大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜患者浆细胞样树突状细胞功能及Toll样受体9 mRNA表达的影响

本研究探讨大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血浆细胞样树突状细胞(pDC)功能及Toll样受体9(TLR9)表达的影响。15例初诊的ITP患者给予地塞米松40 mg/d,连用4 d,采用免疫磁珠分离法体外分离15例正常对照及13例治疗有效患者治疗前后外周血中pDC;用CpG-ODN 2216刺激外周血pDC并与之共培养24 h,采用ELISA方法检测上清中IFN-α、IL-6、TNF-α的含量;用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测pDC的TLR9 mRNA表达量。结果表明,①治疗前pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平〔(960.83±164.65)pg/ml,(156.15±39.89)pg/ml,(137.31±35.44)pg/ml)〕明显高于正常对照组〔(616.67±105.98)pg/ml,(89.13±21.48)pg/ml,(88.53±25.81)pg/ml,P<0.05〕;治疗后pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平分别降至(678.46±128.88)pg/ml,(97.77±26.31)pg/ml,(103.08±26.42)pg/ml,与治疗前比较差异有统计学意(P<0.05),与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);②治疗前pDC的TLR9 mRNA的表达水平高于正常对照组(P<0.05);治疗后pDC的TLR9 mRNA的表达水平低于治疗前(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学显著性(P>0.05)。结论:pDC分泌的细胞因子及其表达的TLR9在ITP发病中起重要作用;地塞米松可能通过下调TLR9的表达,抑制pDC分泌细胞因子的功能,而对ITP起到治疗作用。     

雷公藤内酯醇对原发免疫性血小板减少症患者浆细胞样树突细胞功能及成熟的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对原发免疫性血小板减少症(ITP)患者浆细胞样树突细胞(pDC)功能及成熟的影响.方法 取22例初治ITP患者(初治组)、22例精皮质激素治疗后完全缓解(CR)ITP患者(CR组)及22名健康志愿者(正常对照组)外周静脉血,分离单个核细胞,用流式细胞术分选pDC,分别加入0、5、10、30μg/L的雷公藤内酯醇共孵育.24 h后收集上清液,用ELISA法检测IFN-α、IL-6、TNF-α水平;5d后收集细胞,用流式细胞术检测髓样树突细胞(mDC)CD11c、CD80、CD86表达,光镜下观察mDC的形态,电镜观察mDC的超微结构.结果 加入10μg/L雷公藤内酯醇后初治组IFN-α、IL-6、TNF-α水平分别为(451.32±85.77)、(105.68±23.85)、(135.78±30.62)ng/L,CR组分别为(391.71±72.49)、(84.73±17.77)、(108.16±23.21)ng/L,正常对照组分别为(335.51±67.54)、(73.62±21.82)、(95.58±32.85)ng/L,初治组及CR组高于正常对照组(P<0.05),初治组高于CR组(P<0.05),并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P<0.05);初治组及CR组mDC表型CD11c、CD80、CD86阳性率高于正常对照组(P<0.05),初治组高于CR组(P<0.05),加入雷公藤内酯醇后mDC表型阳性率呈浓度依赖性降低(P<0.05).加入雷公藤内酯醇后mDC较对照组突起变少、变短,形态上不成熟.结论 雷公藤内酯醇能够减弱ITP患者pDC的功能,并抑制其向mDC的分化和成熟.     

src抑制的蛋白激酶C底物调控内皮细胞分泌TNF-α

目的 探讨src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响.方法 体外培养Wistar大鼠PMVEC,按随机数字表法分组(n=4),10 mg/L LPS刺激1h、3h、6h、12h、24 h或0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L LPS刺激24 h;蛋白激酶C抑制剂(BIM)预处理0.5h或50 nmol/L SSeCKS-siRNA转染PMVEC 48 h后再加入10 mg/L LPS孵育24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清TNF-α量(ng/L).采用SPSS10.0软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析,以P＜ 0.05为差异具有统计学意义.结果 0.1、1、10 mg/L LPS刺激PMVEC 24 h后的,TNF-α分泌量分别为(253.70±23.55)、(327.88±37.25)、(403.20±36.22) ng/L,均高于未刺激组(82.28±22.56) ng/L(均P =0.000);10 mg/L LPS刺激PMVEC后,TNF-α分泌量于1h升高(170.11±49.22) ng/L,6h达峰值(404.82±13.78) ng/L,刺激24 h后仍维持高水平(395.67±36.23) ng/L,分别与未刺激组(84.60±23.61) ng,/L比较:P=0.001,0.000,0.000;BIM预处理PMVEC后再给予LPS刺激,TNF-α分泌量(200.44±27.39) ng/L较LPS单独刺激(402.28±31.07) ng/L显著较少(P=0.000);与LPS单独刺激比较(407.28±32.64) ng/L,SSeCKS-siRNA抑制SSeCKS表达后,LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应(195.20±13.28)ng/L也显著下降(P=0.000).结论 下调SSeCKS表达和蛋白激酶C活性可抑制LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应,从而减轻PMVEC的炎症反应.     

慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-8及TNF-α的意义

目的　探讨白介素-8(IL-8)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机理中的作用。方法　采30例COPD急性发作期及缓解期患者血清,应用放射免疫法和液相竞争法分别测血清IL-8及TNF-α水平。结果　COPD患者急性发作期IL-8及TNF-α水平分别为:(1 .9608±2.0304)ng/L、(4 .6170±2 .2745)ng/L;缓解期IL-8及TNF-α水平分别为(1 6648±1 6786)ng/L、(3 8916±2 0820)ng/L;正常对照组IL-8及TNF-α水平分别为:(0. 3738±0 .1448)ng/L,(0 .7056±0. 5223)ng/L,急性发作期和缓解期IL-8 及TNF-α水平明显高于正常对照组(P<0 01),且急性发作期IL-8 及TNF-α水平又高于缓解期(P<0. 05)。结论　IL-8、TNF-α共同参与COPD气道炎症的形成,在COPD形成过程中可能起重要作用。     

羊栖菜多糖免疫调节活性的实验研究

目的:观察羊栖菜多糖(SFPS)对离体小鼠脾细胞免疫调节活性的影响。方法:10、30、100mg/L浓度的SFPS分别作用离体培养的小鼠脾细胞24、48和72h,采用酶联免疫法测定其所分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ量。结果:SFPS可显著升高小鼠脾细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ的分泌量,这些作用与时间、浓度相关。其中,各浓度组均使IL-2的分泌量明显升高,100mg/L浓度组效应最为显著,作用24、48、72h后分别使IL-2的分泌量达到7.08、39.04、20.30pg/mL;TNF-α的分泌的最高值则是由100mg/LSFPS作用48h引起;SFPS对IFN-γ分泌量的影响具有明显的量效关系,而不同时间组的差异不显著。结论:SFPS能明显增强离体小鼠脾细胞的免疫活性物质的分泌,具有明显的免疫调节活性。     

多指标联合评估急性心肌梗死患者PCI术后病情的研究

目的 联合监测急性心肌梗死(AMI)患者血清瘦素、脂联素、IL-6、TNF-α水平变化,研究其对AMI患者病情的评估和临床意义.方法 采用酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测20例健康对照组志愿者和20例急性心肌梗死(AMI)组患者的外周血清瘦素、脂联素、IL-6、TNF-α水平及其变化.并于6h内对AMI组患者溶栓,分别于24、48 h后再次检测该组患者.结果 AMI组血清瘦素、脂联素、IL-6、TNF-α水平分别为(17.41±2.98) g/L、(16.66±1.29)mg/L、(1509.17±106.31)μg/L、(23.11 ±2.99) g/L,显著高于健康对照组(P＜0.05),并且高于AMI组PCI后24h的血清瘦素、脂联素、IL-6、TNF-α[(12.83±3.51) g/L、(11.98 ±1.35)mg/L、(1315.28±103.27) μg/L、(19.01 ±3.10) g/L]水平和48 h[(8.80 ±2.11)g/L、(8.71±1.25)mg/L、(1121.31 ±99.13) g/L、(9.33 ±2.19) g/L]水平(P＜0.05).结论 多指标联合监测对评估PCI术后AMI患者的病情变化和治疗效果有一定的参考意义.     

