多底物协同-拮抗法同时检测超广谱β-内酰胺酶和AmpC1β-内酰胺酶

目的 建立一种能同时检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpCβ-内酰胺酶(AmpCs)的简便、实用的方法。方法 应用“多底物协同-拮抗法”(MSSAT)检测30株阴沟杆菌(E．cl)和42株不动杆菌(Aci)的ESBLs和AmpCs。结果 MSSAT法检出各种ESBLs产酶株53株(E．cl25株，Aci28株)；各种AmpCs产酶株52株(E．cl19株，Aci33株)，其中高诱导型10株(E．cl8株，Aci2株)，部分去阻遏型12株(E．cl5株，Aci7株)，完全去阻遏型30株(E．cl6株，Aci24株)；同时产ESBLs AmpCs产酶株37株(E．cl15株，Aci22株)，其中ESBLs 高诱导型4株(均为E.cl),ESBLs 部分去阻遏型6株(E.cl5株，Aci1株)，ESBL.s 完全去阻遏型27株(E．cl6株，Aci21株)。结论 MSSAT法能同时检测ESBLs AmpCs及其不同型，且准确、简便、实用。在同时产ESBLs AmpCs的细菌中，E．cl以产诱导型AmpCs为主，Aci则以产非诱导型AmpCs为主。同时产ESBLs AmpCs的细菌大部分取自痰标本。     

同时产超广谱β-内酰胺酶和AmpCβ-内酰胺酶菌的单独和联合药物敏感分析

目的研究同时产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpCβ-内酰胺酶(AmpCs)菌(同产酶菌)的抗生素单独和联合耐药性,以期指导同产酶菌的治疗. 方法采用多底物纸片法(协同法、拮抗法)、ESBLs确认试验、AmpCs检测法检测33株阴沟肠杆菌和46株不动杆菌属的ESBLs和AmpCs产酶情况,以琼脂扩散法检测同产酶菌的抗生素单独和联合耐药性. 结果在本组菌,检出同时产ESBLs AmpCs产酶株42株,其中ESBLs 诱导型AmpCs 12株,ESBLs 高产AmpCs 30株;同时产ESBLs 诱导型AmpCs菌对亚胺培南、头孢吡肟和头孢哌酮/他唑巴坦的单独敏感率均>90%,对阿米卡星的敏感率为66.67%,对其他4大类6种抗生素的单独敏感率均<34%;对4大类10种抗生素的10种组合联合药敏,氨曲南与阿莫西林/克拉维酸协同率高(75%),亚胺培南与头孢哌酮/他唑巴坦的拮抗率也较高(50%),其余大部分为无关;在同时产ESBLs 高产AmpCs时,有效抗菌药物仅为亚胺培南、头孢哌酮/他唑巴坦,对其他4大类8种抗生素的单独敏感率均<20%;对4大类10种抗生素的10种组合联合药敏,除氨曲南与阿莫西林/克拉维酸有少量协同外,全部为无关. 结论阴沟肠杆菌和不动杆菌属的同产酶率很高;同产酶菌仅对亚胺培南与头孢哌酮/他唑巴坦敏感,其对4大类10种抗生素的10种组合联合药敏,仅氨曲南与阿莫西林/克拉维酸部分协同,其余大部分为无关.     

肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶类型的动态比较研究

目的动态比较研究肺炎克雷伯菌(KPN)所产各种β-内酰胺酶(β-lase)分布情况. 方法采用多底物改良相邻纸片法检测230株,S1期(2000年1月～2001年6月)70株、S2期(2001年7月～2002年7月)70株和S3期(2003年1月～2004年11月)90株;KPN所产各种β-lase. 结果 S1期Kpn总β-lase检出率为28.7%,其中产青霉素酶、头孢菌素酶各1株(1.4%),产广谱酶4株(5.7%),产ESBLs14株(20.0%);S2期70株KPN总β-lase检出率为85.7%,其中产青霉素酶4株(5.7%),头孢菌素酶3株(4.3%),产广谱酶11株(15.7%),产ESBLs 42株(60.0%);S3期KPN总β-lase检出率为64.0%,其中产青霉素酶9株(10.0%),AmpCs酶3株(3.3%),广谱酶3株(3.3%),单纯产ESBLs20株(22.2%),同时产ESBLs AmpCs产酶株15株(16.7%),酶抑制剂耐药的β-内酰胺酶14株(15.6%,1株IRT、13株IRESBLs),ESBLs总检出率为53.3%;3期均未检出碳青酶烯酶. 结论本组KPN所产各种β-lase的总产酶率、β-lase类型数均随时间而提高.     

