NK细胞抗肿瘤免疫效应机制研究进展

自然杀伤(NK)细胞无需抗原预先致敏即可直接杀伤靶细胞，通常被视为机体免疫防御系统的第一道防线。NK细胞主要通过诱导靶细胞凋亡、释放效应细胞冈子、介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)作用等途径杀伤肿瘤细胞。现综述近年来NK细胞在以上效应机制方面的研究进展。     

耐地塞米松B细胞淋巴瘤细胞逃逸同种异体NK细胞的杀伤及其机制

目的:观察地塞米松耐药的人B细胞淋巴瘤细胞系对NK细胞杀伤敏感性的变化,并探讨其作用机制。方法:20μg/ml地塞米松(dexamethasone,DXM)诱导B细胞淋巴瘤细胞系SU-DHL-4(简称SU细胞)发生耐药,建立多药耐药细胞系SU/DXM。流式细胞术分选健康人外周血NK细胞,流式细胞术检测效靶比20∶1时,NK细胞对SU和SU/DXM细胞的杀伤效应。实时定量PCR检测SU和SU/DXM细胞表面NK细胞活化性受体(soluble NK group 2 member D,NKG2D)配体基因[可溶性MHCⅠ类分子相关A/B(MHC classⅠchain-related molecules A/B,MICA/B)及人UL16结合蛋白(UL16 binding protein,ULBP)1、2、3]的表达。结果:成功建立多药耐药细胞系SU/DXM。与SU细胞相比,SU/DXM细胞对NK细胞杀伤的敏感性明显下降[SU细胞为(11.38±3.51)%,SU/DXM细胞为(3.57±4.22)%,P<0.05],细胞表面NKG2D配体基因MICA、MICB、ULBP2 mRNA表达量降低(SU细胞分别为1.014±0.121、1.009±0.092、0.993±0.108,SU/DXM细胞分别为0.017±0.006、0.682±0.063、0.773±0.066,P<0.05或P<0.01)。结论:地塞米松能诱导B细胞淋巴瘤SU细胞发生多药耐药,多药耐药SU/DXM细胞能够抵抗NK细胞的杀伤,其机制可能与NKG2D配体基因表达量下降有关。     

NK细胞杀伤人胶质瘤起始细胞的体外研究

背景与目的：越来越多的证据支持人脑胶质瘤来源于胶质瘤起始细胞／干细胞（glioma initiating cell／stemcell,GIC／GSC）的假说,鉴于干细胞特性．常规手术和放化疗难以清除GIC．本研究试图用体外活化的自然杀伤（natural killer,NK）细胞对GIC细胞进行杀伤研究。方法：以体外长期培养于干细胞培养基的CD133阳性胶质瘤细胞作为GIC,用免疫磁珠从胶质瘤患者（或健康人）的外周血中分离NK细胞,常规IL2／PHA活化NK细胞后,应用LDH释放法检测其体外杀伤GIC细胞的活性,以K562细胞为阳性对照。结果：体外实验中,异体NK细胞可以在GIC的培养基甩生长和活化．且其杀伤GIC细胞的能力随效靶比增高而增强,同一效靶比时,活化的NK细胞杀伤GIC细胞的活性明显高于未活化（静止）NK细胞的活性（P〈0．011。结论：异体NK细胞可以在GIC的培养环境中活化并表现出针对GIC的杀伤能力,为NK细胞用于脑胶质瘤起始细胞的临床清除提供可能性。     

树突状细胞与自然杀伤细胞相互作用研究进展

最近树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞的相互作用引起各国研究人员的注意。体内、体外试验均证实两种细胞相互作用产生细胞毒效应，并能激活、促进DC成熟和NK细胞增殖．这些相互作用的效嘘在免疫反臆中起重要作用。现综述NK—DC相互作用机制及意义的研究进展。     

NK细胞抗肿瘤免疫效应机制研究进展

自然杀伤(NK)细胞无需抗原预先致敏即可直接杀伤靶细胞,通常被视为机体免疫防御系统的第一道防线.NK细胞主要通过诱导靶细胞凋亡、释放效应细胞因子、介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)作用等途径杀伤肿瘤细胞.现综述近年来NK细胞在以上效应机制方面的研究进展.     