多发性硬化树突状细胞分泌细胞因子的检测与意义

目的:检测多发性硬化(MS)患者树突状细胞(DC)分泌的细胞因子,探讨DC及其分泌的细胞因子在MS发病机制中的作用。方法:利用MS患者外周血单核细胞培养诱导成为成熟DC,用人IL-12、IL-23、IL-27和人TNF-α的ELISA试剂盒检测DC分泌的细胞因子,并与正常对照组比较。结果:MS来源的DC分泌的IL-12、IL-23和TNF-α较对照组增多,差异有统计学意义;IL-27在两组DC分泌的量无明显差异。结论:IL-12、IL-23和TNF-α与MS的发病有关,未发现IL-27与MS发病的关系。     

急性高原缺氧大鼠脑皮质相关细胞因子变化及蕨麻的保护作用

目的 探讨模拟高原缺氧条件下大鼠脑皮质内细胞因子变化及蕨麻的保护作用.方法 选择成年健康雄性SD大鼠54只,按随机数字表法分为平原组、模拟中海拔(3000 m)组和模拟高海拔(7000 m)组,后两组再分为缺氧12h和24 h两个时间点,各时间点又分蕨麻组和对照组,每组6只.建立大鼠急性低压缺氧损伤模型;蕨麻组灌胃蕨麻提取物300 mg/kg,对照组给予生理盐水.于各时间点处死大鼠,剥离脑组织,匀浆离心后取上清,采用悬浮芯片蛋白法测定单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)、白细胞介素(IL-1β、-6、-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及血管内皮生长因子(VEGF)含量.结果 与平原组比较,模拟中、高海拔对照组各时间点MCP-1 (ng/L)、IL-1β (ng/L)、IL-6 (ng/L)、IL-10( ng/L)、TNF-α (ng/L)、IFN-γ (ng/L)及VEGF (ng/L)含量均显著升高,且上述各指标均随时间延长和海拔升高而升高,以模拟高海拔对照组24 h升高最显著(MCP-1:199.69±16.67比164.32±11.84;IL-1β:83.32±9.90比17.05±5.60;IL-6:112.15±4.55比74.50±10.00;IL-10:129.49±16.28比68.11±10.26;TNF-α:106.29±13.05比54.54±6.97;IFN-γ:105.72± 14.76比51.77±11.59;VEGF:227.95±26.84比80.28±23.76,均P＜0.01).与同海拔对照组同期比较,模拟中、高海拔蕨麻组各时间点MCP-1、IL-1β、TNF-α、IFN-γ含量均明显降低(高海拔蕨麻24h组MCP-1:176.48± 16.23比199.69±16.67;IL-1β:67.66±12.34比83.32±9.90;TNF-α:82.26±8.26比106.29±13.05;IFN-γ:83.29±9.84比105.72±14.76,均P＜0.05),IL-6、IL-10及VEGF含量均显著升高(高海拔蕨麻24 h组IL-6:122.40±6.35比112.15±4.55;IL-10:150.66±11.18比129.49±16.28;VEGF:280.98± 22.72比227.95±26.84,均P＜0.05).结论 高原急性缺氧使炎症细胞因子生成增加;蕨麻可通过降低促炎症细胞因子含量,升高抗炎症细胞因子含量来减少脑组织氧化应激损伤.     

输卵管支原体感染不孕妇女输卵管液中TNF-α、IFN-γ和IL-6的水平

【目的】研究支原体感染导致的输卵管不孕患者输卵管液中TNF-α、IFN-γ和IL-6水平。【方法】对179例不孕妇女,应用微量肉汤稀释法检测输卵管液支原体感染情况,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测TNF-α、IFN-γ和IL-6含量。【结果】179例不孕妇女中显示支原体阳性者97例,其中Uu阳性者91例,Mh阳性者23例,两种支原体均阳性者17例,未检测出支原体者82例。支原体阳性患者血清TNF-α含量为(171.1±21.4)ng/ml,阴性者血清TNF-α含量为(113.7±35.5)ng/ml;阳性患者血清IFN-γ含量为(70.4±11.2)pg/ml,阴性者血清IFN-γ含量为(38.9±12.9)pg/ml;阳性患者血清IL-6含量为(48.9±5.2)pg/ml,阴性者血清IL-6含量为(26.4±4.7)pg/ml;阳性者血清TNF-α、IFN-γ、IL-6均高于阴性者,差异有显著性(P<0.05)。且阳性组TNF-α和IL-6含量成正相关(r=0.893,P<0.05)。【结论】认为支原体感染引起的输卵管炎症导致不孕可能与TNF-α、IFN-γ和IL-6升高有关。     

