BRCA1基因甲基化及甲硫氨酸合成酶与乳腺癌发病的关系

背景与目的:启动子异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,肿瘤组织中存在的DNA甲基化异常可以概括为广泛低甲基化伴局部高甲基化.甲硫氨酸合成酶(methionine synthase,MS)是参与甲基供体生成的关键酶,为DNA的甲基化提供甲基.本研究探讨抑癌基因BRCA1 mRNA在乳腺癌组织中的表达及启动子区甲基化状态,及MS基因mRNA表达与BRCA1基因甲基化的关系.方法:应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylationspecific PCR,MSP)技术检测乳腺癌组织、相应癌旁组织(距癌>3 cm)和乳腺良性病变组织中BRCA1 mRNA的表达及其启动子甲基化状态,并检测MS mRNA的表达水平.结果:乳腺癌组织、癌旁组织及良性病变组织BRCA1mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织中BRCA1基因启动子区甲基化检出率明显高于癌旁组织和良性病变组织(χ2=7.631,P<0.05),BRCA1基因启动子区甲基化与散发性乳腺癌组织学分级、雌激素受体(estrogen receptor,ER)相关(P<0.05).乳腺癌组织MS基因表达量明显低于乳腺良性病变及乳腺癌旁组织(P<0.05).MS mRNA的表达与BRCA1基因甲基化的发生有相关性(r=0.419,P<0.05).结论:BRCA1甲基化能够增加乳腺癌的患病风险,MS基因可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达.     

散发性乳腺癌中MTA1表达与ERα甲基化关系的研究

目的:通过甲基化特异性PCR和免疫组化研究女性散发性乳腺癌中ERα基因启动子区甲基化和MTA1蛋白表达的相关性。方法:甲基化PCR研究102例散发性乳腺癌ERα启动子甲基化情况,免疫组化研究其MTA1蛋白表达情况。结果:乳腺癌组织中ERα启动子甲基化率为37.3%,乳腺癌组织中MTA1表达率为29.4%,高于其在癌旁正常乳腺组织中的表达(P<0.05),MTA1表达和ERα启动子甲基化均与乳腺肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05),且乳腺癌中ERα启动子甲基化与MTA1阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论:女性散发性乳腺癌中ERα基因启动子甲基化与MTA1表达升高密切相关,其在乳腺癌发展过程中可能起重要作用。     

散发性乳腺癌癌变过程14-3-3σ异常甲基化与其转录水平的关系

背景与目的：抑癌基因启动子异常甲基化是肿瘤发生的重要机理之一，本研究探讨散发性乳腺癌癌变过程14-3—3σ基因启动子异常甲基化状况及其与转录水平的关系。方法：用甲基化特异PCR方法对散发性乳腺癌患者癌组织及正常组织进行14—3-3σ异常甲基化检测；用SYBR green Ⅰ实时定量PCR检测14-3—3σ mRNA的转录表达。结果：68例散发性乳腺癌组织中，14—3—3σ基因启动子异常甲基化率为90％（61／68），部分不典型增生病例检出异常甲基化15％（2／13），而正常组织未检出甲基化．只检出未甲基化的14-3—3σ。14—3-3σ基因启动子异常甲基化与散发性乳腺癌组织分型、分级和淋巴结转移相关（P〈0．05），而与年龄无相关性（P〉0．05）。14—3-3σ甲基化与其转录水平呈负相关性（P〈0．05）。结论：14—3-3σ基因启动子异常甲基化的检测在散发性乳腺癌癌变过程的组织分型、分级和淋巴结转移等方面有一定的应用价值。14-3—3σ基因启动子异常甲基化是其转录下调乃至缺失的重要原因。     