树突状细胞通过交互提呈IL-15预激活NK细胞

自然杀伤（NK）细胞又称大颗粒淋巴细胞，在机体的抗感染免疫以及肿瘤免疫中发挥着重要的作用。然而在生理和不同病理条件下，NK细胞活化的细胞和分子机制尚不清楚。该文作者利用树突状细胞（DCs）特异性删除小鼠模型，首次在体内证实了NK细胞同B细胞、T细胞一样，也需要归巢进入引流淋巴结；NK细胞在淋巴结中由DCs预激活后回到外周发挥效应功能。     

NKG2D介导NK 细胞对鼻咽癌细胞杀伤作用的体外研究

 目的 探讨鼻咽癌CNE2细胞表面HLA-Ⅰ类分子表型和NKG2D配体的表达情况，进一步了解其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响。方法 流式细胞仪检测NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3在K562、CNE2细胞的表达情况。PCR-SSP法分析CNE2细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型。LDH释放法测定5例健康者NK细胞在不同效靶比时对K562、CNE2细胞的杀伤活性，效靶比20：1时观察抗NKG2D配体的单抗对NK细胞杀伤K562、CNE2细胞活性的影响。结果 CNE2细胞表达MICA、MICB、ULBP2，不表达ULBP1、ULBP3。K562细胞表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3。5例健康者NK细胞抑制性KIR与CNE2细胞表面的HLA-Ⅰ类分子之间存在错配。效靶比5：1、10：1、20：1、30：1时NK细胞对K562、CNE2细胞的杀伤活性分别为（29．02±0．45）％、（10．50±2．17）％；（44．43±1．36）％、（27．68±1．47）％；（57．82±1．35）％、（36．99±3．13）％：（71．24±2．36）％、（55．00±2．20）％，在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较CNE2细胞明显增强（P=0．000）；在效靶比20：1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP1、anti—ULBP2、anti-ULBP3可明显抑制NK细胞对K562细胞的杀伤活性，与阻断前相比有显著性差异（P=0．000）；anti—MICA、anti—MICB、anti—ULBP2可明显抑制NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性，与阻断前相比有显著性差异（P〈0．01），但anti—ULBP1、anti—ULBP3不能阻断NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结论 NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性，提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤活性。     

人外周血NK细胞生物学特征的初步研究

NK细胞的纯化及体外扩增是研究NK细胞重要的方法学基础.NK细胞不需在要特异抗原的刺激下即可杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞,它的功能还受多种细胞因子的调节,其中IL-2在体外可显著促进NK细胞的杀伤功能及增殖.本实验在此基础上对NK细胞的生物学特征进行了初步研     

放射线照射后NK-92 细胞对人宫颈癌细胞体外杀伤活性的研究

 目的 研究放射线照射后NK-92细胞对人宫颈癌细胞的体外杀伤活性。方法 应用医用电子直线加速器对NK-92细胞进行照射处理(0、400cGy)后，以体外培养人宫颈癌细胞系Hela为靶细胞，以NK-92的敏感细胞株K562作为对照，应用4h^51Cr释放法检测不同效靶比情况下NK-92细胞的杀伤活性。结果 NK-92细胞0cGy照射组，效靶比较低时(1：1、5：1)对Hela细胞杀伤率为15％～33％，随效靶比升高，杀伤率随之上升，10：1时杀伤率显著上升为47％，20：1时杀伤率仅上升了3％；对于K562细胞，杀伤率为33％～69％。400cGy组照射后2d，NK-92细胞对Hela细胞不同效靶比的杀伤率与0cGy组相比稍有降低，其总体杀伤率为14％～47％，对K562细胞杀伤范围在30％～60％之间。结论 放射线照射后的NK-92细胞对人宫颈癌Hela细胞系具有一定的杀伤活性。     

