补肾活血方对AGEs条件下体外纯化培养大鼠视网膜Müller细胞HIF-1α介导缺氧信号通路的影响

目的观察在晚期糖基化终末产物(AGEs)条件下,补肾活血方含药血清对大鼠视网膜Müller细胞的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)缺氧信号通路的影响。方法采用SD大鼠制备补肾活血中药含药血清和空白血清,以终浓度50 mg/L的AGEs作为低AGEs条件,终浓度100 mg/L的AGEs作为高AGEs条件,将体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞分为6组,分别置于加入空白血清、中药含药血清、空白血清+低AGEs、空白血清+高AGEs、中药含药血清+低AGEs、中药含药血清+高AGEs的DMEM培养基中,培养48 h后酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞外液中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)含量,逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)测定各组Müller细胞HIF-1αm RNA、VEGFm RNA表达量,比较差异。结果 1.低AGEs组较正常对照组HIF-1α值有升高趋势,但差异无统计学意义(P0.05),HIF-1αm RNA值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05),高AGEs组较正常对照组HIF-1α、HIF-1αm RNA值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05);低、高AGEs组较正常对照组VEGF、VEGFm RNA值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05)。2.正常中药干预组HIF-1α、VEGF、HIF-1αm RNA、VEGFm RNA值接近正常对照组,差异无统计学意义(P0.05)。3.低、高AGEs中药干预组HIF-1α、VEGF、HIF-1αm RNA、VEGFm RNA值均较对应的低、高AGEs组明显降低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论补肾活血方含药血清可抑制视网膜Müller细胞在AGEs条件下HIF-1α介导缺氧信号通路的高表达,这可能是补肾活血方防治DR的机制之一。     

蛭龙活血通淤胶囊对脑出血大鼠神经细胞凋亡与缺氧诱导因子-1α蛋白表达的作用研究

目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的动态变化及蛭龙活血通淤胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通淤胶囊可能的脑保护作用。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通淤胶囊低、中、高剂量组。采用自体血注入法制备脑出血大鼠模型。采用TUNEL法测定凋亡细胞的表达,免疫组化法测定HIF-1α蛋白的表达。结果与模型组比较,蛭龙活血通淤胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞表达明显下降,而HIF-1α蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的凋亡细胞表达均明显下降,而HIF-1α蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论蛭龙活血通淤胶囊能明显促进HIF-1α表达,抑制细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系。     

脑出血PAR-1、HIF-1α与细胞凋亡关系及中药三七的影响

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围蛋白酶激活受体-1(proteinase activated receptor-1,PAR-1)、缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1 α,HIF-1α)、神经细胞凋亡的表达及中药三七的影响.方法 将90只SD大鼠随机分为3组:假手术组、脑出血组、三七干预组,立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠脑出血模型,分别为术后6h、1d、2d、3d、5d、7d处死,免疫组织化学法检测血肿周围区PAR-1、HIF-1 α、TUNEL阳性细胞(凋亡细胞)数的表达,中药三七特殊调配饲料对其干预后的影响.结果 假手术组PAR-1、HIF-1 α少量表达,偶见凋亡细胞;脑出血组自6h起PAR-1、HIF-1α表达上调,凋亡细胞大量增加,3d达高峰,PAR-1在7d基本降至假手术组,但凋亡细胞仍处于较高水平;6h起HIF-1α表达不明显,1d明显增多,3d达到高峰,7d仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);中药三七干预组均有明显降低PAR-1表达,上调HIF-1α的表达,减少神经细胞凋亡,有统计学意义(P＜0.05).结论 脑出血后血肿周围存在大量PAR-1、HIF-1α表达上调,神经细胞凋亡明显增多;中药三七能够明显降低PAR-1表达,HIF-1α表达上调增加,减少血肿周围细胞凋亡,从而起到神经元保护作用.     

