表面活性蛋白A在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达

目的 研究表面活性蛋白A（SP-A）及其亚型在人肾组织和人肾小管上皮细胞（HK-2）的表达和分布,同时分析脂多糖（LPS）对HK-2细胞中SP-A亚型的 mRNA和蛋白表达的影响。 方法 收集10例人的肾组织,以5例人的肺组织作为对照,同时培养HK-2细胞。免疫组化法检测SP-A在人肾组织的表达部位;RT-PCR法检测SP-A mRNA在人肾组织和HK-2细胞中的表达;限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）和测序的方法分析SP-A亚型在HK-2细胞的表达;实时定量PCR法比较SP-A mRNA在人肾组织和在人肺组织中的相对含量;Western印迹法检测人肾组织和HK-2细胞中SP-A蛋白的表达;Western印迹和ELISA法检测人的尿液和HK-2细胞培养上清液中SP-A的分泌量。RT-PCR和Western印迹检测LPS在不同浓度（0、0.1、1、2、5、10 mg/L）作用8 h及5 mg/L LPS在不同时间（0、2、4、8、16、24 h）作用HK-2细胞后,SP-A mRNA和蛋白表达的变化情况。 结果 免疫组化结果显示SP-A主要表达在肾皮质的远曲和近曲小管的肾小管上皮细胞。RFLP和测序的方法均证实HK-2细胞可同时表达SP-A1和SP-A2亚型。实时定量PCR证实SP-A mRNA在人肾组织的表达量仅为肺组织的30%（n = 5）。Western印迹检测到人肾组织和HK-2细胞可表达SP-A蛋白。同时在人的尿液和HK-2细胞培养上清液中也检测到SP-A的分泌,其分泌量分别为（106.614±72.772） nmol/L（n = 30）和（85.533± 58.622） nmol/L（n = 10）。应用1、2、5、10 mg/L的 LPS刺激HK-2细胞8 h后,SP-A1和SP-A2 mRNA及SP-A蛋白表达较0、0.1 mg/L显著升高（P < 0.05）;同时,应用5 mg/L的LPS作用HK-2细胞4、8、16、24 h后, SP-A1和SP-A2 mRNA及SP-A蛋白表达较LPS作用0、2 h显著升高（P < 0.05）。 结论 HK-2细胞能同时表达SP-A1和SP-A2亚型,能产生和分泌SP-A蛋白。SP-A1和SP-A2可能在肾脏的天然免疫和炎性反应调节方面起重要作用。     

罗格列酮对脂多糖诱导肾小管上皮细胞趋化因子分泌的影响及可能机制

目的 探讨罗格列酮（RGL）对脂多糖（LPS）诱导人近端肾小管上皮细胞（HK-2）趋化因子分泌的影响及可能机制。 方法 用RGL（10 μmol/L）预处理HK-2细胞2 h后加入LPS（1 mg/L）,与单纯LPS组、单纯RGL组及未加任何刺激（CON）组进行比较。用实时定量PCR方法检测细胞中白细胞介素8（IL-8）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1） mRNA表达水平;用ELISA法检测细胞培养上清中IL-8和MCP-1蛋白水平。通过RNAi技术沉默肾小管上皮细胞过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ（PPARγ）,观察RGL的作用是否依赖于PPARγ。用Western印迹法检测细胞核中NF-κB蛋白水平;用EMSA方法检测NF-κB DNA结合活性。 结果 在HK-2细胞中,与CON组相比,单纯LPS刺激使IL-8、MCP-1 mRNA分别升高（4.30±0.45）倍和（4.80±1.29）倍（均P < 0.05）,使培养上清中IL-8、MCP-1分别升高（1.39±0.18）和（2.11±0.47）倍（均P < 0.05）;与LPS组相比,RGL预处理组IL-8和MCP-1在mRNA水平分别下降66.37%和71.88%（均P < 0.05）,在蛋白水平分别下降41.68%和47.87%（均P < 0.05）。在PPARγ沉默的HK-2细胞中,RGL预处理2 h后再加LPS刺激,IL-8和MCP-1 mRNA仅分别下降18.16%、16.83%,培养上清中IL-8和MCP-1仅分别下降11.39%、11.86%,与单纯LPS组相比差异无统计学意义。RGL预处理2 h不能抑制LPS诱导的NF-κB核易位,但可显著降低NF-κB DNA结合活性。 结论 RGL以PPARγ依赖的方式抑制LPS诱导HK-2细胞分泌IL-8和MCP-1,其机制可能与降低NF-κB DNA结合活性有关。     

