骨康对体外培养人成骨细胞OPG及RANKL基因表达的影响

【目的】观察中药骨康含药血清对肾阳虚型骨质疏松症患者成骨细胞细胞因子骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。【方法】取6月龄体质量2.5～3.0 kg的新西兰大耳白兔4只,雌雄各半,随机分为2组(中药骨康组、空白对照组),每组2只;分别灌服骨康煎剂4.2 g.kg-1.d-1,以及等容积生理盐水,连续灌胃共7 d,最后1次灌胃2 h后所有动物进行心脏采血,收集血清备用。分离并传代培养肾阳虚骨质疏松症患者成骨细胞,取第2代,制成2×105/mL的细胞悬液。实验组分别加入低、中、高不同浓度(体积分数5%、10%、20%)的骨康含药血清进行干预,空白对照组仅加培养液,继续培养。48 h后采用Trizol一步法提取总RNA,然后采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测OPG、RANKL mRNA的表达。【结果】骨康低、中、高浓度组OPG mRNA表达量显著上升,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);骨康中浓度组与骨康低浓度组、骨康高浓度组与骨康中浓度组组间分别比较差异均有统计学意义(P<0.05);骨康含药血清以体积分数5%、10%、20%浓度递增时,RANKL mRNA的表达量显著下降,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),骨康中浓度组与骨康低浓度组、骨康高浓度组与骨康低浓度组组间RANKL mRNA表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】骨康可以上调肾阳虚骨质疏松症患者体外培养成骨细胞OPG mRNA的表达,下调RANKL mRNA的表达。     

姜黄素联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎骨破坏的疗效观察

[目的]探讨姜黄素联合甲氨蝶呤对寒湿痹阻型类风湿关节炎（RA）骨破坏的干预作用。[方法]将符合标准的128例RA患者随机分为对照组和治疗组,每组64例,对照组口服甲氨蝶呤,治疗组在服甲氨蝶呤基础上加用姜黄素口服治疗,疗程12周,观察改良疾病活动性评分体系（DAS）28评分、炎性指标及对成骨细胞骨代谢相关因子骨保护素（OPG）、核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）的影响。[结果]治疗组与对照组比较,治疗后DAS28评分、血小板计数（PLT）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、RANKL、RANKL/OPG比值均较治疗前显著下降（P<0.05）,且治疗组比对照组下降更明显,血红蛋白（HGB）、OPG较治疗前明显升高（P<0.05）,以治疗组升高水平较好。[结论]姜黄素联合甲氨蝶呤可有效改善RA寒湿痹阻患者的关节及全身症状,且能改善骨破坏,对RANK/RANKL/OPG系统有明显干预作用。     

类风湿关节炎患者Th17细胞膜上RANKL的表达及意义

目的探讨类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血和关节液中Th17细胞膜上RANKL的表达水平与RA病情活动程度指标CRP、ESR、RF及DAS28评分的关系。方法用流式细胞术及RT-PCR方法检测RA患者外周血和关节液中Th17细胞膜上RANKL的表达水平。结果 RA患者外周血Th17细胞膜上RANKL表达明显高于健康对照组（P〈0.05）,RA患者关节液中Th17细胞膜上RANKL表达高于RA外周血（P〈0.05）,RA患者外周血Th17细胞膜上RANKL表达与DAS28评分呈正相关性（r=0.36,P〈0.05）。RTPCR结果提示RA患者CD4~＋T上RANKL表达较健康对照组升高（P〈0.05）。CD4~＋T细胞RANKL mRNA水平与IL-17mRNA水平呈显著正相关（r=0.63,P〈0.001）。结论 Th17细胞膜上RANKL表达明显升高,且与病情活动程度显著相关,提示Th17细胞可能参与RA骨破坏过程,在RA的破骨免疫致病机制中可能起重要作用。     