人参皂苷通过调节HIF-1α-VEGF通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探究人参皂苷通过调节HIF-1a-VEGF通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:选取30只6周龄SPF级SD大鼠,体质量200±30g,采用改良线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),随机分为3组,空白对照组、模型组、人参皂苷治疗组。使用HE将大鼠脑组织细胞染色,观察缺血侧脑组织形态学变化;使用TUNEL染色,在12小时、24小时、36小时分别观察大鼠脑组织细胞凋亡情况;使用Westen Bolt和RT-PCR定性、定量检测大鼠HIF-1α、VEGF蛋白表达情况。结果:与空白组相比,模型组大鼠脑组织细胞明显出现凋亡;与模型组相比,人参皂苷治疗组大鼠脑组织细胞凋亡显著减少。与空白组相比,模型组大鼠脑组织细胞凋亡百分比显著升高(P0.01),人参皂苷治疗组大鼠脑组织细胞凋亡百分比有一定程度升高(P0.05);与模型组相比,人参皂苷治疗组大鼠脑组织细胞凋亡百分比显著降低(P0.01)。与空白组相比,模型组大鼠HIF-1α、VEGF蛋白表达显著升高(P0.01),与模型组相比,人参皂苷治疗组大鼠HIF-1α、VEGF蛋白表达显著上升(P0.01),且上升相比模型组更为显著。结论:人参皂苷可以通过提高HIF-1α、VEGF蛋白的表达水平,激活HIF-1α/VEGF通路,使血管新生能力增强从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

活血荣络方对Aβ_(25-35)损伤神经胶质细胞Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ表达的影响

目的:旨在通过细胞实验,从Wnt5a-Fz5-Ca MKⅡ通路揭示活血荣络方治疗阿尔茨海默病(AD)的分子机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供新思路、新方法。方法:分别将Aβ_(25-35)损伤星形胶质细胞铺板,以(2.5~3)×104/孔的密度接种到96孔板中,并随机分为6组,分别为2倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组、s FRP组、空白组;待细胞的融合率为85%~90%时,含药组分别给予相应的含药血清,s FRP组给予s FRP,空白组予以空白血清。取生长对数期细胞加相应刺激分别处理12、24、48、72 h。分别取细胞上清液分离细胞,用MTT法检测细胞毒力,用流式细胞术检测细胞凋亡;用化学免疫法检测Wnt5、Fz5、Ca MKⅡ的含量。结果:各组OD值随着时间的延长而增高,2倍活血荣络方组72 h OD值明显高于12 h(P0.05),而空白组、s PRF组、2倍、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P0.05);各给药组细胞活性均高于空白组(P0.05),其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞活性低于空白组(P0.05)。各组细胞凋亡数目随着时间的延长而增高,其中空白组72 h细胞凋亡比例高于12 h(P0.05),s PRF组72 h细胞凋亡比例明显高于12 h;2倍、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P0.05);各给药组细胞凋亡比例明显低于空白组及s PRF组,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;s FRP组细胞凋亡比例高于空白组(P0.05)。各给药组Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达均高于空白组(P0.05),其中2倍活血荣络方组Wnt5α表达明显高于空白组(P0.01),空白组明显高于s PRF组(P0.05);其它给药组间比较:2倍活血荣络方组明显高于1倍活血荣络方组、多奈哌齐组及0.5倍活血荣络方组(P0.01),1倍活血荣络方组与多奈哌齐组Wnt5α表达程度无明显差异(P0.05),此两组Wnt5α表达均高于0.5倍活血荣络方组(P0.05)。结论:活血荣络方能有效提高Wnt5α、Fz5、Ca MKⅡ的表达,减轻神经毒性的积累及细胞凋亡反应的发生,保护神经胶质细胞,延缓AD发病进展,其中以2倍活血荣络方效果最佳。     

