HCV抗体酶联免疫诊断试剂的质量评价

目的评价抗-HCVEIA诊断试剂盒的质量。方法应用ELISA法对抗-HCV国家标准品血清盘、临床科研血清盘、临界值质控血清等进行检测，考评抗-HCV诊断试剂盒质量。结果6种厂家试剂均符合国家标准品血清盘判读标准，均能检出2NCU／ml定值质控血清，但测出S／CO比值的差异很大。用临床科研血清盘检测，其试剂的灵敏度、特异性、总符合率存在差异（χ^2=3．91，P〈0．05）。结论不同厂家试剂质量仍存在差异，综合评价，优选试剂，有利于控制和减少丙型肝炎的输血传播。     

ELISA法检测HBsAg影响结果的重要因素的分析

目的确定温育温度、时间和条件对定性酶联免疫吸附试验（ELISA）测定结果的影响，为临床检验提供最佳方案。方法温育温度分别设为37℃组和室温组。37℃组温育时间分别为45分钟、60分钟、75分钟、90分钟和120分钟。其中室温组温育中又分别采用振荡和静置两种条件，温育时间分别为45分钟、1小时、2小时和4小时。检测阴性血清和0．2、0．5、1、2、5ng／ml HBsAg系列定值血清，观察这些条件下标本测定S／CO比值的差异。结果在同一温育温度下，所有被检血清的S／CO比值均随着测定温育时间的延长而增大，浓度越低表现越为明显，以0．2ng／ml的样本，温育2小时的S／CO比值与温育1小时相比，均有明显的增加，0．2ng／ml的样本由按CUT-OFF值判断为阴性而转为阳性。对照组阴性血清的S／CO比值在温育各时间则变化不大。室温组在振动状态下反应较之静止状态下的反应，S／CO比值均有明显增加。结论温育条件对ELISA测定结果有很大影响，尤其是弱阳性标本，由于温育条件不当会造成假阴性，增加传染机率。     

时间分辨荧光免疫分析检测乙肝病毒血清学标志物的临床评价

目的 对时间分辨荧光免疫技术(TRFIA)定量检测乙型肝炎病毒(HBV)五个血清学标志物进行临床评价。方法用TRFIA法和酶免法(EIA)对定值样品和296份临床标本同时测定，对二种方法的结果进行比较分析。结果 TRFIA检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe和抗HBc的灵敏度分别为0．2ng／ml、10mlU／ml、0．05Ncu／ml、2Ncu／ml和0．2Ncu／ml；对296份临床血清测定，除HBeAg外，其余4个指标检测阳性率均大于EIA，两个高浓度HBsAg血清EIA法阴性，但TRFIA为阳性。结论TRFIA较EIA更为敏感；TRFIA在一定程度上可克服EIA法中的高剂量钩状效应。     

化学发光免疫分析检测丙型肝炎病毒抗体与重组免疫印迹试验确证阳性的关联研究

目的：探讨化学发光免疫分析（CLIA）检测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）与重组免疫印迹试验（RI-BA）确证结果的关系。方法对10309例在山东大学附属省立医院就诊的门诊及住院患者采用 CLIA 法进行抗-HCV 检测，对检测为有反应性的标本通过 RIBA 作进一步确证。结果CLIA 初筛抗-HCV 抗体有反应性的标本共计106例，采用 RIBA 试剂对106例反应性标本进行检测，确认阳性37例、不确定28例、阴性41例，确认阳性比例为34．91％，且确认阳性标本比例与 S/CO 比值呈正相关。确证阳性标本条带检出率有差别，Core 检出率最高，其次依次为 NS3、NS4、NS5。结论确证结果与确证的条带分布有关，可根据 CLIA 法 S/CO 比值预测确证结果，有利于对结果进行正确和合理解释。     

丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试验阳性判断值在献血员血液筛检中的意义

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)测定阳性判断值(Cut-off)“灰区”在献血员血液筛检中的应用价值。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了503份抗-HCV ELISA测定为阴性的献血员血清(浆)标本的HCV RNA。如HCV RNA检测为阳性，则使用重组免疫印迹(RIBA)方法进一步检测抗HCV。结果在503份抗-HCV ELISA阴性献血员血清(浆)标本中，发现有5份HCV RNA阳性，其中2份标本抗HCV ELISA测定S/CO比值小于0．5，RIBA结果均为阴性。另外3份抗HCV阴性(ELISA检测的S/CO值在0．8-0．9之间)但HCV RNA为阳性的献血员血标本，进一步进行RIBA检测，发现其中2份为抗核心区(C22)单独阳性，另外1份为抗NS3单独阳性。阳性标本HCV RNA的含量测定均约为10^4拷贝/ml。结论为尽可能减少输血后HCV感染的发生，有必要将抗-HCV ELISA测定的Cut-off值下移20％，因为S/CO比值接近Cut-off值的血液有很大可能为HCV感染者。     

溶血标本使用国产HBsAg酶免试剂可用于常规分析

目的 观察标本不同程度溶血对国产两步法乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂检测结果的影响.方法 收集HBsAg阴性和阳性已确定的血液标本各3例,并将其分别作为HBsAg阴性组和阳性组.标本人为处理为无、轻、中、重度溶血,用3种国产HBsAg ELISA试剂对其进行重新检测,分析溶血后标本吸光度值与临界值的比值（S/CO值）的变化.结果 在HBsAg阴性标本中,不同浓度的溶血标本未检出阳性,S/CO值无明显改变（P〉0.05）;在HBsAg阳性标本中,不同浓度的溶血标本和无溶血的标本比较,S/CO值也无明显变化（P〉0.05）.结论 国产两步法HBsAg ELISA试剂可用于溶血标本的常规检测.     

不同孵育条件对HBsAg定性分析的影响

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）中不同孵育条件对乙肝表面抗原（HBsAg）检测结果的影响。方法采用ELISA方法分析孵育温度（25℃、37℃）、时间（30、60、90、120min）、方式（25℃振荡和静止）对检测不同浓度HBsAg（0、0．2～0．5ng／mL、1．0ng／mL）标本吸光度／临界值（S／CO）的变化。结果在同一温度下,标本从0．2～1．0ng／mL的S／CO随孵育时间延长而增加。对于0．2ng／mL标本孵育30min、60min按照判断标准结果呈阴性,而孵育90、120min结果转为阳性。孵育时间不同对阴性标本S／CO基本无影响。在同一时间、同一浓度下,25℃孵育振荡方式S／CO值较静止方式明显增加。结论不同孵育条件对ELISA定性测定HBsAg结果有影响,尤其对弱阳性标本。     

化学发光免疫分析检测抗-HCV 抗体与 HCV-RNA 的关联研究

目的：分析实时荧光定量 PCR 检测 HCV-RNA 载量与化学发光免疫分析（CLIA）检测抗-HCV 抗体的相关性。方法抽取 CLIA 法抗-HCV 检测有反应性标本587例,采用实时荧光定量 PCR 进一步检测 HCV-RNA。结果荧光定量 PCR 检测 HCV-RNA,阴性225例,阳性362例,阳性率为61．67％,且阳性标本比例与 CLIA 法 S/CO 比值呈正相关。结论HCV-RNA阳性率与 CLIA 法 S/CO 比值呈正相关,可根据 S/CO 比值预测 HCV-RNA 结果。     

液态蛋白芯片技术在抗-HCV、抗-TP检测中的应用

目的建立液态蛋白芯片联合检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体和梅毒螺旋体(TP)抗体的方法,并采用已知标准品进行评估。方法 HCV和TP重组抗原分别包被在不同的羧基化珠子上,应用免疫间接法原理建立液态蛋白芯片检测抗-HCV和抗-TP的方法。利用建立的方法检测标准血清盘标本和已知结果的标本,并评估方法的敏感性和特异性。结果液态蛋白芯片法检测抗-HCV灵敏度达到1 NCU/ml,抗-TP灵敏度达到2 NCU/ml。在标准血清盘中,抗-HCV阳性符合率24/24,阴性符合率16/16;抗-TP阳性符合率19/23,有4份IgM阳性标本未检出,阴性符合率17/17。在收集的60份阳性标本、2 000份阴性标本中,抗-HCV阳性符合率100%,阴性符合率分别为99.5%。抗-TP阳性和阴性符合率均为100%。结论建立的液态蛋白芯片方法操作简便、快速,可同时检测抗-HCV和抗-TP。     

