酸-阿霉素偶联物:对KB-A-1细胞的毒性及其抑制P-gp蛋白表达的效果

目的 :癌细胞膜上P gp糖蛋白的过量表达是肿瘤多药抗性的主要机制。人体内编码P gp糖蛋白的基因中仅有mdr1涉及多药抗性。本研究中设计了针对mdr1的反义核酸与阿霉素的偶联物 ,并且对其细胞毒性进行了考察。同时对偶联物对人表皮癌细胞株KB A 1内的P gp蛋白的表达也做了分子水平上的研究。方法 :使用MTT法考察偶联物对KB A 1细胞的毒性。用HPLC考察偶联物对细胞内阿霉素的积累量的影响。对于P gp蛋白表达的变化 ,主要是通过RT PCR及WesternBlot方法进行了研究。结果 :偶联物的细胞毒性比寡核苷酸高。在低剂量的偶联物 (0 .5 μmol·L-1)的作用下 ,细胞对阿霉素的敏感性提高。偶联物能有效的提高细胞内阿霉素的积累量。并且从RT PCR及WesternBlot看 ,偶联物处理后的细胞内P gp表达最少。结论 :选用合适的基团 ,对反义核酸进行结构修饰能够较好的增强反义核酸的性能。采用阿霉素作为偶联基团尽管增强了细胞毒性 ,但是在更大程度上增强了其抑制P gp蛋白的效力 ,提高了肿瘤耐药性的逆转倍数 ,具有一定的潜在应用价值。     

体外评价羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒的细胞毒性和巨噬细胞的摄取

目的 体外评价自制羧甲基壳聚糖超顺磁氧化铁纳米粒(OCMCS-SPIO-NPs)的细胞毒性和逃避巨噬细胞的吞噬能力.方法 以菲立磁和未包被的超顺磁氧化铁纳米粒为对照,采用四唑盐(MTT)比色法考察OCMCS-SPIO-NPs对LO2细胞(正常肝细胞株)和A549(人肺腺癌细胞株)的细胞毒性;用菲洛嗪法及普鲁士蓝法考察OCMCS-SPIO-NPs纳米粒并评价其体外的抗吞噬能力.结果 SPIO-NPs经羧甲基壳聚糖共价修饰后,对LO2和A549细胞的细胞毒性明显降低,OCMCS-SPIO-NPs的细胞毒性和dextran-SPIO的细胞毒性无显著性差异(P>0.05),其细胞毒性与培养基中SPIO的浓度呈正相关;与3种SPIO纳米粒孵化24h后,RAW264.7细胞内铁含量随培养基中SPIO的含量增加而增加,细胞内铁含量依次为:未包被SPIO-NPs>dextran-SPIO-NPs>CMCS-SPIO-NPs组(P<0.05).结论 超顺氧化铁纳米粒经羧甲基壳聚糖共价修饰后能显著降低细胞毒性和吞噬细胞摄取,提高了生物相容性,显著降低了巨噬细胞对其的摄取.     

蓖麻蛋白：具有多种治疗用途潜力的植物毒素

本文概述了蓖麻蛋白的化学特性、作用机理、毒性步骤和对细胞培养、动物及人类的毒性效应,并综述了近年对蓖麻蛋白实验治疗及临床方面的研究。参考文献98篇。     

蓖麻毒素的毒性作用机制及其在肿瘤治疗中的应用

蓖麻毒素对哺乳动物细胞具有很强的毒性,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白。其A链是活性链,可使核糖体失活,从而使蛋白质合成受阻,细胞死亡。基于蓖麻毒素的细胞毒性,人们将蓖麻毒素及其A链应用于肿瘤治疗领域,目的在于特异性杀伤肿瘤细胞,并减小对正常细胞的毒性。本文就蓖麻毒素的分子结构、毒性机制以及近年来在肿瘤治疗领域的研究进展作一综述。     

跨膜型超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A融合蛋白的抗肿瘤作用

目的　为扩大超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的抗瘤谱 ,制备跨膜型SEA融合蛋白 ,研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法　在荷B16黑色素瘤的C5 7BL/ 6小鼠上 ,观察跨膜型SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用和免疫保护作用 ,并通过乳酸脱氢酶 (LDH)释放法检测治疗组和免疫组小鼠脾细胞的天然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T细胞 (CTL)活性。结果　融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长 ,并延长其生存期 ,其脾细胞的NK和CTL活性显著增强。同时 ,该肿瘤疫苗对同种肿瘤细胞攻击可产生较强的免疫保护作用。结论　跨膜型SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有显著的抗肿瘤作用 ,可有效激发荷瘤小鼠机体的特异性和非特异性抗肿瘤免疫应答 ,增强CTL和NK活性。     

聚乳酸-羟基乙酸纳米粒表面功能化修饰及其应用

聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)纳米粒表面特性是影响其体内分布的重要因素,经表面修饰的PLGA纳米粒已广泛应用于靶向给药系统研究.本文综述了PLGA纳米粒表面修饰的方法,包括共价交联、静电作用及疏水作用力等,概述了表面修饰纳米粒在非特异性生物黏附和生物渗透、特异性靶向、延长体循环时间及稳定生物活性分子方面的应用.