婴儿巨细胞病毒性肝炎炎性细胞因子水平及其与肝功能损害的关系

目的 了解婴儿巨细胞病毒(CMV)肝炎患儿肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)/白细胞介素4(IL-4)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平比值,探讨其在炎症过程中的作用及相关关系.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α、IFN-γ/ IL-4水平,用全自动生化分析仪检测ALT和AST水平.共分析了CMV肝炎30例,正常对照组30例.结果 CMV肝炎组TNF-α、IFN-γ/IL-4、ALT、 AST 值分别为448.07±122.76 ng/L,2.99±1.35,95.24±8.52 U/L,138.59±11.57 U/L,TNF-α、ALT、AST均高于正常对照组,IFN-γ/IL-4比值低于对照组.相关分析发现,肝炎组TNF-α与ALT呈正相关(r=0.76,P＜0.01).结论 CMV肝炎患儿存在细胞因子分泌紊乱,表现在TNF-α水平增高,与肝功能损害程度密切相关;IFN-γ/ IL-4 比值变化推测存在Th1/ Th2平衡失调和Th2功能异常增强情况.     

结核性脑膜炎患者脑脊液中细胞因子水平的诊断价值

目的:探讨分泌性靶抗原-6(ESAT-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)对于早期诊断结核性脑膜炎(TBM)的临床应用价值。方法:选取48例TBM患者为研究组,29例非结核性中枢神经系统感染患者为对照组,35例普通头痛患者为正常组。采用ELISA法分别检测所有患者脑脊液中的ESAT-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平。结果:研究组的ESAT-6、TNF-α、IFN-γ水平与对照组相比增高,研究组与对照组的ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平均高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组的ESAT-6与IFN-γ水平呈正相关(r=0.96,P<0.05)。4项指标联合检测的灵敏度明显高于使用ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ单一指标,差异均具有统计学意义(χ2=10.936,18.104,12.647,13.978;P<0.05)。结论:ESAT-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10在TBM患者脑脊液中的表达水平显著升高,对早期诊断TBM具有重要的临床价值,而且4项联合检测较单一检测的诊断效果更佳。     

FLT3信号通路介导常规树突状细胞启动和调节急性肺损伤早期炎症反应的机制研究

目的 明确FLT3信号通路依赖的肺常规树突状细胞(cDCs)对急性肺损伤(ALI)早期炎症反应和肺损伤的影响及其调控机制.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只按随机数字表法分为正常对照组、ALI组、FLT3L预处理组、来他替尼预处理组和DMSO对照组,分别给予FLT3L、来他替尼预处理5d后采用LPS气道内滴入复制ALI模型,6h及24h后处死小鼠留取肺组织,采用流式细胞术检测CD11c+ CD11b+双阳性细胞比例评价肺cDCs的数量,检测肺cDCs的MHCⅡ及CD80表达比例评价肺cDCs的成熟程度;ELISA检测IL-6、TNF-α评价肺部炎症反应的强度;计算肺湿质量/体质量比(LWW/BW)评价肺水肿程度;肺组织HE染色行组织病理学检查评价肺损伤程度;比色法检测肺MPO活性评价中性粒细胞的浸润;qRT-PCR检测转录因子T-bet及GATA-3mRNA的表达比例评价辅助性T细胞Th1/Th2亚群漂移;ELISA检测IFN-γ及IL-4表达评价Th1/Th2细胞因子的平衡.结果 肺cDCs聚集及成熟程度高峰出现于ALI成模后6h(P＜0.05).FLT3L预处理显著增加肺cDCs的聚集和成熟程度(P＜0.05),上调肺部炎症反应并加重肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著上升(P＜0.05).来他替尼预处理显著抑制肺cDCs的聚集和分化成熟(P＜0.05),下调肺部炎症反应并减轻肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著下降(P＜0.05).结论 肺cDCs可通过FLT3信号通路调节中性粒细胞的浸润和Th1/Th2免疫反应的平衡,进而启动和调节ALI早期炎症反应和肺损伤.     