散发性乳腺癌中 DNMT3a、3b 表达及其与 BRCA1基因启动子甲基化和蛋白表达的相关性

目的:探讨DNMT3a、3b蛋白表达与散发性乳腺癌BRCA1基因启动子甲基化状态及蛋白表达的相关性。方法:收集乳腺肿瘤组织及相关临床资料。采用免疫组化法检测200例散发性乳腺癌与25例乳腺纤维腺瘤组织中DNMT3a、3b蛋白的表达情况。甲基化特异性PCR检测108例散发性乳腺癌中BRCA1基因启动子甲基化状态。结果:与乳腺纤维腺瘤相比,乳腺癌组织中DNMT3a表达水平显著增高(P=0.037),DNMT3b表达水平增加不显著(P=0.478)。乳腺癌中BRCA1基因启动子存在甲基化。DNMT3a、3b过表达与乳腺癌病程晚期(TNMⅢ-Ⅳ期)显著相关(P=0.064,P=0.007);DNMT3a与BRCA1基因甲基化正相关(r=0.222,P=0.021),与BRCA1蛋白负相关(r=-0.172,P=0.022)。BRCA1蛋白表达与乳腺癌患者OS和DFS显著相关(P=0.025,P=0.027),DNMT3a表达与散发性乳腺癌OS和DFS存在一定的相关性(P=0.052,P=0.091)。结论:DNMT3a、3b高表达与乳腺癌侵袭转移、病程进展、预后相关。DNMT3a可能参与催化BRCA1基因启动子甲基化导致BRCA1蛋白表达下调的过程。抑制DNMT3a、3b蛋白可能有利于散发性乳腺癌的预防和治疗。     

RASSF1A基因启动子外周血和组织甲基化在乳腺癌中的意义

目的通过对乳腺癌、癌旁组织及同一患者对应的术前外周血中RASSF1A基因甲基化的检测,加深对乳腺癌发病分子机制的了解并为乳腺癌早期诊断和预后判断提供候选指标。方法采用甲基化特异性PCR方法,分别检测156例乳腺癌患者血浆、肿瘤组织及癌旁正常组织和39例乳腺良性病变血浆及其正常组织中RASSF1A基因启动子甲基化状况。结果早期乳腺癌组织RASSF1A基因启动子甲基化发生率为62.2%(23/37),同一患者外周血甲基化发生率为56.7%(21/37),Kappa值为0.6553(P<0.001),40例血浆RASSF1A甲基化的患者中,37例发生淋巴结转移92.5%(37/40),3例未发生淋巴结转移7.5%(3/40),差异有显著性(P=0.0003);乳腺癌组织和外周血中的RASSF1A甲基化水平与乳腺癌的年龄、家族史、分型、分期、ER、PR、CerbB-2无关;晚期癌复发的86例中,其中癌组织甲基化病例的复发率为25.5%(13/51),癌旁组织甲基化的复发率为75.7%(53/70),两组差异有显著性(P<0.0001)。结论乳腺癌血浆RASSF1A甲基化与组织中的变化较为一致,可作为早期病例筛查和判断淋巴结转移的候选指标之一;晚期乳腺癌癌旁RASSF1A甲基化可能参与肿瘤复发,可作为预测晚期病例预后的候选指标之一。     