HSP70-TKD诱导的NK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究

目的:探讨从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中获得足够数量和高细胞毒活性的CD3-CD56 NK细胞的方法,并观察其对肝癌细胞HepG2杀伤效应.方法:以干细胞培养基(SCGM)为基础培养基,在不同浓度的抗CD3单抗、IL-2和PHA的培养条件下,从健康人PBMC中高效扩增获得CD3-CD56 NK细胞;以不同剂量的HSP70-TKD诱导NK细胞的活性,MTT法测定HSP70-TKD诱导的NK细胞对HepG2和榄香烯处理的HepGZ细胞的杀伤活性.结果:建立了从人PBMC体外扩增CD3-CD56 NK细胞体系:以SCGM为基础培养基,在600 U/mL IL-2、500 μg/L抗CD3单抗和50 mg/L PHA联合作用下,培养14 d细胞扩增了116倍,舍有(66.97±8.76)?3-CD56 NK细胞;HSP70-TKD诱导的NK细胞对HepG2杀伤活性低.与未经TKD诱导的NK细胞之间差异无统计学意义,P=0.298;而对税香烯处理过的HepG2杀伤活性高,诱导组与未诱导组之间差异有统计学意义,P=0.008;当TKD浓度为2.0 mg/L时,杀伤活性最高为(58.8±3.4)%.结论:以干细胞生长培养基为基础培养基,在抗CD3单抗和IL-2协同刺激下体外大量扩增NK细胞,HSP70-TKD诱导的NK细胞对细胞膜HSP70阳性的肿瘤细胞杀伤活性高,而对于细胞膜HSP70低表达的肿瘤细胞杀伤活性低.     

靶向CD33 的CAR修饰的NK92 细胞对CD33+急性髓系白血病细胞的杀伤作用

[摘要] 目的：根据抗CD33-scFv 序列构建CD33-CAR 修饰的NK92 细胞,探讨其对CD33+ 急性髓系白血病（acute myeloidleukemia,AML）细胞的杀伤作用。方法：通过基因合成以及分子克隆技术获得抗CD33-CAR片段,然后将其构建到慢病毒载体上,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染NK92 细胞,用流式细胞术检测细胞转染效率并通过嘌呤霉素筛选得到稳定表达抗CD33-CAR的细胞系CD33-CAR-NK92,利用钙黄绿素释放法检测该细胞的杀伤作用,ELISA法检测细胞因子IFN-γ 分泌的变化。结果：成功构建pCDH-CD33-CAR 重组慢病毒质粒,慢病毒转导后约18.7%的NK92 细胞表达CD33-CAR（命名为CD33-CARNK92细胞）,嘌呤霉素筛选后表达CD33-CAR的NK92 细胞比例约86.3%。CD33-CAR-NK92 细胞对CD33+AML细胞MOLM-13的杀伤作用明显高于未被基因修饰的NK92 细胞（P<0.01）,而两者对CD33-肿瘤细胞JURKAT 的杀伤作用没有明显差异（P>0.05）。效靶比为2∶1 共培养6 h 后,经CD33-CAR修饰的NK92 细胞相比未被基因修饰的NK92 细胞IFN-γ 的分泌水平明显升高[ （190.97±11.52）vs（88.41±2.75）pg/ml, P<0.01]。结论：CD33-CAR-NK92 细胞能特异性识别CD33 抗原并杀伤CD33+AML细胞,其杀伤作用显著高于未被基因修饰的NK92 细胞,为进一步开展靶向CD33 的CAR-NK92 细胞治疗AML的临床转化奠定了实验基础。     