大肠埃希菌产β-内酰胺酶类型的动态比较研究

目的动态比较研究大肠埃希菌(E.coli)所产各种β-内酰胺酶(β-lase)的分布.方法采用多底物改良相邻纸片法检测195株,其中S1期75株、S2期60株和S3期60株;E.coli所产各种β-lase.结果 S1期E.coli总β-lase检出率为70.67%,其中产青霉素酶18株(24.00%),产广谱酶8株(10.67%),产ESBLs 27株(36.00%),未检出其他β-lase;S2期E.coli总β-lase检出率为81.67%,其中产青霉素酶5株(8.33%),产广谱酶17株(28.33%),产ESBLs27株(45.00%),未检出其他β-lase;S3期E.coli总β-lase检出率为91.00%,其中产青霉素酶3株(5.00%),AmpC酶1株(1.67%),广谱酶10株(16.67%),产ESBLs29株(48.33%),同时产ESBLs AmpC酶株8株(13.33%),酶抑制剂耐药的β-内酰胺酶4株(6.00%,1株IRT、1株IRBSBLs、2株IRESBLs),未检出碳青酶烯酶.结论本组E.coli所产各种β-lase的总产酶率、β-lase类型数均随时间而提高.     

弗氏柠檬酸杆菌β-内酰胺酶的分类检测

目的 研究弗氏柠檬酸杆菌所产各种β-内酰胺酶(β-lase)分布情况.方法 采用头孢硝噻吩试验检测33株弗氏柠檬酸杆菌所产β-lase,多底物纸片法(协同法、拮抗法)、AmpC酶检测法、碳青酶烯酶分类检测检测其所产各种β-lase.结果 33株弗氏柠檬酸杆菌,检出29株β-lase,总检出率为87.9%;头孢硝噻吩试验27株为阳性(81.8%);29株产酶菌株中,产青霉素酶2株,产头孢菌素酶3株,产广谱β-内酰胺酶5株,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)11株,产ESBLs AmpC酶6株,ESBLs总产酶率51.5%,产碳青酶烯酶2株(均为复合产超广谱酶 金属酶).结论 弗氏柠檬酸杆菌产β-lase率、ESBLs总产酶率和复合产酶率很高,产6种酶,以广谱酶、ESBLs为主.     

下呼吸道感染肠杆菌科细菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测

目的探讨下呼吸道感染标本中分离的肠杆菌科细菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率.方法采用纸片扩散法对下呼吸道感染标本中分离的肠杆菌科细菌进行初筛,选择出可疑产酶菌株,然后以头孢西丁三维试验检测产AmpC酶菌株,以复合纸片法检测产ESBLs菌株,以头孢曲松三维试验检测同时产AmpC酶和ESBLs菌株.结果在下呼吸道感染肠杆菌科细菌初筛为耐药菌株的242株细菌中,检出单产AmpC酶、单产ESBLs及同时产AmpC酶和ESBLs细菌分别为21、110、6株,总检出率分别为8.7%、45.5%、2.5%,其中阴沟肠杆菌AmpC酶检出率最高,为42.1%,肺炎克雷伯菌ESBLs检出率最高,为64.5%.结论及时准确地检测产AmpC酶和(或)ESBLs细菌,为临床医师诊断和治疗患者提供依据,能早期治疗并控制下呼吸道感染性疾病.     

产β-内酰胺酶葡萄球菌及产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药

目的调查本地区产β-内酰胺酶(Blac)葡萄球菌及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的革兰阴性杆菌的耐药状况. 方法采用酸试剂纸片法检测产Blac的葡萄球菌;采用ESBLs确证试验检测产ESBLs的革兰阴性杆菌. 结果 326株葡萄球菌检出Blac阳性菌237株,检出率为72%;787株革兰阴性杆菌检出ESBLs阳性菌111株,检出率为14.1%;它们对β-内酰胺类抗生素均呈现极高的耐药性. 结论产Blac的葡萄菌及产ESBLs的革兰阴性杆菌均具有极高的耐药性及多重耐药性,检测葡萄球菌产Blac酶、革兰阴性杆菌产的状况,并探讨它们的耐药谱,有利于指导临床合理使用抗生素.     

