DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β表达的信号转导机制。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测细胞核因子-κB(NF-κB)活性,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果LPS刺激MH-S细胞可导致TNF-α、IL-1β mRNA、p-IκB表达增加及NF-κB活性升高。用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0mg.L-1)预处理细胞30min后再给予LPS刺激,可使TNF-α、IL-1β mRNA表达降低,并呈剂量依赖性;升高的NF-κB活性及p-IκB表达均显不同程度的抑制。单独DATS对TNF-α、IL-1β mRNA表达及NF-κB活性无影响。结论DATS可通过抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达。     

抗氧化剂2-吲哚啉酮衍生物对NF-κB信号通路的抑制作用

目的探讨2-吲哚啉酮衍生物(PMID)对NF-κB信号通路的调控作用。方法用PMID 2,5和10μmol·L-1预处理HEK293T细胞2 h,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)10μg·L-1刺激8 h。用双荧光素酶报告基因系统检测PMID对TNF-α诱导的NF-κB报告基因和ICAM启动子报告基因的影响;对照组HEK293T细胞单用TNF-α10μg·L-1处理,实验组用PMID 10μmol·L-1预处理细胞2 h,加入TNF-α10μg·L-1,分别在0,10,30,60 min后收取细胞,Western蛋白印迹法检测PMID对TNF-α诱导的IκBα降解和P65入核的影响;对照组用PMID 10μmol·L-1处理HEK293T细胞12 h,实验组用10μmol·L-1PMID处理4 h,后用TNF-α10μg·L-1刺激8 h。采用实时荧光定量PCR检测PMID对NF-κB信号通路下游靶基因白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子(MCP)和干扰素γ(IFN-γ)表达的影响。结果 TNF-α单用组与正常对照组比较,NF-κB和IFN-β报告基因活性明显增加(P<0.01),ICAM报告基因活性增加(P<0.05)。PMID预处理细胞后再采用TNF-α刺激,与TNF-α单用组比较,PMID 2μmol·L-1时,NF-κB和IFN-β报告基因活性降低(P<0.05),ICAM报告基因活性无明显变化;PMID 5μmol·L-1时,NF-κB和IFN-β报告基因活性明显降低(P<0.01),ICAM报告基因活性降低(P<0.05);PMID 10μmol·L-1时,NF-κB,ICAM和IFN-β报告基因活性明显降低(P<0.01)。与TNF-α单用组比较,PMID预处理后再用TNF-α处理,在10,30和60 min 3个时间点,IκBα表达增高(P<0.05),细胞核中P65表达减弱(P<0.05),胞浆中的P65表达增加(P<0.05)。加入PMID后,与正常对照组相比,对NF-κB下游靶基因IL-6和MCP的表达明显抑制(P<0.01),对IFN-γ有一定的抑制作用(P<0.05);加入TNF-α刺激后,与正常对照组相比,IL-6,MCP和IFN-γ表达均显著增高(P<0.01);加入PMID处理后,与TNF-α单用组比较,IL-6,MCP和IFN-γ表达均明显下降(P<0.05)。结论 PMID作为抗氧化剂,可负调控NF-κB信号通路。     

阻断NF-κB/IκB信号通路对HIBD大鼠脑内炎症因子的影响

目的:建立大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,将IκB通过腺病毒载体导入体内,探讨其对HIBD大鼠脑内NF-κB活性和TNF-α、IL-1表达的影响。方法:40只大鼠随机分为5组:I组(正常对照组),II组(HIBD损伤1d组),III组(HIBD损伤7d组),IV组(IκB干预1d组),V组(IκB干预7d组)。Western-blot检测脑细胞NF-κB的表达,了解NF-κB的活性,放免法检测TNF-α、IL-1的表达。结果:经中心静脉途径导入腺病毒转载的IκB基因,可降低HIBD大鼠脑内NF-κB活性,IκB干预1d组和7d组与HIBD损伤1d组和HIBD损伤7d组比较,NF-κB活性明显减少(P<0.05);降低脑内TNF-α、IL-1含量,IκB干预1d组和7d组与HIBD损伤1d组和7d组比较,TNF-α、IL-1含量明显减少(P<0.05)。结论:通过中心静脉途径注入腺病毒转载的IκB基因,直接增加脑内IκB的表达,阻断炎症因子TNF-α的合成,机制可能与其抑制了NF-κB的活性有关。     