凉血散瘀法通过抑制巨噬细胞凋亡抗动脉粥样硬化的作用

目的:观察凉血散瘀法清心通脉饮含药血清对乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low density lipoprotein,ac-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞系RAW264. 7凋亡率及A型清道夫受体(type A scavenger receptor,SR-A),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax),肌醇需要酶1α(inositol-requiring enzyme lα,IRE1α)表达的影响,探讨清心通脉饮治疗动脉粥样硬化可能的作用机制。方法:8只新西兰兔采用随机数字法分为阿托伐他汀组(2. 6 g·kg~(-1)),清心通脉饮低、中、高剂量组(3. 33,6. 66,13. 32 mg·kg~(-1)),灌胃7 d后颈动脉采血收集含药血清。各组用2. 5,5,10,20%体积分数的含药血清培养液分别刺激RAW264. 7细胞系6,12,24 h,采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法观察细胞增殖率。体外培养RAW264. 7细胞系,分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、清心通脉饮低、中、高剂量组。空白组用牛血清白蛋白(BSA)培养细胞,模型组用BSA+50 mg·L~(-1)ac-LDL刺激细胞24 h,其他组用BSA+50 mg·L~(-1)ac-LDL+10%含药血清刺激细胞24 h。流式细胞技术检测每组RAW264. 7细胞系凋亡率和SR-A的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2,Bax,IRE1α蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组可显著增加RAW264. 7细胞凋亡率(P 0. 01),并增加Bax,SR-A蛋白表达(P 0. 01),减少Bcl-2蛋白表达(P 0. 05)。与模型组比较,清心通脉饮低、中、高剂量组均可降低RAW264. 7细胞系凋亡率(P 0. 05),减少SR-A和IRE1α表达(P 0. 05,P 0. 01)。清心通脉饮低、高剂量组可降低Bax表达(P 0. 05,P 0. 01);清心通脉饮中、高剂量组可降低Bcl-2表达(P 0. 05)。结论:清心通脉饮可降低巨噬细胞凋亡率,其治疗动脉粥样硬化机制可能与调控相关凋促亡蛋白Bax,IREα,SR-A和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。     

清脑滴丸下调HIF-1α/BNIP3表达拮抗氧糖剥夺/复氧诱导C6胶质细胞凋亡

目的研究清脑滴丸对氧糖剥夺诱导C6胶质细胞损伤的HIF-1α/BNIP3以及细胞凋亡的影响及机制。方法采用氧糖剥夺/复氧方法建立C6胶质细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组、清脑滴丸组。采用Western Blot法检测各组HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3蛋白表达,免疫荧光染色法观察各组HIF-1α、Cleaved Caspase-3的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组细胞活力降低(P0.01),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达增加(P0.01,P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.01);与模型组比较,清脑滴丸1.25 g/L组细胞活力升高(P0.05),HIF-1α、BNIP3、Cleaved Caspase-3表达和细胞凋亡率均降低(P0.01,P0.05)。结论清脑滴丸抑制C6胶质细胞凋亡的作用机制可能与通过下调HIF-1α和BNIP3过表达,降低Cleaved Caspase-3表达有关。     

养阴消癥方对糖尿病性脑内微小病变实验大鼠的保护作用

目的观察养阴消癥方对糖尿病性脑内微小病变大鼠的治疗效果。方法 Wistar大鼠24只,除正常对照组6只外,其余大鼠建立糖尿病性脑内微小病变模型,造模成功后分为高糖损伤组、阿司匹林组、中药组。各组动物灌肠相应药物共3个月。通过生化、流式细胞仪(PI)测定等观察大鼠脑内微小病变的变化情况;通过Realtime PCR、Western blot测定HIF-1α的变化情况。结果①糖化血红蛋白吸光度、流式细胞仪检测凋亡率结果表明,与高糖损伤组比较,阿司匹林组、中药组糖化血红蛋白吸光度、脑神经细胞凋亡率都有所减少,且各组之间相比差异有统计学意义(P0.05)。与阿司匹林组比较,中药组糖化血红蛋白吸光度值明显减少(P0.05);早期、晚期脑神经细胞凋亡率皆减少(P0.05)。②Realtime PCR、Western blot测定结果显示,与高糖损伤组比较,阿司匹林组、中药组HIF-1αmRNA及蛋白表达量都有所减少(P0.05),且各组之间相比差异有统计学意义(P0.05);与阿司匹林组比较,中药组HIF-1αmRNA及蛋白表达量有所减少(P0.05)。③免疫组化结果显示,与高糖损伤组比较,阿司匹林组、中药组HIF-1α阳性表达细胞数有所减少(P0.05);与阿司匹林组比较,中药组HIF-1α阳性表达细胞数差异有统计学意义(P0.01)。结论养阴消癥方对糖尿病性脑内微小病变具有一定的作用,可降低糖化血红蛋白吸光度,降低脑神经细胞凋亡率,降低HIF-1α的表达。     

