融合表达的副溶血弧菌不耐热性溶血毒素包涵体复性的研究

目的 构建融合表达载体,获得具有生物活性的副溶血弧菌不耐热性溶血毒素。方法 克隆tlh基因,构建表达载体pET32a+/tlh,融合表达副溶血弧菌不耐热性溶血毒素,用8 mol/L的尿素溶解包涵体,亲和层析纯化目的蛋白,采取逐步透析、降低蛋白浓度、加入氧化还原剂等复性方法。结果 复性蛋白具有溶血活性及免疫原性。结论 通过克隆tlh基因,构建融合表达载体pET32a+-tlh,采取纯化、复性方法,获得具有融血活性及免疫原性的副溶血弧菌不耐热性溶血毒素。     

副溶血性弧菌直接溶血毒素和溶血相关毒素的研究进展

副溶血性弧菌 (vibrioparahaemolyticus,Vp)是一种嗜盐性细菌 ,最早于 1 95 0年在日本发生的一次暴发性食物中毒中发现并分离成功 ,以后便经常从食物中毒患者中分离出。该菌主要存在于近海岸的海水、海底沉积物及鱼贝类等海产品中 ,是日本、美国和东南亚国家食物中毒和急性腹泻病的重要病原菌 ,在日本约占全部食物中毒的 40 %～ 60 % ,也是我国沿海地区及台湾地区食物中毒中最常见的一种病原菌。同时 ,该菌也是引起旅游者腹泻的重要病原菌之一 ,日本Osaka和Kansai机场卫生检疫站从出国旅游的 84777例腹泻患者中 ,检出副溶血弧菌感染者 1 9…     

产耐热溶血毒素副溶血弧菌耐药性调查

目的：了解临床引起急性腹泻的副溶血弧菌产耐热溶血毒素的（TDH）情况和耐药现状。方法：用常规方法对临床大便标本进行培养及分离．Vitek-2全自动微生物仪进行鉴定,TDH用我妻培养基检测,药物敏感性试验采用K-B法（结果参照NCCLS肠杆菌科标准判读）。结果：①分离出的167株副溶血弧菌中96．4%（161／167）产耐热溶血毒素;②副溶血弧菌对临床常用23种抗生素的体外抗菌活性除了氨苄西林、头孢唑林、头孢噻吩、头孢呋新较低,敏感率小于10．6％,其他均较高,敏感率在84．5％以上。结论：引起急性腹泻的副溶血弧菌大部分都产TDH,临床常用的抗菌素时其均有较好的体外抗菌活性。     

副溶血性弧菌溶血相关毒素基因原核融合表达载体的构建

目的:实现副溶血性弧菌溶血相关毒素TRH基因在大肠杆菌中的融合表达,以获得纯度较高的蛋白产物。方法:构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ(trh/pGEX—3X/DE3),并在31℃条件下,用0.6mmol/L IPTG诱导表达。用SDS-PAGE分析蛋白表达。结果:PRⅡ在上述条件下诱导后,目的蛋白呈高效、可溶、融合性表达。薄层扫描显示,细菌的周质腔中的蛋白量最高,SDS-PAGE表明,融合蛋白的相对分子量(Mr)为49Kda,与预期结果一致。结论:trh基因在原核融合表达系统pGEX-3X/DE3中获得成功表达,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、构建基因工程菌苗、阐明该菌的致病机制奠定了基础。     

副溶血性弧菌耐热直接溶血毒素基因的克隆

目的探讨克隆副溶血性弧菌（Ｖｐ）耐热直接溶血毒素基因的方法。方法用ＰＣＲ技术扩增目的基因,双酶切载体 ｐＵＣ１９和目的基因 ＤＮＡ,连接并转化大肠杆菌 ＪＭ１０９。对重组质粒进行 ＰＣＲ鉴定、酶切鉴定和序列分析。结果凝胶电 泳显示,标准株Ｖｐｌ４－９０基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ产物长约６００ ｂｐ。阳性克隆的ＰＣＲ产物也为一长约６００ ｂｐ）的条带,经双 酶切可切出一约 ６００ ｂｐ的条带。 ＤＮＡ 测序结果表明与 Ｇｅｎｅｂａｎｋ中的序列有 ９９．６５％的同源性。结论利用该方法成功 克隆了目的基因,为制备用于现场检测的基因探针和Ｖｐ的保护性菌苗以及阐明Ｖｐ的致病机理奠定了基础。     