不动杆菌β-内酰胺酶的分类和分布研究

目的 了解不动杆菌所产各种β-内酰胺酶(β-lactamases)分布情况。方法 采用多底物纸片协同法、ESBLs确认试验、纸片拮抗法、AmpC酶检测法检测42株不动杆菌所产各种β—内酰胺酶。结果 42株不动杆菌总β-内酰胺酶检出率为100％，其中产头抱菌素酶2株(4．8％)、诱导型AmpC酶5株(11．9％)、单独产AmpC菌及ESBLs各7株(16、7％)，产AmpC酶及ESBLs2l株(50．0％)，未检出单独青霉素酶、广谱酶和碳青霉烯酶；28株产ESBLs菌株中，纸片协同法阳性仅7株，占25．0％(7/28)，ESBLs确认试验阳性26株，2l株产ESBLs菌株的超广谱β-内酰胺抗生素抑菌环直径为6mm。结论 本组不动杆菌产β-内酰胺酶总检出率很高，以AmpC酶、ESBLs为主，未检出青霉素酶和碳青霉烯酶；本组不动杆菌所产β-内酰胺酶的产量高。     

基层医院产β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的分析山区基层医院阴沟肠杆菌(ECL)产β-内酰胺酶的耐药现状,指导临床合理使用抗菌药物。方法用纸片扩散法(K-B法)对87株阴沟肠杆菌进行13种抗菌药物的敏感性试验,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的筛选按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的确证法进行,去阻遏持续高产AmpC酶的检测采用双抑制剂扩散协同纸片法检测。结果从87株阴沟肠杆菌中检出产AmpC酶13株,占14.9%,产ESBLs24株,占27.6%,同时表达AmpC酶和ESBLs10株,占11.5%;产酶株对13种抗菌药物均显示了不同程度的耐药性或出现交叉耐药性。结论ESBLs和AmpC酶的产生是阴沟肠杆菌的重要耐药机制。     

普罗威登斯菌属β-内酰胺酶的分类检测

目的 研究普罗威登斯菌属所产各种β-内酰胺酶分布情况.方法 采用头孢硝噻吩试验检测19株普罗威登斯菌属所产β-内酰胺酶,多底物纸片法(协同法、拮抗法)、AmpC酶检测法、碳青酶烯酶分类检测其所产各种β-内酰胺酶.结果 19株普罗威登斯菌属头孢硝噻吩试验均为阳性,β-内酰胺酶总检出率为100.0%,其中单独产广谱酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、碳青酶烯酶分别为8株占42.1%,8株占42.1%、3株占15.8%,持续高产AmpC酶1株,未检出持续高产AmpC酶+ESBLs复合产酶菌.结论 普罗威登斯菌属产β-内酰胺酶率很高,产3种酶,以广谱酶、ESBLs为主.     

不动杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测

目的研究不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测方法,分析其与抗生素耐药的关系。方珐采用NCCLS（美国临床标准委员会）推荐方法对收集120株不动杆菌进行产ESBLs（超广谱β-内酰胺酶）的筛选和确认实验,按照PCR基因分型原则采用碱裂解法提取质粒DNA,以此为模版设计引物和反应条件,用PCR法对产ESBLs株进行基因分型．结果产ESBLs共检出20株,检出率占16．7％．产酶株耐药率明显高于非产酶株。PCR进行ESBLs基因分型。检出TEM型12株,SHV型4株,PER型4株,未检出OXA．姑论西安市不动杆菌产ESBLs株基因型以TEM为主,产ESBLs可能是西安市不动杆菌耐药的主要机制。     

医院内产β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的检测

目的了解医院高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阴沟肠杆菌的流行情况. 方法用改良三维实验检测86株阴沟肠杆菌中表型可疑产酶的菌株. 结果检出产酶菌26株,其中高产AmpC酶17株,ESBLs 4株,同时高产AmpC酶和ESBLs 5株;产酶菌对多种抗生素的耐药率明显高于不产酶菌. 结论及时准确检测阴沟肠杆菌的产酶株,对指导临床合理使用抗生素、减缓对细菌耐药的选择性压力、避免医院感染的发生和流行有重要意义.     