化合物4h对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用及机制研究

摘要：目的:探讨化合物4h对脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症的抑制作用。方法:小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7经LPS诱导建立炎症模型,实验分为空白组、对照组、阳性罗格列酮组(5,10μmol·L-1)、阳性吲哚美辛组(5,10μmol·L-1)、4h组(5,10μmol·L-1),采用酶联免疫吸附实验测定目标化合物4h对于炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）分泌的影响;实验分为空白组、对照组、4h组(5,10μmol·L-1),采用蛋白免疫印迹实验测定目标化合物4h对于信号通路Toll样受体4/核因子κB（TLR4/NF-κB）蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,LPS作用后,对照组TNF-α含量显著升高（P<0.01）,并且随着LPS作用时间的延长,TNF-α含量随之升高。加入化合物处理后,各实验组TNF-α含量呈下降趋势,与对照组比较,化合物4h各时间点的TNF-α含量差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,随着化合物浓度的升高,炎症因子的含量逐渐下降。化合物4h对TNF-α的抑制作用明显优于两个阳性对照药罗格列酮和吲哚美辛（P<0.05或P<0.01）。与空白组比较,LPS作用后对照组RAW 264.7细胞中IκBα蛋白表达水平显著降低,TLR4、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与对照组比较,4h作用后实验组RAW 264.7细胞中IκBα蛋白表达水平显著升高,TLR4、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论:4h通过抑制信号通路TLR4/NF-κB蛋白的表达,进而抑制炎症因子TNF-α的产生,从而发挥抗炎作用。     

连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 以肺癌NCI-H226细胞为研究对象,将细胞分为对照组,连翘醇提物低、中、高浓度组（5、10、20 mg/mL）,激活剂组[10 mg/mL连翘醇提物+0.5μmol/L核因子κB(NF-κB)信号通路激活剂PMA],抑制剂组（10 mg/mL连翘醇提物+10μmol/L NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082）,阳性对照组（20μg/mL顺铂）,除对照组细胞不作干预外,其余各组细胞加入相应药物培养24 h。检测细胞增殖、迁移、侵袭情况,并计算增殖率、迁移率、侵袭细胞数;检测细胞中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达水平。结果 与对照组比较,连翘醇提物各浓度组和阳性对照组细胞的增殖率、迁移率、侵袭细胞数以及细胞中p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;与连翘醇提物中浓度组比较,抑制剂组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数及细胞中上述蛋白表达水平均显著降低（P&l...     

阿托伐他汀对兔动脉粥样硬化中NF-κB/IκB和炎症因子表达的影响

目的探讨高脂饮食诱发兔动脉粥样硬化中核因子-κB(NF-κB)的活化与其抑制因子IκB的表达,以及阿托伐他汀对NF-κB/IκB信号途径、ICAM-1和P选择素的影响。方法24只新西兰♂家兔随机分为正常对照组、高胆固醇组和阿托伐他汀组,应用W estern b lot方法检测动脉中胞核NF-κB p65亚基和胞浆IκBα表达变化;免疫放射法检测血清P选择素水平,免疫组织化学检测血管壁ICAM-1的表达。结果高胆固醇组与对照组比较胞核NF-κB p65和血管壁ICAM-1表达明显增强、血P选择素明显升高(P<0.05),胞浆中IκBα表达明显减弱(P<0.05);阿托伐他汀组与高胆固醇组比较NF-κB p65和血管壁ICAM-1明显表达较弱、血P选择素明显减少(P<0.05),胞浆IκBα的表达增强(P<0.05)。结论NF-κB/IκB信号途径在动脉粥样硬化中起重要作用,阿托伐他汀可以减少P选择素、ICAM-1的表达。     

