基因芯片技术研究针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响

目的:探讨针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响。方法:用基因芯片技术检测肾阳虚证骨关节炎患者及正常人的基因表达谱,以及针灸治疗显效者的治疗前后基因表达谱的变化。结果:通过基因表达谱芯片筛选出与肾阳虚骨关节炎免疫相关的基因13条,肾阳虚骨关节炎患者与正常人相比表达下调4条,上调5条。经温针治疗显效的4例患者治疗前后的基因芯片比较结果显示:NM000265、NM001838基因普遍上调,NM_001784基因普遍下调,其他基因表达无规律性变化。结论:肾阳虚证骨关节炎的发生涉及免疫相关基因表达的异常,针灸可能通过诱导或阻遏这些基因的表达发挥效应。     

应用基因表达谱芯片技术筛选老龄肾阳虚证特征功能类基因

目的:利用基因芯片技术探讨肾阳虚证发生的特征功能基因集。方法:在老龄肾阳虚证流行病学调查过程中,筛选出典型肾阳虚证患者2例和正常对照2例,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片,按一步法抽提总RNA,分离纯化两种样品的mRNA,经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,获得肾阳虚患者差异表达基因。结果:两例患者和正常人比较获得680和503条差异表达基因,通过g:GOSt基因芯片数据分析平台进行基因功能分类,发现免疫反应功能类基因出现显著性。结论:肾阳虚证的发生与免疫反应功能类基因的异常表达密切相关。     

老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的 采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系.方法 筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus 2.0基因表达谱芯片,通过组间比较,筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因.结果 芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因,聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因,主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫.结论 老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程,可能与个体的衰老存在密切关联.     

肾阳虚证发生与免疫功能类基因的关联性研究

目的：利用基因表达谱芯片技术探讨肾阳虚证的发生与免疫功能类基因的关联性。方法：筛选肾阳虚证患者2名和正常对照2名,采用美国Affymetrix公司的HG—u133Plus 2．0基因表达谱芯片,筛选肾阳虚患者差异表达基因。结果：芯片数据两两比较分析后获得20条共同基因,基因功能注释后3个GO（基因本体）术语具有显著性,最富显著性的为GO：0002504（经由MHC-Ⅱ类分子的肽或多糖抗原的加工及提呈）。2条基因HLA—DQA1和HLA—DRB4被注释到其中的2个GO类。结论：免疫系统反应特别是MHC-Ⅱ类分子介导的抗原加工及提呈过程的异常可能是肾阳虚证发生的主要免疫机制。     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

骨关节炎肾阳虚证信号转导差异表达基因分析

目的:以基因芯片技术从差异基因表达角度分析骨关节炎肾阳虚证与信号转导相关差异表达基因。方法:先后筛选出符合西医膝骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者两组,每组8例,与8例正常对照组比较。两组病人均取血、提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,分别混合与对照组杂交作两张基因芯片,最后对数据进行信息挖掘。结果:两张芯片各获得162和75条差异表达基因,其中与信号转导相关的分别为26条和11条;两张芯片共同差异表达基因6条,与信号相关的有3条,占总数的1/2。提示:信号转导是生命活动的一种最基本和最重要的方式。细胞间信号转导异常可能在肾阳虚证骨关节炎的发生、发展过程中起着重要作用。     

老龄肾阳虚证差异表达基因的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。方法:从前期基因表达谱芯片初步获得的差异表达基因中筛选出25个基因,选取18例肾阳虚证患者和6例正常对照者,采用半定量RT-PCR检测其血液中这25个基因的表达情况,从中鉴定出与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。结果:有8个基因在18例老龄肾阳虚证患者和6例正常人间的表达水平存在明显差异,这8个基因主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫。结论:老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂过程,推测肾阳虚可能与肿瘤的发生存在某种程度的关联。     

肾阳虚骨关节炎个案与13个免疫基因的初步研究 --辨证论治的个体化医学及分子疗效评定方法探试

目的 :观察温针治疗肾阳虚骨关节炎典型病例的疗效 ,通过基因芯片前沿方法研究该疗效的差异表达基因。从而探索辨证论治的个体化医学治疗效果及分子疗效评定的新方法。方法 :对 10例典型肾阳虚关节炎患者 ,辨证评分 ,然后施以温针灸治疗后精选疗效最好者。对其治疗前、后分别采血 ,提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图象采集与数据分析等过程获得差异基因表达谱。结果 :在 10例肾阳虚关节炎治疗有显著性的背景上 ,所选 1例患者的肾阳虚证、疼痛分分别减少 2 6分、12分 ,基因芯片检测该患者治疗前、后血液获得有表达差异的基因 5 7条 ,其中已知功能的基因有 3 3条 ,与免疫相关有 13条 ,约占整个已知功能基因的 3 6 4%。结论 :温针治疗肾阳虚证有效病例的基因表达涉及广泛 ,其分子机理包括免疫、能量、疾病、肿瘤等多个方面 ,但以免疫方面最为突出。同时也可由肾阳虚证的分子生物学基础 ,来探讨辨证论治的个体化医学疗效及其评价方法     