乳腺癌患者血浆循环DNA中Sox17基因甲基化检测的临床意义

背景与目的：在乳腺癌发生、发展过程中,甲基化异常是导致抑癌基因失活的重要机制,是一种可用于肿瘤诊断及预后判断、有价值的生物标志物。本研究旨在通过检测乳腺癌组织及其相应的血浆循环DNA中Sox17基因的甲基化状况,探讨其在乳腺癌早期诊断和预后判断方面的应用价值。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific-PCR,MSP)法,对86例乳腺癌组织、36例乳腺良性肿瘤的癌旁正常组织及其配对的血浆循环DNA中Sox17基因启动子甲基化进行检测,并结合乳腺癌的主要临床病理特性进行分析。结果：86例乳腺癌组织中Sox17基因启动子的甲基化率为77.9%(67/86),与其相应血浆循环DNA中Sox17基因启动子的甲基化率为61.6%(53/86),36例癌旁正常乳腺组织及血浆中均未检测到Sox17基因异常甲基化。患者血浆循环DNA中Sox17基因启动子的甲基化与肿瘤组织中该基因的甲基化显著相关(r=0.502,P=0.000)。在乳腺癌组织标本中Sox17基因甲基化率与患者肿瘤分期(χ2=6.18,P=0.041)、淋巴结转移(χ2=13.54,P=0.001)显著相关,在血浆标本中,Sox17基因甲基化率与患者肿瘤分期(χ2=27.06,P=0.000)、肿瘤大小(χ2=9.65,P=0.007)及淋巴结转移(χ2=20.80,P=0.000)显著相关,与患者年龄、组织学分级及ER、PR、HER-2/neu等指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论：Sox17基因启动子甲基化在乳腺癌的发生、发展中起着重要作用,可能与乳腺癌的预后相关。血浆中Sox17基因甲基化,是一个有潜在应用价值的生物标志物。     

BRCAL及p16基因甲基化在散发性乳腺癌诊断中的应用价值

背景与目的:已有研究表明DNA甲基化具有作为肿瘤标志的潜能.本研究旨在探讨血浆BRCAI及p16基因甲基化在乳腺癌特异诊断中的价值.方法:用甲基化特异PCR(MSP)法检测散发性乳腺癌患者癌组织及相应血浆标本中BRCAI和p16基因异常甲基化情况,同时测定CAL5-3水平,并进行统计学分析.结果:乳腺癌组织中BRCAL和p16基因甲基化率分别为34.9%(22/63) 28.6%(18/63),BRCAL和p16至少一个基因(BRCAL和/或p16)甲基化率60.3%(38/63);相应血清中BRCAL和p16甲基化率依次为31.7%(20/63) 25.4%(16/63)、BRCAI和/或p16基因甲基化率为54.0%(34/63).BRCAI和/或p16基因甲基化与肿瘤组织类型、淋巴结转移及患者居住地明显相关(P<0.O1). CAL5-3单指标检测作为乳腺癌诊断的灵敏度47.6%(30/63),特异度89.7%(26/29):血浆BRCAL和/或p16甲基化检测乳腺癌的灵敏度为54.0%(34/63).特异度为93.1%(27/29).CAL5-3与BRCAL和/或p16甲基化联合检测的灵敏度可提高到84.1%,特异度也在可接受的高度93.1%(27/29).单因素分析发现BRCAL和/或p16甲基化、组织分型和患者的居住地与乳腺癌的复发相关(P<0.05,风险指数分别为14.0、6.7和5.14),而患者绝经与否、肿瘤分级和CAL5-3水平与乳腺癌复发无关(P>0.05).多因素分析对基因甲基化、肿瘤组织分型和居住地分析提示,除患者居住地外,BRCAL和/或p16甲基化及组织分型与肿瘤的复发密切相关(P相似文献   

散发性乳腺癌组织中BRCA1基因启动子甲基化与蛋白表达的相关性

目的：探讨BRCA1基因启动子甲基化对BRCA1蛋白表达的影响,及与散发性乳腺癌发病之间的关系。方法：甲基化特异性PCR（MSP）法检测51例散发性乳腺浸润导管癌和10例乳腺良性组织的BRCA1基因启动子甲基化状态,SP法检测BRCA1蛋白表达水平。结果：10例乳腺良性组织中均未检测到BRCA1启动子的异常甲基化,BRCA1蛋白在细胞核均阳性表达,其中70％（7／10）为强阳性表达。在51例散发性乳腺浸润性导管癌组织中检测到7例（13．73％）BRCAl启动子发生异常甲基化,其余44例（86．27％）未检测到BRCA1启动子甲基化。7例BRCA1启动子甲基化的组织均未见BRCA1蛋白细胞核阳性表达（0／7）,仅有1例BRCA1蛋白细胞质表达;44例未检测到BRCA1启动子甲基化的浸润性导管癌中,30例（68．18％）BRCA1蛋白在细胞核阳性表达,14例（31．82％）BRCA1蛋白在细胞核阴性表达。BRCA1启动子甲基化与BRCA1蛋白核低表达密切相关,X^2=11．9591,P=0．0005;BRCA1蛋白的表达在乳腺良性组织与癌组织之间差异有统计学意义,X^2=4．5879,P=0．032。结论：乳腺癌易感基因BRCA1启动子甲基化可抑制BRCA1蛋白表达,并影响其参与散发性乳腺癌的发生发展过程。     