抑制NF-κB信号通路对顺铂致肺癌大鼠肾损伤的保护作用及其分子机制研究

摘要：目的:探索抑制核转录因子（NF）-κB信号通路对顺铂致肺癌大鼠肾损伤的保护作用及其分子机制研究。方法:将50只大鼠随机分为5组:正常对照组、肺癌组（Lewis细胞）、顺铂组(Lewis细胞+腹腔注射顺铂溶液5 mg·kg-1)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组(Lewis细胞+腹腔注射PDTC 25 mg·kg-1)、PDTC+顺铂组（Lewis细胞+腹腔注射顺铂和PDTC）,每组10只。末次给药后,生化分析仪检测血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C（Cys C）、尿液肾损伤分子-1（Kim-1）水平,ELISA法测定肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平,RT-PCR检测肾组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平,Western Blotting检测核因子2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、NF-κB p65、p-IκBα/IκBα的表达,HE染色检测肾组织损伤。结果:与肺癌组相比,顺铂组大鼠血SCr、BUN、Cys C、尿Kim-1水平及肾组织MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、Nrf2、HO-1、NF-κB p65和p-IκBα/IκBα的表达明显升高（P<0.05）,肾组织SOD活性和GSH-Px活性明显降低（P<0.05）;与顺铂组相比,PDTC+顺铂组大鼠血SCr、BUN、Cys C、尿Kim-1水平及肾组织MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、NF-κB p65和p-IκBα/IκBα的表达明显明显降低（P<0.05）,肾组织SOD、GSH-Px、Nrf2和HO-1的表达明显升高（P<0.05）。结论:抑制NF-κB信号通路可以降低炎症因子水平,还可以激活Nrf2的表达,降低氧化应激水平,保护顺铂致肺癌大鼠的肾组织损伤。     

红霉素抑制人工关节磨屑诱导的外周血单核细胞NF-κB的活化

目的 探索红霉素(EM)对人工关节磨屑诱导的外周血单核细胞抑制性κB(IκBa)降解、核因子κB(NFκB)活化的影响.方法 采集30例人体外周血,分离单核细胞(MO),每例标本分成6组,A组:仅MO;B组:M0 超高分子聚乙烯微粒(UHMWPE);C组:MO UHMWPE 帕米磷酸钠(10μg/ml);D组:MO UHMWPE EM(5μg/ml);E组:MO UHMWPE EM(10μg/ml);F组:MO UHMWPE EM(25μg/ml).培养48 h后,采用Western印迹法检测IκBa蛋白降解情况,电泳迁移率分析检测NF-κB活性的变化.结果 A、C、D、E、F组NF-κB出活性明显低于B组(P<0.01),同时与A、C、D、E、F组相比较,B组IκBa蛋白降解明显增强.结论 EM能有效地抑制由于UHMWPE刺激MO所致的IκBa降解和NF-κB活化.EM的效果与帕米磷酸钠相似,能防治人工关节置换术后由微粒诱导的NF-κB活化引发的骨溶解,有望成为将来防治人工关节无菌性松动的一种很有潜力的药物.     

西洛他唑对糖尿病大鼠主动脉VCAM-1、NF-κB及PPARs的影响

目的观察西洛他唑对糖尿病大鼠主动脉血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、核因子(NF)-κB及过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR s)的影响,探讨西洛他唑影响VCAM-1表达的上游信号通路。方法腹腔注射链脲佐菌素(65 mg.kg-1)制备糖尿病模型,正常对照组大鼠腹腔注射柠檬酸钠缓冲液(NC,n=8)。随机将成模的32只糖尿病大鼠分为糖尿病模型组(DM,n=12)、高剂量西洛他唑组(GX,27mg.kg-1.d-1,n=10)与低剂量西洛他唑组(DX,9 mg.kg-1.d-1,n=10)。治疗8 wk,采用免疫组织化学法检测各组主动脉组织VCAM-1表达及P65亚基核转位情况;原位杂交和凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测主动脉VCAM-1 mRNA表达及NF-κB-DNA结合活性;RT-PCR或Real-Time PCR检测PPARα、PPARγmRNA表达。结果①与正常组相比,糖尿病大鼠主动脉内皮VCAM-1及其基因表达升高(P<0.01),NF-κB P65核转位及活化增强(P<0.01),PPARγmRNA表达为正常大鼠的1.7倍,而PPARαmRNA表达下降(P<0.01)。②与糖尿病组相比,高剂量西洛他唑治疗组主动脉内皮VCAM-1及其基因表达降低(P<0.01),NF-κB P65核转位及活化被抑制(P<0.01),PPARγmRNA表达比糖尿病大鼠下降73%,而PPARαmRNA则上升(P<0.05)。结论高剂量西洛他唑抑制糖尿病大鼠主动脉内皮表达VCAM-1,这可能与其对PPARs表达、NF-κB核转位及其DNA结合活性的影响有关。     