川芎对肺癌干细胞样PG细胞荷瘤裸鼠手术前后HIF-1α表达的影响

目的:探讨活血药川芎对高转移性人巨细胞肺癌细胞PG-BEI干细胞样细胞荷瘤裸鼠手术前后HIF-1α蛋白表达的影响。方法:分选PG-BG1中的干细胞样细胞亚群,并将其接种于裸鼠右下肢。根据干预时间和药物的不同,分为对照组、乏氧组、川芎术前组、川芎术后组、顺铂术前组、顺铂术后组、川芎联合顺铂术前组和川芎联合顺铂术后组。于第21天行截肢手术并对原位瘤组织称重,计算抑瘤率,用Western blot法检测HIF-1α表达。第40天获取小鼠复发瘤组织,并对复发瘤组织称重,计算复发率、复发率抑制率、复发瘤重及复发瘤重抑制率,Western blot法检测HIF-1α表达结果。结果:肺癌干细胞样细胞荷瘤裸鼠原位瘤方面,川芎联合顺铂组原位瘤重及HIF-1α表达较空白组和单纯顺铂组减少。复发瘤组织方面,与模对照、化疗组比较,川芎联合顺铂组复发率、复发率抑制率、复发瘤重、复发瘤重抑制率及HIF-1α表达明显下调。低氧环境较常氧环境下HIF-1α表达增加。结论:川芎联合顺铂组可以通过抑制HIF-1α的表达从而抑制肺癌干细胞样细胞荷瘤裸鼠肿瘤组织的增殖和复发。     

益肾活血通络法对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏缺氧诱导因子一血管内皮生长因子信号通路干预作用的实验研究

目的探讨缺氧诱导因子Or．（hypoxia-inducible factor α,HIF-α）诱导血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor α,VEGF-α）表达的作用机制及微血管损伤发生的机制及“益肾活血通络法”干预效果,为中医药治疗。肾间质纤维化提供新的依据。方法实验采用单侧输尿管梗阻（unilateral urethral obstruction,UUO）造成肾纤维化动物模型,并以益肾活血方、氯沙坦灌胃对其进行治疗性干预,分别在术后第7天、14天、21天采集肾脏标本,运用免疫组化法检测HIF-α、VEGF在肾脏中的分布、表达。结果与假手术组比较,模型组、治疗组在各时间点HIF-α、VEGF表达均显著上调（P〈0．01）;在各时间点,益肾活血方组和氯沙坦组较模型组大鼠HIF-α、VEGF表达均下调（P〈0．01）。随着干预时间的延长,模型组、治疗组HIF-α、VEGF表达都逐渐增强,但增强幅度明显下调;益肾活血方组较氯沙坦组大鼠HIF-α、VEGF下调明显,有统计学差异（P〈0．05）。结论益’肾活血方能有效地降低HIF-α及VEGF表达,改善UUO大鼠内源性低氧状态,减轻微血管损伤,发挥抗肾纤维化的作用。     

