K562细胞未知基因KH的开放阅读框架在大肠杆菌中的表达

目的:构建K562细胞未知基因KH的开放阅读框架（openreadingflame,ORF）的原核表达体系。方法:采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架（KH-ORF）的表达载体pCI-neo-KH-ORF,热休克法转化大肠杆菌BL21（DE3）plysS,IPTG诱导后,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达。结果:经IPTG诱导0.5h后KH-ORF在BL21（DE3）plysS中获得表达,表达产物以包涵体形式存在,分子产量约24kD。结论:成功构建了KH-ORF的原核表达体系,为进一步研究其功能奠定了基础。     

未知基因KH与公共生物信息资源的比较与分析

目的 快速分析K562细胞中未知基因KH的结构与功能。方法 以mRNA差异显示技术筛选的K562细胞在0．2mg／ml苦参碱诱导前、后3小时的差异基因为研究对象，采用基因片段的碱基序列与Internet网上多种公共生物信息数据库进行比较，分析未知基因KH的结构与功能。结果 对其中的4个片段进行序列分析和同源性比较，有3个基因片段与已知蛋白或蛋白酶的碱基序列完全或高度同源；有1个基因片段除与16号染色体高度同源外，与其它数据库均无显著同源性，暂命名KH基因。结论 KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的候选新基因。     

苦参碱对K562细胞增殖及凋亡相关分子表达的影响

目的 研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法 苦参碱（0.2mg/ml）作用于K562细胞,每日计数白细胞、计算抑制率;流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响;电子显微镜观察凋亡细胞形态;Western blot检测BCL－6及增列细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果 苦参碱对K562细胞有明显的抑制作用,用药72h的细胞增殖抑制率达69％;用药5d后,G1期细胞明显增多,高达58.5%,68％的细胞发生凋亡。电子显微镜可观察到苦参碱诱导的早、中、晚期K562凋亡细胞;BCL－6表达增强,PCNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制K562细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与细胞增殖周期受阻及PCNA表达下降、BCL－6表达增加有关。     

人类疱疹病毒8型K8.1基因真核表达载体的构建与表达

目的 构建和表达人类疱疹病毒8型(HHV-8)K8.1基因真核表达载体.方法 聚合酶链反应(PCR)法从HHV-8感染细胞BCBL-1细胞总DNA中扩增HHV-8 K8.1全长基因;克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+);将重组K8.1+pcDNA3.1真核表达载体转染人胚肾细胞293细胞,提取总RNA,反转录PCR(RT-PCR)检测重组K8.1+pcDNA3.1真核表达载体在293细胞中的mRNA.结果 经测序,克隆的K8.1基因序列与GenBank中登记的K8.1基因100%同源;RT-PCR法检测在约370 bp位置出现条带,与预期的369 bp大小一致.结论 HHV-8 K8.1基因真核表达载体构建成功,并可在293细胞中表达.     

Notch1过表达对K562细胞增殖及其周期的影响

目的 研究外源性Notch1过表达对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖和细胞周期的影响.方法 用脂质体将携带Notch1胞内段(ICN1)的质粒转染入K562细胞,倒置相差显微镜观察转染前后K562细胞形态学变化,RT-PCR 和Western blot检测Notch1 mRNA和蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖,...     

哌唑嗪对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究α1受体拮抗剂哌唑嗪在体外对K562白血病细胞系增殖及凋亡的影响。方法：采用四唑盐（MTT）比色实验、集落形成实验为指标观察哌唑嗪对K562细胞增殖作用的影响;采用细胞形态学、Hochset33258荧光染色实验、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：哌唑嗪能抑制K562细胞的增殖,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。在5×10-6mol/L哌唑嗪作用下,K562细胞在形态学上可以看见凋亡细胞;流式细胞术也可检测到凋亡峰。结论：哌唑嗪能抑制K562白血病细胞的增殖,并能诱导其凋亡。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

大蒜素对人红白血病细胞株K562细胞增殖的影响

目的 研究大蒜素对人红白血病K562细胞增殖的影响.方法 用不同浓度的大蒜素处理对数生长期的K562细胞,通过形态学观察、瑞氏染色、MTT比色法,观察大蒜素对K562细胞增殖的影响.结果 562细胞在大蒜素作用后,出现凋亡的形态学改变;MTT比色法测定显示大蒜素能明显抑制K562细胞的增殖,并且抑制率随浓度增加和作用时间延长而升高.结论 大蒜素对K562细胞有明显的增殖抑制作用.     

