清洁级长爪沙鼠病毒抗体ELISA检测法建立

经纯化长爪沙鼠IgG免疫家兔后获得的血清用辛酸法纯化抗体，电泳可见只有一条蛋白带，制备得酶标二抗工作浓度为1：25600。用间接ELISA对开放系统和屏障系统中长爪沙鼠进行淋巴细照脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)，鼠肝炎病毒(MHV)和仙台病毒抗体的检测，发现其血清病毒抗体阳性率开放系统为6．0%(4/67)，22.4%(15／67)和14．9%(10／67)，屏障系统为1．3%(1／79)，1．3%(1／79)和7．6%(6／79)，如用酶标蛋白A取代酶标抗长爪涉鼠IgG抗体进行检测，则无一份血清阳性，结果表明长爪沙鼠可以自然感染LCMV、MHV和仙台病毒或其抗原相关的病毒，酶标蛋白A不宣作为酶标二抗用手长爪沙鼠抗体的检测。     

禽流感H5N1型病毒对沙鼠致病性的初步研究

目的 观察禽流感H5N1型病毒对沙鼠的致病性。方法 在生物安全三级实验室，将禽流感H5N1型病毒通过滴鼻接种乙醚麻醉后沙鼠，观察14d，记录沙鼠的体温、体重、临床体征、病理学变化、病毒分离情况及抗体变化。结果 沙鼠感染后发病主要表现在第2～6天，攻毒组沙鼠出现反应迟钝、皱毛、弓背、食欲下降、呼吸急促、打堆等体征，攻毒组沙鼠的体温降低和体重减轻，死亡率为44％，在攻毒后8d检出抗体，主要病理学变化表现为肺出现严重淤血、水肿、出血，镜下可见肺间质充血，血管周围炎性细胞浸润，肝和胸腺淤血，肾出血，肾小管变形。结论 禽流感H5N1型病毒对沙鼠有较强致病性。     

肾综合征出血热病毒灭活疫苗的研究 Ⅱ、灭活HFRS疫苗的安全性和效力观察

本文总结了HFRS病毒鸡胚组织培养灭活疫苗的研制和效果观察。证明其免疫原性好,安全性可靠。为生产出血热灭活疫苗提供了成功的经验。在小量人体免疫时,第1针血清阳转率为4/5,第2针阳转率达5/5。几何平均滴度显著高于第1针,为1∶33—1∶160。扩大人群免疫效果更进一步证明HFRS抗体阳转率颇理想,于第2针免疫后21天取血检查抗HFRS抗体阳性检出率为百分之百。GMT IFA为183.8,HI为46.6。10份血清中和抗体指数为467.8～17790。受接种者无任何不良反应,也未发生HFRS病毒的感染。     

天津市红桥区接种乙型脑炎疫苗免疫效果观察

目的 了解两种疫苗接种后的免疫效果,为制定科学的免疫方案提供依据.方法 选取天津市红桥区10家接种单位2～3岁共计220名健康儿童作为观察对象.将受试者分组每组各110人分别接种Vero细胞乙脑灭活疫苗和乙脑减毒活疫苗开展观察,评价不良反应和免疫效果.结果 两种疫苗不良反应总发生率分别为4.56％,8.12％.接种不良反应主要表现发热(1.82％、2.72％),接种部位红肿(0.91％、0.91％),均为一过性反应.Vero细胞乙脑灭活疫苗免疫后抗体阳性率为91.84％,抗体滴度(GMT)为1∶32.1,免疫成功率为88.4％.乙型脑炎减毒活疫苗免疫后抗体阳性率为65.26％,GMT为1∶21.3.结论 两种乙脑疫苗在安全性有效性上没有显著差异,但在抗体阳性率和中和抗体滴度方面Vero细胞乙脑灭活疫苗较乙脑减毒活疫苗更具有保护性优势.     