表面活性蛋白-A对脂多糖诱导的人肾小管近曲上皮细胞白介素-6表达的影响

目的：探讨表面活性蛋白-A（SP-A）的表达改变对脂多糖（LPS）诱导的人肾小管近曲上皮细胞（HK-2细胞）白介素-6（IL-6）表达的影响及机制。方法培养HK-2细胞,ELISA方法检测不同浓度的LPS（0、0．1、1、2、5、10 mg／L）作用8 h及5 mg／L的LPS于不同时间（0、2、4、8、16、24 h）作用HK-2细胞后IL-6蛋白表达的变化;应用脂质体转染法将SP-A SiRNA转染入HK-2细胞,筛选稳定转染细胞株,采用5 mg／L的LPS刺激SP-A SiRNA稳定转染的HK-2细胞8 h,ELISA方法检测细胞上清中IL-6的分泌量,Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白的表达。结果应用1、2、5、10 mg／L的LPS刺激HK-2细胞8 h后,IL-6蛋白表达水平较0、0．1 mg／L的LPS刺激后显著升高（P＜0．05）;同时,应用5 mg／L的LPS作用HK-2细胞4、8、16、24 h后,IL-6蛋白的表达水平较5 mg／L的LPS作用0、2 h显著升高（P＜0．05）。SP-A SiRNA转染的HK-2细胞经LPS刺激后,其NF-κBP65和IL-6蛋白表达较未转染经LPS刺激细胞明显升高（P＜0．05）。结论 SP-A可能通过抑制NF-κB p65的表达进而下调LPS诱导的HK-2细胞IL-6的表达,在脓毒症急性肾损伤时发挥保护作用。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1的表达

目的 探讨细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对高糖状态下肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达的影响。 方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用脂质体2000分别转染pCR3.1-SOCS-1表达质粒和pCR3.1 空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用低糖（5.5 mmol/L）、高糖（30 mmol/L）、低糖+甘露醇（24.5 mmol/L甘露醇）和JAK-STAT信号通路抑制剂AG490 （10 μmol/L）进行刺激。Western印迹检测系膜细胞SOCS-1、信号转导和转录活化因子1、3（STAT1、STAT3）及其磷酸化蛋白（p-STAT1、p-STAT3）的表达。ELISA法和放免法测定细胞上清液中MCP-1、FN和Ⅳ型胶原的含量。RT-PCR法检测SOCS-1和MCP-1 mRNA的表达。 结果 高糖刺激系膜细胞SOCS-1蛋白和mRNA表达呈时间依赖性变化, 4 h表达达到峰值,然后逐渐减低,24 h达基线水平。与低糖组相比,高糖组系膜细胞STAT1和STAT3磷酸化水平显著上调（P < 0.01）; MCP-1 mRNA水平表达显著上调[（0.39±0.05）比（0.16±0.02）,P < 0.01];上清液中MCP-1[（459±67）比（241±19） ng/L]、FN[（5.84±0.61）比（3.41±0.31） mg/L]和Ⅳ型胶原[（16.45±2.30）比（9.56±1.52） μg/L] 含量均显著增加（均P < 0.01）。与空载体对照组相比,SOCS-1过表达组系膜细胞STAT1和STAT3的磷酸化水平显著下降（P < 0.05）;MCP-1 mRNA表达下调[（0.34±0.04）比（0.42±0.05）,P < 0.05]; 上清液中MCP-1[(387±47）比（463±56） ng/L]、 FN[（4.61±0.57）比（5.76±0.74） mg/L]和Ⅳ型胶原[(13.4±2.32)比（17.1±2.57） μg/L] 含量显著减少（均P < 0.05）。与高糖组相比,AG490组系膜细胞MCP-1 mRNA（0.31±0.04）表达显著下调;上清液中MCP-1[（361±53） ng/L]、FN[（5.46±0.71）mg/L]和Ⅳ型胶原[（15.2±1.97） μg/L]含量均减少。 结论 SOCS-1过表达抑制高糖状态下肾小球系膜细胞MCP-1及细胞外基质的分泌可能部分是通过影响STAT1和STAT3的激活而实现。     