骨髓瘤RPMI 8226细胞体外逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步研究

目的:探讨骨髓瘤细胞RPMI 8266逃逸NK细胞免疫杀伤的机制。方法:流式细胞仪检测K562和8266细胞表面MICA/B、ULBP1～3和HLA-Ⅰ类分子的表达。4hLDH释放法测定效靶比20∶1时阻断前后NK细胞对2种细胞杀伤活性变化。观察效靶比20∶1时NK细胞对药物处理后RPMI 8226细胞杀伤活性变化、RPMI 8226细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表达及NK细胞对RPMI 8266细胞的克隆形成率的影响。结果:K562细胞高表达MICA/B和ULBP 1～3分子;RPMI 8266细胞表达HLA-Ⅰ类分子,2株细胞NKG2D配体表达差异有统计学意义,P<0.001。单抗分别阻断MICA/B、ULBP 1～3分子后,效靶比为20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,P值均<0.05;对RPMI 8266细胞的杀伤活性基本无变化,P值均>0.05。抗W6/32单抗封闭8266细胞表面HLA-Ⅰ类分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性无上升(P=0.721),而对RPMI 8266细胞的杀伤活性上升,P=0.000。1/2IC50的三氧化二砷处理后RPMI8226细胞ULBP...     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用及对NK细胞杀伤活性的影响

[目的]研究三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用及对自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性的影响。[方法]建立人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤模型,观察YSL对肿瘤生长的抑制作用;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测YSL对正常小鼠及人肝癌BEL-7402荷瘤鼠的NK细胞杀伤活性的影响。[结果]YSL[160μg(/kg·d)]能抑制BEL-7402的生长,肿瘤抑制率为72.23%,且能增强BEL-7402荷瘤裸鼠及正常小鼠NK细胞杀伤活性,与生理盐水组相比均具有显著性差异(P<0.05)。[结论]YSL对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤有抑制作用,并具有增强正常及荷瘤小鼠NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的作用。     

急性淋巴细胞性白血病患者骨髓血νδT细胞的动态分析

νδT淋巴细胞是一群具有特殊功能的T细胞，在机体自身稳定和免疫反应中起着极其重要的作用，业已证实，νδT细胞具有MHC非限制性细胞毒作用，能够杀伤各种肿瘤靶细胞，包括NK敏感和NK抵抗细胞，Wright等已研究证实：从B淋巴瘤患者分离得到的νδT细胞具有特异性识别患者自体肿瘤细胞表面Ig的独特型抗原和杀伤肿瘤细胞的作用。     

急性淋巴细胞白血病患者外周血中KIR2DL4的表达及其对NK细胞杀伤功能的影响

目的:探究杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(killer cell Ig-like receptor 2DL4,KIR2DL4)在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)患者外周血中的表达,及其对自然杀伤细胞(nature killer, NK)杀伤功能的影响。方法:从ALL患者及健康志愿者的外周血中分离出单个核细胞,采用实时荧光定量PCR检测单个核细胞中KIR2DL4的表达差异;从单个核细胞中分选NK细胞,通过流式细胞仪检测CD3^-CD56⁺标记的NK细胞比例,并分析NK细胞表面KIR2DL4与Molt-4细胞表面人白细胞抗原G(human leukocyte antigen G,HLA-G)的表达水平。分别以NK细胞、KIR2DL4阻断抗体作用的NK细胞、IgG1抗体作用的NK细胞作效应细胞,Molt-4细胞为靶细胞,在不同效靶比(5:1、10:1、20:1)下,利用ELISA检测细胞上清液中干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosi...     

硼替佐米联合NK细胞对骨髓瘤细胞株KM-3作用的影响

目的:探讨硼替佐米联合自然杀伤(NK)细胞杀伤及诱导多发性骨髓瘤细胞株KM-3凋亡的作用.方法:WST-1法观察加入硼替佐米后,NK细胞对KM-3细胞杀伤作用的变化;Annexin-V、PI及CD45三重免疫荧光标记,流式细胞术检测Annexin-V+/PI凋亡细胞及线粒体跨膜电位的变化.结果:效靶比为5:1、10:1和20:1的NK细胞联合5 nmol/L硼替佐米处理后12、24和48 h,均显著杀伤KM-3细胞(P=0.003),杀伤率的升高呈时间依赖性(P=0.002),且显著高于NK细胞单独处理,P<0.01.效靶比为5:1、10:1和20:1的NK细胞联合5 nmol/L硼替佐米处理,Annexin-V+/PI-细胞比例均增加(P=0.003),呈时间依赖性(P=0.002),且高于NK细胞单独处理,P<0.01.效靶比为5:1、10:1和20:1的NK细胞联合5 nmol/L硼替佐米处理后6、12和24 h,KM-3细胞线粒体跨膜电位明显降低(P=0.025),呈时间依赖性(P=0.022),且低于NK细胞单独处理,P<0.05.结论:硼替佐米联合NK细胞具有更显著地杀伤并诱导KM-3细胞凋亡的作用,提示硼替佐米与NK细胞具有协同作用.     

