灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的 探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(CDk4)表达的影响.方法 给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况.结果 在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异.在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的.结论 灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形.     

灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生

目的 探讨灵芝孢子能否促进受维甲酸诱导,而停滞在G0/G1期的胚胎神经管神经上皮细胞重新进入细胞周期循环,继续增殖和分化,减少神经管畸形的发生.方法 于实验对照组和灵芝孢子组小鼠孕期胚胎E17.75d时一次性胃饲全反式维甲酸,造成这两组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出两组孕鼠的胚胎,分别计数胚胎的神经管畸形发生率.应用免疫荧光组织化学染色和流式细胞仪检测胚胎神经管神经上皮的巢蛋白(nestin)表达情况.应用DNA定量荧光染色和RT-PCR技术检测胚胎神经管依赖细胞周期蛋白激酶2(Cdk2) mRNA和Cdk4 mRNA的转录.结果 灵芝孢子组孕鼠胚胎的神经管畸形发生率显著低于实验对照组.神经管神经上皮细胞表达nestin的百分率也明显大于实验对照组.实验对照组孕鼠胚胎的神经管细胞在G0/G1期的比例则显著高于灵芝孢子组,但是实验对照组神经管细胞S期的比例低,低于灵芝孢子组形态正常的胚胎神经管细胞.RT-PCR检测发现,灵芝孢子组孕鼠胚胎神经管细胞能够正常转录Cdk4 mRNA,而实验对照组则低转录Cdk4 mRNA.结论 灵芝孢子能够减少维甲酸诱导的妊娠小鼠孕期E10.5d胚胎神经管畸形的发生.     

Dishevelled2 和Vangl2表达与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形的相关性

目的 探讨Dishevelled2和Vangl 2蛋白与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形发生的关系。 方法 50只昆明孕小鼠随机分为对照组和实验组。孕775d时,实验组一次性胃饲30mg/kg致畸量维甲酸（RA）,对照组胃饲等量溶剂,服药后4h、18h、42h、66h及90h分别取胚胎,常规石蜡切片,采用原位杂交和免疫组织化学技术,分别检测胚胎神经管组织中Dishevelled2蛋白和Vangl2 mRNA及蛋白的表达水平变化。 结果 两种蛋白均存在于对照组及实验组不同发育阶段的小鼠神经管上皮,且两者的表达变化趋势有所不同。与对照组相比,实验组Dishevelled2蛋白在RA处理18h、42h时表达水平明显降低(P≤0.05),66h时表达升高(P≤0.05),90h时两组表达水平无明显差异;Vangl2 mRNA在灌服RA 4h、18h时表达水平明显低于对照组(P≤0.05),42h时两组表达水平无明显差异,66h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。Vangl2蛋白在RA处理18h、42h时表达显著降低(P≤0.05),66h时两组表达水平无明显差异,90h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。 结论 过量RA可能通过调节Dishevelled2和Vangl2表达干扰正常胚胎神经管的闭合过程。     

维甲酸诱导的小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因的表达情况分析

 摘要: 目的: 研究在全反式维甲酸诱导小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因（ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5）的表达变化。方法: 取8只E8.5的C57/BL6孕鼠随机分为两组：对照组（4只），模型组（4只）。对照组腹腔注射橄榄油，模型组腹腔注射全反式维甲酸；E13.5取胚胎。采用Real-time PCR检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5的mRNA表达；采用Western Blotting技术检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5的蛋白表达情况。结果：全反式维甲酸可诱导小鼠出现典型神经管畸形；与对照组相比，全反式维甲酸处理组的致畸胚胎脑和脊髓中,ASH2L HDAC4, NSPC1和DOK5的mRNA表达有所下降（P<0.05）；同时这些基因的蛋白水平也显著下降 (P<0.05)。结论：ASH2L,HDAC4,NSPC1和DOK5可能是抑制全反式维甲酸致神经管畸形的潜在基因。     

尼古丁影响鼠胚神经管Nestin和S-100β表达

目的 探讨生殖致畸期宫内暴露尼古丁是否影响鼠胚神经管nestin和S—100g表达。方法 建立妊娠期宫内暴露尼古丁的大鼠模型,免疫组织化学法观察孕13d神经管顶板基板及16d鼠胚中缝组织分化程度的改变。结果 尼古丁组孕13d大鼠胚胎菱脑顶板未完全闭合,部分区域无神经上皮覆盖,nestin阳性神经上皮细胞数量明显比正常对照组少（P〈0．05）,排列紊乱;孕16d鼠胚中缝处尼古丁组S-100β表达较对照组为弱（P〈0．05）;神经上皮细胞排列不规则,核仁不清晰,胞质内可见空泡,细胞间隙增宽。结论生殖致畸期内暴露尼古丁影响神经管菱脑区顶板、基板神经组织正常发育,延迟神经管闭合;延迟孕16d鼠胚中缝处神经组织的完全闭合。     