鲍氏不动杆菌耐药性与产β-内酰胺酶的关系分析

目的 了解鲍氏不动杆菌的耐药性与产β-内酰胺酶的关系.方法 对分离出的细菌采用API 20NE系统进行鉴定,药敏试验采用K-B法,用改良三维试验检测菌株产β-内酰胺酶的情况,用2-巯基丙酸抑制试验筛选金属酶.结果 在150株鲍氏不动杆菌中,头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低(4.0%),其次为亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦和左氧氟沙星(耐药率从20.0%～55.0%),耐药率最高的是头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和阿米卡星,均＞60.0%;在所有菌株中有37株(24.7%)产ESBLs,66株(44.0%)产AmpC酶,16株(10.7%)产碳青酶烯酶,其中12株(8.0%)为金属酶.结论 除头孢哌酮/舒巴坦和碳青酶烯类抗菌药物外,鲍氏不动杆菌对临床常用的其他抗菌药物耐药率均较高,产ESBLs、AmpC酶和金属酶是其对多种抗菌药物高度耐药的主要原因.     

耐药柠檬酸杆菌属β-内酰胺酶检测

目的了解安徽医科大学第一附属医院临床分离的耐药柠檬酸杆菌属产β-内酰胺酶的情况。方法采用琼脂稀释法测定17种抗菌药物对临床分离的52株柠檬酸杆菌最低抑菌浓度（MIC）,用改良三维试验检测31株柠檬酸杆菌ESBLs、AmpC、MBL的产酶情况,再用聚合酶链反应（PCR）法扩增β-内酰胺酶基因。结果31株柠檬酸杆菌对多种抗菌药物耐药,三维试验检出24株菌产ESBLs,3株菌产AmpC酶,2株同时高产AmpC酶和ESBLs,未检出MBL;PCR检出20株菌携带blaTEM基因,1株菌携带blaSHV基因,8株菌携带blaCTX-M-1基因,15株菌携带blaCTX-M-13基因,5株菌携带blaCIT基因。结论31株多重耐药的柠檬酸杆菌同时产〉1种的ESBLs及高产AmpC酶,是其对β-内酰胺类药物耐药的重要原因。     

质粒介导产ESBLs与AmpC β-内酰胺酶基因弗氏柠檬酸杆菌的研究

目的研究一株同时产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶弗氏柠檬酸杆菌(CFR)的耐药机制。方法 2008年1月从临床尿液标本中分离出多药耐药弗氏柠檬酸杆菌1株,采用双纸片扩散法检测产ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC酶,E-test法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测产ESBLs和AmpC酶基因,DNA测序决定基因型;接合试验测定耐药基因的转移性。结果临床分离出一株同时产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的多药耐药弗氏柠檬酸杆菌,对头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁、氨曲南、氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的MIC分别为96、96、256、192、>256、>32μg/ml,PCR扩增及测序临床分离株携带blaCTX-M-3和blaCMY-2,接合试验显示含blaCTX-M-3和blaCMY-2基因耐药质粒可以通过接合转移至受体菌大肠埃希菌J53。结论 CFR同时携带有ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶基因,ESBLs基因和AmpCβ-内酰胺酶基因由质粒介导。     

产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科细菌医院感染与耐药表型分析

目的探讨产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的医院感染和耐药现状. 方法采用双纸片协同试验及纸片确证试验检测医院感染病例中产ESBLs菌,采用纸片扩散法测定产ESBLs菌和不产ESBLs菌的耐药率并加以比较. 结果 125株肠杆菌科细菌检出产ESBLs菌共41株,产酶率为32.8%,产酶株均为大肠埃希菌(16株)和肺炎克雷伯菌(25株),耐药表型结果显示产ESBLs菌对抗生素耐药率明显高于非产ESBLs菌. 结论产ESBLs是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要机制,临床细菌室应对产ESBLs菌进行规范化地监测与控制.     

