PPIs抑制P13K/Akt／mTOR信号通路逆转胃癌细胞的化疗多药耐药

背景：前期实验显示质子泵抑制剂（PPIs）可抑制空泡型质子泵（V-H＋-ATPases）和多药耐药蛋白P—gP、MRP1表达,增强胃癌细胞的化疗敏感性。目的：探讨PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药与P13K／Akt／mTOR信号通路的关系。方法：应用不同浓度埃索美拉唑或泮托拉唑预处理人胃腺癌细胞敏感株SGC7901和多药耐药株SGC7901／MDR,或以V—H＋-ATPasessiRNA干扰SGC7901／MDR细胞内的V-H＋-ATPases表达,或以雷帕霉素阻断mTOR表达,以蛋白质印迹法检测经不同方式处理的细胞内V—H＋ATPases、P—SP、MRPl蛋白表达以及P13K／Akt/mT0R／HIF—1α信号通路及其信号旁路TSCl／2-Rheb中的相关蛋白表达;以免疫荧光法检测经埃索美拉唑预处理的SGC7901／MDR细胞内的V-H＋ATPases、P—gP蛋白表达和定位。结果：PPIs可呈浓度依赖性地抑制SGC7901／MDR细胞内的V—H＋ATPases、P13K、Akt、roTOR、HIF-1仅、TSCI、TSC2、Rheb、P—gP、MRP1表达以及Akt底物和TSC2磷酸化,改变V-H＋ATPases、P—gP的胞内定位,对SGC7901细胞则无上述影响。以V—H＋-ATPasessiRNA抑制SGC7901／MDR细胞内的V—H＋-ATPases表达,作用与PPIs预处理相似。以雷帕霉素阻断mTOR可呈浓度依赖性地抑制SGC7901／MDR细胞内的HIF-1α、P—gP表达。结论：PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药的机制与抑制P13K／Akt／mTOR信号通路有关。     

胃癌多药耐药研究新进展

胃癌为一常见肿瘤,在我国及日本发病率极高,危害着人民的生命。早期胃癌以手术为主,辅以化疗药物。晚期肿瘤则以化疗为主要手段。但由于耐药的产生,疗效往往不佳。因而促使人们对胃癌多药耐药性(ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)问题进行深入研究。目前研究发现的与耐药有关的机制可归纳为以下几个方面:1.发生在细胞膜水平的药物摄取减少和外排增多,引起细胞内药物的绝对浓度降低,如由Ｐｇｐ引起的耐药;2.发生在细胞质和细胞器水平的药物亚细胞分布的改变,使药物无法接近其作用靶点,引起药物有效浓度降低,如由多药耐药相关蛋…     

胃癌多药耐药相关基因的研究现状

目前化疗仍是中、晚期胃癌患者的主要治疗方法,影响疗效的关键问题之一是肿瘤的多药耐药性。对瘤组织而言,多药耐药是化疗失败的主要原因。此文就近年来有关胃癌多药耐药相关基因产物的临床研究作一综述。     

Bax基因对人胃癌耐药细胞多药耐药性的逆转作用

目的 研究凋亡相关基因Ｂax对胃癌多药耐药细胞的多药耐药性的逆转作用。方法 构建含有人Ｂax cＤＮＡ全长的真核表达载体pＢＫ－Ｂax,经脂质体导入缺乏Ｂax蛋白表达的人 胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１/ＶＣＲ中。Ｗestern印迹观察Ｂax基因在转导细胞中的表达,ＭＴＴ法检测Ｂax转导细胞与空载体转导细胞对化疗药物的敏感性。结果 成功构建了Ｂax的真核表达载体,Ｂav转导细胞能稳定表达Ｂax蛋白,与空载体转导细胞相比。Ｂ     

缺氧诱导胃癌多药耐药的机制研究

目的研究缺氧对化疗药物敏感性的影响及药物转运蛋白和凋亡相关蛋白的变化,探讨缺氧条件下胃癌细胞发生多药耐药的机制。方法通过MTT比色法检测胃癌细胞SGC7901在缺氧和常氧状态下对化疗药物敏感性的差异;利用Annexin V/PI染色法检测缺氧对化疗药物诱导的凋亡的影响;利用阿霉素的蓄积和潴留实验检测缺氧与常氧条件下胃癌细胞SGC7901阿霉素的潴留和蓄积的差异;利用Western blot和RT-PCR方法检测不同时间缺氧处理胃癌细胞SGC7901中药物转运蛋白p-gp和MRP的变化以及凋亡相关分子Bcl-2和Bax的变化。结果缺氧能够显著降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性,并能够降低化疗药物诱导的凋亡和药物在细胞内的潴留和蓄积;缺氧能够显著上调MDR1和MRP1基因的表达以及增加其产物p-gp和MRP的蛋白水平;缺氧能够显著增加抗凋亡分子Bcl-2 mRNA和蛋白水平以及降低促凋亡分子Bax的表达。结论缺氧加剧胃癌细胞的多药耐药表型,其主要是通过上调药物转运蛋白的表达及增加抗凋亡分子Bcl-2/Bax的比例实现的。     