运用基因芯片技术分析老龄肾阳虚证与Wnt/β-catenin信号通路的相关性

目的：采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路上基因表达异常间的联系。方法：筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u33Plus2.0基因表达谱芯片,比较两组间在Wnt/β-catenin信号通路上的差异表达基因。结果：芯片数据组间比较后在Wnt/β-catenin信号通路上获得5条差异表达基因。讨论：老龄肾阳虚证的发生与Wnt/β-catenin信号通路的调控紊乱之间有必然联系,衰老机制可能是这一联系的关键。     

骨关节炎肾阳虚证个案的温针疗效及基因表达谱研究

目的　观察温针治疗骨关节炎肾阳虚证患者的临床疗效 ,并以基因芯片研究温针疗效的基因表达谱。方法　筛选出符合西医骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者 1例 ,温针治疗 2周 ,治疗前后取血、提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程 ,获得差异基因表达谱。结果　温针对此例患者的治疗作用达到显效 ,对基因表达的影响涉及免疫、基础代谢、肌肉运动、生长发育和信息传导等多个方面。结论　温针治疗肾阳虚型骨关节炎疗效确切 ;应用基因芯片技术能够同时半定量地研究数千条基因的表达状态 ,可以从微观基因水平研究针刺的整体机制 ,并从分子水平判定其疗效 ,为探讨针灸的作用机制开辟新途径。     

慢性乙型肝炎肝郁脾虚证生物信息学差异研究

目的:应用基因芯片技术研究慢性乙型肝炎肝郁脾虚证与它证的生物信息学差异。方法:应用Affymetrix Gene Chip人类全基因组芯片,分析了9例、3证型慢性乙型肝炎患者(肝肾阴虚型、湿热中阻型、肝郁脾虚型各3例)基因表达谱。通过应用Scanner 3000 7G 4C扫描仪对芯片进行扫描和信号值转换,获得各个中医证型之间的相对表达比值。结果:在检测的全部54676个基因中,中医证型基因表达存在着明显的差异,肝郁脾虚型与肝肾阴虚型、肝郁脾虚型与湿热中阻型比较,表达差异基因均占全基因的0.21%。结论:慢性乙型肝炎在肝郁脾虚证的基因层面上有着异常表达,这可能是临床出现同病异证的生物信息学基础,为其有效预防和治疗提供新的思路。     

慢性阻塞性肺疾病肺气虚证和肺阴虚证患者T淋巴细胞相关基因表达对比研究

目的利用基因芯片研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证和肺阴虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异。方法采集肺气虚证、肺阴虚证患者和健康人的外周血作为实验血样和对照血样。用Ficoll技术分离外周血淋巴细胞,用分选式流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞,并采用一步法提取总RNA,逆转录合成双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA,片断化后,采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交,扫描后筛选出差异表达基因。结果肺气虚证患者/健康人外周血T淋巴细胞相关差异表达基因45条,其中上调41条,下调4条;肺阴虚证患者外周血T淋巴细胞相关差异表达基因32条,其中上调19条,下调13条;肺气虚证组/健康人组和肺阴虚证组/健康人组均高表达的差异基因5条。结论基因芯片技术能有效地研究基因的表达谱,筛查出COPD肺气虚证、肺阴虚证患者T淋巴细胞相关差异基因。     

右归胶囊对肾阳虚大鼠TLR4影响的实验研究

目的：通过检测TLR4在肾阳虚大鼠肾内的表达,为探讨右归胶囊在治疗肾阳虚中可能的免疫学机制奠定基础。方法：健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、干预组,模型组和干预组肌肉注射氢化可的松建立肾阳虚大鼠模型,对照组和模型纽给予生理盐水灌胃,干预纽给予右归胶囊混悬液灌胃。大鼠肾组织常规切片,免疫组化法检测TLR4的在肾脏的表达,Real—timePCR法测定TLR4mRNA的表达。结果：模型组和干预组TLR4蛋白和基因的表达较对照组明显减少,差异有统计学意义（P〈0．05）;干预组和模型组比较,干预组TLR4的蛋白和基因的表达明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）;结论：右归胶囊可能通过调节TLR4的表达,影响机体的免疫功能从而发挥改善机体肾阳虚状态的作用。     