Observation of JE live attenuated vaccine and inactivated vaccine effects and human vaccination reactions

目的 比较乙脑减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫效果和安全性.方法 选择中宁县8～10月龄应初免的儿童285名,分组接种乙脑减毒活疫苗和乙脑灭活疫苗,观察人体接种反应,采用细胞蚀斑减少中和试验(PRNT)检测免疫前和免疫后乙脑中和抗体.结果 减毒活疫苗组(JE Attenuated Live Vaccine,JEV-L)抗体阳转率和抗体几何平均滴度(GMT)分别为90.14%和1∶30.68;灭活疫苗组[Japanese Encephalitis(JE)Inactivate Vaccine(Vero Cell),JEV-1(Vero)]为60.84%和1∶12.08,减毒活疫苗组抗体阳转率和阳性抗体(GMT)均高于灭活组.经观察,减毒活疫苗组和灭活疫苗组人体反应均为发热和接种部位轻度红肿,发热率分别为34.75%和39.86%,中、强反应率为8.45%和7.69%,红肿率为1.42%和0.81%,所有发热及轻度红肿者均于72小时恢复正常.结论 乙脑减毒活疫苗免疫效果好,免疫针次少,安全性好,是现阶段预防乙脑比较理想的疫苗,适宜推广使用.     

流行性乙型脑炎减毒活疫苗与灭活疫苗免疫效果及人体接种反应观察

目的比较乙脑减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫效果和安全性。方法选择中宁县8～10月龄应初免的儿童285名,分组接种乙脑减毒活疫苗和乙脑灭活疫苗,观察人体接种反应,采用细胞蚀斑减少中和试验(PRNT)检测免疫前和免疫后乙脑中和抗体。结果减毒活疫苗组(JE Attenuated Live Vaccine,JEV-L)抗体阳转率和抗体几何平均滴度(GMT)分别为90.14%和1∶30.68;灭活疫苗组[Japanese Encephalitis(JE)Inactivate Vaccine(Vero Cell),JEV-1(Vero)]为60.84%和1∶12.08,减毒活疫苗组抗体阳转率和阳性抗体(GMT)均高于灭活组。经观察,减毒活疫苗组和灭活疫苗组人体反应均为发热和接种部位轻度红肿,发热率分别为34.75%和39.86%,中、强反应率为8.45%和7.69%,红肿率为1.42%和0.81%,所有发热及轻度红肿者均于72小时恢复正常。结论乙脑减毒活疫苗免疫效果好,免疫针次少,安全性好,是现阶段预防乙脑比较理想的疫苗,适宜推广使用。     

18～59岁人群加强免疫新型冠状病毒灭活疫苗的免疫原性及安全性观察

目的观察新型冠状病毒疫苗加强免疫的免疫原性及安全性。方法 2020年10月, 江苏省疾病预防控制中心(CDC)开展了新型冠状病毒灭活疫苗的Ⅱ期临床试验, 入组对象为18～59岁、未妊娠、未哺乳的健康人群, 基础免疫程序为0-14 d 5 μg、0-14 d 10 μg、0-28 d 5 μg、0-28 d 10 μg, 从其中按研究编号从小到大顺序各选择50名(共200名)完成2剂基础免疫的受试者, 在完成基础免疫后第6个月(窗口期30 d)加强接种第3剂与基础免疫同样剂量的疫苗。加强免疫前后分别采集静脉血约5 ml, 分析活病毒中和抗体、假病毒中和抗体、受体结合域IgG抗体(RBD-IgG)的阳转率和几何平均滴度(GMT)。收集并分析加强免疫后28 d内不良事件发生情况。结果 0-14 d 5 μg、0-14 d 10 μg、0-28 d 5 μg、0-28 d 10 μg组对象的基线年龄分别为(43.98±9.58)、(43.46±9.34)、(42.56±9.08)和(43.94±11.05)岁(P=0.877), 各组间性别比例均衡(P=0.331);4组活病毒中和抗体GMT(...     

双价肾综合征出血热灭活疫苗免疫原性检测

目的检测生产的双价肾综合征出血热灭活疫苗的免疫原性。方法将生产的各批次双价肾综合征出血热灭活疫苗免疫家兔，并在初次免疫后1wk加免一次，每次免疫接种1mL／只。免疫前和免疫后第28d分别于家兔心脏采血，分离血清运用空斑减少中和实验测定血清的中和抗体滴度。结果所检测的5批双价肾综合征出血热灭活疫苗免疫家兔后其血清的中和抗体滴度均≥1：10，部分批次／家兔的免疫血清其中和抗体滴度≥1：20。结论所检测的5批双价肾综合征出血热灭活疫苗其免疫原性检测结果均达到中国国家药典要求。     

