卡配因Ⅱ在过氧化诱发大鼠白内障的晶状体上皮细胞中的表达

目的：探讨卡配因Ⅱ在过氧化（H2O2）诱发大鼠白内障的离体晶状体上皮细胞中的表达改变和意义。方法：使用H2O2诱发实验组离体培养的大 鼠晶状体发生白内障，用免疫组织化学方法检测卡配因Ⅱ在大鼠晶状体上皮细胞中的表达，与对照组正常晶状体上皮细胞中的卡配因Ⅱ表达进行比较，并进行统计学分析，观察2个组晶状体出现混浊的时间和程度。结果：实验组大鼠的晶状体上皮细胞中卡配因Ⅱ的表达明显增高，与对照组比较，差异有显著意义（P＜0．05）。卡配因Ⅱ表达的增高发生于晶状体混浊之前。结论：H2O2可在大鼠晶状体上皮细胞中激活卡配因Ⅱ的表达，从而使其在氧化损伤诱发白内障的过程中发挥作用。     

卡配因Ⅱ在过氧化氢诱发大鼠白内障的晶状体上皮细胞中的表达

目的　探讨卡配因Ⅱ在过氧化氢 (H2 O2 )诱发大鼠白内障的离体晶状体上皮细胞中的表达改变和意义。方法　使用H2 O2 诱发实验组离体培养的大鼠晶状体发生白内障 ,用免疫组织化学方法检测卡配因Ⅱ在大鼠晶状体上皮细胞中的表达 ,与对照组正常晶状体上皮细胞中的卡配因Ⅱ表达进行比较 ,并进行统计学分析 ;观察 2个组晶状体出现混浊的时间和程度。结果　实验组大鼠的晶状体上皮细胞中卡配因Ⅱ的表达明显增高 ,与对照组比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。卡配因Ⅱ表达的增高发生于晶状体混浊之前。结论　H2 O2 可在大鼠晶状体上皮细胞中激活卡配因Ⅱ的表达 ,从而使其在氧化损伤诱发白内障的过程中发挥作用     

半胱氨酸天冬氨酸酶在过氧化氢诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡中的表达

目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸酶（caspase3)在氧化损伤致大鼠晶状体上皮细胞凋亡过程中的表达及意义。方法 离体大鼠晶状体于MEM培养液中培养，实验组加入终浓度为2mmol/L的过氧化氢（H2O2），对照组不加H2O2，观察培养过程中两组晶状体混浊程度；透射电镜下观察晶状体上皮细胞超微结构改变；免疫组织化学方法测定细胞中caspase3表达。结果 在H2O2作用下随培养时间延长，晶状体混浊度加重，伴随晶状体上皮细胞凋亡增加；caspase3表达量随细胞凋亡及晶状体混浊度的增加而增加。结论 晶状体上皮细胞凋亡是氧化损伤诱发白内障模型的细胞学基础；caspase3可能参与晶状体上皮细胞凋亡和白内障的形成，在白内障的发病机制中占有重要地位。     

氧化性白内障晶状体中蛋白和细胞的改变

目的探讨将氧化性白内障动物作为模型研究人老年性白内障机制的可行性。方法用过氧化氢(H2O2)诱发大鼠晶状体产生白内障,分析晶状体相对灰度值、晶状体水化程度,Folin酚法测量水溶性蛋白(WSP),电泳及染色分析WSP条带,流式细胞术测定晶状体上皮细胞(LECs)凋亡。结果6、12和24h时晶状体相对灰度值减小(P<0.05);WSP比例减少(P<0.05);WSP的相对分子质量为25000、29000和30000的信号减弱;晶状体水化程度增加(P<0.01);凋亡LECs增加(P<0.01)。结论H2O2诱发大鼠晶状体产生的白内障,其蛋白和细胞的改变与人老年性白内障相似,将氧化性白内障动物作为模型研究人老年性白内障具可行性。     