副溶血性弧菌耐热直接溶血毒素基因的克隆

目的 探讨克隆副溶血性弧菌（Vp）耐热直接溶血毒素基因的方法。方法 和PCR技术扩增目的基因,双酶切载体pUC19和目的基因DNA,连接并转化大肠杆菌JM109。对重组质粒进行PCR鉴定、酶切鉴定和序列分析。结果 凝胶电泳显示,标准株Vp14-90基因组DNA的PCR产物长约600bp。阳性克隆的PCR产物也为一长约600bp的条带,经双酶切可切出一约600bp的条带。DNA测序结果表明与Genebank中的序列有99.65%的同源性。结论 利用该方法成功克隆了目的基因,为制备用于现场检测的基因探针和Vp的保护性菌苗以及阐明Vp的致病机理奠定了基础。     

包涵体蛋白复性的研究进展

包涵体是指外源重组蛋白在细胞内凝集的无活性的固体颗粒。经分离、洗涤除去一些膜蛋白或膜碎片后,用适宜试剂溶解,如高p H值加低浓度的尿素缓冲液、不同羟基的醇类或含小分子的变性剂。传统的稀释、透析等复性方法效率一般较低,目前可通过高静水压、沸石的高通量筛选及高通量筛选结合实验设计软件的方法提高复性效率。希望可以找到一种适于所有重组蛋白的高效、简便的复性方法,实现不易获得的外源重组蛋白简易的规模化生产。     

副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因的序列分析

目的:利用PCR技术扩增副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因，对tlh基因进行生物信息学分析。方法:利用PCR技术扩增tlh基因，克隆至载体pET32a^ 并测序。将测序结果提交国际互联网上有关生物信息网站进行生物信息学分析。结果和结论:测序结果tlh14-90被GenBank收录，登录号为AY289609。tlh14-90全长1257bp，与国际标准株WPI的同源性为99%，含有启动子和密码子，预测其编码一个含418个氨基酸的蛋白质(TLHl14-90)，分子式为C2131H3184N548O649S16，相对分子质量47392．9，理论等电点pI为4．92，丙氨酸、亮氨酸和天冬酰氨的含量分别为11．0％、7．4％和7．2％．含有4个半胱氨酸(Cys)，κ—D法推算的疏水性参数为-34。预测其二级折叠结构为α/□蛋白，三级结构未给出。     

两起因副溶血弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的 分析两起食物中毒中副溶血性弧菌分离株的分子分型、耐药性特点,以揭示深圳市龙华区副溶血性弧菌的分子流行特征.方法 对该两起食物中毒事件分离到的28株副溶血弧菌(其中5株分离自2019年5月15日食物中毒患者肛拭子,另外23株分离自2019年9月1日食物中毒患者肛拭子、厨师肛拭子、食物及环境样品)进行血清学分型,PC...     

副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因的序列分析

目的 利用PCR技术扩增副溶血弧菌不耐热溶血毒素tlh基因,对tlh基因进行生物信息学分析。方法 利用PCR技术扩增tlh基因,克隆至载体pET32a⁺ 并测序。将测序结果提交国际互联网上有关生物信息网站进行生物信息学分析。结果和结论 测序结果tlh14-90被GenBank收录,登录号为AY289609。tlh14-90全长1257bp,与国际标准株WP1的同源性为99%,含有启动子和密码子,预测其编码一个含418个氨基酸的蛋白质(TLH14-90),分子式为C₂₁₃₁H₃₁₈₄N₅₄₈O₆₄₉S₁₆,相对分子质量47392.9,理论等电点pI为4.92,丙氨酸、亮氨酸和天冬酰氨的含量分别为11.0%、7.4%和7.2%,含有4个半胱氨酸(Cys),κ-D法推算的疏水性参数为-34。预测其二级折叠结构为α/□蛋白,三级结构未给出。     

