应用活体冷冻技术分析急性高血压时免疫球蛋白G在小鼠近端肾小管中的分布变化

目的 应用活体冷冻技术结合免疫组织化学方法 形象化地研究急性高血压血流动力学条件下,小鼠免疫球蛋白G(IgG)及其轻、重链经肾小球毛细血管袢滤过后,在近端小管再吸收的病理过程.方法 分别在正常血流、急性高血压和心脏骤停等血流动力学条件下,进行小鼠肾脏活体冷冻及冷冻置换.连续的石蜡切片后,分别进行苏木精-伊红(H-E)染色和IgG、kappa轻链和IgG1重链免疫组织化学染色.结果 正常血压和心脏骤停情况下,IgG在血管内清晰定位,只有极少量出现在近端小管顶端的细胞质内.而在急性高血压情况下,kappa轻链几乎免疫定位于所有近端小管,无IgG1重链表达.并首次展示了小鼠活体内血清IgG的轻链而非重链通过肾小球滤过后,迁移至近端肾小管重吸收的过程.结论 活体冷冻技术结合冷冻置换方法 能够原位瞬间捕获不同血流动力学条件下血清IgG在活体肾组织中的分布状态,可视化活体组织细胞的功能形态学特征.     

白细胞介素1受体拮抗剂对小鼠再灌注损伤的保护作用

目的 探讨在小鼠线栓模型中,基因转染过度表达的ＩＬ－１ｒａ蛋白对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 成年ＣＤ－１小鼠,右侧脑室内注射腺病毒载体（编码人类组ＩＬ－１ｒａ或ＬａｃＺ基因）或生理盐水。５ｈ后,单侧大脑中动脉线栓阻断１ｈ,再灌注２３ｈ。采用激光多普勒血流仪（ＬＤＦ）监测脑表面血流,ＨＥ染色脑切片计算脑硬死体积,内源性白蛋白免疫组织化学染色评价血脑屏幕破坏程度,并采用免疫组织化学染色,计     

常染色体显性遗传多囊肾的多囊素表达

目的：研究多囊素的细胞定位,了解正常肾脏与肾组织多囊素的表达及分布差别。方法：应用多囊素合成肽单抗抗ｐｅｐＰＢＰ１和抗ｐｅｐＰＢＰ３以及融合蛋白抗体抗ｆｐＡＨ４,对３例正常肾组织和８例多囊肾组织的标本做免疫组织化学染色定位。结果：正常肾组织的多囊素组织化学定位主要分布在远端小管和集合管,髓质部更明显,近端小管弱染或阴性,肾小球上皮细胞也可着染。８例多囊肾组织的染色细胞在２８％～６０％,大多数为５０％,囊肿上皮染色比正常肾组织强,囊肿上皮染色强弱不同,少数囊肿上皮染色阴性。结论：正常肾组织和多…     

脂多糖诱导下急性肾功能衰竭小鼠肾脏中TOLL样受体4的表达

目的:探讨TOLL样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肾功能衰竭(ARF)肾脏中表达及意义。方法:建立LPS诱导的小鼠ARF模型。应用免疫组织化学SABC法、Western blot及RT-PCR法检测肾组织TLR4蛋白及mRNA的表达变化。TUNEL法检测肾脏的凋亡情况。结果:TLR4在正常组(NG)肾脏中主要分布于肾小管、管周、肾间质区,肾小球系膜区也有表达,而ARF组TLR4在上述区域的表达显著增加,以近端小管、肾间质、远端小管、肾血管等部位较明显,两组光密度值比较有明显差异(P<0.05);TLR4的表达与肾功能的改变呈正相关(r=0.91);与NG组相比,ARF组的TLR4蛋白及mRNA水平的表达显著上调,以造模24 h后最明显;TUNEL法显示凋亡小体主要出现在ARF组肾脏的近端小管及管周围,肾小球无明显变化。结论:TLR4在脂多糖诱导的小鼠ARF肾脏中有较高表达,同时在其肾近端小管及小管周围组织发现较明显的凋亡小体。二者在ARF发病中可能起重要作用。     