表面活性蛋白A调节肾小管上皮细胞巨噬细胞炎症蛋白2的表达及其机制的探讨

目的 研究表面活性蛋白A(SP-A)对肾小管上皮细胞的巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)表达和NF-κB活性的影响，探讨SP-A在肾组织炎症中的作用。方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)，经同步化后分别在低血清条件下经不同浓度的SP-A(0~80 μg/ml)共培养，用RT-PCR和ELISA法分别检测脂多糖(LPS，10 μg/ml)刺激的MIP-2 mRNA和蛋白的表达水平，并用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性。结果 在LPS刺激下，NRK-52E细胞有明显的MIP-2表达。SP-A浓度达5 μg/ml以上时可显著降低上清液中的MIP-2的浓度；当达10 μg/ml以上时可显著下调MIP-2 mRNA的表达。LPS刺激使NRK-52E细胞的NF-κB活性升高，SP-A以剂量依赖方式降低LPS诱导的NF-κB活性。结论 SP-A可以下调趋化因子MIP-2在肾小管上皮细胞的表达，其作用可能与抑制NF-κB活性有关。SP-A可能在肾组织炎症反应时发挥重要的调节作用。     

人白蛋白刺激人肾小管上皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1

目的：研究人白蛋白是否能刺激人肾小管上皮细胞产生单核细胞趋化蛋白-1(MCP－10。方法：病理标本研究中,以5例正常肾组织为对照,以13例微小病变（MCD）为病变组,应用免疫组织化学和原位杂交的方法,检测肾组织中单核巨噬细胞（Mφ）及MCP－1的分布。在细胞培养中,以不同浓度的人白蛋白（0．1－30g/L)刺激人类肾小管上皮细胞系HK－2细胞24h后,用Western Blot法检测提取物中的MCP－1。结果：（1）在MCD肾组织中,MCP－1主要呈灶状在肾小管壁分布;Mφ在各区域有少量浸润,在间质与肾小管内的浸润数量呈正相关,可见Mφ嵌入在肾小管上细胞间细胞产生MCP－1,白蛋白浓度大于2g/L时明显。结论：MCD患者大量尿蛋白时肾小管有MCP－1表达,肾组织中有少量Mφ浸润,Mφ可能在肾间质和小管间移动。人白蛋白可以刺激人类肾小管上皮细胞产生MCP－1。     

丙泊酚对脂多糖诱导人单核细胞表达Peroxiredoxin-2蛋白和超氧化物歧化酶蛋白的影响

目的 研究丙泊酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人单核细胞(THP-1)表达Peroxiredoxin-2及超氧化物歧化酶(SOD1)的影响.方法 将体外培养的THP-1细胞按照完全随机方法分为4组:正常对照组(C组);LPS刺激组(L组):加入LPS 1 mg/L;丙泊酚处理组(P组):给予丙泊酚15 mg/L和丙泊酚预处理合并LPS刺激组(P+L组):给予丙泊酚15 mg/L,1 h后再给予LPS 1 mg/L.通过Western blot法分别检测各组内Peroxiredoxin-2及SOD1含量的变化,用四唑盐快速比色法(MTT)观察各组THP-1细胞的存活率.结果 在LPS刺激12 h后收集细胞,Westernblot结果显示与正常对照组(C组)、丙泊酚处理组(P组)、丙泊酚预处理合并LP3刺激组(P+L组)3组相比,LPS刺激组(L组)中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量明显降低,而L组与(P+L)组比较,(P+L)组中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量则明显高于L组;MTT结果显示L组与(L+P)组相比较,L组细胞存活率明显低于(L+P)组细胞存活率(P<0.05)结论丙泊酚可以逆转LPS对THP1细胞表达抗氧化蛋白Peroxiredoxin-2及SOD1的抑制作用,其抗氧化作用可能与增加Peroxiredoxin-2及SOD1的表达有关.     