系统性红斑狼疮患者血清α干扰素和白细胞介素6共同作用对造血干细胞定向分化为树突状细胞的影响

背景:系统性红斑狼疮与树突状细胞的功能活化密切相关.在体内,树突状细胞来源于造血干细胞,其分化成熟的过程受多种因素的影响.系统性红斑狼疮患者血清中存在细胞因子网络失调,以往研究多关注于单一因子的参与作用.目的:课题创新性提出和观察系统性红斑狼疮患者血清α干扰素和自细胞介素6共同作用下对CD34~+造血干细胞定向分化为树突状细胞的影响.设计、时间及地点:分组对比观察,完全随机细胞学体外实验,于2006-05/2008-10在南京医科大学微生物与免疫学实验室完成.材料:外周血标本取自50例就诊于南京医科大学第一附属医院风湿免疫科的系统性红斑狼疮患者,以及30例南京医科大学的健康志愿献血者.15份脐血标本取自南京医科大学附属南京妇幼保健院健康足月顺产的新生儿,产妇及其家属均对实验知情同意.方法:无菌采集系统性红斑狼疮患者和正常对照者的外周静脉血,根据正常人血清中α干扰素、白细胞介素6的浓度,采用百分位数法求得血清α干扰素、白细胞介素6浓度的95%参考值范围,并以浓度超过此范围为异常升高.取新生儿脐血,Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,免疫磁珠法纯化CD34~+造血干细胞,并诱导其定向分化为树突状细胞.在培养过程中设立6组,分别加入:正常对照血清、α干扰素升高的系统性红斑狼疮血清、白细胞介素6升高的系统性红斑狼疮血清、α干扰素和白细胞介素6同时升高的系统性红斑狼疮血清、混合α干扰素及白细胞介素6中和抗体的系统性红斑狼疮血清、混合外源性α干扰素和白细胞介素6的正常对照者血清,各组血清体积分数均为10%,培养14 d.主要观察指标:流式细胞仪检测树突状细胞的表型,ELISA法检测树突状细胞分泌细胞因子的水平,混合淋巴细胞反应检测树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力,及其对T细胞亚群分化率影响.结果:①与正常血清对照比较,α干扰素、白细胞介素6及二者同时升高的系统性红斑狼疮血清、混合外源性α干扰素和白细胞介素6的正常对照者血清诱导培养的树突状细胞其HLA-DR,CD80,CD86的表达均明显升高(P＜0.05),分泌白细胞介素12的水平均明显降低(P＜0.05),刺激T细胞增殖能力均明显增强(P＜0.05).混合α干扰素及白细胞介素6中和抗体的系统性红斑狼疮血清诱导培养的树突状细胞上述各项指标均恢复至正常血清对照水平.②与正常血清对照比较,白细胞介素6升高的系统性红斑狼疮血清其CD3~+CD8~-IFN-γ~+、CD3~+CD8~-IFN-γ~+细胞亚群百分率明显下降(P＜0.05):α干扰素升高的系统性红斑狼疮血清、α干扰素和白细胞介素6同时升高的系统性红斑狼疮血清、混合外源性α干扰素和白细胞介素6的正常对照者血清其CD3~+CD8~-IFN-γ~+和CD3~+CD8~+IFN-γ~+细胞亚群百分率均明显升高(P＜0.05).结论:系统性红斑狼疮血清α干扰素和白细胞介素6的共同作用对CD34+造血干细胞定向分化为树突状细胞产生了异常影响,可促进树突状细胞的表型成熟和功能活化,并间接影响T细胞亚群的分化,可能参与系统性红斑狼疮的发病.     

类风湿关节炎患者外周血白细胞介素-32的表达及临床意义

目的分析类风湿关节炎(RA)患者外周血白细胞介素-32(IL-32)的表达及临床意义。方法选取122例RA患者,根据活动度积分(DAS28)将其分为高活动组45例(DAS285.1)、中低活动组42例(DAS28≥2.6~≤5.1)和缓解期组35例(DAS282.6)。选取同期50例非RA结缔组织病患者作为非RA组,选取同期50名健康志愿者作为对照组。对5组研究对象血清IL-32、TNF-α水平及外周血单核细胞(PBMC)中的IL-32、TNF-α基因相对表达量进行检测和比较。结果高活动组患者PBMC中IL-32、TNF-αmRNA相对表达量和血清IL-32、TNF-α水平最高,其次为中低活动组患者,非RA组患者的血清TNF-α水平显著高于缓解期组和对照组(P0.05)。缓解期、非RA组和对照组PBMC中IL-32、TNF-αmRNA相对表达量和血清IL-32水平的差异均无统计学意义(P0.05),缓解期组和对照组研究对象的血清TNF-α水平的差异无统计学意义(P0.05)。RA患者血清和PBMC中的IL-32、TNF-α水平与RA患者的病情指标均具有相关性(P0.05)。结论 RA患者表现为外周血IL-32水平的显著升高,其水平与其疾病严重程度和活动性程度指标具有相关性,提示了IL-32可能在RA的活动性增强过程中具有重要的作用,可作为评价RA病情的辅助指标。     