医院感染病原菌AmpC与超广谱β-内酰胺酶检测

目的 了解医院感染病原菌中革兰阴性杆菌产AmpC与超广谱p内酰胺酶(ESBLs)的情况.方法 用改良的头孢西丁三维试验和头孢曲松三维试验检测持续高产AmpC β-内酰胺酶和ESBLs.结果 医院感染病原菌中革兰阴性杆菌持续高产AmpC β-内酰胺酶,产酶率为16.00%,其中单独产AmpC β-内酰胺酶的产酶率为8.84%,以阴沟肠杆菌、褪色沙雷菌和产气肠杆菌产酶率高(36.00%、31.25%和28.00%);同时产ESBLs的检出率为7.16%,以鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌阳性率高(15.18%、10.60%和8.74%).结论 医院感染菌株产酶率较高,应引起临床高度重视.     

肺炎克雷伯菌臭鼻亚种产β-内酰胺酶的分类检测及耐药性

目的研究肺炎克雷伯菌臭鼻亚种(Koz)所产各种β-内酰胺酶(β-lase)分布及其耐药性。方法采用多底物纸片法、ESBLs确认试验、AmpC酶检测法检测36株Koz所产各种β-lase，采用琼脂扩散法分析其耐药性。结果(1)36株Koz β-lase检出率为69．4％，其中单独产广谱酶、青霉素酶、ESBLs分别为1、1、12株，产AmpC酶总数11株(30．5％)，ESBLs总数22株(61．1％)，未检出碳青酶烯酶；产复合酶11株(30．5％)，青霉素酶 诱导型AmpC酶1株，诱导型AmpC酶 ESBLs7株，持续高产AmpC酶 ESBLs3株；(2)22株产ESBLs菌株中．CAZ，ATM，CTX检出率分别68．2％、77．3％、95．5％；(3)非产酶Koz对12种抗生素均敏感；25株产β-内酰胺酶Koz中，非产ESBLs菌株对PRL、GN、SXT多数耐药，青霉素酶 诱导型AmpC酶、ESBLs 诱导型AmpC酶产酶菌株和产ESBLs菌株对亚胺培南、头孢哌酮／舒巴坦较敏感，对其他抗生素均有不同程度的较高耐药率，持续高产AmpC酶 ESBLs仅对亚胺培南敏感。结论36株Koz产β-lase总检出率很高，产4种酶，以AmpC酶、ESBLs为主，未检出碳青酶烯酶；复合产酶是其主要产酶形式之一，臭鼻克雷伯菌所产ESBLs的检出率以CTX最高；不同产酶菌株耐药谱不同，持续高产AmpC酶 ESBLs仅对亚胺培南敏感。     

山区医院产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性分析

目的 调查山区医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的耐药现状,为临床医师用药提供科学依据. 方法 细菌分离、鉴定按<全国临床检验操作规程>进行;药物敏感性试验采用K-B法. 结果 244株肠杆菌科细菌检出产ESBLs菌89株,总产酶率为36.5%;药敏试验结果显示,产ESBLs菌对常用抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌. 结论 产ESBLs是革兰阴性杆菌对β-内酰胺类抗菌经物耐药的重要机制,对产ESBLs菌应进行监测与控制.     

重症监护病房患者产超广谱β-内酰胺酶细菌感染的耐药性研究

目的了解我院重症监护病房(ICU)感染患者标本中肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的现状,为ICU抗感染化疗提供用药依据. 方法对我院8年来ICU送检标本中分离的 563株肠杆菌科细菌采用双纸片法筛选试验及确证试验检测ESBLs,并用K-B纸片法进行药敏试验. 结果 563株肠杆菌科细菌中检出产ESBLs菌 115株,检出率20.4%;肺炎克雷伯菌的产酶率26.1%,高于大肠埃希菌18.9%的产酶率;肠杆菌、柠檬酸杆菌、变形菌及摩根菌均检出产ESBLs菌株;产ESBLs菌株对15种常用抗菌药物的敏感性明显低于不产ESBLs的菌株;亚胺培南对产ESBLs细菌仍具有很高的抗菌活性. 结论我院ICU送检标本中分离的产ESBLs细菌比例高,应引起足够重视.