睾丸灌注超低温冷冻对家兔移植睾丸功能的影响

目的 研究睾丸灌注超低温冷冻对家兔睾丸功能的影响,探讨移植睾丸的保存方法.方法 通过自体或异体移植,比较低浓度冷冻保护剂活体灌注或体外灌注、高浓度冷冻保护剂活体灌注或体外灌注对兔睾丸冷冻后的完整率、移植成功率、睾酮分泌及精子生成的影响.结果 高浓度冷冻保护剂活体灌注效果最好,冷冻后睾丸完整率为29.3%,血流再通率为79.2%,睾酮分泌接近正常水平,精子生成持续时间可达2个月.结论 采用高浓度冷冻保护剂行活体灌注的方法可有效地保护部分睾丸结构及功能,移植后可产生接近正常水平的睾酮和保持较长时间的生精.     

cyclin A1基因变异诱导小鼠发生头颈部皮肤病变

目的 研究cyclin A1基因变异对活体小鼠动物模型可能产生的影响.方法 饲养 46只cyclin A1基因变异的小鼠与25只同龄野生型小鼠9～24个月,进行比较观察.对发现病变部位的组织切片和对照标本采用HE染色和免疫组织化学染色方法检查.结果 cyclin A1基因变异鼠中,约有24% (11/46) 在头颈部发生了深溃疡状的皮肤病变,HE 染色结果显示病变及病变周围皮肤过度角化,皮脂腺增生明显.而25只野生型鼠中未见类似改变.以cyclin A1特异性抗体进行免疫组织化学染色结果显示,野生型小鼠的皮脂腺内可以观察到明显的染色,而cyclin A1基因变异小鼠标本中没有染色.结论 cyclin A1基因变异是导致本实验中观察到的小鼠发生头颈部皮肤病变的直接或间接原因.     

未折叠蛋白反应参与小鼠急性肾缺血/再灌注损伤

目的 探讨未折叠蛋白反应(UPR)在小鼠急性肾缺血/再灌注损伤中的作用.方法 将C5786小鼠分为正常、假手术组和0、4、12、24 h手术组(分别于术后0、4、12和24 h处死小鼠),留取各组小鼠的左侧肾脏.苏木精一伊红(H-E)、过碘酸雪夫反应(PAS)和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察各组肾脏组织学变化,Western印迹法和实时聚合酶链反应(PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和caspasel2在各组小鼠肾组织中的表达.结果 H-E、PAS染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞坏死明显,病变最重的部位为外髓外带近端小管,肾小管坏死评分为(2.930 0±0.131 1)分,显著高于其他组(P值均<0.01).TUNEL染色可见24 h手术组的肾小管上皮细胞凋亡指数为(36.17±7.53)%,显著高于其他各组(P值均<0.01).Western印迹法.结果 显示,12 h手术组的GRP78和caspase12蛋白水平显著高于其他各组(P值均<0.01).实时PCR.结果 显示,4 h手术组的GRP78和caspasel2 mRNA水平显著高于其他各组(P值分别<0.01、0.05).结论 在夹闭左侧肾动脉致急性肾缺血/再灌注损伤模型中,小鼠左侧肾脏组织学损伤显示再灌注后24 h最严重.GRP78和caspasel2在再灌注后其mRNA和蛋白表达水平明显升高或激活,其变化早于组织学改变.提示UPR可能在急性肾缺血/再灌注损伤中发挥重要作用.     

Megalin在胚胎期小鼠肾脏中的表达

目的观察胞吞受体megalin在胚胎发育不同时期小鼠肾脏中的表达。方法采用免疫组织化学技术及体视学方法检测胚龄9．5、11、14、16、18d小鼠肾脏megalin的表达。结果Megalin在胚龄9．5d小鼠表达于中肾管上皮细胞游离面,胚龄11d表达于输尿管芽的上皮细胞游离面,胚龄14d megalin表达量逐渐增多,主要分布于输尿管芽的壶腹部和发育中的肾近端小管上皮细胞游离面及较成熟的近端小管刷状缘。胚龄16d至胚龄18d megalin主要表达于近端小管的刷状缘,肾小球内也有微量表达。结论Megalin在胚胎肾发生中的表达存在着时空顺序,可能与肾小管,乃至肾单位的分化及成熟有关。     