RhD阴性供者健康状况实验室检测方法的选择

目的探讨RhD阴性供者传染病标志物的实验室检测方法的反应性,为RhD阴性献血者传染病标志物、实验室检测方法的选择提供依据。方法（1）利用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对孝感地区232279例献血者进行血清丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）及梅毒抗体（抗-TP）检测,其结果呈阳性的样品进一步用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）确认分析;（2）利用赖氏法或速率法对献血者血清作丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测;（3）利用微板法对献血者作RhD血型筛查,对RhD阴性的标本进一步用美国DBL公司单克隆抗体试剂确认。结果232279份血清标本抗-HCV、抗-HIV、HBsAg、抗-TP及ALT阳性检出率分别为1．52％（3540／232279）、0．004％（1／232279）、4．20％（9752／232279）、0．06％（137／232279）及2．72％（6321／232279）;RhD血型筛查的确认阴性率为0．32％（746／232279）和0．30％（700／232279）。结论ELISA法、速率法对RhD阴性供者传染病指标及ALT检测无1例漏检,灵敏度高,特异性强,结果准确,可作为献血者传染病检测的实验室方法。微板法检测RhD血型具有快捷、灵敏、结果准确、经济等特点,适合RhD血型的大规模筛查。     

两种试剂检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中的意义

目的提高丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）检出率和检测结果的准确率。方法应用两个厂家抗-HCV ELISA试剂（试剂①、②）检测本院2006年1～12月间2516份输血、手术前住院患者血清标本。再将试剂①、②均阳性的血清标本28份、仅试剂①阳性的15份和仅试剂②阳性的17份血清标本进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果试剂①、②抗-HCV均阳性28份标本的RT—PCR结果均阳性,仅试剂①抗-HCV阳性的15份标本中2份阳性,试剂②抗-HCV阳性的17份标本中3份阳性;仅试剂①或②抗-HCV阳性的32份血清标本中,HCV RNA RT—PCR检测阳性率为15．63％。结论采用双试剂检测能提高抗-HCV的检出率和结果的准确率。     

HBsAg定性测定室内质控物浓度的选择

目的探讨定性ELISA测定的室内质控血清浓度的选择方法。方法根据系列HBsAg质控血清的浓度与其测定S／CO值的关系,得到线性回归直线方程Y=a＋bX及其相关系数r。选择计算得到的S／CO值减去3倍批间CV与该S／CO值的乘积仍大于1的质控物作为判断实验室测定重复性室内质控用。结果质控血清0～2ng／ml与其检测的S／CO值之间呈高度相关。1ng／ml质控血清可作为测定重复性使用,0．5ng／ml质控血清作为监测试剂下限使用。结论定性ELISA试剂本身的阴性、阳性对照只能检测其实验的有效性,无法监测灵敏性及测定下限的变化,必须使用弱阳性质控血清进行室内质控,并依据统计学直线回归与相关分析,科学地选用质控物浓度,保证实验的准确性。     