乳腺癌组织中Maspin蛋白表达与maspin基因启动子甲基化关系的研究

背量与目的:探讨乳腺癌与maspin基因失活之间的关系.材料与方法:采用免疫组织化学方法检测30例乳腺癌患者癌组织、癌近旁组织和癌远旁组织中Maspin蛋白的表达情况,用亚硫酸氢钠测序法检测乳腺癌组织maspin启动子CpG岛的甲基化情况.结果:乳腺癌组织中的Maspin蛋白表达明显低于癌近旁组织(P<0.05)和癌远旁组织(P<0.01),乳腺癌组织maspin基因启动子CpG岛甲基化率为98.72%.结论:乳腺癌的发生与nmspin基因失活关系密切,启动子异常甲基化可能是maspin基因在乳腺癌中失活的重要途径.     

乳腺癌Runx3基因启动子甲基化状态及其与病理特征的关系

目的探讨乳腺癌组织中Runx3基因启动子甲基化状态及其与乳腺癌临床病理特征之间的关系。方法 2007年2月至2009年4月收集经病理确诊的56例乳腺癌患者癌组织及相应的癌旁组织。采用甲基化特异聚合酶链反应检测Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化状态,并检测其对Runx3基因表达的影响和分析其与乳腺癌临床病理特征之间的关系。统计学分析采用χ2检验和Pearson相关分析法。结果乳腺癌组织中Runx3基因启动子区CpG岛甲基化率(55.4%)显著高于癌旁组织中的甲基化率(10.7%),二者之间差异有统计学意义(χ2=25.225,P=0.000)。Runx3基因的异常甲基化和乳腺癌患者的临床分期及淋巴结转移有关(P=0.018,P=0.010),但与患者的年龄、肿瘤直径大小及组织学类型无关(P0.050)。Runx3mRNA表达与Runx3启动子甲基化呈弱相关(r=0.343,P=0.010)。结论 Runx3基因启动子甲基化状态导致Runx3基因mRNA表达降低或缺失。Runx3基因启动子区甲基化可能是导致Runx3基因在乳腺癌中失活的分子机制之一。     

BRCA1 promoter region hypermethylation in ovarian carcinoma: a population-based study

There is a clear association between germ-line BRCA1 mutations and inherited ovarian cancer; however, the association between BRCA1 mutations and sporadic ovarian cancer remains ambiguous. The frequency of BRCA1 promoter hypermethylation as an epigenetic means of BRCA1 inactivation was determined for a large, population-based cohort of ovarian cancer patients. BRCA1 promoter hypermethylation was determined by methylation-specific restriction digestion of tumor DNA, followed by Southern blot analysis and confirmed by methylation-specific PCR. BRCA1 promoter hypermethylation was observed in 12 of 98 ovarian tumors. BRCA1 methylation status of the primary tumor was conserved in six recurrent tumors after interim chemotherapy. None of the 12 tumors with BRCA1 promoter hypermethylation demonstrated BRCA1 protein expression by immunohistochemistry. BRCA1 methylation was only seen in ovarian cancer patients without a family history suggestive of a breast/ ovarian cancer syndrome. Therefore, the 12 BRCA1 methylated tumors represented 15% (12 of 81) of the sporadic cancers analyzed in this study. Although the clinical significance of BRCA1 promoter hypermethylation is yet to be determined, promoter hypermethylation may be an alternative to mutation in causing the inactivation of the BRCA1 tumor suppressor gene in sporadic ovarian cancer.     

