酶法测定血清中甘油三酯

我们用国产试剂盒一步终点比色法(酶法)测定血清甘油三酯,结果血清甘油三酯批内CV=1.31～2.54％;批间3.31～4.01％,回收率平均为101.1％,与化学萃取法比较,有结果准确,操作简便快速,样品量少等优点,现介绍如下: 试剂与方法一、试剂:甘油三酯氧化酶试剂、磷酸缓冲液和甘油三酯标准液(200mg/dl)。由东欧生物工程试剂厂供应。二、方法:在标准管中加入标准液20μl、在样品管加入血清20μl后,同时在两管中加入1ml酶     

在玻璃碳电极上肼苯哒嗪的电流测定法

本文介绍基于在流体中玻璃碳电极上的电化学氧化作用,用流动注入法连续测定盐酸肼苯哒嗪。方法:用往复泵使流动相Walpole 醋酸盐缓冲液-无水甲醇(40∶60)流经一Metrohm EA-1096型电化学池(具E611型检测器),流速:1.0ml/min。池中配有玻璃碳工作电极、银-氯化银参比电极与另一玻璃碳辅助电极。用微量注射器将样品注入进样口,进样量:50μl。整个系统用HPLC 不锈钢管(0.02cm)连接固定,在室温下用记录器记录电流。标准、样品液制备:用Walpole 醋酸盐缓冲液(pH4.2)配制盐酸肼苯哒嗪贮备液(0.1mg/ml),再将其稀释成1～50μg/ml 的标准液,用作制备工作曲线。     

巯甲丙脯酸酶免疫分析法

测定生物体内巯甲丙脯酸已有GC-MS、GC及HPLC方法,但这些方法费时、繁琐。本文介绍一种灵敏、特异的酶免疫分析法。仪器与试剂:MPF-4型荧光分光光度计、LSC-900型液体闪烁计数器、离心机、恒温器、13×100mm玻璃管。氚化巯甲丙脯酸乙酸酯、N-(3-二甲胺丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(DEC)、牛免疫球蛋白G(BIgG)、牛血清白蛋白(BSA)、02-D-半乳糖苷酶、免疫珠第二抗体、山羊抗兔免疫球蛋白     

用GC法测定人血浆中的硫癸醇含量

硫癸醇(1,10-二羟乙基硫代癸烷)是一种广泛用于治疗血胆固醇和血脂蛋白过多的降血脂药.它在体内的药物浓度测定,以往文献未见报道.本文首次采用GC法测定硫癸醇在人血浆中的浓度,其优点为灵敏度高,专属性好.实验方法:(1)提取与衍生化:取1ml血浆于15ml离心管中,加6ml氯仿和100μl甲醇(含1μg/ml的1,8-二羟乙基硫代辛烷,内标液).振摇5min,离心5min.取有机层5.9ml移到10ml的锥形试管中,真     

人血清中氟卡胺HPLC立体选择测定

本文报道了人血清中氟卡胺的HPLC立体测定方法。氟卡胺标准贮备液及内标溶液(2,5-二乙氧基-N-(2-哌啶基甲基)苯甲酰胺盐酸盐)分别由10mg外消旋醋酸盐溶于1000ml去离子水中(10μg/ml),工作标准液则将贮备液稀释10倍而得。在试管中放入1.0 ml血浆,然后加入50μl内标溶液(50 ng),1 ml Tris盐酸(2.0 M,pH 8.5)缓冲液和过量(3 g)氯化钠。NaCl极度溶解后,用5 ml氯丁烷:2-丙醇(95∶5v/v)旋涡提取30秒钟。在室温以每分钟3000     