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒的诊断性能评价

目的 通过与Ortho3．0丙型肝炎病毒（HCV）抗体诊断试剂盒比较，分析评价EIAgenHCV抗体诊断试剂盒（EIAgen）的诊断性能。方法应用考核试剂EIAgen和参比试剂Ortho3．0HCV抗体诊断试剂盒对2881份样本进行检测，检测结果不一致时，应用重组免疫印迹试验（RIBA）确证试剂RIBAHCV3．0或核酸试验（NAT）确证试剂进行确证，以对结果进行综合分析。结果2881份样本中，考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性，且参比试剂的测量值／临界值（S／CO）≥3．8，或检测结果符合确证试验阳性结果的阳性标本为274份，考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性且参比试剂的S／CO〈3．8为59份，阴性标本2539份，不确定的9份被剔除。考核试剂检测真阳性274份，无假阴性结果；真阴性2527份，假阳性12份。考核试剂敏感度为100％，高于参比试剂的98，91％；特异度为99．53％，略低于参比试剂的99．88％。考核试剂对部分国内常见HCV基因型（1a型、1b型、2a型、3型和6型）样本27份，均为真阳性，敏感度为100％，对于非HCV感染的病毒性肝炎、自身免疫性疾病及妊娠样本具有良好的特异度，特异度均为100％。溶血、脂血样本对考核试剂检测结果无影响。考核试剂阳性预测值为95．80％，阴性预测值为100％，准确性为99．57％。考核试剂S／CO≥5．9的样本301份，其中用参比试剂检测S／CO≥3，8占88．70％；考核试剂S／CO〈5．9的29份，其中用参比试剂检测S／CO〈3．8占86．21％。结论EIAgen敏感度100％，特异度较好，是一种优秀的检测抗-HCVEIAgen试剂，尤其适用于阳性样本的筛选。采用EIAgen试剂检测样本，当S／CO≥5．9时，样本的阳性预测值较高。     

两种抗凝剂对血液免疫项目ELISA法检测结果的影响

目的探讨两种抗凝剂对血液免疫项目ELISA法检测结果的影响。方法留取EDTA-K2和肝素钠抗凝标本126人份，用两种试剂同时对血液免疫四项ELISA检测，对其中11人分HBsAg检测结果呈反应性标本进行血液辫子确认。结果EDTA—K2和肝素钠抗凝标本126人份中，EDTA．K2抗凝标本HBsAg检测结果新创试剂有4人份呈反应性（S／CO〉1）占3．17％（4／126），万泰试剂呈反应性标本7人份占5．55％（7／126），肝素钠抗凝标本均为阴性，经留血液辫子对11人份呈反应性标本用两种试剂重新检测HBsAg，结果为阴性．结论EDTA-K2抗凝剂对ELISA法检测HBsAg结果有影响。     

用酶联免疫夹心法测定肝炎患者血清丙型肝炎抗原

目的建立血清中丙肝病毒NS3抗原（HCAg-NS3）的酶免检测方法。方法以特异性强、敏感度高、识别不同HCAg-NS3抗原表位的HCAg-NS3单克隆抗体和高效价的纯化抗-HCV分别作为包被抗体和酶标记抗体，采用夹心ELISA法测定血清中HCAg-NS3抗原。结果优化了酶免疫反应条件；该方法对HCAg-NS3的最低检测限为1—2ng／ml；批内（n=13）及批间（n=3）变异系数（CV）分别为4．51％和5．64％；对52例抗-HCV阳性血清测定HCAg-NS3抗原的检出率为21．2％，对15例HCAg-NS3阳性标本测定HCV RNA的检出率为60％，1350例抗-HCV阴性的其他类型肝炎患者血清标本中，HCAg-NS3检出率为1．7％，50例正常人血清标本的HCAg-NS3抗原测定结果均为阴性。结论该方法敏感性较高，特异性、重复性和稳定性均良好，可以作为早期诊断HCV感染的有效方法。     

23 547例患者择期手术和/或输血前4项指标检测

目的了解择期术前和／或输血前患者的HBsAg、抗-HCV、TP—ELISA和抗-HIV 1／2单项或多项重叠感染情况。方法收集2002年2月-2005年12月在本院所有拟手术和／或输血患者的血清．采用ELISA法检测。结果23547例受检标本中有3312例检出1顶或多项阳性,阳性率达14．07％。其中HBsAg阳性2535例（10．77％）;抗-HCV阳性396例（1．68％）;TP—ELISA阳性357例（1．52％）;抗-HIV 1/2阳性24例（0．10％）。多项重叠阳性116例（0．49％）,以HBsAg和TP重叠感染、HBsAg和抗-HCV重叠感染居多,分别为57例（49．14％）、42例（36．21％）。结论对择期手术和／或输血的患者进行4项指标检测,是对患者、医院和供血单位三方同时负责,对减少医疗纠纷有重要意义。     