当归补血汤对特发性肺纤维化大鼠血管新生因子HIF-1α和endostatin的影响

目的:观察当归补血汤调节血管新生抑制特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:40只大鼠随机分为假手术组、模型组、泼尼松组和当归补血汤组。气管内滴入博莱霉素复制IPF大鼠模型。术后24h灌胃,泼尼松组灌服泼尼松水溶液(0.5mg/100g),当归补血汤组灌服当归补血汤中药配方颗粒水溶液(0.81g·kg-1·d-1),假手术组和模型组给予等容量去离子水(1mL/100g)。连续灌胃28d后处死大鼠,取左肺组织进行HE染色、Szapiel评分评估肺泡炎程度,测定肺小动脉管壁厚度、肺小动脉管壁厚度和血管外径比值(WT%)、管壁面积和血管总面积比值(WA%);Masson染色后,Ashcroft评分评估肺纤维化程度;免疫组织化学染色观察缺氧诱导因子(HIF-1α)、内皮抑素(endostatin)和CD34蛋白表达情况,并依据CD34表达评估微血管密度(MVD)。取右肺组织进行实时荧光定量PCR检测HIF-1α、endostatin基因表达情况。结果:与假手术组比较,模型组Szapiel评分、Ashcroft评分、肺小动脉管壁厚度、WT%、WA%和MVD显著升高(P<0.05,P<0.01),同时HIF-1α、endostatin和CD34平均光密度及HIF-1α、endostatin mRNA水平亦显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,当归补血汤组除endostatin表达水平升高外,其余指标均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:当归补血汤可通过下调HIF-1α表达、上调endostatin表达以调节血管新生状态,从而延缓IPF病理进程。     

补肾活血祛痰方对高雄激素多囊卵巢综合征大鼠类固醇激素合成急性调节蛋白质因子的影响

目的:探讨补肾活血祛痰方对高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的影响。方法:选择SD雌性大鼠60只,采用脱氢表雄酮注射建立高雄激素PCOS模型,并随机分为对照组(30只)和中药组(30只),中药组给予补肾活血祛痰方灌胃治疗,对照组给予等量的0.9%氯化钠溶液灌胃,观察治疗后两组大鼠卵巢组织形态学情况,比较治疗后两组大鼠血清激素水平情况; Western blot法检测治疗后两组大鼠StAR蛋白的表达情况。结果:治疗后,卵巢组织形态学观察结果显示,对照组仍存在多个囊泡,其囊泡即空卵泡,中药组卵巢组织形态明显改善; 与对照组相比,卵泡及黄体数较多(均P<0.05); 治疗后,中药组血清促黄体生成素(LH)和雄激素(T)水平比对照组明显降低(均P<0.05)。治疗22 d后,中药组血清胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平比对照组明显降低(均P<0.05)。Western blot结果显示,治疗后中药组StAR蛋白表达明显比对照组降低(P<0.05)。 结论:补肾活血祛痰方可改善高雄激素PCOS大鼠卵巢功能,促进激素水平趋于正常,并可降低卵泡膜细胞的细胞膜附近StAR蛋白质,改善大鼠的生殖功能。     

中药汤剂煎煮法的文献调查分析

中药汤剂发展至今已有数千年的历史,对发挥中医药特色起到重要的作用。随着学科专业化、规范化的时代要求,专业化是大势所趋,中医学规范化、标准化发展已经取得显著的成果。然而目前在中医临床实践中,中药汤剂煎煮法不规范、不合理的现象普遍存在。本研究以中药汤剂煎煮法文献为研究对象,通过对中药汤剂煎煮法的相关文献进行整理与分析,总结归纳了中药汤剂煎煮法的现状及存在的问题,为中药汤剂煎煮法的规范化提供参考依据和今后研究方向。     

不同煎煮方法对我院胃肠复原汤临床疗效的影响

目的：比较我院不同方法煎煮的胃肠复原汤对妇科腹部手术术后胃肠功能恢复的时间差异。方法：选取我院2011~2012 年妇科腹部手术患者120 例,随机分为治疗组和对照组各60 例,治疗组与对照组分别在术后8 h 服用不同方法煎煮的胃肠复原汤,治疗组采用“煎药机多剂煎煮法”,对照组采用“传统单剂煎煮法”,观察两组患者肛门首次排气时间。结果：治疗组排气时间为16 h,对照组排气时间为13 h,两组患者的排气时间呈偏态分布,采用中位数和四分位数间距进行描述,非参数检验进行比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：不同方法煎煮对胃肠复原汤临床疗效存在一定的影响,“煎药机多剂煎煮法”较“传统单剂煎煮法”推迟3 h,因此,在采用“煎药机多剂煎煮法”的同时,应当改进煎药机的功能,完善煎药程序,更好的提升该法煎煮汤剂的疗效。     