阴虚型去卵巢大鼠下丘脑基因表达谱改变研究

目的:寻找与更年期综合征肾阴虚病变相关的下丘脑基因表达谱特征。方法对雌性大鼠实施去卵巢手术以模拟更年期肾虚病变,在去卵巢手术基础上灌服辛热、温燥、利水中药以模拟肾阴虚病变。提取大鼠下丘脑总RNA,以差异表达2倍作为显著性意义标准,分析差异表达基因。结果:与正常大鼠相比,去卵巢组大鼠下丘脑基因上调1 261个,下调126个;与单纯去卵巢组大鼠相比,阴虚大鼠基因上调1 081个,下调57个;阴虚大鼠与正常大鼠相比,基因上调1 688个,下调115个。结论:发现一些与更年期综合征肾阴虚病变联系性较强的基因表达特征,提供了进一步研究的线索。     

慢性阻塞性肺疾病肺气虚证患者T淋巴细胞差异表达基因的初步研究

目的 通过基因芯片技术研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异基因表达情况。方法 采集肺气虚证和肺阴虚证患者、健康人的外周血作为实验血样和对照血样。采用Ficoll技术分离外周血淋巴细胞、流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞,采用人类全基因表达谱芯片技术筛选出差异表达基因。结果 肺气虚证组／肺阴虚证组和肺气虚证组／健康对照组均高表达的差异基因15条。结论 基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱并初步筛查出COPD肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异表达基因。     

“劳倦过度 房室不节”肾阳虚小鼠睾丸生殖相关基因的研究

目的:应用基因芯片技术探讨"劳倦过度、房室不节"肾阳虚模型小鼠睾丸生殖相关基因的改变,从基因水平上探讨肾阳虚证和"肾主生殖"的本质。方法:连续4周雄雌鼠按比例1:6同笼喂养,每天更换动情期雌鼠,雄鼠每日游泳,建立"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型。用小鼠全基因组Oligo芯片检测对照组和模型组睾丸基因,以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异表达基因,查阅北京博奥生物分子注释系统,进行基因功能分类。结果:成功建立"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型,筛选出大量差异表达基因,其中上调2425个,下调3080个。上调基因前百位中已知基因41个,下调基因前百位中已知基因62个,主要涉及细胞结构/功能、物质/能量代谢、信号转导/传递、炎症/免疫、细胞凋亡、转录/翻译、增殖/分化及细胞周期等。结论:模型小鼠出现与生殖细胞增殖、凋亡、精子发生和运动、能量代谢相关的基因改变,揭示了肾阳虚证及"肾主生殖"的部分实质。     

肺气虚证患者T淋巴细胞相关基因的表达研究

目的：通过基因芯片技术研究肺气虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异。方法：采集肺气虚证和肺阴虚证患者、正常人的外周血作为实验血样和对照血样。采用Fieoll技术分离外周血淋巴细胞、流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞，一步法提取总RNA，逆转录合成双链cDNA，体外转录合成生物素标记的cRNA，片断化后，采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交，扫描后筛选出差异表达基因。结果：肺气虚证患者／正常人外周血T淋巴细胞相关差异表达基因45条，其中上调41条，下调4条；肺气虚证／肺阴虚证患者外周血T淋巴细胞相关差异表达基因43条，其中上调27条，下调16条；肺气虚证组／肺阴虚证组、正常人组均高表达的差异基因15条。结论：基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱，筛查出肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异表达基因。     

尿渗透压与慢性肾脏疾病肾阴虚、肾阳虚证关系的研究

目的 探讨慢性肾脏疾病患者肾阴虚、肾阳虚证与尿渗透压之间变化的规律,为临床中医辨证、肾功能判断提供客观依据.方法 对121例中医辨证为肾阴虚、肾阳虚证的慢性肾脏疾病患者的尿渗透压、肾功能等进行了检测,分析其之间的关系以及与中医症状积分之间的关系.结果 慢性肾脏疾病患者的尿渗透压和肾功能结果与肾阴虚、肾阳虚有关,且尿渗透...