荧光定量PCR检测HCV—RNA和ELISA检测抗-HCV的比较

目的分析血站开展HCVRNA检测的必要性。方法对48份抗-HCV阳性标本（s／co≥1）、19份抗-HCV灰区可疑标本（0．8≤s／co〈1）及1000份抗-HCV阴性标本（s／co〈0．8）进行FQ—PCR检测。结果三类标本HCV RNA阳性数分别为30例、5例、2例。结论在ELISA检测抗-HCV基础上加做HCV RNA核酸检测，有助于保证输血安全。     

乙型肝炎病毒血清标志物GICA检测性能的比对分析

目的评估乙型肝炎病毒血清标志物（HBV—M）胶体金免疫层析法（GICA）的分析性能。方法收集雅培i1000免疫检测系统检测的HBV—M阳性标本653例、阴性标本103例和HBV—M标准品,以化学发光免疫测定法（CLIA）检测结果为标准,分别用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂和5种GICA试剂检测,统计分析检测结果。结果检测HBV—M敏感性：ELISA和GICA检测HBV—M的最低检测限分别为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）0．5IU／mL和4～8IU／mL、乙型肝炎表面抗体（抗HBs）10mlU／mL和15～30mlU／mL、乙型肝炎e抗原（HBeAg）1NCU／mL和2～4NCU／mL、乙型肝炎e抗体（抗HBe）2NCU／mL和64～256NCU／mL、乙型肝炎核心抗体（抗HBc）2IU／mL．和32—256IU／mL。检测标本HBV—M的符合率：ELISA分别为87．4％、99．0％、87．7％、96．6％、100．0％,GICA分别为69．6％～71．7％、69．0％～72．0％、70．5％～73．9％、42．2％～49．1％、50．0％～60．0％。检测HBV—M特异性：除GICA柃测抗HBs的特异性略差外,其余各HBV—M的检测特异性均是可接受。,结论GICA检测HBV—M低浓度的标本,漏检率很高,只能用于GICA检测线性范围里HBsAg的筛查,不能作为临床诊断乙型肝炎和疗效考核的依据。     

加酶时间对ELISA定性测定HBsAg的影响

目的探讨加酶时间对酶联免疫吸附试验(ELISA)一步法定性测定HBsAg的影响程度,及加酶前后反应的差异。方法1加酶时间分别设为加样后0,5,10,15,20min,温育时间为30min,检测阴性血清和HBsAg为0.2,0.5,1,2,50,1000ng/ml的定值质控血清,观察这些条件下标本测定S/CO比值的差异;2同时作"一步法"与"二步法"对照检测,比较两种测定方法S/CO比值的差异。结果1随着加样后加酶时间的延长,弱阳性标本结果越明显;2弱阳性标本检测结果"一步法"S/CO比值明显低于"二步法"。结论1加酶时间对ELISA一步法定性测定HBsAg弱阳性标本结果有较大影响;2弱阳性标本的检测"二步法"优于"一步法"。     

静脉吸毒人群中血浆抗-HCVEIA法、WB法与HCVRNA荧光定量PCR法比较

目的了解吸毒人群中抗-HCV EIA法、WB法与HCV RNA检测分析的符合性,选取适合高危人群的HCV实验室诊断策略。方法使用2种EIA试剂进行筛查试验,初检阳性者用另一种抗体试剂复检和用FQ-PCR(荧光定量PCR)法检测HCV RNA,抗体复检阳性的样品用HCV WB检测试剂进行确认。结果血清学试验115份样本初检结果阳性108份,阴性7份;对初检阳性者进行复检,结果阳性90份,阴性18份。复检阳性者使用WB确认,89份阳性,1份不确定;EIA抗-HCV结果S/CO≥3.8有71份,与WB阳性符合率为98.6%。EIA复检阳性样本中HCV-RNA检出率为82.22%,复检阴性样本中有HCV RNA的检出率为77.78%(14/18)。结论抗-HCV并不与HCV RNA同时出现。吸毒人员HCV感染的检测,在EIA筛查基础上,对阴性样本检测HCV-RNA,阳性样本用WB试验进行确认,确保检测的准确性。