Nonrandom distribution of aberrant promoter methylation of cancer-related genes in sporadic breast tumors.

PURPOSE: In an effort to additionally determine the global patterns of CpG island hypermethylation in sporadic breast cancer, we searched for aberrant promoter methylation at 10 gene loci in 54 primary breast cancer and 10 breast benign lesions. EXPERIMENTAL DESIGN: Genomic DNA sodium bisulfate converted from benign and malignant tissues was used as template in methyl-specific PCR for BRCA1, p16, ESR1, GSTP1, TRbeta1, RARbeta2, HIC1, APC, CCND2, and CDH1 genes. RESULTS: The majority of the breast cancer (85%) showed aberrant methylation in at least 1 of the loci tested with half of them displaying 3 or more methylated genes. The highest frequency of aberrant promoter methylation was found for HIC1 (48%) followed by ESR1 (46%), and CDH1 (39%). Similar methylation frequencies were detected for breast benign lesions with the exception of the CDH1 gene (P = 0.02). The analysis of methylation distribution indicates a statistically significant association between methylation of the ESR1 promoter, and methylation at CDH1, TRbeta1, GSTP1, and CCND2 loci (P < 0.03). Methylated status of the BRCA1 promoter was inversely correlated with methylation at the RARbeta2 locus (P < 0.03). CONCLUSIONS: Our results suggest a nonrandom distribution for promoter hypermethylation in sporadic breast cancer, with tumor subsets characterized by aberrant methylation of specific cancer-related genes. These breast cancer subgroups may represent separate biological entities with potential differences in sensitivity to therapy, occurrence of metastasis, and overall prognosis.     

散发性乳腺浸润性导管癌中BRCA1 表达及临床意义*

目的:研究散发性乳腺浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma,IDC）（breastcancer 1 BRCA1）基因的表达及其与其临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组化SP三步法检测67例乳腺浸润性导管癌,53例乳腺腺病患者的石蜡标本BRCA1 的表达,从病理科的档案提取患者的年龄,肿物大小,淋巴结转移情况,ER,PR,Her-2 表达结果,分析BRCA1 的表达和患者的年龄,肿物大小,淋巴结转移情况及ER,PR,Her-2 表达的关系。结果:BRCA1蛋白在IDC 组织表达率56.7%（38/67）,癌旁组织表达率80.0%（36/45）,乳腺腺病组织表达率92.5%（49/53）。 阳性细胞定位除细胞核外,也见于胞浆。IDC 癌组织与癌旁组织、乳腺腺病组织比较,BRCA1 阳性表达率均下降,均有显著性差异（P<0.05）。 BRCA1 的表达与淋巴结转移呈负相关（r=-0.137,P<0.05）,与ER、PR、Her-2 的表达均呈负相关（r 值分别为-0.439,-0.250,-0.363,P<0.05）,与年龄、肿物大小无明显相关性（P>0.05）。 结论:BRCA1 蛋白可作为估计乳腺癌生物学行为和预后的潜在指标。      

宫颈癌中p16基因启动子异常甲基化的检测

目的:探讨宫颈癌组织及外周血浆中p16基因启动子异常甲基化的状况及其在宫颈癌诊断中的价值.方法:用甲基化特异性PCR技术对宫颈癌组织,正常宫颈组织及相对应血浆中p16基因进行甲基化的检测.结果:45例宫颈癌组织中p16基因异常甲基化率为33.3％(15/45),相对应血浆中p16基因甲基化的检出率为20％(9/45),而正常对照组织未检出甲基化.血浆中甲基化的改变与宫颈癌组织甲基化状态显著相关(P＜0.05).p16基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间无统计学相关性(P＞0.05).结论:p16基因CpG岛甲基化是宫颈癌发生的高频事件,其甲基化检测在宫颈癌早期诊断中有一定的应用价值.     