副溶血性弧茵耐热直接相关溶血素基因的克隆与序列分析

目的探讨克隆副溶血弧菌(Vp)耐热直接相关溶血素基因的方法.方法用PCR技术扩增目的基因双酶切载体pGEX-3X和目的基因DNA,连接并转化大肠杆菌DH5α.对重组质粒进行PCR鉴定、酶切鉴定和序列分析.结果凝胶电泳显示,标准株Vp14-91基因组DNA的PCR产物长约600 bp.阳性克隆的PCR产物也为一长约600 bp的条带,经双酶切可切出一约600bp的条带.DNA测序结果表明与GenBank中的序列有99.1%的同源性.结论利用该方法成功克隆了目的基因,为制备用于现场检测的基因探针和Vp的保护性疫苗以及Vp的致病机制研究奠定了基础.     

副溶血性弧菌耐热直接相关溶血素基因的克隆与序列分析

目的：探讨克隆副溶血弧菌（Vp）耐热直接相关溶血素基因的方法。方法：用PCR技术扩增目的基因，双酶切载体pGEX-3和目的基因DNA，连接并转化大肠杆菌DH5α。对重组质粒进行PCR鉴定、酶切鉴定和序列分析。结果：凝胶电泳显示，标准株Vp14-91基因组DNA的PCR产物长约600bp.阳性克隆的PCR产物也为一长约600bp的条带，经双酶切可切出一约600bp的条带。DNA测序结果表明与GenBank中的序列有99．1％的同源性。结论：利用该方法成功克隆了目的基因，为制备用于现场检测的基因探针和Vp的保护性疫苗以及Vp 的致病机制研究奠定了基础。     

Fulminant necrotising fasciitis caused by Vibrio parahaemolyticus

We report a patient with septicaemia and fulminant necrotising fasciitis caused by Vibrio parahaemolyticus. This organism is strongly associated with seawater exposure and seafood ingestion. The patient recovered due to expedient management, prompt recognition of the organism, appropriate antimicrobial cover and surgical debridement. The lesson to be learned is that this organism should be clinically suspected and recognised from its typical history of injury and fulminant clinical progress as a delay in diagnosis and treatment may result in an increased risk of mortality.     

一起副溶血性弧菌引起的食物中毒调查分析

目的对一起集体单位食堂发生的副溶血性弧菌引起的食物中毒进行调查分析,为此类事件的处理和防控提供科学依据。方法采用流行病学调查、现场卫生学调查、实验室检测对本次食物中毒进行调查分析,病例对照研究分析事件的原因和可疑危险因素。结果本次食物中毒报告病例66例,总体罹患率为23. 7%;主要临床症状为腹泻、腹痛、呕吐伴乏力、发热,潜伏期集中在9～48 h,2例病例和1名凉菜厨师便标本中分离出的副溶血性弧菌为高度相关株。结论本次食物中毒为一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒,主要原因可能是食堂从业人员操作不当,建议加强食品安全监管,开展食品安全和卫生知识宣教,提高餐饮业自我管理能力,增强责任意识,防止类似事件发生。     

一起多种型别副溶血弧菌引起食物中毒的实验室检测

目的对一起可疑食物中毒的病原菌进行实验室检测。方法依据GB/T4789-2003《食品卫生微生物检验》进行肠道致病菌的检测,同时采用实时荧光定量PCR的方法,共同鉴定病原菌。结果选取的6份样本中,有5份副溶血弧菌PCR结果为阳性,16份病人肛拭子中有11份分离出副溶血弧菌,生化反应呈三种模式,血清学分型亦有K6、K41和K56三种。结论该起食物中毒是由多种型别副溶血弧菌引起。     

关于一起副溶血性弧菌引起的食物中毒流行病学调查报告

目的为明确2010年7月31日发生于大连市某宾馆的一起食物中毒的病因与来源。方法流行病学调查与病原细菌的分离鉴定。结果采集现患病例肛拭子6份、呕吐物1份、粪便1份;厨师肛拭子和手拭子各4份;外环境标本3份（菜刀1份,砧板1份,操作台1份）;留样食品标本12份。在4份病人标本（3份肛拭子、1份粪便）、留样食品辣炒蚬子等5份样品中检出副溶血性弧菌。结论根据流行病学调查及实验室检验结果,判断本起食物中毒为食用被副溶血性弧菌污染的辣炒蚬子引起。