维拉帕米对多药耐药胃癌细胞耐药逆转作用的研究

肿瘤细胞对多种抗肿瘤药物产生耐药 ,并且这些药物之间化学结构及作用机制可以互不相同 ,这种现象称为多药耐药性 (ｍｕｌｔｉｐｌｅｄｒｕｇｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)。目前的研究表明 ,ＭＤＲ的产生与耐药细胞膜上Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ)水平呈正相关 ,钙通道阻滞剂可对部分肿瘤细胞耐药起逆转作用[1,2 ] 。本研究旨在分析肿瘤细胞耐药与Ｐ ｇｐ表达的关系 ;观察维拉帕米 (ＶＥＲ)逆转耐药的程度 ,探讨ＶＥＲ逆转耐药与Ｐ ｇｐ的关系。一、材料与方法1.细胞及主要试剂 :胃癌细胞株ＳＧＣ790 1(中山医科大学动物实验中心提供 ) ,胃癌耐…     

胃癌多药耐药机制的研究进展

胃癌为临床最常见肿瘤之一，据统计占我国消化道恶性肿瘤的第1位。胃癌化疗迄今仍是重要的临床治疗方法，而胃癌化疗有效率只有20％～30％，2年内复发和转移率高达60％，多数学者认为肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药现象(MDR)是化疗失败的主要原因之一，因而促使人们对胃癌MDR机制进行深入研究。现将国外的近期研究情况作一综述。     

多药耐药相关蛋白在胃癌、肾癌中的表达意义

目的探讨多药耐药相关蛋白（MRP）在胃癌、肾癌中表达的临床意义。方法应用免疫组化LSAB法检测52例胃癌和20例肾癌组织中MRP表达，结果MRP在胃癌中阳性表达率为38.5％(20／52)，肾癌为60％（12／20)，MRP在肿瘤细胞膜上和胞浆山均见表达，但以胞浆（粗颗粒状)更显。晚期胃癌和肾癌（Ⅲ、Ⅳ期)阳性表达率分别为60％（15／25)和88.9％(8／9)，分别高于Ⅰ、Ⅱ期早期患(18.5％与36.4‰，分别P<0.01和P<0.5)，且胃癌患教唆MRP阳性表达的平均存活期和五年生存率显低于阴性。结论MRP表达与胃癌和肾癌的浸润转移相关、并或能是两由源性耐药的重要机制。     

中药逆转恶性肿瘤多药耐药的研究进展

癌症患者的死因大约94％与肿瘤多药耐药的发生有关，目前寻求高效低毒的逆转多药耐药的方法已成为研究的热点。引起肿瘤多药耐药的机制比较复杂，中药以资源丰富、含多种逆转耐药的活性成分、作用靶点多，而引起了广泛的关注。本文就中药逆转恶性肿瘤多药耐药研究的进展情况如下综述。     

逆转MDR-1基因相关的消化系统肿瘤多药耐药

消化系统恶性肿瘤细胞多药耐药是导致化疗失败的重要原因.多药耐药基因(MDR-1)过度表达P-糖蛋白(p-gp)是产生耐药的主要机制.逆转MDR-1基因相关的消化系统肿瘤多药耐药,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的方式有两类一是直接抑制p-gp的药泵功能;二是干扰MDR-1基因的表达.     

胃癌组织中多药耐药基因的表达特点及其对化疗的指导意义

目的探讨5种多药耐药基因产物在胃癌组织中的表达特点及其对胃癌化疗的指导意义。方法应用免疫组化SP法联合检测48例胃癌组织和10例正常胃黏膜中胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)、P-糖蛋白(P-gp)、拓扑异构酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)、胸苷酸合成酶(TS)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达,并结合其临床病理资料进行回顾性分析。结果胃癌组织中GST-π、P-gp、Topo-Ⅱ、TS、MRP的阳性表达率依次为72.9%(35/48)、56.3%(27/48)、83.3%(40/48)、41.7%(20/48)和39.6%(19/48),与正常胃黏膜组织比较差异显著。其表达与病人的性别、年龄和肿瘤的部位、大小、侵袭深度、淋巴结转移均无关,而与肿瘤的分化程度、组织学类型密切相关。结论GST-π、P-gp、Topo-Ⅱ、TS、MRP的高表达可能是胃癌多药耐药产生的基础。多药耐药基因产物的联合检测有助于判断胃癌病人的预后;也对化疗方案的制定和药物选择有指导意义。     