细胞因子疗法增强NK细胞杀伤肿瘤细胞能力

自然杀伤细胞（Naturalkillercell，NK）是免疫系统中的哨兵，可以快速响应并杀死病变细胞。NK细胞是能针对和消除表面缺乏蛋白MHCI类的细胞，然而许多肿瘤细胞缺少这种蛋白，能抵抗NK细胞的监视和杀伤。     

KIR2DS1受体对人类NK细胞杀伤白血病细胞的作用研究

目的 探讨活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）家族成员KIR2DS1在自然杀伤（NK）细胞杀伤白血病细胞中的作用.方法 采集健康人群外周血单个核细胞,采用NK细胞分选试剂盒富集NK细胞,将分选的NK细胞进行体外扩增培养,以作为效应细胞.取初治确诊的急性髓细胞白血病（AML）患者新鲜骨髓液,分离后的白血病细胞作为靶细胞.采用CCK8比色法检测NK细胞对白血病细胞的杀伤率.采用聚合酶链反应和顺序特异性引物（PCR-SSP）基因分型法分别检测NK细胞及靶细胞的KIR基因和HLA-Cw;根据KIR2DS1表达与否将NK细胞分为KIR2DS1阳性NK细胞与KIR2DS1阴性NK细胞;用抗-KIR2DS1抗体封闭NK细胞的KIR2DS1受体,用CCK8比色法检测封闭前后KIR2DS1阳性组NK细胞对靶细胞的杀伤率.根据HLA-Cw将NK细胞和靶细胞分别分为C1纯合子组（表达HLA-Cw 01、03、07、08、12、14、16）、C2纯合子组（表达HLA-Cw02、04、05、06、15、17、18）和C1/C2杂合子组（既表达C1组的等位基因又表达C2组的等位基因）.结果 经过富集后NK细胞的纯度为（91.2±5.94）％;不同效靶比下,KIR2DS1阳性NK细胞的杀伤率明显高于阴性组;当效靶比为10：1时,KIR2DS1阳性NK细胞组对白血病细胞的杀伤率（42.82±6.81）％高于KIR2DS1阴性组（28.61±5.14）％;抗-KIR2DS1封闭后NK细胞对白血病细胞杀伤作用明显减弱（t=-3.00,P＜0.05）;KIR2DS1阳性NK细胞C1纯合子组对靶细胞C2纯合子组的杀伤率（54.39±3.46）％明显高于靶细胞C1组（41.22±3.68）％（t=8.33,P＜0.05）和C1/C2组（41.32±5.09）％（t=6.37,P＜ 0.05）.结论 KIR2DS1阳性NK细胞对白血病细胞的杀伤效力高于KIR2DS1阴性NK细胞,即KIR2DS1可以有效介导NK细胞杀伤白血病细胞;HLA-C1纯合子的KIR2DS1阳性NK细胞对HLA-C2纯合子的靶细胞杀伤作用强.     

同种异体NK细胞对人多药耐药鼻咽癌细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的: 研究同种异体自然杀伤（natural killer，NK）细胞对人多药耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP裸鼠皮下移植瘤的抑制作用，探讨异体间的免疫治疗。方法：PCRSSP法分析CNE2/DDP细胞人白细胞抗原（human leucocyte antigen， HLA）基因型和健康人NK细胞表面的抑制性杀伤细胞免疫球蛋     

47例肺癌病人外周血NK细胞杀伤活性的检测

作者观察了47例原发性支气管肺癌病人NK细胞杀伤活性及其手术与免疫增强剂对NK细胞活性的影响。结果显示:肺癌病人外周血NK细胞活性明显低于健康对照(P相似文献