Spatiotemporal trafficking of HIV in human plasmacytoid dendritic cells defines a persistently IFN-α-producing and partially matured phenotype

Plasmacytoid DCs (pDCs) are innate immune cells that are specialized to produce IFN-α and to activate adaptive immune responses. Although IFN-α inhibits HIV-1 replication in vitro, the production of IFN-α by HIV-activated pDCs in vivo may contribute more to HIV pathogenesis than to protection. We have now shown that HIV-stimulated human pDCs allow for persistent IFN-α production upon repeated stimulation, express low levels of maturation molecules, and stimulate weak T cell responses. Persistent IFN-α production by HIV-stimulated pDCs correlated with increased levels of IRF7 and was dependent upon the autocrine IFN-α/β receptor feedback loop. Because it has been shown that early endosomal trafficking of TLR9 agonists causes strong activation of the IFN-α pathway but weak activation of the NF-κB pathway, we sought to investigate whether early endosomal trafficking of HIV, a TLR7 agonist, leads to the IFN-α-producing phenotype we observed. We demonstrated that HIV preferentially traffics to the early endosome in human pDCs and therefore skews pDCs toward a partially matured, persistently IFN-α-secreting phenotype.     

脐血树突状细胞对同源CIK细胞生物学活性及抗白血病作用影响的研究

本研究旨在探索脐血树突状细胞（DC）对同源细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞体外增殖、免疫表型、分泌细胞因子水平及其对白血病细胞细胞毒作用的影响。采集脐血单个核细胞诱导DC和CIK细胞。将DC和CIK细胞按1：5的比例混合培养,以脐血CIK细胞或外周血DC—CIK细胞为对照。用流式细胞术分析细胞表型,台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,MTT法检测效应细胞杀伤白血病细胞的活性,ELISA法测定分泌干扰素-γ（IFN—γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-12（IL—12）的水平。结果表明,脐血DC—CIK细胞增殖能力显著高于脐血CIK细胞和外周血DC-CIK细胞（P〈0．05、P〈0．05）;脐血DC、CIK细胞共培养后,CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD56^＋细胞比例较相同奈件下CIK细胞明显增多（P〈0．05）;混合培养3天,脐血DC—CIK细胞上清液中IL-12、IFN-γ 、TNF—α含量均比单纯培养CIK细胞分泌含量高（P〈0．01、P〈0．05、P〈0．05）;在2．5：1—20：1的效靶比范围内,脐血DC—CIK细胞对各亚型急性白血病细胞的杀伤率明显高于CIK细胞（p〈0．05）,但对各亚型白血病细胞杀伤活性无显著性差异,与外周血DC—CIK细胞对白血病杀伤效应相类同。结论：脐血DC可增强同源CIK细胞的增殖活性和抗白血病效应。脐血DC。CIK细胞增殖能力比外周血DC—CIK细胞强,但两者在细胞毒方面无显著性差异。因脐血较易获得,且输注不易引起严重的排斥反应,因而DC—CIK细胞在免疫治疗方面具有更广泛的临床应用前景。     

结核病合并慢性乙肝患者TNF—α、IFN-γ、IL-12变化及意义

【目的】研究结核病合并慢性乙肝患者血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）及白细胞介素-12（IL-12）水平的变化及意义。【方法】肺结核并HBsAg阳性患者21例（A组）,单纯肺结核患者30例（B组）,健康对照组30例（C组）。应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定三组血清中TNF-α、IFN-γ、IL-12浓度水平。【结果】A组和B组TNF-α水平均高于C组（P〈0．01）;但A组T组和B组之间TNF-α水平差异无显著性（P〉0．05）;B组IFN-γ、IL-12水平均低于C组（P〈0．05）;而A组IFN-γ、IL-12水平均低于B组（P〈0．05）。【结论】在结核病合并慢性乙肝患者的体内,可能存在着显著的Th1细胞免疫应答减弱。     