牛磺酸抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法 取兔晶状体离体培养，分为对照组、H2O2氧化损伤组、氧化损伤同时加牛磺酸共3组，每组64只晶状体，分别以不同时限观察各组晶状体混浊情况，DNA缺口末端原位检测法(TUNEL法)及DNA片段分析检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况。结果 牛磺酸组的晶状体混浊情况和晶状体上皮细胞凋亡率均明显低于H2O2氧化损伤组，与对照组差别无统计学意义。DNA片段琼脂糖凝胶电泳：H2O2组培养24、36、48及72h各时限均呈现凋亡细胞的典型梯状条带；而培养24h的对照组、牛磺酸组均未出现此变化而仅呈现正常细胞电泳条带。结论 牛磺酸可抑制H2O2氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡，从而延缓或减轻白内障形成。     

Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡的防护作用

目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase-3)及其抑制剂Ac-DEVD-CHO对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响，为进一步研究晶状体氧化损伤机制及其防护提供实验依据。方法 采用大鼠离体晶状体器官培养的方法，用Western blot法分析氧化损伤后晶状体上皮细胞内caspase-3蛋白酶活性，流式细胞AnnexlnV-PI双染色法定量检测caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对晶状体上皮细胞凋亡率的影响。结果 氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡过程中，细胞内caspase-3酶活性明显增强，caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可有效降低晶状体上皮细胞凋亡率。结论 caspase-3蛋白酶在氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡过程中占有重要地位，caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO可有效防护体外品状体上皮细胞氧化损伤。     

牛磺酸对H2O2诱发的猪眼白内障的抑制作用及其晶状体中GSH含量的变化

目的研究牛磺酸对过氧化氢（R2O2）诱发的白内障的抑制作用及晶状体中抗氧化利谷胱苷肽含量的变化。方法采用猪晶状体器官培养的方法，观察牛磺酸对H2O2诱发猪晶状体白内障形成的抑制作用，同时检测对照组、H2O2组和H2O2＋牛磺酸组猪晶状体中谷胱苷肽的含量。结果随着培养时间的延长，H2O2＋牛磺酸组晶状体混浊程度明显较H2O2组轻，且H2O2＋牛磺酸组晶状体中谷胱苷肽含量明显高于H2O2组，差异有显著统计学意义（P〈0.01）。结论牛磺酸做为抗氧化剂，能抑制H2O2诱发的猪晶状体中抗氧化剂谷胱苷肽的减少，从而延迟白内障的发生和发展。     

晶状体上皮细胞凋亡与过氧化氢诱导白内障形成研究

目的 探讨晶状体上皮细胞凋亡与皮质性白内障形成的关系。方法用200μmol／L过氧化氢(H2O2)诱导离体兔晶状体白内障形成,TUNEL法检测H：0：作用1,6,18,24,48h的晶状体上皮凋亡细胞,同时测定晶状体超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果H2O2作用1h,晶状体保持透明,未发现凋亡上皮细胞。随着作用时间的延长,凋亡上皮细胞数量逐渐增多,晶状体逐渐变混浊。SOD活性早期无变化,18h后逐渐降低。结论晶状体上皮细胞凋亡是皮质性白内障形成的细胞学基础,其发生先于晶状体抗氧化机制的变化。     

大鼠钝挫伤白内障模型的建立及其晶状体上皮细胞的超微结构观察

目的 建立钝挫伤白内障大鼠模型及探讨钝挫伤白内障与其晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法 50只SD大鼠分成A、B、C、D、E共5组：分别用不同重量的小球，以不同次数连续从不同高度落下打击大鼠的左眼。裂隙灯下观察大鼠品状体的变化，用透射电镜观察晶状体上皮细胞凋亡的超微结构，并与自身对照眼比较。结果 实验开始1周后，5组实验眼的晶状体即出现不同程度的混浊，但是只有D组出现典型的、持续的环状混浊，其晶状体上皮细胞出现明显细胞凋亡的超微结构改变。各组自身对照眼晶状体上皮细胞超微结构无明显改变。结论 20cm高度20g重量的外力持续打击可以使大鼠较快产生典型的、持续的白内障。钝挫伤白内障的发生与晶状体上皮细胞凋亡有关。     