益气清络方对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中miR-146a表达的影响

目的:探讨益气清络方对类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-146a表达的影响。方法:纳入56例RA患者和32名健康志愿者。将56例RA患者随机分为治疗组(n=28)和对照组(n=28),所有患者均给予西医常规治疗,治疗组在上述治疗基础上给予益气清络方治疗,疗程为12周。采用RT-PCR法检测RA患者和健康志愿者的PBMC中miR-146a的表达,分析RA患者PBMC中miR-146a表达与C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)的关系,比较两组RA患者治疗前后PBMC中miR-146a表达的差异。结果:RA患者的PBMC中miR-146a相对表达量显著高于健康志愿者(P<0.01)。RA患者PBMC中miR-146a的相对表达量与其ESR、CRP水平均呈负相关,相关系数分别为-0.45(P<0.01)和-0.49(P<0.01)。经治疗后,治疗组患者的PBMC中miR-146a相对表达量明显增加(P<0.01),且显著高于对照组(P<0.01)。结论:PBMC中miR-146a表达对RA疾病活动度的判断有益,益气清络方治疗RA的机制可能与上调RA患者PBMC中miR-146a的表达有关。     

类风湿关节炎患者外周血B10细胞高表达核因子κB受体活化因子配体

目的: 检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周血B10细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand, RANKL)的表达,并分析其与RA患者临床和实验室指标的关系,探讨B10细胞在RA发病中的作用及其免疫调节功能缺陷的潜在机制。方法: 选取RA患者25例(近半年未使用糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂)和20名健康对照者(healthy controls, HC),利用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测RANKL在健康对照组和RA患者外周血B10细胞及非B10细胞中的表达,分析表达RANKL的B10 细胞比例与RA患者临床特征和实验室指标的相关性,体外刺激实验评价肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin 1β, IL-1β)对B10细胞表达RANKL的影响。数据分析采用独立样本t检验、Pearson和Spearman相关分析。结果: 健康人外周血B10细胞能表达低水平RANKL, RA患者外周血表达RANKL的B10细胞比例较健康对照组显著升高(3.65%±1.59% vs. 2.25%±0.68%, P<0.01)。RA患者表达RANKL的B10 细胞比例与关节压痛数、关节肿胀数及28-关节疾病活动度分值(disease activity score in 28 joints,DAS28)呈正相关(分别为r=0.479,P=0.035;r=0.519,P=0.008;r=0.526, P=0.019),与年龄、病程、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate, ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、类风湿因子(rheumatoid factor, RF)及抗环瓜氨酸多肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody, ACPA)无显著相关性。TNF-α能促进B10细胞高表达RANKL(P<0.01)。结论: RA患者外周血表达RANKL的B10细胞比例升高,与关节肿痛数及疾病活动度正相关,提示RA患者B10细胞免疫调节功能受损的同时可能参与了RA的发病及骨破坏。     

消肿方对骨关节炎兔软骨下骨成骨细胞OPG及RANKL mRNA表达的影响

目的观察消肿方对骨关节炎兔软骨下骨成骨细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法将30只新西兰大耳白兔随机分为空白对照组,模型组,消肿方低、中、高剂量组,每组6只。采用改良Hulth法复制膝关节骨关节炎模型,消肿方低、中、高剂量组分别给予40、80、160g/kg消肿方煎剂灌胃,空白对照组和模型组分别以等容积生理盐水灌胃,共28d。光镜下观察兔膝关节关节软骨下骨成骨细胞形态,采用RT-PCR法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果空白对照组与模型组OPG mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P<0.05);消肿方高、中、低剂量组OPG mRNA表达水平均较模型组显著升高(P<0.05),具有明显的剂量依赖性。模型组RANKL mRNA表达水平低于空白对照组,消肿方低、中、高剂量组RANKL mRNA表达水平较模型组逐渐降低,但差异均无统计学意义(P>0.05);消肿方高剂量组RANKL mRNA表达水平显著低于低剂量组(P<0.05)。结论消肿方可上调骨关节炎动物模型软骨下骨成骨细胞OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达。     

RANK/RANKL/OPG信号通路的研究进展

核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路是近些年来骨代谢领域的重大发现。许多激素、细胞因子、生长因子通过作用于核因子κB受体活化因子配体,骨保护素影响骨代谢,而导致骨代谢疾病如骨质疏松,溶骨性骨肿瘤及恶性肿瘤骨转移等。该文就主要RANK/RANKL/OPG信号通路的成员、信号转导及表达调控进行综述。     