急、慢性哮喘小鼠气道血管生成的实验研究

目的观察急、慢性哮喘小鼠气道血管生成的变化，并初步探讨其在哮喘发病中的作用。方法24只BALB／c小鼠随机均分为三组，即A组：正常对照组；B组：急性哮喘组；C组：慢性哮喘组。通过卵白蛋白（OVA）多次腹腔注射致敏和反复滴鼻激发建立急、慢性哮喘小鼠模型。末次激发后24小时处死动物留取血清，右肺行灌洗留取支气管肺泡灌洗液（BnLF），左肺和气管制备病理切片。病理切片行苏木精一伊红（HE）染色和抗Ⅷ因子免疫组织化学染色，于免疫组化切片上显微镜下计数气管黏膜固有层、黏膜下层血管密度。溴甲酚绿（BCG）法检测血清、BALF内白蛋白浓度，计算气道血管渗出指数（BnLF白蛋白浓度／血清白蛋白浓度）。结果①B组小鼠气道血管密度与A组相比无统计学差异；与A组相比，C组气道血管密度明显升高（P〈0．01）。②B、C组血管渗出指数均明显升高（均P〈0．05），两者之间无统计学差别。结论①慢性喘小鼠气道内血管生成明显增加．急性哮喘小鼠气道内无明显血管生成。②急性哮喘小鼠气道内血管渗出明显增加，怛慢性哮喘小鼠血管渗出指数未见进一步增加。     

老年原发性高血压伴2型糖尿病患者肾损害微量白蛋白尿期肾血流动力学变化

在老年人群中同时患有原发性高血压和2型糖尿病这两种疾病的概率逐年增高.随着病情的进展,两者均会造成慢性肾损害,其中血流动力学变化起着重要作用.那么在这类患者肾损害微量白蛋白尿期血流动力学的变化如何？我们将同时伴有这两种疾病的70岁以上老年患者作为研究对象,以同龄单纯原发性高血压患者作为对照,在肾功能代偿及血压、血糖控制相对稳定情况下,观察其各段肾动脉血流的变化、24h尿白蛋白量及尿白蛋白量与肾血流的相关性,报道如下.     

Immunohistochemical Study of Serum Proteins in Normal and Cadmium-Treated Mouse Testis by in vivo CryotechniqueImmunohistochemical Study of Serum Proteins in Normal and Cadmium-Treated Mouse Testis by in vivo Cryotechnique

Objective To investigate time-dependent changes of serum proteins permeability in the normal and cadmium（Cd）-treated mouse testis, reflecting tight junctional （TJ） barriers of Sertoli cells Methods The serum proteins, albumin and immunoglobulin-G（IgG）, in the seminiferous tubules were firstly immobilized by the “in vivo cryotechnique”, in which the dynamic blood circulation was always kept. The cryofixed testicular tissues were then processed for the freeze-substitution method, and embedded in the paraffin wax. Serial sections of 5μm thickness were immunostained by anti-mouse albumin or IgG antibody with peroxidase immunostaining, and also stained with hematoxylin-eosine （HE）for morphological observation. Results In normal seminiferous tubules, albumin immunoreaction products were localized around peritubular myoid cells and among Leydig cells, as well as in blood vessels. They were also localized as arch-like patterns around some spermatogonia in basal compartments. The number of the immunopositive arch structures was different according to developmental stages of the seminiferous cycle, judging from the arrangement of germ cells by HE-staining. The patterns of localization of IgG immunostaining in normal mouse testis were similar to that of albumin. In 24 h after Cd-treatment, some enlarged spaces and vesicular formation in the seminiferous epithelium were observed on the paraffin sections by HE-staining. The albumin or IgGimmunolocalization was seen not only in the basal compartments, but also in the adluminal compartments between Sertoli.cells and germ cells. Conclusion The structural changes of inter-Sertoli TJ barriers in vivo, such as different immunostaining patterns of serum proteins between the normal and Cd-treated mouse seminiferous tubules, could be clearly detected by the “in vivo cryotechnique” with albumin or IgG immunohistochemistry.     