葛根素对过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞NF-κB活化表达的抑制作用

目的：观察过氧化氢诱导鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞NF-κB的活化表达及葛根素(Puerarin，Pue)对NF-κB活化表达的抑制作用，探讨NF-κB在白内障发病过程中的意义及Pue对白内障的治疗作用。方法：大鼠晶状体离体培养，分成过氧化氢组(H2O2组)、对照组、Pile处理组(治疗组)，免疫组织化学方法检测三组不同时间的晶状体上皮细胞NF-κB的活化表达。结果：随过氧化氢损伤时间的延长，H2O2组晶状体上皮细胞NF-κB活化表达逐渐增强，与晶状体混浊程度正相关。培养24小时1mmolA、10mmol／l浓度的Pue处理组与H2O2组比较晶状体上皮细胞NF-κB平均阳性活化表达率和晶状体混浊程度均明显降低。结论：过氧化氢可以诱导鼠晶状体上皮细胞NF-κB的活化表达。1mmol／l、10mmol／l浓度的Pue可以有效抑制NF-κB的活化表达,有可能对抗或延缓白内障的发生。     

钙蛋白酶抑制剂PD150606对鼠氧化性白内障的预防作用

目的　探讨钙蛋白酶抑制剂PD15 0 6 0 6对鼠氧化性白内障的预防作用和钙蛋白酶在H2 O2 诱发白内障鼠的晶状体上皮细胞 (LEC)凋亡过程中的作用。方法　将健康清洁级SD大鼠的12 0只离体透明晶状体随机均分为 2组 ,实验组加含 2mmol/LH2 O2 和 0 1mmol/LPD15 0 6 0 6的培养液 ,对照组加含 2mmol/LH2 O2 的培养液。于 6、12、2 4h ,分别检测 2组鼠晶状体的透明度及相对灰度值 ;微量Folin酚法检测 2组晶状体蛋白质中水溶性蛋白 (WSP)所占比例 ;流式细胞仪术检测 2组晶状体中LEC数目 ;蛋白电泳结合免疫印迹法检测LEC中天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶 3的表达。结果　加入培养液后 2 4h内 ,实验组晶状体混浊程度较对照组明显好转。 6、12及 2 4h ,实验组晶状体相对灰度值增大 ,与对照组比较 ,差异有显著意义 (t=2 2 85 ,4 834 ,5 737;均P <0 0 5 ) ;12和 2 4h ,实验组WSP在晶状体蛋白质中所占比例下降程度有所减小 ,与对照组比较 ,差异均有非常显著意义 (t=1 398,3 2 6 0 ,3 2 6 0 ;均P =0 0 0 9) ;加入培养液后 6、12及 2 4h ,实验组LEC凋亡数目减少 ,与对照组比较 ,差异均有非常显著意义 (t=6 2 6 8,5 75 9,5 397;均P <0 0 1) ;6、12及 2 4h ,实验组半胱氨酸蛋白酶 3的表达减弱 ,与对照组比较 ,差异     

蛋白激酶C-α在晶状体上皮细胞中的表达及其与白内障关系的研究

目的 研究蛋白激酶C-α(PKC-α)在晶状体上皮细胞中的表达及其在皮质性白内障形成过程中的变化及作用。方法 离体培养的大鼠晶状体,应用Western-blot检测蛋白激酶C在晶状体上皮细胞中的表达和分布;H_2O_2诱导大鼠皮质性白内障形成,Western-blot检测晶状体上皮细胞内蛋白激酶C-α的蛋白表达变化;RT-PCR检测其mRNA含量改变。同时,流式细胞仪检测晶状体上皮细胞调亡率。结果 在正常晶状体上皮细胞中PKC-α高表达,经H_2O_2处理产生凋亡的晶状体上皮细胞中PKC-α的蛋白表达和mRNA含量均降低,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.05)。结论 H_2O_2可抑制大鼠晶状体上皮细胞中PKC-α的活性,提示PKC-α与白内障的发生发展有关。     