密蒙花方对缺氧状态下脐静脉内皮细胞增殖及HIF-1α表达的影响

目的研究密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial,HUVEC）增殖及缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α）表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖的影响,应用免疫细胞化学法检测密蒙花方对缺氧状态下细胞中HIF-1α表达的影响。结果在缺氧状态下,HUVEC增殖明显且细胞中HIF-1α表达增高（P〈0.01）,密蒙花方能有效的抑制细胞增殖及HIF-1α表达,并呈浓度依赖关系。结论密蒙花方可能通过抑制HIF-1α的表达而抑制血管内皮细胞的增殖,从而对新生血管的形成起到一定的抑制作用。     

红景天对新生大鼠缺氧缺血性脑病的干预

目的探讨红景天对新生大鼠缺氧缺血性脑病（HIE）的疗效及可能的作用机制。方法36只7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、实验组和中药组，手术分离左侧颈总动脉，假手术组不再做任何处理；实验组和中药组结扎并切断左侧颈总动脉，2h后置于8％氧氮混合气体2h。中药组于模型建立后2h开始灌喂红景天，每日1次，每次每只1ml。连续5d，休息2d再灌喂5d。分别于实验第1日和第3日处死动物，留取脑组织，半数中性福尔马林固定，半数液氮保存，采用HE染色、RT-PCR和免疫组化，在蛋白和mRNA水平检测新生大鼠HIE时HIF-1α基因的表达。结果缺氧缺血后大鼠相继表现为烦躁不安、全身发绀、呼吸加深加快、站立不稳、嗜睡、激惹或间断发作的痉挛和抽搐；HE染色显示实验组大鼠左侧大脑皮层出现局灶性神经元核固缩，核碎裂，核仁偏位，不清或消失，基质疏松；中药组大鼠脑组织结构基本接近假手术组，无明显水肿和坏死表现；实验组和中药组大鼠脑组织HIF-1α mRNA（RT-PCR）表达较假手术组明显增加，尤其是中药组实验第3日者；免疫组化显示实验组和中药组各时间点大鼠大脑皮层和海马区均可见不同程度的HIF-1α表达，明显高于假手术组，阳性表达主要在血管内皮细胞，海马和皮层的锥体细胞亦有HIF-1α阳性细胞分布。结论红景天对新生大鼠HIE有一定的治疗作用，其可能的作用机制之一是增加脑组织HIF-1α的表达。     

参苓白术散合麦门冬汤对染矽尘肺纤维化（肺脾两虚型）大鼠肺组织细胞HMGB1、PDGF的影响＊

目的 本研究遴选中医培土生金法的代表方参苓白术散合麦门冬汤加减方灌胃治疗染矽尘肺纤维化（肺脾两虚型）大鼠，观察中药治疗各组对染矽尘大鼠肺组织HMGB1、IL-6、PDGF、K-Ras蛋白含量，基因表达水平作用的影响改变。方法 对健康SD大鼠随机分为正常对照组和造模组。造模组分别给予大黄煎液灌服造模法与二氧化硅（SiO₂）气管滴注诱导染矽尘肺纤维化造模法结合，制造染矽尘肺纤维化（肺脾两虚型）模型，待造模成功后，造模组随机分为5组，分别给予生理盐水、激素、中药高剂量、中药中剂量和中药低剂量进行治疗。各组动物于造模成功后30 d处死。ELISA检测各组肺组织高迁移率族蛋白1（HMGB1）、白介素6（IL-6）、血小板衍生因子（PDGF）、K-RAS蛋白含量并提取各组肺组织RNA,采用反转录合成cDNA，通过RT-PCR技术扩增HMGB1、IL-6、PDGF、K-RAS基因。结果 中药各组肺组织HMGB1、IL-6、PDGF、K-Ras蛋白含量，基因表达水平明显低于染矽尘组（P < 0.05），但中药各组肺组织HMGB1、IL-6、PDGF、K-Ras蛋白含量，基因表达水平明显高于对照组（P < 0.05）。结论 中药各组能显著降低肺组织HMGB1、IL-6、PDGF、K-Ras蛋白含量和基因表达，HMGB1与PDGF间存在正相关关系。     