SARS恢复猴和灭活疫苗免疫实验猴再次感染SARS-CoV研究

目的研究SARS-CoV实验感染恢复猴，以及灭活疫苗免疫猴对SARS—CoV再次感染的疾病状况。方法动物分四组，分别为SARS感染恢复动物组，灭活疫苗免疫不同时间2组和SARS模型对照组。动物分别接种病毒，1～7d进行病毒检测和血清学检测，7d后安乐处死动物，进行病理检测。结果实验感染SARS-CoV猴和灭活疫苗免疫猴均产生了中和抗体，猴体内SARS-CoV复制得到一定程度的抑制，病理变化也比SARS-CoV模型组轻。结论SARS-CoV感染恢复猴对SARS-CoV再次感染有一定抵抗作用；灭活疫苗免疫是预防实验猴感染SARS—CoV的有效方法。     

普通环境长爪沙鼠种群中病原体携带情况普查

目的对普通环境饲养的长爪沙鼠病原感染情况进行初步调查,为制定长爪沙鼠病原体检测地方标准提供依据。方法参考小鼠、大鼠微生物和寄生虫检测方法,对普通环境饲养的30只长爪沙鼠进行16项细菌、11项病毒和8项寄生虫的检测。结果饲养于普通环境的30只长爪沙鼠有淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型、小鼠脑脊髓炎病毒、支原体、泰泽病原体、螺杆菌抗体检出,其检出率分别为6.7%、3.3%、100.0%、6.7%、10.0%、6.7%、6.7%和56.7%,同时检出嗜肺巴斯德杆菌感染率为3.3%,金黄色葡萄球菌感染率为10.0%,大肠埃希菌O115 a,C,K(B)感染率为6.7%,鼠三毛滴虫感染率为100.0%,鞭毛虫感染率为100.0%。结论本研究为制定长爪沙鼠等级标准提供了参考数据。     

季节性流感疫苗对小鼠感染H7N9禽流感病毒的保护效力

目的 评价季节性流感裂解疫苗对流感病毒H7N9的免疫保护效力。方法 用我国2012～2013年度季节性流感裂解疫苗,以腹腔注射方式免疫BALB/c小鼠,并设PBS免疫模型组,末次免疫14 d后以5 LD₅₀ A/Anhui/1（H7N9）进行攻试验。感染后观察记录小鼠临床表现,体重变化,并分别于第2天和第4天每组处死3只小鼠,取肺组织和鼻甲骨测病毒滴度和载量。结果 感染后疫苗与模型组小鼠体重下降明显,疫苗组存活率为10%,模型组全部死亡。感染后第4天疫苗组鼻甲骨滴度显著低于模型组。血凝抑制试验及中和实验表明免疫小鼠血清无中和H7N9病毒抗体。结论 季节性流感疫苗在小鼠中对于H7N9流感病毒感染无明显保护作用。     

PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵方案的优化

目的：优化PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵方案。方法通过对动物周龄、激素剂量和间隔时间等系统研究,优化出用于长爪沙鼠超数排卵的最佳动物周龄、激素组合剂量和间隔时间。结果对6周龄长爪沙鼠使用10单位激素计量及间隔70 h可以获得最佳超数排卵效果。在合笼16 h后80％的动物得以排卵,获卵数为32.6±3.0枚／只,其中24.8±5.4枚／只可以发育至二细胞胚胎。结论本研究获得了利用PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵的优化方案,为长爪沙鼠胚胎生物技术研究奠定了基础。     

肾综合征出血热疫苗效果免疫增强和免疫策略研究

目的"八五"、"九五"期间连续观察肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)沙鼠肾原代细胞Ⅰ型灭活疫苗(简称沙鼠苗)、乳鼠脑纯化Ⅰ型灭活疫苗(简称鼠脑苗)和地鼠肾原代细胞Ⅱ型灭活疫苗(简称地鼠苗)在HFRS疫区试验人群中的安全性、血清学和流行病学效果,并提出免疫策略建议.方法采取现场与实验室结合的方法.现场试验人群采用整群随机分组,分为疫苗接种组和对照组.实验室血清抗体检测采用间接免疫荧光法(IFAT)、微量细胞病变中和试验(MCPENT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和血凝抑制试验(HI).结果3种疫苗安全性良好.在接种人群中的中强反应率较低;沙鼠苗为0.56%,地鼠苗1.57%,鼠脑苗3.26%.在接种疫苗的168 714人中,6年内临床上未出现免疫(感染)增强反应的病例.接种组17例病人与对照组362例病人比较,临床类型差异无显著性(P＞0.01).119例疫苗接种者,以IFAT证实,再次自然感染汉坦病毒(HV)后,未出现临床症状.3种疫苗血清学效果较好.3种疫苗对人群保护效果均较高.免疫策略研究结果表明,同型苗用在同型疫区,Ⅱ型苗用在不同类型疫区和Ⅰ型苗用在姬鼠型为主混合型疫区,在观察的5年内均取得了满意的预防效果.结论我国研制的3种HFRS单价灭活疫苗,经过5年在高发疫区人群中的观察结果证明,安全有效,可以推广应用.并根据研究结果和本病流行特点提出了免疫策略的建议.     