胃癌多药耐药蛋白的相互作用蛋白鉴定及分子机制

目的:研究多药耐药蛋白(multidrug resistance protein,MRP)的相互作用蛋白及其对肿瘤耐药性的影响.方法:采用免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定MRP的相互作用蛋白,并对其中的耐药相关蛋白之一Annexin A5进行功能研究,Western blot及siRNA干扰技术分析MRP、Annexin A5蛋白表达的变化、相关性及胃癌SGC-7901细胞的耐药性变化.结果:经免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定发现了14个MRP的相互作用蛋白,其中AnnexinA5为其中得分最高的蛋白;Westernblot检测显示耐药细胞株SGC-7901/DDP中MRP、AnnexinA5蛋白表达均高于SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP,siRNA干扰AnnexinA5表达后,siRNA-SGC-7901/DDP中MRP蛋白表达下调,MRP、AnnexinA5蛋白在SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP之间表达无明显差异;MTT法结果显示经siRNA干扰SGC-7901/DDP后,顺铂、5-Fu和紫杉醇作用后的IC50值明显减少,对其的敏感性分别增加了36倍、17倍和4倍.结论...     

人核糖体蛋白S13与胃癌细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨人核糖体蛋白S13(RPS13)在胃癌多药耐药(MDR)机制中的作用。方法 采用RT-PCR法扩增RPS13 cDNA片段编码区序列全长，DNA重组技术构建正反义真核表达载体，经脂质体介导转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR，斑点杂交检测转染细胞mRNA水平的变化；MTT法测定细胞对化疗药物的敏感性，流式细胞仪检测细胞周期。结果 RT-PCR法成功扩增出RPS13 cDNA片段编码区序列全长，并构建正反义真核表达载体；斑点杂交试验证实：正义转染细胞RPS13 mRNA水平上调，反义转染细胞其mRNA水平下调。RPS13正义核酸转染SGC7901细胞后，细胞对阿霉素、5-氟尿嘧啶和长春新碱的敏感性降低；转染反义核酸后，耐药细胞对丝裂霉素和长春新碱的敏感性增加。细胞周期测定表明高表达RPS13后，G1期、S期和G2期细胞的比例分别为47．0％、33．2％和19．8％；低表达RPS13后，G1期、S期和G2期细胞的比例分别为62．9％、1、0％和36．1％。结论 RPS13参与胃癌耐药细胞SGC7901／VCR的多药耐药。     

Reversal of multidrug resistance in vincristine-resistant human gastric cancer cell line SGC7901/VCR by LY980503

AIM： To investigate the reversal effect of LY980503, a benflumetol derivative, on multidrug resistance in vincristine （VCR） -resistant human gastric carcinoma cell line SGC7901/VCR.
METHODS： Cells of a human gastric cancer cell line, SGC7901, and its VCR-resistant variant, SGC7901/VCR, were cultivated with LY980503 and/or doxorubicin （DOX）. The cytotoxicity of drugs in vitro was assayed by M-IF method. Based on the flow cytometric technology, the uptake of DOX was detected in these cells by measuring DOX -associated mean fluorescence intensity （MFI）.
RESULTS： SGC7901/VCR cells were 23.5 times more resistant to DOX in comparison with 5GC7901 cells. LY980503 at the concentrations of 2.0 μmol/L -10 μmol/ L had no obvious cytotoxicity to SGC7901 and SGC7901/ VCR cells. After simultaneous treatment with LY980503 at the concentrations of 2.0, 4.0 and 10 μmol/L, the ICso of DOX to SGC7901/VCR cells decreased from 1.6 ± 0.12 μmol/L to 0.55 ± 0.024, 0.25 ± 0.032 and 0.11 ± 0.015 μmol/L, respectively, thus, increasing the DOX sensitivity by 2.9-fold （P 〈 0. 05）, 6.4-fold （P 〈 0. 01） and 14.5-fold （P 〈 0. 01）, respectively. In the uptake study of DOX, simultaneous incubation of SGC7901/VCR cells with LY980503 significantly increased the DOX -associated MFI in SGC7901/VCR cells. No such results were found in parental SGC7901 cells.
CONCLUSION： LY980503 at non-cytotoxic concentrations can effectively circumvent resistance of SGC7901/VCR cells to DOX by increasing intracellular DOX accumulation.     