丙泊酚对脂多糖诱导人单核细胞表达Peroxiredoxin-2蛋白和超氧化物歧化酶蛋白的影响

目的 研究丙泊酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人单核细胞(THP-1)表达Peroxiredoxin-2及超氧化物歧化酶(SOD1)的影响.方法 将体外培养的THP-1细胞按照完全随机方法分为4组:正常对照组(C组);LPS刺激组(L组):加入LPS 1 mg/L;丙泊酚处理组(P组):给予丙泊酚15 mg/L和丙泊酚预处理合并LPS刺激组(P+L组):给予丙泊酚15 mg/L,1 h后再给予LPS 1 mg/L.通过Western blot法分别检测各组内Peroxiredoxin-2及SOD1含量的变化,用四唑盐快速比色法(MTT)观察各组THP-1细胞的存活率.结果 在LPS刺激12 h后收集细胞,Westernblot结果显示与正常对照组(C组)、丙泊酚处理组(P组)、丙泊酚预处理合并LP3刺激组(P+L组)3组相比,LPS刺激组(L组)中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量明显降低,而L组与(P+L)组比较,(P+L)组中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量则明显高于L组;MTT结果显示L组与(L+P)组相比较,L组细胞存活率明显低于(L+P)组细胞存活率(P<0.05)结论丙泊酚可以逆转LPS对THP1细胞表达抗氧化蛋白Peroxiredoxin-2及SOD1的抑制作用,其抗氧化作用可能与增加Peroxiredoxin-2及SOD1的表达有关.     

丙泊酚对脂多糖诱导人单核细胞表达Peroxiredoxin-2蛋白和超氧化物歧化酶蛋白的影响

目的 研究丙泊酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人单核细胞(THP-1)表达Peroxiredoxin-2及超氧化物歧化酶(SOD1)的影响.方法 将体外培养的THP-1细胞按照完全随机方法分为4组:正常对照组(C组);LPS刺激组(L组):加入LPS 1 mg/L;丙泊酚处理组(P组):给予丙泊酚15 mg/L和丙泊酚预处理合并LPS刺激组(P+L组):给予丙泊酚15 mg/L,1 h后再给予LPS 1 mg/L.通过Western blot法分别检测各组内Peroxiredoxin-2及SOD1含量的变化,用四唑盐快速比色法(MTT)观察各组THP-1细胞的存活率.结果 在LPS刺激12 h后收集细胞,Westernblot结果显示与正常对照组(C组)、丙泊酚处理组(P组)、丙泊酚预处理合并LP3刺激组(P+L组)3组相比,LPS刺激组(L组)中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量明显降低,而L组与(P+L)组比较,(P+L)组中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量则明显高于L组;MTT结果显示L组与(L+P)组相比较,L组细胞存活率明显低于(L+P)组细胞存活率(P<0.05)结论丙泊酚可以逆转LPS对THP1细胞表达抗氧化蛋白Peroxiredoxin-2及SOD1的抑制作用,其抗氧化作用可能与增加Peroxiredoxin-2及SOD1的表达有关.     

氯胺酮对脂多糖诱导人单核细胞NF-κB表达和肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的研究氯胺酮(KT)对脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞核因子κB(NF-κB)表达和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放的影响,探讨氯胺酮抗炎效应的机制。方法将采集分离的健康志愿者外周血单核细胞接种于培养板,按培养液不同分为四组,每组20孔。LPS组:加入1 mg·L-1 LPS 1 ml;对照组:加入等体积生理盐水;LPS KT 20mg·L-1组:加入20mg·L-1 KT 1 ml后加入LPS 1 ml;LPS KT 100 mg·L-1组:加入100 mg·L-1 KT 1 ml后加入LPS 1 ml。按孵育时间不同分成5个亚组,每组4孔,分别于孵育0．5、2、6、12和16 h取细胞及细胞培养上清液,应用免疫细胞化学染色法检测细胞NF-κB p65 表达,计算阳性率,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中TNF-α浓度。结果与对照组比较,LPS、 LPS KT 20 mg·L-1、LPS KT 100 mg·L-1组NF-κB p65阳性率孵育0．5 h增加,2 h时达高峰。TNF-α浓度在孵育2 h时开始升高,6 h时达高峰。与LPS组比较,LPS KT 20 mg·L-1组NF-κB p65阳性率在孵育0．5、2 h时,TNF-α浓度在2、6 h时降低,LPS KT 100 mg·L-1组NF-κB p65阳性率在0．5、2、6 h时, TNF-α浓度在2、6、12、16 h时降低。与LPS KT 20 mg·L-1组比较,LPS KT 100 mg·L-1组NF-κB p65阳性率在孵育2、6 h时,TNF-α浓度在6、12、16 h时降低(P<0．05或0．01)。结论 KT抑制LPS诱导人单核细胞NF-κB的表达和TNF-α的释放,其作用可能与剂量有关。     