Nestin在高温致畸神经管的表达及多种维生素和微量元素对神经管畸形的保护作用

本研究旨在探讨高温致神经管畸形(NTD)中巢蛋白(nestin)的表达规律及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。孕鼠随机分为实验组和对照组。实验组又进一步分为3组,A组:孕前第8d开始灌服多种维生素和微量元素;B组:孕后第1d开始灌服;C组:不灌服。孕鼠分别于孕第8d高温处理,对照组不灌服多种维生素和微量元素,也不进行高温处理。对以上各组胎鼠进行形态学观察,计算神经管畸形发生率;利用免疫荧光染色观察nestin在胚胎不同发育时期的神经上皮细胞中的表达规律。结果显示,在实验组中,C组神经管畸形发生率最高,为77.5%;各组鼠胚神经上皮细胞胞质中nestin呈阳性染色,实验C组的染色明显弱于其它组;不同发育阶段各组染色强度不同。结果提示,nestin低表达是神经管畸形发生的重要因素,多种维生素和微量元素对高温致神经管畸形有保护作用。     

神经细胞黏附分子1和骨调蛋白在神经管畸形中的变化

目的初步探究神经细胞黏附分子1和骨调蛋白在神经管畸形中的变化。方法20只健康成年SD孕大鼠随机分为正常对照组和神经管畸形实验组,每组10只。通过胃饲维甲酸建立胚胎大鼠神经管畸形模型,检查了神经管畸形鼠体重的变化;用HE染色观察神经管畸形鼠神经管结构的变化;通过Western blot分析神经管畸形鼠组织中神经细胞黏附分子1和骨调蛋白的变化。结果神经管畸形鼠形态偏小,体质量为(0.34±0.45)g,明显低于正常对照组(0.53±056)g。胚胎鼠在第9天神经管处于未闭合状态,在第11天已完全闭合。胚胎第9天和11天神经管畸形大鼠的神经细胞黏附分子1比正常组表达均明显增加(P0.01)。骨调蛋白在胚胎第9 d神经管畸形大鼠中的表达比正常明显增高(P0.01),但在胚胎第11天的表达与正常相比没有差异(P0.05)。结论神经细胞黏附分子1和骨调蛋白的变化可能与神经管畸形形成有密切关系。     

维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织中Caspase-3表达情况

目的　本文旨在探讨维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织Caspase-3表达情况。 方法　选取孕10 d Wistar大鼠,实验组用溶有维甲酸（40mg/ml）的橄榄油,以135 mg/kg经胃管注入给药制作脊柱裂畸形大鼠模型;对照组选取孕10 d Wistar大鼠给等量橄榄油。将实验组及对照组按照孕12、15、17和20 d分为4组。应用免疫组织化学方法比较分析Caspase-3在对照组、畸形组胎鼠脊髓组织细胞中的分布和表达情况。 结果　脊柱裂大鼠脊髓神经组织中Caspase-3在15 d开始增多,一直持续到20 d胚胎大鼠。其增高情况明显高于同一时间点对照组大鼠。胚胎15、17和20 d显性脊柱裂畸形鼠脊髓组织Caspase-3阳性细胞数多于对照组,荧光强度高于对照组。 结论　维甲酸诱导的脊柱裂胎鼠Caspase-3表达明显高于正常发育胎鼠。     

HMGB1在高温致金黄地鼠神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

为了探讨高温致神经管畸形(NTDs)作用的分子机制,为预防人类NTDs的发生提供理论依据,本研究在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,研究HMGB1在高温致金黄地鼠NTDs神经上皮细胞中的表达变化。将孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于水浴处理后8、16、24、40、64 h(相当于胚龄第8、8.5、9、9.5、10.5 d)处死孕鼠,剖腹取鼠胚,制备石蜡切片,应用免疫荧光染色技术检测NTDs发生过程中HMGB1在神经上皮细胞中的表达变化。结果显示:对照组和模型组孕鼠在水浴处理后8、16、24h,HMGB1免疫阳性产物分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞浆中;水浴后40、64 h,HMGB1表达部位出现了由胞浆向胞核的转移;高温处理后,HMGB1在实验组各期胚胎神经上皮细胞内的表达均比对照组减弱。上述结果提示,HMGB1的表达变化与神经管发育密切相关,其表达降低是高温致神经管畸形发生的重要途径之一。     