芦丁通过抑制 NF-κB信号通路缓解大鼠结肠炎的研究

目的探讨芦丁对右旋葡聚糖硫酸钠( DSS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎( UC)的缓解作用以及对核因子 κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 2020年 4—5月建立右旋葡聚糖硫酸钠( DSS)诱导的 UC模型。将大鼠分为对照组、模型组和芦丁组( 20、 40、80 mg/kg)。观察各组大鼠的疾病活动指数( DAI),比色法检测结肠组织髓过氧化物酶( MPO)活性, Elisa法检测大鼠结肠组织中的肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)和白细胞介素 -6(IL-6)水平,并采用蛋白质印迹法( western blotting)测定各组大鼠结肠组织的人磷酸化 IκB激酶 -α(p-IκBα)、 IκB激酶 -α(IκBα)以及核 p65蛋白表达。结果芦丁高、中、低剂量组的 DAI评分［(1.09±0.39)、(1.38±0.38)、(1.97±0.46)分］、 MPO活性［( 0.74±0.04)、(0.75±0.08)、(0.98±0.06)U/g］、 TNF-α水平［( 3.16±0.52)、(3.75±0.72)、(4.26±0.87)μg/L］和 IL-6水平［( 3.72±0.65)、(4.28±0.72)、(5.12±0.93)μg/L］均显著性低于模型组的( 2.98±0.57)分、(1.26±0.07)U/g、(5.19±0.93)μg/L、(6.54±0.85)μg/L(P<0.05)。机制研究显示芦丁可以有效下调 DSS诱导大鼠结肠组织的 p-IκBα和核 p65的水平的提高(P<0.05)。结论芦丁通过下调 NF-κB信号通路缓解右旋葡聚糖硫酸钠诱导的大鼠溃疡性结肠炎。     

栀子苷对缺氧/复氧小胶质细胞TLR4通路的影响

目的研究缺氧/复氧对原代培养的小胶质细胞TLR4受体及其通路中MyD88、NF-κBp65、p-ERK1/2、p-IκBα和p38的影响和不同浓度栀子苷的干预作用,以揭示栀子苷治疗脑缺血的分子生物学机制。方法原代培养小胶质细胞,采用缺氧/复氧的方式制备模型,用栀子苷125、250和500μmol.L-1 3个浓度梯度进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测小胶质细胞TLR4 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、p-IκBα、p38、p-ERK1/2蛋白,免疫荧光双染观察MyD88和NF-κB;结果缺氧/复氧激活了TLR4通路,并通过MyD88依赖途径激活了下游蛋白MyD88、NF-κBp65、p-ERK1/2、p-IκBα和p38;栀子苷250和500μmol.L-1组抑制了通路蛋白的活性;结论缺氧/复氧使TLR4通路蛋白磷酸化激活。栀子苷通过对TLR4通路蛋白的抑制发挥抗炎效应,促进脑缺血的恢复。     