高温对SGC7901/ADM细胞多药耐药蛋白表达的影响和意义

目的:研究高温43℃对多药耐药基因表达产物P-gp、MRP、LRP在蛋白水平上的影响及其生物学意义,更深入地了解热效应逆转耐药的机制.方法:采用免疫细胞化学染色法、RT-PCR以及Western blot方法,检测在不同温度和不同药物作用下,人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM和对照的人胃癌敏感细胞SGC7901株中,与人胃癌多药耐药相关的分子MDR1、P-gp、MRP、LRP在蛋白水平上的表达差异.结果:采用免疫细胞化学染色法检测人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞,发现高温43℃60 min处理可使P-gp蛋白表达下调率(down-regulated rate,DRR)31.78%(P=0.016),而MRP表达DRR为20.22%(P=0.037),差异有统计学意义,LRP未表达.采用Western blot法在SGC7901细胞中未检测出P-gp蛋白表达,而SGC7901/ADM细胞中P-gp高表达;在ADM和CDDP处理组细胞中,高温43℃时P-gp的表达量较37℃时DRR分别为45.65%(P=0.007)、17.95%(P=0.021),差异有显著学意义;TAX处理组DRR为11.90%,差异无显著学意义(P=0.065).结论:高温43℃的短期处理对人胃癌SGC7901/ADM细胞中P-gp和MRP多药耐药蛋白的表达有一定的抑制作用,可能是逆转耐药的机制之一.     

Ss-A/Ro核蛋白60 ku亚单位在胃癌多药耐药中的作用

目的:对Ro 60在胃癌多药耐药中的功能进行研究．方法:克隆Ro 60编码基因,构建Ro 60编码基因的正义真核表达载体,将其转导入SGC7901 细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素．结果:成功构建了Ro 60正义真核表达载体, 应用脂质体介导法将其转导入SGC7901,Ro 60真核表达载体转染SGC7901细胞后其表达量明显增加,体外药物敏感性试验提示其对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、阿霉素的敏感性减低,SGC7901细胞的IC50值 (mg/L)与未转染细胞和转染空白载体细胞相比,显著增加(2．28±0．11 vs 0．45±0．04,0．65 ±0．05;2．89±0．14 vs 0．61±0．21,0．90±0．11; 1．92±0．03 vs 0．54±0．03,0．75±0．21;1．41± 0．06 vs 0．45±0．03,0．54±0．03;0．28±0．03 vs 0．14±0．01,0．14±0．01;均P<0．01),细胞内阿霉素蓄积显著减少(56．30±2．49 mg/L vs 92．83 ±3．63,87．38±2．94 mg/L,P<0．01)．结论:Ro 60真核表达载体转染SGC7901细胞后显示了一些多药耐药的特性,提示Ro 60在胃癌多药耐药中发挥了一定的作用．     

Ss-A/Ro核蛋白60 ku亚单位反义核酸逆转胃癌细胞多药耐药

目的:对Ro 60反义核酸在逆转胃癌细胞多药耐药中作用进行研究．方法:克隆Ro 60编码基因,构建Ro 60编码基因的反义真核表达载体,将其转导入SGC7901细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素．结果:成功构建了Ro 60反义真核表达载体,应用脂质体介导法将其转导入SGC7901-VCR, Ro 60反义真核表达载体转染SGC7901-VCR细胞后,Ro 60的表达量明显下降,体外药物敏感性实验提示其对长春新碱、丝裂霉素、顺铂、阿霉素的敏感性增加,转染反义表达载体的SGC7901-VCR细胞与未转染和转染空载体的细胞相比,IC50值(mg/L)有显著的下降(7．66±0．45 vs 19．56±0．38,17．48±0．85;0．84±0．03 vs 1．62±0．06．1．80±0．03;0．51±0．03 vs 0．87±0．03．0．88±0．03;0．22±0．01 vs 0．52±0．02,0．43±0．03,均P<0．01),细胞内阿霉素蓄积有显著的增加(51．94±1．26 mg／L vs 36．27±0．98,37．01±0．91 mg／L,P<0．01)．结论:Ro 60反义真核表达载体转染SGC7901后能够抑制胃癌细胞的多药耐药表型．     

Influence of efflux pump inhibitors on the multidrug resistance of Helicobacter pylori

AIM:To evaluate the effect of efflux pump inhibitors (EPIs) on multidrug resistance of Helicobacter pylori (H. pylori).METHODS: H. pylori strains were isolated and cultured on Brucella agar plates with 10% sheep‘s blood. The multidrug resistant (MDR) H. pylori were obtained with the inducer chloramphenicol by repeated doubling of the concentration until no colony was seen, then the susceptibilities of the MDR strains and their parents to 9 antibiotics were assessed with agar dilution tests. The present stud...