金属颗粒对MG63细胞骨保护素/核因子-κB受体活化因子配体表达影响的研究

目的:探讨金属钴、铬颗粒对人成骨细胞系MG63细胞骨保护素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响。方法:将金属钴、铬颗粒与人成骨细胞系MG63细胞共培养,ELISA法检测细胞培养上清中OPG、RANKL水平,采用荧光定量PCR法检测OPG、RANKLmRNA表达水平。结果:培养后24、48h实验组RANKL蛋白与mRNA水平显著增加,与对照组相比差异有统计学意义;但OPG蛋白与mRNA水平虽然增加,但与对照组相比差异没有统计学意义;RANKL/OPG比值显著增加,与正常对照组相比差异有统计学意义。结论:金属钴、铬颗粒可以促进RANKL蛋白及RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG比率增高,促进破骨细胞分化,从而使骨吸收增强。     

青藤碱联合甲氨蝶呤治疗早期类风湿关节炎的疗效及对患者MMP-3、RANKL/OPG

  目的：观察青藤碱(SIN)联合甲氨蝶呤(MTX)治疗早期类风湿关节炎(RA)的疗效及对患者血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)表达的影响。  方法：纳入68例早期RA患者,按照随机数字表分为治疗组和对照组,每组各34例。对照组患者给予MTX治疗,治疗组患者给予MTX联合SIN治疗,两组疗程均为12周。采用美国风湿病学会(American College of Rheumatology,ACR) 20、50、70标准评价两组患者的临床疗效,检测患者的类风湿因子(RF)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)及血清MMP-3、OPG、RANKL表达水平。  结果：治疗后,治疗组的ACR 20、50、70达标率分别为76.7%、40.0%、3.3%,对照组分别为34.5%、20.7%、6.9%,治疗组的ACR 20达标率显著高于对照组(P<0.01)。治疗后,治疗组患者的RF、ESR、CRP水平均降低(P<0.01),对照组患者的RF、ESR、CRP水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05);且两组患者的ESR、CRP、RF水平治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.01),治疗组患者上述指标的改善优于对照组。治疗后,治疗组患者的MMP-3、RANKL水平降低(P<0.01,P<0.05),OPG水平和OPG/RANKL比值升高(P<0.01,P<0.05);对照组患者的MMP-3水平亦降低(P<0.05);且两组患者的OPG、RANKL水平及OPG/RANKL比值治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),治疗组患者上述指标的改善优于对照组。  结论：SIN联合MTX可改善早期RA患者的临床症状,调控MMP-3及RANKL/OPG系统,这可能是其抑制骨侵蚀、促进骨保护的机制之一。     

仙灵骨葆胶囊对骨关节炎患者血清OPG、RANKL表达的影响

目的 观察仙灵骨葆胶囊对骨关节炎患者血清护骨素(OPG)与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法 将我院骨科诊治的膝关节骨关节炎患者114例,根据随机数字表法分为观察组与对照组各57例。对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组的治疗基础上给予仙灵骨葆胶囊治疗,两组均治疗观察8周,记录血清OPG、RANKL表达水平的变化。结果 治疗后,观察组的总有效率显著高于对照组(P<0.05);两组膝关节功能(Lysholm)评分显著高于治疗前(P<0.05),且观察组显著高于对照组(P<0.05);两组血C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)值均显著低于治疗前(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.05);两组血清OPG值显著高于治疗前(P<0.05),RANKL值低于治疗前(P<0.05)且观察组与对照组对比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 仙灵骨葆胶囊能调节骨关节炎患者的血清OPG/RANKL分泌平衡,抑制CRP、ESR的释放从而促进改善患者的膝关节功能,提高治疗效果。     