穿心莲内酯对人肺腺癌A549细胞NF-κB通路的调控作用

目的探讨穿心莲内酯对肿瘤细胞生长的作用及机制。方法人肺腺癌A549细胞分别与穿心莲内酯1.5～30μmol·L-1作用24h,以及穿心莲内酯30μmol·L-1作用4～24h。用MTT法检测A549细胞存活率;Western印迹法检测在肿瘤坏死因子α(TNF-α)10μg·L-1刺激下,穿心莲内酯30μmol·L-1对NF-κB信号通路中的相关蛋白NF-κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化IκBα、IκB激酶β(IKKβ)和磷酸化IKKβ表达的影响;ELISA法检测穿心莲内酯对A549细胞核内NF-κBDNA结合活性的影响。结果穿心莲内酯的浓度和作用时间与A549细胞的存活率密切相关,穿心莲内酯30μmo·lL-1作用24h,A549细胞的存活率下降到(22.0±1.2)%,而穿心莲内酯1.5μmol·L-1作用24h或者穿心莲内酯30μmol·L-1作用4h对A549细胞的存活率几乎无影响。Western印迹法显示,穿心莲内酯能够抑制TNF-α诱导的NF-κB信号通路中IKKβ的磷酸化,抑制IκBα的磷酸化,推迟IκBα的降解,对IKKβ的表达无影响。穿心莲内酯还能够抑制TNF-α诱导的A549细胞核内NF-κBp65蛋白的DNA结合活性,抑制率达32%。结论穿心莲内酯通过影响NF-κB信号通路抑制A549细胞的生长。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导的神经细胞核因子-κB活化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1拮抗β淀粉样蛋白(Aβ)、保护神经细胞的作用是否与核因子κB(NF-κB)活化机制变化有关。方法分别以原代培养的大鼠海马神经元和星形胶质细胞为靶标建立Alzheimer病(AD)细胞模型。采用四唑盐显色(MTT)法检测细胞活力,进行Aβ25-35造模浓度、时间以及人参皂苷Rg1预处理最适宜浓度的选择。经Aβ25-35和Rg1干预后,用激光共聚焦显微镜检测分析FITC/PI双重标记的NF-κB在细胞内的激活程度,结合形态学观察分析人参皂苷Rg1对以上两种细胞的保护作用。结果40μmol.L-1的Aβ25-35作用24h后可激活原代培养星形胶质细胞的NF-κB(P<0.01),下调原代培养神经元的NF-κB活性(P<0.01)。2μmol.L-1的人参皂苷Rg1能明显提高神经元的NF-κB活性(P<0.01),减弱星形胶质细胞的NF-κB活性(P<0.01)。同时结合形态学观察和细胞活力检测发现,人参皂苷Rg1对两种细胞都有保护作用。结论人参皂苷Rg1通过启动神经元中NF-κB活化、下调星形胶质细胞的NF-κB活性,从两方面发挥其保护神经细胞的作用,从而有可能达到减缓AD发病进程的效果。     

川芎嗪对LPS致心肌细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨川芎嗪对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞损伤及NF-κB核移位的影响。方法采用原代培养SD乳鼠心肌细胞,经终浓度分别为40、80、120μmol·L-1川芎嗪预处理后,用10 mg·L-1LPS处理6 h,处理完成后检测培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性,四唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞存活率,流式细胞法检测ROS生成,试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量及细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性、Western blot法检测核蛋白中NF-κB p65的变化情况。结果不同剂量川芎嗪(40、80、120μmol·L-1)预处理3 h后可明显降低LDH活性,增加细胞存活率,降低ROS生成,减少MDA含量,升高SOD、GSH-Px活性,抑制NF-κB p65在细胞核中的表达,且呈剂量依赖性。结论川芎嗪可抑制LPS所致的心肌损伤,其机制与减少脂质过氧化、增强抗氧化酶系、降低ROS生成、抑制NF-κB p65核移位有关。     

姜黄素通过阻断NF-κB减少IL-1β诱导的内皮脂酶表达

目的观察姜黄素对培养的人血管内皮细胞内皮脂酶表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法不同浓度的姜黄素处理HUVEC-12细胞。RT-PCR检测内皮酯酶(endo-thelial lipase,EL)mRNA的表达;Western blot检测核因子-κB抑制因子-α(inhibitor of nuclear factor-κB-α,IκB-α)蛋白的表达;间接免疫荧光检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白的活化。结果IL-1β处理HUVEC-12细胞可以明显上调EL mRNA的表达,同时降低胞质蛋白IκB-α的表达水平,激活核转录因子NF-κB,增加胞核蛋白NF-κB的水平。姜黄素预处理HUVEC-12细胞可以抑制IL-1β对EL的上调作用,同时逆转IL-1β诱导的IκB-α蛋白降解和NF-κB活化。结论姜黄素可以通过阻断NF-κB活化减少IL-1β诱导的人血管内皮细胞EL的表达。     