单核细胞化学吸引蛋白质1 小分子干扰RNA人肾小管上皮细胞株的建立

目的 建立单核细胞化学吸引蛋白质1（MCP-1） 小分子干扰RNA（siRNA）人肾小管上皮细胞株，并检测MCP-1 siRNA对人肾小管上皮细胞（HKC）MCP-1基因的抑制效应。 方法 针对人MCP-1 mRNA 67、116、142位点设计并合成3对MCP-1 siRNA序列。构建MCP-1特异性siRNA真核表达载体，以脂质体法瞬时转染至HKC。转染24 h后分别应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达，筛选出抑制效率最高的MCP-1 siRNA。以筛选出的MCP-1 siRNA序列构建慢病毒穿梭质粒。使用慢病毒穿梭质粒进行慢病毒颗粒的包装和生产，得到病毒液并确定其滴度。以病毒液感染HKC，筛选MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株，并应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达。 结果 成功建立MCP-1特异性siRNA人肾小管上皮细胞株。MCP-1 siRNA稳定转染能下调人肾小管上皮细胞MCP-1 mRNA (68.49±6.38)%、蛋白(72.97±6.13)%，与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.01)。 结论 MCP-1特异性siRNA能高效抑制HKC内MCP-1基因表达。MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株的建立为MCP-1基因功能及肾间质纤维化防治研究提供实验材料和依据。     

异丙酚预先给药对大鼠前脑缺血再灌注时海马单核细胞趋化因子1及其受体表达的影响

目的 探讨异丙酚预先给药对大鼠前脑缺血再灌注时海马单核细胞趋化因子1(MCP1)及其受体(CCR2)表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体重250～300g,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)仅暴露双侧颈总动脉及股动静脉置管,不夹闭;缺血再灌注组(IR组)采用夹闭双侧颈总动脉10 min合并放血降压再回输法制备前脑缺血再灌注损伤模型;异丙酚预先给药组(P组)脑缺血前即刻股静脉注射异丙酚50 mg/kg.于再灌注6 h时处死大鼠取脑,分离海马神经元,采用RT-PCR法测定MCP-1 mRNA和CCR2mRNA的表达,Western blot法测定MCP-1和CCR2蛋白的表达.结果 IR组和P组海马神经元MCP-1及CCR2表达较S组上调(P＜0.05);P组海马神经元MCP-1及CCR2表达较IR组下调(P＜0.05).结论 异丙酚预先给药可抑制海马神经元MCP-1及CCR2表达,该作用可能会减轻大鼠前脑缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of propofol pretreatment on hippocampal monocyte chemotactic protein-1 ( MCP-1 ) and CC-chemokine receptor type 2 (CCR2) expression following forebrain ischemiarepcrfusion (I/R) in rats. Methods Twenty-four male SD rats weighing 250-300 g were randomly divided into 3 groups ( n = 8 each): group Ⅰ control; group Ⅱ I/R and group Ⅲ propofol pretreatment. Cerebral I/R was induced by clamping bilateral common carotid arteries for 10 min combined with hypotension ( MAP was maintained at 35-45 mm Hg) induced by exsanguinations in group Ⅱ and Ⅲ. In group Ⅲ propofol 50 mg/kg was injected into femoral vein immediately before cerebral ischemia. The animals were sacrificed at 6 h of reperfusion. Hippocampal tissue was obtained for detection of MCP-1 mRNA and CCR2 mRNA and their protein expression by RT-PCR and Western blot technique. Results I/R significantly increased the expression of MCP-1 and CCR2 in hippoeampal tissue as compared with control group. Propofol pretreatment significantly attenuated cerebral I/R induced increase in MCP-1 and CCR2 expression. Conclusion Propofol pretreatment can significantly inhibit forebrain I/R-induced hippocampal MCP-1 and CCP2 expression.     