干扰素对M2e-HBc疫苗鼻内免疫的佐剂作用

目的 研究干扰素对鼻腔黏膜免疫M2e-HBc疫苗的佐剂作用.方法 小鼠经鼻腔黏膜免疫,用流感病毒攻击.测定抗体水平和对小鼠的保护.结果 小鼠可产生局部和系统保护性抗体IgA、IgG,对流感病毒的亚致死性攻击产生完全保护.结论 干扰素对M2e-HBc疫苗鼻内免疫具有较强的免疫佐剂作用.     

红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物作为流感疫苗佐剂的初步研究及其LD50的测定

目的本研究旨在探讨红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物作为裂解灭活H3N2流感疫苗的佐剂对小鼠模型的免疫作用及其毒性程度。方法取ICR小鼠完全随机平均分组后,分别将红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物作为佐剂与H3N2灭活流感疫苗混合免疫小鼠,同时以相应剂量的单独疫苗组、氢氧化铝佐剂组、生理盐水空白免疫组作为对照组。所有动物于第1周和第3周进行肌内注射免疫,共2次。于初次免疫后每周取血收集血清,测定血凝抑制(HI)抗体效价,并考察每组小鼠的生长状况。同时,进一步观察红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物的小鼠半数致死量(LD50)。结果红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物能显著增强血清HI抗体效价,高于单独疫苗组,并且小鼠体重增长正常,结合二者LD50(红豆杉提取物的LD50为295.43mg/kg,纳米乳包裹红豆杉提取物LD50为7.33g/kg)。认为红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物作为流感疫苗佐剂具有安全有效性,有望成为流感灭活疫苗的新型免疫佐剂。结论本实验首次证实了红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物可以有效增强对流感抗原的免疫性,并为进一步研究开发提供了毒性依据。鉴于红豆杉提取物和纳米乳包裹红豆杉提取物所表现出的佐剂效应,二者值得做更进一步的研究以便提高疫苗的质量。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒2 DNA疫苗与重组亚单位疫苗在小鼠中诱导中和抗体的效力分析

目的 探讨以严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）受体结合区（RBD）和表面刺突蛋白（S蛋白）S1亚基为疫苗靶抗原诱导中和抗体的效果。方法 构建SARS-CoV-2 RBD与小鼠IgG1 Fc段（mFc）融合蛋白表达质粒pVRC-RBD-mFc,转染人胚肾细胞293T并进行培养。用蛋白质印迹法检测细胞培养上清中的RBD-mFc融合蛋白,用微量中和实验检测细胞培养上清中的RBD-mFc及CHO细胞重组表达的SARS-CoV-2 S1与人IgG1 Fc段（S1-hFc）融合蛋白对SARS-CoV-2感染的抑制作用。分别用质粒pVRC-RBD-mFc及S1-hFc融合蛋白通过肌内注射接种BALB/c小鼠,用ELISA检测小鼠血清中的抗-S1 IgG,用微量中和实验检测小鼠血清的病毒中和活性。结果 pVRC-RBD-mFc质粒转染293T细胞的培养上清中可检测到RBD-mFc融合蛋白,超滤浓缩的细胞培养上清及S1-hFc融合蛋白均呈浓度依赖性抑制SARS-CoV-2对Vero E6细胞的感染;经pVRC-RBD-mFc质粒及S1-hFc融合蛋白免疫的小鼠血清中均可检测出抗-S1 IgG,且能中和SARS-CoV-2的感染;S1-hFc融合蛋白免疫小鼠血清的抗体滴度及病毒中和活性均高于质粒pVRC-RBD-mFc免疫小鼠血清（P均<0.01）。结论 SARS-CoV-2 RBD和S1蛋白均可能作为有效的疫苗抗原,重组亚单位疫苗较DNA疫苗能更有效地诱导中和抗体。     