阳明病（阳明腑实证）欲解时TNF-α的变化及大承气汤干预作用的实验研究＊

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)在阳明病(阳明腑实证)欲解时及大承气汤干预后变化的研究。方法健康未孕SD大鼠290只,随机分为正常组(n=90)、模型组(n=100)、大承气汤组(n=100)。正常组每天给予等量蒸馏水,模型组采用给实验大鼠灌中药热药、自身粪便混悬液及脂多糖的方法造成大鼠阳明病(阳明腑实证)的模型,大承气汤组在造模成功后分别于卯时(5:00-7:00)、酉时(17:00-19:00)给予大承气汤干预,连续观察5天。造模结束与药物干预后,每天于卯时、酉时从正常组中抽取9只大鼠,模型组和大承气汤组中抽取10只大鼠,断头处死后获取组织匀浆,观察肿瘤坏死因子(TNF-α)含量变化。结果正常组TNF-α表达低于模型组(P<0.01),模型组TNF-α表达呈现节律性,大承气汤组欲解时TNF-α表达有短暂升高后逐渐降低,低于非欲解时组(P<0.05),最后趋于稳定。结论阳明病(阳明腑实证)模型组大鼠TNF-α表达呈现时间节律性,经大承气汤干预后,大承气汤组TNF-α表达逐渐下降,尤以酉时明显。     

清热化湿祛瘀方对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:观察清热化湿祛瘀方对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜氧化应激和细胞凋亡的影响。方法:将40只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和中药组。采用3%DSS诱导UC模型,于造模开始后的第3天开始给药干预,正常组和模型组分别给予0.9%氯化钠溶液灌胃,中药组和美沙拉嗪组分别给予中药水煎剂和美沙拉嗪混悬液灌胃。计算小鼠的疾病活动指数,测量结肠长度,通过HE染色进行病理观察,采用DHE染色检测组织ROS表达情况,采用MDA、SOD测定盒检测组织MDA、SOD表达水平,并采用TUNEL染色法检测组织细胞凋亡水平变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠DAI评分显著升高(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.05),结肠组织病理学评分显著升高(P<0.05),ROS、MDA以及细胞凋亡水平显著升高(P<0.05),SOD表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,美沙拉嗪组及中药组小鼠第8、9天DAI评分显著降低(P<0.01),结肠长度显著延长(P<0.05),结肠组织病理评分显著降低(P<0.05),ROS、MDA以及细胞凋亡水平显著降低(P<0.05),SOD表达显著升高(P<0.05);中药组细胞凋亡百分率显著低于美沙拉嗪组(P<0.05)。结论:清热化湿祛瘀方对UC具有一定的改善作用,其作用机制可能与调节氧化应激、改善结肠上皮细胞凋亡有关。     

增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药相关基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响

目的研究增免抑瘤方(ZMYL)对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药调控基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,中药高、中、低剂量组,顺铂组(DDP),联合组(DDP联合中药),各组给予相应干预措施共3周。定期测量瘤体最大、最小径线,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后处死裸鼠,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率,免疫组化测定瘤体HIF-1α、Glut1的表达,定量RT-PCR测定瘤体MDR1、P-gp的表达。结果①抑瘤率:联合组抑瘤率最高,达(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各剂量组均有一定的抑瘤作用,抑瘤率低于顺铂组(P<0.01)。②免疫组化结果:联合组HIF-1α的表达最低(P<0.01);中药高、中剂量组HIF-1α的表达较顺铂组降低(P<0.01);低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组以及中药高剂量组Glut1的表达低于顺铂组(P<0.01);中剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于顺铂组(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。③定量RT-PCR结果:顺铂组MDR1、P-gp的表达较对照组升高(P<0.01);联合组以及中药各剂量组MDR1、P-gp的表达较顺铂组降低(P<0.01)。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用;其作用机制可能通过下调瘤体内缺氧标记物Glut1、HIF-1α的表达,下调多药耐药基因MDR1、P-gp的表达,从缺氧介导的"药泵"耐药机制途径改善卵巢癌化疗耐药。