用柱切换HPLC法测定大鼠、狗及人血浆中的氢氯噻嗪

已有的 HPLC 测定生物液体中氢氯噻嗪(Ⅰ)浓度的方法大多需繁琐的样品处理步骤,采用本文方法,血浆样品可直接注入色谱系统作全自动分析。溶液的制备分别配制1.0mg/ml 的(Ⅰ)和内标氢氟噻嗪(Ⅱ)的甲醇溶液作为贮备液,于-20℃保存。将(Ⅰ)的贮备液用10mmol/L 的磷酸盐缓冲液(pH7.2)稀释至100μg/ml,并以空白血浆(先离心去微粒)进一步稀释制得血浆标准液。以相同缓冲液稀释内标液至1500ng/ml。血浆样品室温解冻后离心(3000rpm,10min)去微粒,将150μl 血浆标准液或样品液与150μl 内标液混合,采用自动进样器将100～200μl 混合液注入 HPLC 仪。色谱系统包括提取柱(两个串联的Guard-Pak C_(18)柱,柱长0.4cm)和串联Guard-Pak C_(18)保护柱的分析柱(HypersilODS,5μm,4.6×250mm),分别联于六孔     

1,6-二磷酸果糖的酶测定法

本品在国外主要用于治疗心肌梗塞、休克、局部性缺血及严重的下肢供血不足等症。其酶测定法如下: 供试溶液的制备: 1.缓冲液(pH7.6)取三乙醇胺盐酸盐约18.6g,加水约200ml溶解,加入氢氧化钠液(2tmol/L)18ml和乙二胺四乙酸二钠·二水合物3.7g,加水适量使稀释成250ml。 2.还原型辅酶I(NADH)溶液取NADH约7mg,精密称定,加入缓冲液     

太平洋侧花海葵中四个新神经酰胺的鉴定

目的研究太平洋侧花海葵(Anthopleura pacifica)中的生物活性成分.方法采用稻瘟霉模型生物活性追踪方法,应用色谱技术进行分离,根据理化性质和波谱分析鉴定结构.结果得到了1个对稻瘟霉显示活性的组分,并鉴定为4个神经酰胺的混合物:N-羟乙基-N-十四酰-(2S,3R)-十八碳鞘氨醇-4(E),8(E)-二烯(a),N-羟乙基-N-(9Z-十六烯酰)-(2S,3R)-十八碳鞘氨醇-4(E),8(E)-二烯(b),N-羟乙基-N-十六酰-(2S,3R)-十八碳鞘氨醇-4(E),8(E)-二烯(c)和N-羟乙基-N-(13Z-二十二烯酰)-(2S,3R)-十八碳鞘氨醇-4(E),8(E)-二烯(d).结论化合物a～d均为新的神经鞘氨醇化合物.     

HPLC法测定N-（2-羟乙基）烟酰胺中的有关物质

目的建立N-（2-羟乙基）烟酰胺中有关物质的测定方法。方法碳十八烷键合硅胶（5μm）填充4．0mm×25cm不锈钢柱;流动相为水：四氢呋喃：三乙胺：三氟乙酸（982：10：5：3）;检测波长：266mn;流速：1．0ml/min。结果N-（2-羟乙基）烟酰胺与主要杂质能得到有效分离,各杂质在1．0—20μg／mL范围内呈良好线性关系。结论本测定方法灵敏度高,准确可靠,可以控制N-（2-羟乙基）烟酰胺中有关物质的含量。     

高效液相色谱法测定庆大霉素C_(1a)、C_2、C_1的含量

本文报道反相一高效液相色谱法测定庆大霉素C组份。该法系用YWG—C_(18)H_(37)10μm为填料的色谱柱;乙腈-无水甲醇-0.1％。三羟甲基氨基甲烷(375:50:105)混合溶媒作流动相,硫酸庆大霉素与邻苯二醛(OPA)制成荧光衍生物,以1.8ml/min的流速洗脱,用荧光检测器激发波长340nm,发射波长430nm测定,庆大霉素C_(1a)、C_2、C_1的保留时间分别为7.6′、9.8′、12.4′。操作简便、灵敏,测定结果准确。     

戊二醛消毒剂对酶联免疫法检测结果的影响

目的探讨戊二醛消毒剂对酶联免疫法(ELISA)造成的假阳性及假阴性影响,为临床免疫实验室合理选择消毒剂提供依据。方法夹心ELISA(以乙肝表面抗原试剂进行实验)及竞争ELISA(以乙肝e抗体试剂进行实验),以自带阴性及阳性血清进行实验,至加入显色液后,加入戊二醛2μl,加入终止液,以全自动酶标仪进行比色,对数据进行分析。结果戊二醛使ELISA各孔显黄色,吸光度值升高,夹心法达阳性判断标准,竞争法达阴性判断标准。结论临床免疫实验室在使用戊二醛消毒剂时,应密切观察显色剂颜色的改变,以便及时发现假阳性及假阴性影响,保证检验结果的准确性。     