系统性红斑狼疮患者外周血BMP/Smads信号通路相关基因表达及与OPG/RANKL的相关性分析

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血BMP/Smads信号通路相关基因表达,了解其与OPG/RANKL相关性,探讨其在SLE骨代谢中的意义?方法:选取SLE患者26例及正常对照组20例,运用实时定量PCR方法检测两组外周血单个核细胞BMP/Smads信号通路相关基因BMP-2?Smad1?Smad5?Smad8及RANKL?OPG的表达,ELISA法定量检测血清中RANKL?OPG水平,计算OPG/RANKL比值;分析Smad1?Smad5?Smad8基因表达量与疾病活动相关指标及OPG/RANKL相关性?结果:SLE患者外周血单个核细胞OPG/RANKL系统中OPG基因mRNA表达水平较正常对照组减低 (0.002 5 ± 0.000 7 vs. 0.017 6 ± 0.006 7,P < 0.05),RANKL基因mRNA表达水平无统计学差异 (0.003 3 ± 0.001 0 vs. 0.002 4 ± 0.000 9,P > 0.05),SLE患者OPG/RANKL比值较正常对照组明显减低 (0.229 6 ± 0.071 2 vs. 0.609 5 ± 0.165 1,P < 0.01)?SLE患者Smad1?Smad8基因mRNA表达水平较正常对照组明显减低 (0.003 1 ± 0.000 4 vs. 0.006 6 ± 0.000 7;0.003 3 ± 0.000 5 vs. 0.005 6 ± 0.000 6,P < 0.01),Smad5基因mRNA表达较正常对照组减低(0.001 7 ± 0.000 3 vs. 0.004 2 ± 0.000 4,P < 0.05),SLE患者与正常对照组BMP-2基因mRNA表达水平无统计学差异(0.006 9 ± 0.002 0 vs. 0.010 5 ± 0.002 1,P > 0.05)?SLE患者组血清RANKL表达较正常对照组明显增高(P < 0.01),OPG表达在两者间无明显统计学意义(P > 0.05),SLE血清OPG/RANKL较正常对照组明显减低(P=0.006)?相关性分析显示,SLE患者Smad8 mRNA水平?OPG/RANKL均与血沉呈正相关 (P < 0.05)?OPG mRNA水平与Smad8 mRNA表达水平呈正相关P <0.01,而RANKL与Smad1 mRNA基因表达呈负相关(P < 0.01)?结论:SLE患者体内BMP/Smads系统基因表达存在异常,可能与SLE的骨代谢异常相关?     

Effect of Triptolide on Expression of Receptor Activator of Nuclear Factor-κB Ligand in Rat Adjuvant Induced Arthritis

Receptor activator of nuclear factor-kappaBligand(RANKL)promotes osteoclast formation,fusion,differentiation and activation.It plays akey role in osteoclast mediated bone erosion inrheumatoid arthritis(RA).Osteoprotegerin(OPG),as a soluble decoy receptor of RANKL,can prevent bone erosion in RA.Our previousstudies have shownthat Triptolide(TP),an activecompoundidentifiedin a traditional Chinese herb--Tripterygium wilfordii Hook F(TWHF),can ef-fectively inhibit bone destruction in ex…     

拉莫德对类风湿关节炎继发骨质疏松的治疗作用及相关机制

目的探讨艾拉莫德对类风湿关节炎（RA）继发骨质疏松（OP）的治疗作用及相关机制。方法选取诊断明确的RA患者90例,按随机数字表法,将患者随机分为对照组45例和观察组45例,对照组采用甲氨蝶呤片（MTX）联合羟氯喹片(HCQ)治疗,观察组采用在MTX、HCQ基础上加用艾拉莫德治疗,两组患者药物治疗观察期均为24周,比较两组患者治疗前后的关节压痛数（TJC）、关节肿胀数（SJC）、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、视觉模拟评分法（VAS）(患者总体评价)、28个关节疾病活动度（DAS28）、骨密度（BMD）、总Ⅰ型胶原氨基端延长肽（TPINP）、β-胶原降解产物（β-CTX）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、骨保护素（OPG）、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）,观察两组患者不良反应发生率。结果（1）两组治疗24周后,ESR、CRP、VAS、DAS28均较治疗前改善（P<0.05）,但观察组较对照组改善更显著（P<0.05）;（2）治疗24周后,各部位骨密度值观察组均高于对照组,但两组骨密度水平差异无统计学意义（P>0.05）,观察组较对照组TPINP升高、β-CTX降低更显著（P<0.05）;（3）治疗24周后,IL-6、TNF-α均降低,且观察组均低于对照组（P<0.05）,OPG均较治疗前升高,RANKL均较治疗前降低,但观察组OPG水平高于对照组,RANKL水平低于对照组（P<0.05）;（4）未有患者发生严重不良事件,两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义（P>0.05)。结论（1）艾拉莫德联合用药能够更有效地减轻RA患者的疾病活动,改善临床症状,而且未增加不良反应;（2）艾拉莫德联合用药能够更显著地调节骨代谢、改善骨密度,可能通过影响OPG/RANK/RANKL系统。     