三氟拉嗪诱导白血病细胞系K562分化的实验研究

目的 观察三氟拉嗪对白血病细胞系K562的诱导分化作用.方法 采用液体培养、MTT和集落培养实验观察三氟拉嗪对K562细胞增殖的影响,同时采用联苯胺染色观察细胞内血红蛋白含量变化,并采用流式细胞术检测CD71分化抗原,以评价三氟拉嗪对K562细胞的诱导分化作用.结果 三氟拉嗪可上调K562细胞膜CD71分化抗原的表达量,升高细胞内血红蛋白含量,并抑制K562细胞增殖.结论 三氟拉嗪具有诱导K562细胞分化的作用.     

缩氨基硫脲衍生物JOH-1对K562细胞增殖的影响

目的探讨JOH-1对体外培养人白血病K562细胞株增殖的影响。方法以JOH-1为研究对象,采用细胞体外培养技术,MTT法和台盼蓝拒染法检测JOH-1对K562细胞株增殖抑制。结果不同浓度的JOH-1作用于K562细胞12、24、48h后对K562细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;生长曲线显示JOH-1使K562细胞的生长受到明显抑制。结论 JOH-1对体外培养人白血病K562细胞株的增殖有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。     

甘草次酸对白血病细胞株K562增殖及其分化的影响

目的探讨甘草次酸（GA）对白血病细胞株K562增殖和分化的作用。方法采用液体培养实验、MTT法、集落培养实验观察GA对K562细胞增殖的影响；采用联苯胺染色法观察细胞内血红蛋白含量变化，采用流式细胞术检测CD71分化抗原评价GA对K562细胞的诱导分化作用。结果GA可明显抑制K562细胞生长、MTT值、集落生长，并呈浓度依赖性；GA可升高细胞内血红蛋白含量，同时上调K562细胞膜CD71分化抗原的表达量。结论GA具有抑制K562细胞增殖和诱导其分化的作用。     

人参总皂甙对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

采用细胞体外培养,流式细胞术、形态学观察、组化与免疫细胞化学等方法,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对Ｋ＿６５２细胞增殖与分化的影响。结果表明：ＴＳＰＧ对Ｋ＿５６２细胞增殖具有明显的抑制作用,并能阻止Ｋ６５２细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｇ２／Ｍ＋Ｓ期过渡：经２００μｇ／ｍｌ的ＴＳＰＧ诱导后,Ｋ５６２细胞形态趋向成熟分化;联苯胺染色、糖原染色和ＨＩＲ２．ＣＤｗ４１阳性表达细胞数显著提高,且阳性强度增加。推测ＴＳＰＧ是能抑制白血病细胞增殖并诱导其分化的天然诱导剂,但对其机理有待进一步探讨。     

苦参碱对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：观察苦参碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：以K562细胞为实验对象,采用体外培养技术,通过细胞生长曲线、细胞形态、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定方法观察苦参碱的作用。结果：浓度为0．2－0．3mg/ml的苦参碱对K562细胞有明显的增殖抑制与诱导分化作用,实验组细胞的数量,形态和生化代谢都发生了变化。结论：这一结果将对白血病的诱导分化治疗提供有力的实验依据。     

bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建bcr/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/ablmRNA和P210蛋白的影响。方法根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶启动子H1的真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/ablmRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达。结果构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24h后,pTER117、pTER363分别使bcr/ablmRNA的相对水平下降52%、43%,使P210蛋白分别下降47%、40%。结论bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达。     

阿糖胞苷减少白血病细胞亮氨酸氨基肽酶的表达

目的研究化疗药物阿糖胞苷对白血病细胞K562细胞亮氨酸氨基肽酶(leucine aminopeptidase,LAP)表达的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法阿糖胞苷(终浓度442μmol/L)处理细胞48 h,倒置显微镜下观察细胞形态改变及细胞凋亡数目,RT-PCR方法检测LAP基因mRNA的表达。结果阿糖胞苷处理细胞48 h后,倒置显微镜下观察到细胞形态发生明显改变,凋亡细胞数显著增多;LAP基因mRNA的表达(0.429±0.061)明显低于对照组(0.789±0.059)(P<0.05)。结论减少白血病细胞株LAP的表达可能是阿糖胞苷致白血病细胞凋亡的机制之一。     

人参多糖对K562细胞基因表达谱的影响

目的 利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法 人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线性扩增标记,与Illumina全基因组表达谱基因芯片杂交,采用生物信息学方法分析人参多糖处理后K562细胞基因表达谱的改变。结果 共发现差异基因306个,其中上调基因220个,下调基因86个,并对其进行生物学功能分类。结论 诱导肿瘤细胞分化是多基因作用的综合结果,筛选的基因对研究肿瘤发生、发展与逆转分化,以及寻找潜在的抗肿瘤药物作用靶点可能有意义。