分溶亲和配基试验(PALA):狄戈辛的新放射免疫测定法

由于狄戈辛的治疗浓度和中毒浓度很接近,需要快速检出血药浓度以指导用药。常用的放射免疫(RIA)方法分离和洗涤程序繁琐,临床应用不方便。作者根据待分离分子表面性质的差异,利用不溶混性的水-聚合物二相系统直接分离生物分子,从而大大简化了分离步骤。此法称为分溶亲和配基试验(Partition AffinityLigand Assay,简称PALA)。测定方法:将50μl血清与50μl~(125)I标记的狄戈辛混合,加入100μl抗狄戈辛抗体(游离或与葡聚糖结合),3～5分钟后加入预先混合好的聚合物系统[1ml 30%(W/W)聚乙二醇(PEG4000)和3ml30%(W/W)MgSO_4·7H_2O]并振摇,几分钟后二相分开,吸取上层PEG疏水相500μl进行计数,从标准曲线即可求得血清狄戈辛含量。整个试验不到10分种。     

青霉素烷基酯经血浆催化降解后不释放母体青霉素

本文通过对不同青霉素酯稳定性的研究,发现苄青霉素和氨苄青霉素的甲酯及甘氨酸酯,在人血浆中虽然能迅速地降解,却不能释放出母体药物。研究药物采用苄青霉素(1),苄青霉素甲酯(2),苄青霉素甘氨酸酯(3,4),氨苄青霉素(5),匹氨西林(6)和氨苄青霉素甘氨酸酯(7)(它们的化学结构见图1)。取这些化合物的储备液100μl,加至10ml预热的0.01M磷酸缓冲液(A)或80%人血浆液(B)中,配制成浓度为10~(-5)M溶液,置于恒温水浴(37℃),于不同时间取样进行HPLC分析。     

胶束增强同步导数荧光测定法测定制剂中叶酸

叶酸（维生素B9）用于治疗巨细胞贫血伴白细胞减少症，是控制血铁的辅酶。它的缺乏与妊娠畸形、致癌过程有关。需要建立灵敏的测定方法。本文报道在不同表面活性剂溶液中，用荧光胺和叶酸衍生化反应，采用同步导致荧光测定法，方法简便、灵敏、省时。1试剂所有试剂皆为分析纯，重蒸馏水，叶酸标准贮备液：叶酸25mg置于25ml容量瓶中，加0．1mol此氨水适量使之治解，再加磷酸盐缓冲液（PBSpH6．5，0．1mol／L）至刻度，贮于4℃，至少可稳定2个月。用PBS稀释贮备液制成一系列标准工作液。荧光腔溶于丙酮制成1mg／ml69溶液。PBS（pH6．5，…     

以高效液相色谱法测定氯霉素乙酰转移酶的活性

本文报告以高效液相色潜(HPLC)法检测3-乙酰基和1,3-双乙酰基氯霉素的形成从而测定氯霉素乙酰转移酶的活性。乙酰化反应步骤为:将产生乙酰转移酶(CAT)的大肠杆菌(NCTC1186)超声破碎,提取粗制酶液,100μl 的酶液在37℃水浴中加温,加到37℃的含有50μmol Tris-盐酸缓冲液(pH6.8或7.8)、15μmol MgCl_2、25μmol S-乙     

紫外光谱在酶联免疫测定法中的应用

酶联免疫法是一综合性免疫化学测定技术,它将特异性抗原、抗体的免疫反应与酶的高效催化原理有机结合起来,其检测灵敏度相当于放射免疫测定法,且不需昂贵的仪器和有放射性危害的同位素物质。我们用紫外分光光度法检测双功能试剂成二醛的纯度,检测酶催化与免疫活性,检测酶标物的纯化过程。 材料与方法 1.材料( 1)试剂:化学纯戊二醛(25%),由中国医药公司北京采购供应站分装。辣根过氧化物酶-T4(HRPOD-T4)为天津医科大学制备。邻苯二胺为色谱纯,是Merk公司产品。SephadexG025(fine)为Pharmaic产品。(2)仪器:酶标检测仪、UV-300紫外扫描仪…     