从表观遗传学角度探讨RAR-β2 基因在乳腺癌发生中的作用*

目的:探讨视黄酸受体β 2（RAR-β 2）基因在乳腺癌、乳腺癌前病变组织中的表达改变,分析其表达情况与基因启动子甲基化状态的关系。方法:采用半定量RT-PCR 和甲基化特异PCR（MSP）方法检测120 例乳腺肿瘤组织中RAR-β 2 基因mRNA 表达情况及其启动子甲基化状态。去甲基化药物5- 氮-2'- 脱氧胞苷（5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC）处理乳腺癌细胞系MCF-7和T-47D,分别检测RAR-β 2 mRNA 表达改变和甲基化状况。结果:在mRNA 水平上,RAR-β 2 基因在乳腺癌及癌前病变组织中阳性表达率较正常乳腺及腺纤维瘤组织显著降低（P<0.05）。 MSP 结果显示,20例正常乳腺组织均未发现RAR-β 2 基因启动子的甲基化;60例乳腺癌组织中,27例（45%）检测到RAR-β 2 基因启动子的甲基化;40例乳腺癌前病变组织中,14例（35%）检测到RAR-β 2 基因启动子的甲基化;20例腺纤维瘤组织中,2 例检测到RAR-β 2 基因启动子的甲基化。乳腺癌及癌前病变组织中RAR-β 2 基因甲基化发生率均明显高于正常组织（P<0.05）,乳腺癌组织甲基化发生率与癌前病变组织无显著性差异（χ2=0.99,P>0.05）。 RAR-β 2 基因表达和甲基化水平之间存在负相关（P<0.05）。 5-aza-dC 处理后,MCF-7 及T-47D 细胞系均出现RAR-β 2 基因再表达,MSP 法检测证实基因发生了去甲基化。结论:DNA甲基化是乳腺癌中 RAR-β 2 基因表达调控的一种重要机制,RAR-β 2启动子甲基化引起的基因表达下调可能与乳腺癌的发生相关。      

Promoter Hypermethylation and Expression Changes of BRCA1 Gene in a Cohort of Sporadic Breast Cancer Cases among Pakistani Population

Objective: The purpose of our study was to determine the frequency of BRCA1 promoter hypermethylation and its association with expression changes of BRCA1 and main morphological features in sporadic breast cancer. Methods: A retrospective review of cases was performed to select those with specific morphological features suggestive of breast cancer. BRCA1 promoter hypermethylation and changes in protein expression were evaluated in 30 cancerous and 30 non-cancerous tissue samples. A tissue microarray containing samples from normal and tumor tissue was prepared and stained for BRCA1 protein expression using a commercially available monoclonal antibody against BRCA1 (Ab-1) clone MS110 (mAb). DNA was extracted using modified protocol of Qiagen minikit. DNA was modified using a Bisulfite conversion kit and BRCA1 hypermethylation was detected using a methylation specific PCR. Results: Promoter hypermethylation was negative in 30 non-cancerous samples with retained BRCA1 protein expression. Methylation was positive in 82.6% (n=19/23) of the sporadic cancer samples that had loss of BRCA1 expression and 50% (n=2/4) of the samples with equivocal protein expression. Methylation was negative in all the sporadic breast cancer samples (n=3/3) with retained protein expression. Chi-square analysis showed significant association of BRCA1 promoter methylation with decreased protein expression (P=0.016) and co-existence of loss of BRCA1 and Her2neu at chromosome 17 (P=0.026) respectively. There was no significant association of BRCA1 methylation with morphological features excluding necrosis (P=0.035). Promoter hypermethylation was found to be most common (68.75%) among Triple Negative Breast Cancer (TNBC) females less than 45 years old. Conclusion: Our study suggests that BRCA1 promoter hypermethylation has significant contribution in sporadic breast carcinogenesis. This was our preliminary study in Pakistan. Further studies aimed to determine the in-depth mechanisms of BRCA1 epigenetics in TNBC. BRCAness enriched phenotype in TNBC might be used as a biomarker for the exploitation of therapeutic and clinical implications.