依达拉奉对急性脑梗死患者血清炎症因子水平的影响

目的观察依达拉奉对急性脑梗死患者血清炎症因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和超敏C反应蛋白（hs—CRP）水平的影响。方法选择急性脑梗死患者120例,随机分为依达拉奉组60例和常规治疗组60例,选择门诊健康体检者60例作为正常对照组。所有脑梗死患者均于入院时、治疗后3d、7d、14d分别抽静脉血3mI检测血清中IL-6、TNF-α、hs-CRP含量各1次,门诊健康体检者仅测定1次血清IL-6、TNF-α、hs-CRP含量。结果脑梗死患者血清IL-6、TNF-α及hs-CRP浓度水平较健康体检组明显升高（P〈0．01）。依达拉奉组和常规治疗组治疗前血清IL-6、TNF-α及hs-CRP含量测定无明显差异（P〉0．05）,治疗后依达拉奉组血清IL-6、TNF-α浓度治疗后3d、7d和14d逐步下降,较常规治疗组有显著差异（P〈0．01）。依达拉奉组治疗后7d和14d血清hs-CRP浓度含量测定明显降低（P〈0．05和P〈0．01）;常规治疗第14天血清hs-CRP浓度才明显降低（P〈0．05）;两组间治疗第7天和第14天有显著差异（P〈0．05）。依达拉奉对于中重度病情患者的血清IL-6、TNF-α、hs—CRP水平的影响比轻度病情患者影响更大。结论急性脑梗死患者血清IL-6、TNF-α和hs—CRP含量明显增加,依达拉奉能显著降低急性脑梗死患者血清炎症因子IL-6、TNF—α和hs—CRP的水平,且对病情重者影响更明显。     

高迁移率族蛋白B1对大鼠脾脏树突状细胞细胞因子表达的影响

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对树突状细胞(dendritic cells,DC)细胞因子蛋白合成和基因表达的影响.方法 分离正常Wistar大鼠脾脏DC后置于96孔培养板(1×105/孔),给予重组HMGB1刺激,研究HMGB1刺激与TNF-α,IL-12蛋白合成和基因表达的时间-效应关系,24孔细胞随机分为6组:正常对照24 h组(4孔/组)、正常对照48 h组(4孔/组)、正常对照72 h组(4孔/组)、HMGB1 24 h组(4孔/组)、HMGB1 48 h组(4孔/组)和HMGB1 72 h组(4孔/组),后3组分别以1 μg/mLHMGB1 刺激.刺激相应时间检测TNF-α,IL-12 mRNA的表达和蛋白水平.研究HMGB1刺激与TNF-α,IL-12蛋白合成和基因表达的剂量-效应关系,16孔细胞随机分为4组:正常对照组(4孔/组)、0.1μg/mL组(4孔/组)、1 μg/mL组(4孔/组)和10 μg/mL组(4孔/组),分别以相应剂量HMGB1刺激.刺激后48 h后检测TNF-α、IL-12 mRNA的表达和蛋白水平.应用Promega公司mRNA提取试剂盒裂解收集的DC,提取细胞mRNA.采用SYBR Green real-time(实时荧光定量)PCR技术检测TNF-α mRNA,IL-12mRNA表达水平.以三磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)作为内参对照.扩增产物经Fast 7500 real-time PCR仪处理,作相对定量(RQ)分析.以ELISA试剂盒检测各组上清中IL-12,TNF-α蛋白水平.数据进行单因素方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 1 μg/mL HMGB1 刺激后,脾脏DC IL-12,TNF-α蛋白合成和基因表达均分别于24～72 h明显上调(P<0.05或P<0.01),其中以作用48 h后其表达上调尤为显著(P<0.01);0.1/.μg/mL,1 tcVmL,10μg/mL HMGB1刺激48 h均可诱导DC IL-12、TNF-α蛋白合成和基因表达增强(P<0.01),其中HMGB1浓度在1 μg/mL时,DC IL-12和TNF-α蛋白合成和基因表达表达最明显(P<0.01).结论 HMGB1诱导DC成熟分化过程中能促进DC合成、释放IL-12和TNF-α,从而发挥其免疫调节作用.