灵通散对催产素致痛经大鼠的作用及机制研究

目的：探讨灵通散治疗原发性痛经的作用机制。方法：以催产素诱发大鼠离体子宫收缩，然后在浴槽内加入终浓度分别为2．75、5．50、8．25mg／ml的灵通散，观察子宫平滑肌收缩的幅度、频率、张力和活动力；采用催产素致大鼠痛经模型，分别给予灌胃灵通散浸膏粉0．15、0．3、0．6g／l（g，连续给药7d，采用放免法检测大鼠子宫组织中内皮素（ET）以及血清雌二醇（E2）、孕酮（P）含量，硝酸还原法测定一氧化氮（NO）含量。实验均设月月舒颗粒剂为阳性药对照组。结果：灵通散能剂量依赖性地拮抗催产素所致的大鼠离体子宫收缩活动的增强；可升高痛经大鼠子宫组织中NO含量及降低ET含量，降低血清E2水平，对P水平无明显影响。结论：灵通散治疗痛经可能与抑制子宫平滑肌痉挛性收缩，调节大鼠子宫组织中ET、NO含量和调节性激素水平有关。     

湿电极单极针射频消融离体猪肝的实验研究

目的 探讨消融时间、温度、设定功率对RITA UniBlate湿电极单极针形成的消融灶的影响.方法 观察湿电极单极针在离体猪肝射频消融实验时形成的消融灶形态特征,最大有效消融电极长度2.5 cm,分别以时间、温度或功率为变量分A、B、C 3个大组(11个亚组)进行实验,观察消融灶形态学特征,测量消融灶纵轴、横轴、针尖前端消融灶长度,计算消融灶体积,应用单因素方差分析法对上述4项指标进行统计学分析.用HE染色法对消融灶行病理学检查.结果 (1)所有消融灶均呈椭球体.消融灶切面由内向外形成3个区:中心区、坏死区、出血水肿区.(2)当消融时间为15 min、温度为103℃时消融灶达到最大,纵轴为(3.49±0.09)cm、横轴为(2.40±0.13)cm、体积为(10.6±1.3)cm3,电极前端消融灶长度(0.79±0.09)cm;功率作为变量引起的消融灶大小变化差异无统计学意义.结论 在一定时间、温度范围内,RITA UniBlate湿电极单极针消融灶大小随时间和温度的增加而增大;功率变化对消融灶大小没有影响.     

原发性高血压“勺型”与“非勺型”者的动态血压变异性特点

目的：探讨原发性高血压“勺型”与“非勺型”患的动态血压变异性特点及临床意义。方法：88例原发性高血压病患分为两组,“勺型”组54例,“非勺型”组34例,42例正常个体为对照组。对三组的血压均值和血压变异性进行分析和比较。结果：高血压组的d-SBP,d-DBP,n-Sbp,n-DBP,24h-SBP,24-DBP,均高于对照组,“勺型”组与“非勺型”组的24h-SBP,24-DBP,d-SBP无显差异,而夜间血压和日间舒张压有明显差异。“勺型”组的24-ABPVd低于对照组,“非勺型”组的24-ABPVa,24-ABPVd,n-ABPVd低于“勺型”组及对照组。结论:ABPV可能与某些靶器官（心,肾）损害有关,原发性高血压的ABPV差异,也为高血压病的个体化治疗提供了客观依据。     

助黄汤对小鼠胚泡着床数的影响

目的:探讨助黄汤对小鼠胚泡着床数的干预作用。方法:选用8～10周龄昆明种雌性小鼠,分别给予不同剂量的助黄汤,以及克罗米芬、助黄汤加克罗米芬,灌胃4d,于妊娠第8d处死小鼠,观察平均着床胚泡数,并进行了毒性实验。结果:助黄汤组平均着床胚泡数明显高于克罗米芬组及正常组,且药理毒性实验为阴性。结论:助黄汤能提高小鼠胚泡着床数,可间接反应该药有可能促进卵泡发育,增加排卵数量及卵的受精数目,增强小鼠的生殖功能的作用;且无毒副作用。     