大黄素对HT-29细胞IL-8分泌及NF-κB活化的影响

目的研究大黄素对IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞的IL-8分泌及NF-κB活化的作用,为其临床应用提供实验依据。方法用IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞来建立体外细胞炎症模型,采用ELISA检测HT-29细胞的IL-8分泌;以免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜观察HT-29细胞NF-κB核转位。结果大黄素在10～80mol.L-1能降低IFN-γ+LPS所引起的HT-29细胞IL-8的大量产生,并且呈明显的剂量依赖关系;大黄素不同浓度组可抑制IFN-γ+LPS刺激造成的NF-κB激活,;有剂量依赖关系。结论大黄素能有效抑制IFN-γ+LPS诱导的IL-8分泌和NF-κB激活。     

鼠曲草提取物对COPD模型大鼠气道炎症的抑制作用及对NF-κB通路的影响

目的:研究鼠曲草提取物对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型大鼠气道炎症的影响及作用机制。方法:大鼠随机分为正常组,模型组,鼠曲草提取物低、中、高剂量组(0.75,1.5,3g·kg^-1)和地塞米松组(阳性对照药,27mg·kg^-1),每组9只。除正常组外,其余各组大鼠采用香烟烟熏联合气管内滴注脂多糖建立COPD大鼠模型。造模15d后,各给药组大鼠灌胃相应药物,正常组和模型组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠溶液,每日1次,连续14d。末次给药后,检测各组大鼠肺功能;HE染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫法检测肺泡灌洗液、血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-1β、TNF-α、TGF-β含量;RT-PCR法检测右肺组织中NF-κB mRNA的相对表达量;Western blot法检测右肺组织中NF-κB、IKKβ、IκBα及其p-IκBα蛋白的相对表达量。结果:不同剂量的鼠曲草提取物干预后,均可显著提高大鼠肺功能参数FEV0.3、FVC、FEV0.3/FVC,明显降低肺泡灌洗液中IL-8、IL-17、TNF-α及血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、TGF-β含量,改善大鼠肺组织病理变化,同时显著降低p-IκB、IKK蛋白及NF-κB mRNA和蛋白相对表达量。结论:鼠曲草能够改善COPD模型大鼠的肺功能,减轻肺组织病理损伤,抑制炎症反应,其作用可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

非诺贝特及罗格列酮对高糖培养肾小球系膜细胞核因子κB信号通路调控的影响

目的探讨过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR)激动剂对糖尿病肾病(DN)作用的机制。方法将大鼠肾小球系膜细胞(MC)分4组:正常对照组(葡萄糖5.5mmol·L-1)、高糖组(HG,葡萄糖25mmol·L-1)、非诺贝特(FB)100μmol·L-1组和罗格列酮(RG)20μmol·L-1组。ELISA法检测培养细胞上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)和纤连蛋白(FN)含量;RT-PCR法检测核因子κB(NF-κB)mRNA的表达;ELISA法检测胞浆及胞核内总NF-κBp65、活性NF-κBp65和磷酸化NF-κBp65表达。结果与正常对照组比较,HG组MC合成基质蛋白Col-Ⅳ和FN增多;HG组MC胞核内核定位序列(NLS)-NF-κBp65和Ser276-NF-κB的表达显著增加;FB或RG干预后能部分或完全逆转上述变化。与HG组比较,FB或RG组上清液中Col-Ⅳ含量下降48h:(21.2±3.2)vs(17.7±2.2),(17.0±3.2)μg.L-1、FN减少48h:(13.5±1.3)vs(12.1±1.0),(11.8±1.1)μg.L-1。各组MC胞浆内NLS-NF-κBp65和Ser276-NF-κB表达则无显著变化;各组NF-κBmRNA表达及总NF-κBp65蛋白水平亦无明显改变。结论PPAR激动剂通过下调MC胞核内NF-κB信号传导通路的活化,进而减少胞外基质合成,达到对DN的治疗作用。