草酸钙结石晶体对人近曲肾小管上皮细胞蛋白质表达谱的影响

目的探讨肾结石草酸钙晶体对人近曲肾小管上皮细胞蛋白质表达谱的影响,筛选差异表达蛋白质并初步探讨肾结石与肾损伤的关系。 方法选取临床经结石成分分析为草酸钙的肾结石标本,充分研磨后配制草酸钙晶体悬液,处理人近曲肾小管上皮细胞HK-2,提取总蛋白并通过SDS-PAGE对蛋白质量进行鉴定,通过BCA法测定蛋白浓度,然后通过TMT标记定量蛋白质组学分析法筛选实验组和对照组蛋白质表达谱的差异,最后通过生物信息学的方法进行聚类分析、GO富集分析以及差异基因相关的蛋白质相互作用网络分析。 结果草酸钙晶体对HK-2细胞显示出明显的细胞毒性,细胞生长速度减慢且引起细胞形态以及培养基PH值发生显著改变。TMT标记定量蛋白质组学分析结果显示经草酸钙晶体处理后的HK-2细胞中差异表达的蛋白分子共1 141个,其中上调表达的699个,下调表达的442个。生物信息学分析结果提示这些差异蛋白在细胞外复合体、细胞器以及多种细胞学过程中发挥重要作用;差异蛋白共表达网络分析发现在细胞骨架维持（ACTB,CFL1）和细胞特殊功能如分泌和加帽中起作用的蛋白（MYH9,MYH14）关系最为密切。 结论草酸钙结晶对人肾上皮细胞蛋白质表达有显著影响,并且这些差异表达的蛋白质分子可能与肾结石的形成以及肾损伤有关。     

Lefty蛋白拮抗人肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的 探讨Lefty蛋白对转化生长因子β1（TGF-β1）介导的人肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡的影响。方法采用脂质体将人Lefty质粒转染入离体培养的HK-2细胞,使其稳定表达Lefty蛋白。对正常对照组（A组）和Lefty转染组（B组）细胞给予10ng／mlTGF-β1刺激后,采用Westernblot法检测各组细胞第6、12、24、48小时磷酸化Smad2／3（p-Smad2／3）表达水平,并同时采用流式细胞术检测各组细胞凋亡程度。结果TGF131刺激后,A组p-Smad2／3表达水平和细胞凋亡程度较刺激前升高（P〈0．05）,而B组上述指标均低于A组（P〈0.05）。结论Lefty蛋白可拮抗TGF-19J／Smad信号转导通路,减轻TGF-β1介导的人肾小管上皮细胞凋亡。     

丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响

目的观察丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响,初步分析其意义。方法肾小管上皮细胞体外培养,将细胞接种在培养瓶中,待细胞融合至80％～90％时,更换含有丹参多酚酸盐终浓度分别为0、0．1、0．5、1．0、2．0mg／L的培养基,培养24h后,收集人肾小管上皮细胞并提取mRNA,转化为CDNA,用实时定量荧光聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶mRNA的表达,并经凝胶成像行半定量分析。结果以空白对照人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA量为参照1,则0．1、0．5、1．0、2．0mg／L浓度丹参多酚酸盐共培养后的人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA依次为2．39、3．05、4．65和6．65,数据为重复2次实验的平均值。结论人肾小管上皮细胞可表达血管性血友病因子裂解酶mRNA,丹参多酚酸盐能增加人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的表达。丹参多酚酸盐对肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的调节可能会影响肾脏局部循环的出血、凝血状态,可能是丹参多酚酸盐的药理机制之一。