用干燥抗原ELISA检测人体百日咳杆菌丝状血凝素抗体

ELISA可定量测定人血清中抗丝状血凝素抗体(抗-FHA)和抗百日咳毒素抗体(抗-PT)。但纯化用于致敏的FHA和PT不仅困难,而且不经济,因此,作者改良了试验方法以减少测定抗体所需要的抗原量。作者参照Voller法进行了间接ELISA。用碳酸氢钠缓冲液(pH9.6)吸附抗原致敏聚苯乙烯微量板,置4℃过夜,用室温下在孔内干燥的抗原致敏另一块聚苯乙烯微量板。每孔中加100μl试剂(除封闭过程以外)。抗原致敏的孔用磷酸盐缓冲液(PBS)洗两次,加百日咳恢复期病人抗-FHA和抗-PT阳性血清[参考血清含650 ELISA单位(EU)/ml抗-FHA和200EU/ml抗-PT活性]于37℃孵育2     

血清钙磷脂酶D测定法

钙是细胞外液中主要的二价离子 ,对维持和调节机体代谢具有重要的意义。目前对血清钙的测定方法有多种[1～ 4 ] ,但这些方法在线性、灵敏度、重复性、试剂及显色的稳定性、蛋白质干扰等方面均不能兼具。本文通过对血清钙磷脂酶Ｄ法测定结果的分析 ,旨在探讨该法实验室应用的可行性。1　试验原理　　二磷脂酸胆碱 +Ｈ2 Ｏ 磷脂酶Ｄ(ＰＬＤ)血清钙 胆碱 +二磷脂酸胆碱 +2Ｏ2 +Ｈ2 Ｏ 胆碱氧化酶 (ＣＯＤ) 甜菜碱 +2Ｈ2 Ｏ　　 2Ｈ2 Ｏ +4 -氨基氨替比林 [4 -ＡＡ]+ＥＭＳＥ(Ｎ -乙基 -Ｎ·(3-甲苯基 ) -Ｎ’ -丁二酰 -乙二胺 ) 过氧化物酶 (Ｐ…     

脐血造血干细胞分离方法的实验研究

目的 优化脐血造血干细胞/祖细胞的分离方法.方法 脐血按体积比1:5与含有树脂海绵筛(筛孔直径约12μm)的6%羟乙基淀粉混合,静置60min,提取界面有核细胞.倒置显微镜下计数有核细胞数,集落培养记数CFU-GM数,流式细胞仪检测CD34 细胞数,并与按照标准的羟乙基淀粉沉淀法和淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离的脐血相对照.结果 采用本实验方法分离脐血获得的有核细胞数、CFU-GM数和CD34 细胞数分别为(96.82±25.78)×105/ml,(66.70 ±12.47)×105,(1.33±0.57)×105/ml,明显高于由羟乙基淀粉沉淀法(70.72±20.93)×105/ml,(28.79±10.25)×105,(1.01±0.36)×105/ml和淋巴细胞分离液密度梯度离心法(25.33±7.27)X 105/ml,(20.13±7.55)×105,(0.34±0.01)×105/m1分离的脐血(P＜0.05).结论 本实验方法可由脐血中分离出大量的造血干/祖细胞,是一种分离脐血造血干/祖细胞的理想方法.     

导数UV-分光光度法测定人体液中的Imipenem

本文报道用导数UV—分光光度法测定人血浆、尿和组织中Imipenem。此法可消除背景干扰,增强分辨率。仪器和条件Perkin—Elmer UV—可见分光光度计Model Lembda 5,零级光谱扫描速度60nmmin~(-1),光谱狭缝宽度2nm。导数条件:扫描速度60nmmin~(-1);光谱狭缝宽度2nm,△λ6。贮备液取Imipenem适量,加4—(2—羟乙基)哌嗪—1—乙基磺酸(HEPES)—乙二醇混合溶剂(0.5mol/L的pH6.8HEPES5ml,加乙二醇和水各2.5ml)制成1.0mgml~(-1),可保存几天。