肺炎合剂免疫、抗菌及抗炎作用的实验研究

目的观察肺炎合剂对免疫功能的影响以及抗菌、抗炎作用。方法采用碳粒廓清法、血清溶血素测定法、小鼠体内诱导法观察本品对机体特异性和非特异性免疫功能的作用；采用试管稀释法测定其对常见致病菌的最低杀菌浓度（MBC）；采用毛细血管通透性法、棉球肉芽肿法观察本品对急慢性炎症的作用。结果肺炎合剂能增强小鼠吞噬功能、升高免疫低下小鼠血清中半数溶血值（HC50）及白细胞总数（WBC）、提高T-淋巴细胞转化率；对金黄色葡萄球菌等致病菌有抗菌作用；能明显抑制小鼠毛细血管通透性增高和棉球肉芽肿形成。结论本品具有增强机体免疫功能、抗菌及抗炎作用。     

建立“纳米物理药剂学”原理解决纳米医药发展中的瓶颈问题

纳米医药在肿瘤治疗方面显示出巨大的潜力,它不仅能克服一些小分子药物水溶性差、代谢快、靶向性差的缺点,还能包载多种分子进行多模态诊疗.尽管优点众多,也有不少新型纳米体系被不断报道,但真正能转化进入临床应用的很少,纳米药物仍存在着体内稳定性差、循环代谢快等问题,从而限制了纳米药物的功效,导致纳米医药进入“体外性能优异-体内表现差”发展瓶颈期.我们认为,从根本上解决纳米医药发展瓶颈问题依赖于其基本的物理化学特性,也就是纳米制剂的物理药剂学理论方法的研究和创新.因此,本文从肿瘤微环境特点出发,围绕临床应用中的实际问题,结合大分子弗洛里赫金斯参数和标度理论等相关理论,以物理化学为手段,建立系列纳米医药的物理药剂学相关原理,并以递送疏水化疗药物的纳米胶束为例,系统地阐述载体组成、自组装、药物装载和释放以及稳定性等相关理化特性与体内外性能的相关关系及体内相互作用的基本机制.     

“三明治”疗法治疗鹿角型结石的体会

目的探讨"三明治"疗法治疗鹿角型结石的疗效及安全性。方法对本院2006年5月至2011年5月间收治的157例鹿角型结石病例进行回顾性分析,其中采用"三明治"法治疗89例,采用经皮肾镜取石术治疗68例,比较两组治疗方法的结石清除率等指标。结果 "三明治"组结石清除率达到88.1%,而经皮肾镜取石术组的结石清除率只有45.9%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),且"三明治"组病例中无重大并发症出现。结论 "三明治"疗法是治疗鹿角型结石一种安全有效的方法。其治疗结石效果优于传统的经皮肾镜取石术。     

气功“入静”行为对事件相关电位P300波影响的观察气功“入静”行为对事件相关电位P300波影响的观察孔健庄鼎杨秀珍王颖尚红燕目的观察气功“入静”行为引起的大脑皮层状态的变化;方法以56名青年大学生为研究对象,分为“入静”组和对照组,采用事件相关电位(ERP)为指标对“入静

观察气功“入静”行为引起的大脑皮层状态的变化；方法以５６名青年大学生为研究对象，分为“入静”组和对照组，采用事件相关电位（ＥＲＰ）为指标对“入静”行为进行研究；结果统计学处理结果表明，ＥＲＰ—Ｐ３α成分的幅值，“入静”组在“入静”期间较“入静”前明显降低，具有显著的统计学意义（Ｐ＜０．０５）；两组受试者的Ｐ３ｂ成分的幅值，在“入静”期间，出现了显著的组间差异（Ｐ＜０．０５），“入静”对受试者ＥＲＰ－Ｐ３００的潜伏期无显著影响；结论：“入静”行为使人的大脑皮层进入了一种低心理负荷、低心理能量消耗状态。