Rabies Virus Neutralizing Activity,Safety, and Immunogenicity of Recombinant Human Rabies Antibody Compared with Human Rabies Immunoglobulin in Healthy Adults

ObjectivePreliminary assessment of rabies virus neutralizing activity, safety and immunogenicity of a recombinant human rabies antibody (NM57) compared with human rabies immunoglobulin (HRIG) in Chinese healthy adults.MethodsSubjects were randomly (1:1:1) allocated to Groups A (20 IU/kg NM57), B (40 IU/kg NM57), or C (20 IU/kg HRIG). One injection was given on the day of enrollment. Blood samples were collected on days –7 to 0 (pre-injection), 3, 7, 14, 28, and 42. Adverse events (AEs) and serious AEs (SAEs) were recorded over a period of 42 days after injection.ResultsAll 60 subjects developed detectable rabies virus neutralizing antibodies (RVNAs) (> 0.05 IU /mL) on days 3, 7, 14, 28, and 42. The RVNA levels peaked on day 3 in all three groups, with a geometric mean concentration (GMC) of 0.2139 IU/mL in Group A, 0.3660 IU/mL in Group B, and 0.1994 IU/mL in Group C. At each follow-up point, the GMC in Group B was significantly higher than that in Groups A and C. The areas under the antibody concentration curve over 0–14 days and 0–42 days in Group B were significantly larger than those in Groups A and C. Fifteen AEs were reported. Except for one grade 2 myalgia in Group C, the other 14 were all grade 1. No SAEs were observed.ConclusionThe rabies virus neutralizing activity of 40 IU/kg NM57 was superior to that of 20 IU/kg NM57 and 20 IU/kg HRIG, and the rabies virus neutralizing activity of 20 IU/kg NM57 and 20 IU/kg HRIG were similar. Safety was comparable between NM57 and HRIG.     

周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响

目的探讨不同周龄和激素水平对长爪沙鼠超数排卵效果的影响,以期确定长爪沙鼠最佳超排周龄和激素使用剂量。方法腹腔注射10 IU PMSG/HCG对4～18周龄8个年龄段的雌性长爪沙鼠进行超数排卵,末次注射16～17 h内对各组动物卵母细胞计数,确定最佳超排周龄后,对该年龄动物以5、10、15 IU3个剂量水平腹腔注射PMSG/HCG,观察各组动物的卵母细胞计数差异。结果与其它周龄组相比,6周龄组长爪沙鼠超数排卵后的卵母细胞数最多,各组间有统计学意义(P<0.05),而5、10、15IU等3个剂量组的超排效果也有一定的差异,10 IU组数量最高。结论对长爪沙鼠而言,采用10 IU激素注射和6周龄的动物进行超数排卵,获得的卵母细胞数量最多而且超排效果稳定性。     

长爪沙鼠的生物净化技术

目的实现长爪沙鼠微生物质量升级和实验动物化目标,需对长爪沙鼠实施生物净化。方法在长爪沙鼠生物净化过程中,采取孕鼠选择和临产期判断、无菌剖宫产、仔鼠代乳以及独立通风笼盒(IVC)饲养管理等措施,比较了ICR小鼠、SD大鼠、长爪沙鼠代乳和饲料中添加营养成分对仔鼠代乳的影响。结果本研究共实施长爪沙鼠无菌剖宫产达85胎次,通过ICR代乳鼠代乳并成功断乳167只。结论本研究顺利实现了长爪沙鼠生物净化,形成的关键技术有望为我国特色实验动物资源的生物净化提供参考。     

Isolation of an exotic serotype of bluetongue virus from imported cattle in quarantine

In 1980, 60 zebu cattle from Brazil were admitted into quarantine in Florida for 150 days. During the 30 days between their last test in Brazil and their first test in Florida, four animals developed antibody to bluetongue virus detectable by agar gel immunodiffusion test. Within 62 days after arrival in Florida, three more seroconverted and one more was positive by the 86th day. Virus neutralizing titers of serums from the first four cattle were highest against bluetongue virus serotype 4 and 20; both of these serotypes are exotic to the United States. A bluetongue virus serotype 4 was isolated from one of these animals. The eight positive reactors were slaughtered; the other 52 cattle, which did not develop detectable antibody titers to bluetongue virus, were released into the United States.