p38MAPK抑制对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

 目的 观察p38MAPK信号转导通路在成骨细胞分化及核因子-κB受体激活配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）和骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达中的作用。方法 取第1继代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,药物刺激组分别加入10^-8 mol/L 17β-雌二醇和10^-7 mol/L雷洛昔芬;含阻断剂组预先添加5 μmol/L SB202190阻断p38MAPK通路后,再加17β-雌二醇或雷洛昔芬。72 h后用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶（alkaliphosphatase,ALP）活性;RT-PCR法检测成骨细胞ALP、OPG和RANKL的转录水平。结果 17β-雌二醇和雷洛昔芬能够促进成骨细胞分化,促进OPG、RANKL的表达（P<0.05）,OPG/RANKL无明显变化（P>0.05）;阻断p38MAPK信号转导通路后,成骨细胞分化受抑,OPG、RANKL的表达和OPG/RANKL降低（P<0.05）。结论 p38MAPK抑制可干扰体外培养成骨细胞分化,抑制RANKL和OPG的过度表达。     

RANKL/OPG系统、Dickkopf-1与类风湿关节炎骨髓水肿的 相关研究

目的 探讨以膝关节受累为主的类风湿关节炎（RA）患者骨髓水肿(BME)与核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/护骨素（OPG）系统、Dickkopf-1(DKK-1)的相关性。 方法 收集我院诊治的以膝关节不适为主诉的RA患者50例,根据MRI检查结果分为骨髓水肿组（BME组,25例）和非骨髓水肿组（非BME组,25例）,分别收集其临床症状和28关节疾病活动指数（DAS28）,并同期检测其血清OPG、RANKL、DKK-1和血清C-反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、抗环瓜氨酸多肽抗体（CCP）、类风湿因子（RF）水平,比较两组患者之间的差异,并分析RA患者BME与OPG/RANKL系统、DDK-1的相关性。 结果 与非BME组比较,BME组病程更短（\P=0.000）,DAS28评分更高（\P=0.009）,CRP（\P=0.000）、RF（\P=0.033）和CCP（\P=0.012）水平更高;且血清OPG水平更低（\P=0.000),RANKL（\P=0.000)、RANKL/OPG（\P=0.000)和DKK-1（\P=0.001)水平更高;BME组内,BME容积和程度积分与血清RANKL（容积积分\rs=0.31,\P=0.027;程度积分\rs=0.33,\P=0.022）、RANKL/OPG（容积积分\rs=0.29,\P=0.039;程度积分\rs=0.28,\P=0.043）、DKK-1（容积积分\rs=0.33,\P=0.021;程度积分\rs=0.34,\P=0.019）存在相关性。 结论 BME是RA患者骨质侵蚀的早期表现之一,伴有BME的RA患者其炎症明显、自身抗体高、破骨细胞更活跃。     

心房颤动患者血浆骨保护素、核因子κB受体活化因子配体水平及临床意义

目的探讨心房颤动患者血浆骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator ofnuclear factor kappa B ligand,RANKL)水平及临床意义。方法采用酶联免疫吸附法检测40例阵发性房颤、39例持续性房颤、43例永久性房颤患者及40例窦性心律对照者血浆中OPG、RANKL水平。结果阵发性房颤组、持续性房颤组、永久性房颤组患者血浆中OPG、RANKL水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),持续性房颤组、永久性房颤组患者与阵发性房颤组相比血浆中OPG、RANKL水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而持续性房颤组、永久性房颤组患者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OPG、RANKL与房颤的发生和持续可能相关。     

类风湿性关节炎患者外周血NKG2D、NKG2A及颗粒酶B表达的研究

目的 本研究旨在探讨类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血中NK细胞表达NKG2D、NKG2A及胞内颗粒酶B的水平,并且分析它们与疾病活动度（DAS28）的相关性。方法 流式细胞术检测41例RA患者和35例健康对照者外周血中NK细胞、NKG2D⁺NK细胞、NKG2A⁺NK细胞以及颗粒酶B⁺NK的表达水平;采用Spearman秩相关分析法分析它们与DAS28的相关性。结果 RA患者外周血中,NK细胞表达水平显著低于健康对照组（P=0.016）;NKG2D的表达水平显著低于健康对照组（P=0.002）,且NKG2D的表达水平与DAS28评分呈负相关（P<0.05）;NKG2A的表达水平与健康对照组之间比较差异无统计学意义（P=0.547）,且与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）;颗粒酶B的表达水平有所降低（P=0.034）,但与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）。结论 活化性受体NKG2D以及胞内颗粒酶B表达的异常降低可能导致NK细胞杀伤活性的损伤,不能有效杀伤免疫效应细胞,从而促进了RA的发生、发展。     