腭裂小鼠牙胚发育中β-连环蛋白的表达

背景：牙齿发育生物学中信号传导是热点问题,β-连环蛋白是Wnt信号传导通路中的关键效应因子,其在发育的牙胚中有普遍表达,并且在内釉上皮、釉结、星网状层、中间层的表达有时空变化。 目的：通过苏木精-伊红染色和免疫组化技术,观察牙胚在维甲酸诱导腭裂发生中的形态学变化及β-连环蛋白的表达变化。 方法：选取C57BL/6J近交系小鼠,按雌雄比2∶1于晚8时合笼,次日8时检查雌鼠,发现阴栓视为妊娠,定为E0 d。18只孕鼠随机分为3组：在E10 d,实验组以维甲酸100 mg/kg对孕鼠行一次性灌胃,制备腭裂动物模型;植物油对照组给予10 mL/kg橄榄油灌胃;空白对照组不做任何处理。 结果与结论：β-连环蛋白在空白对照组E13 d牙胚蕾状期、E14 d帽状期、E16 d钟状期上皮内均有表达,且空白对照组的表达随着牙胚发育的成熟而逐渐增加,实验组的变化趋势与空白对照组相同。3个时期的实验组β-连环蛋白在牙胚中的表达水平均高于空白对照组,植物油对照组和空白对照组表达无明显差异。提示维甲酸在诱导腭裂发生过程中,可能通过干扰上皮-间充质间的相互作用,上调β-连环蛋白在牙胚中的表达,使牙胚发育受阻。     

维甲酸对胎鼠Vangl1及Vangl2基因表达的影响

神经管畸形的发生是由遗传因素与环境因素共同作用产生的。平面细胞极性途径（planar cell polarity，PCP）对脊椎动物神经胚形成非常重要。该途径基因的任何突变都可能导致神经管不能闭合，与人类的颅脊柱裂相似。但是，环境因素是否影响、如何影响PCP途径基因的表达到目前仍不清楚。目的研究维甲酸对胎鼠Vangl1及Vangl2基因表达的时空特征的影响。方法全反式维甲酸橄榄油混悬液按120mg／kg在BALB／C小鼠怀孕第9．5天（E9．5）（B组）或E10．5（C组）灌胃，A组仅用橄榄油灌胃。取E9．5、E10．5、E11．5、E13．5、E15．5、E17．5、E19．5胎鼠，Vangl1及Vangl2基因表达量采用逆转录酶PCR（RT—PCR）检测，其时空表达采用全胚胎原位杂交（WISH）检测。结果结果显示，正常情况下Vangl1及Vangl2基因在整个神经胚形成过程中都有强表达。而B组胎鼠从脑到后神经孔Vangl1及Vangl2基因表达显著下调。C组较复杂，二基因表达在全胚胎（从E11．5到E13．5）及神经管脊柱区（从E15．5到E19．5）显著下调并维持低表达，但在神经管的颅区（E15．5到E19．5）仅中度下调。结论：结果提示，维甲酸诱导的神经管畸形的发生与Vangl1及Vangl2基因转录子下调有关。     

灵芝孢子油与深海鱼油联合应用对小鼠学习记忆及海马神经元表达NOS的影响

目的探讨灵芝孢子油与深海鱼油联合应用对小鼠学习记忆及海马神经元表达NOS的影响。方法将受孕小鼠随机分为4组,自受孕第1天起分别胃饲生理盐水、灵芝孢子油、深海鱼油和灵芝孢子油加深海鱼油。在母鼠分娩21d后改为胃饲其幼鼠,然后将出生后45d的幼鼠处死。处死前进行Morris水迷宫行为学测试,处死后应用酶组织化学法检测海马神经元NOS的表达。结果在Morris水迷宫检测中,灵芝孢子油组、深海鱼油组和灵芝孢子油加深海鱼油组小鼠的逃逸潜伏期明显缩短。灵芝孢子油组和灵芝孢子油加深海鱼油组的小鼠平台象限游泳距离有增加。灵芝孢子油加深海鱼油组的小鼠大脑海马NOS阳性神经元与其它组的小鼠比较有显著性增加。结论灵芝孢子油和深海鱼油联合应用能够促进小鼠学习记忆能力及其大脑海马神经元表达NOS。     

灵芝孢子粉对异丙肾上腺素致心肌缺血损伤大鼠apelin表达的影响

目的： 观察异丙肾上腺素（ISO）致心肌缺血损伤大鼠血浆和心肌组织apelin的变化,探讨灵芝孢子粉抗心肌缺血损伤的作用机制。方法: 将大鼠分为5组：正常对照组、ISO模型组、灵芝孢子粉高、中、低剂量治疗组,连续灌胃给药7周。皮下注射ISO建立大鼠心肌缺血损伤模型,ELISA分析检测血浆和心肌apelin的含量,半定量RT-PCR方法检测心肌apelin mRNA表达,电镜观察心肌组织病理形态学的变化。结果: 与正常组比较,ISO组大鼠血浆和心肌组织apelin含量均下降,心肌组织中apelin mRNA水平表达下调（P＜0.01)。与ISO组比较,灵芝孢子粉治疗组大鼠血浆和心肌组织apelin含量以及心肌apelin mRNA表达水平显著升高（P＜0.01或P＜0.05）,同时,血中NO含量显著增加;心肌病理改变明显减轻。结论: 灵芝孢子粉抗大鼠心肌缺血损伤的机制可能与其上调心肌组织apelin mRNA的表达,提高apelin水平有关。