核因子κB的小干扰RNA防治自体移植静脉再狭窄的实验研究

目的   探讨核因子κB（NF-κB）的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA)对大鼠自体静脉移植术后血管内膜增殖及相应炎性细胞因子表达的影响。方法    雄性Wistar大鼠80只,随机分为空白组（A组,n=10）;自体静脉移植组（B组,n=18）;空载体组（阴性质粒脂质体医用蛋白胶复合物转染移植静脉,C组,n=26）和基因转染组（NF-κB siRNA阳离子脂质体医用蛋白胶复合物转染自体移植静脉,D组,n=26）。B、C及D组需制作大鼠自体颈外静脉——腹主动脉移植模型,每组4个时点( 3,7,14,21d),相应时间点取移植静脉观察病理形态学变化,免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）,PCR测定单核细胞趋化因子（MCP-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF α）的mRNA含量,Western blot测定NF-κB p65蛋白的表达。结果    自体静脉移植术后,B、C和D组移植静脉血管桥均出现内膜增生变厚,新生内膜有大量PCNA阳性细胞,中膜平滑肌细胞增生活跃。术后3d,B组和C组 MCP-1 mRNA及TNF-αmRNA表达水平明显高于A组（P＜0.05）,但D组水平明显低于C组（P＜0.05）。术后7d,B、C组NF-κB p65蛋白表达水平明显高于A组（P＜0.05）,与C组相比,D组NF κB p65蛋白水平明显降低（P＜0.05）。结论     NF-κB的基因表达产物和MCP-1mRNA、TNF-αmRNA的表达有一定相关性,自体静脉移植术后新生内膜增生及炎性细胞因子表达在不同时相点呈动态变化。转染NF-κB siRNA阳离子脂质体复合物可抑制NF-κB的表达,减少MCP-1及TNF-αmRNA的表达,从而抑制移植静脉内膜增生和VSMC增殖,减轻再狭窄。     

基于OPG/RANK/RANKL系统比较研究前肢畸形WHBE兔骨代谢特征

目的 利用OPG/RANK/RANKL系统比较研究前肢畸形WHBE兔骨代谢特征。方法 取健康WHBE兔、健康日本大耳白兔、前肢畸型WHBE兔各10只,分为3组,标记为HWR、HJR和FMWR组。用X射线机所拍摄X-线片观察各组兔前肢尺桡部形状并测定平均灰度值;通过骨组织石蜡切片HE染色对前肢骨组织进行微观形态分析;采用荧光定量PCR法检测OPG、RANKL基因在肝脏中表达;采用酶联免疫法和免疫组化法分别测定OPG/RANK/RANKL蛋白在血清和骨组织中的表达。结果 与HWR和HJR组比较,FMWR组兔前肢尺桡部呈异常弯曲状,骨皮质明显变薄,X-线片所示灰度值显著低于HWR组(P<0.05)。FMWR组兔在肝脏RANKL基因表达水平和RANKL/OPG mRNA比值（P<0.01),血清RANK、RANKL蛋白含量及RANKL/OPG比值(P<0.05, P<0.01),骨组织RANKL蛋白表达阳性指数及RANKL/OPG比值(P<0.05, P<0.01)等指标上均显著高于HWR组和HJR组。与HJR组比较,HWR组兔肝脏OPG和RANKL基因表达水平显著提高（P<0.05, P<0.01)。结论 前肢畸形WHBE兔存在骨质量下降、骨组织受损现象,RANKL/OPG比值明显升高,骨代谢紊乱是其骨骼发生畸形的主要原因。与日本大耳白兔在RANKL基因表达水平上的品种差异可能是WHBE兔对前肢畸形易感的诱因。