氧化性白内障中晶状体上皮细胞内Ca2+浓度的变化

目的 通过测定过氧化氢诱发的白内障中晶状体上皮细胞内Ca^2 浓度的变化，探讨Ca^2 浓度的改变在氧化性白内障发生机制中的作用。方法 用过氧化氢诱发实验组离体培养的大鼠晶状体产生白内障，用Fura-2／AM荧光标记法测定晶状体上皮细胞胞浆内Ca^2 的浓度，并与对照组正常晶状体相比。结果 经过氧化氢作用的实验组，6、12和24h时，晶状体上皮细胞胞浆内Ca^2 浓度与对照组相比明显升高，差异有显著性(P=0．001，0．000，0．000)。结论 本研究证实过氧化氢作用于大鼠晶状体后，其上皮细胞内Ca^2 浓度明显升高，从而为Ca^2 依赖的蛋白水解酶如钙蛋白酶等的激活创造必要条件。     

The unfolded protein response in lens epithelial cells from galactosemic rat lenses

PURPOSE: Diabetic complications are associated with hypoglycemia and hyperglycemia. The purpose of this study was to investigate the effect of both glucose deprivation and hyperglycemia on the induction of endoplasmic reticulum (ER) stress and the subsequent activation of the unfolded protein response (UPR) that results in apoptosis in in vitro cultured lens epithelial cells (LECs) and in vivo cataract formation in galactose-fed rats. METHODS: Lenses from rats fed a standard diet containing 50% galactose with or without an aldose reductase inhibitor (ARI) were investigated. Transformed human LECs were cultured in standard 10% FCS-DMEM containing various concentrations of sugar. UPR-specific proteins from both the rat lenses and lens cultures were quantified by protein blot analysis. Cell death was evaluated with TUNEL staining and ethidium homodimer-1 (EthD) dyes. Reactive oxygen species (ROS) were quantified with H2-DCF, and free glutathione (GSH) levels were measured with a commercial GSH quantification kit. RESULTS: Increased apoptosis of the LECs was observed in the lenses of rats fed the galactose diet for 5 to 9 days, and nuclear cataracts subsequently developed in these lenses after 13 to 15 days. Protein blot analysis of the LECs from these galactose-fed rats showed higher levels of the UPR-specific proteins Bip/GRP78, ATF4, and CHOP. These LECs also demonstrated activation of the UPR-specific procaspase-12 and the increased presence of ROS, whereas GSH was reduced. Because these results indicate that the UPR is activated in LECs along with the production of ROS and apoptosis during cataract formation in the galactose-fed rats, subsequent studies were conducted to determine the role of nonenzymatic glycation, osmotic stress, and oxidative stress on these biochemical processes. In vitro cultures of human LECs showed that the UPR was induced by osmotic and oxidative stress, but not by glycation. In addition, the UPR and apoptosis in LECs was induced by glucose deprivation. The ARI blocked the induction of the UPR, cell death, and cataract formation. CONCLUSIONS: The UPR that is induced by abnormally high or low concentrations of sugar is linked to the production of ROS, increased apoptosis in LECs, and cataract formation. The inhibition of the UPR induction by ARI suggests that osmotic stress may be the primary inducer of the UPR. Modulation of the UPR pathways may offer novel methods for the development of therapeutic tools to delay cataracts.     

Comparison of various calpain inhibitors in reduction of light scattering, protein precipitation and nuclear cataract in vitro

PURPOSE: To compare effects of calpain inhibitors on in vitro light-scattering in rat lens soluble protein and calcium-ionophore (A23187)-induced cataract formation in cultured rat lenses. METHODS: Rat lens soluble protein was hydrolyzed for 24 hours by activation of endogenous lens calpain. Ten calpain inhibitors were tested in this model at 10 and 25 microM concentration. As an index of protein precipitation, light scattering was measured daily at 405 nm for 8 days. Lens proteins were analyzed by isoelectric-focussing. Subsequently, rat lenses were cultured for 5 days with 10 microM A23187. Calpain inhibitors (SJA6017, MDL28170, AK295 and PD150606), which inhibited light-scattering were tested at 100 microM concentration in this model. Cataract evaluation, isoelectric-focussing and calcium determinations were performed. RESULTS: At 25 microM concentration AK295, SJA6017, E-64, PD-150606 and MDL28170 produced greater than 25% inhibition of light-scattering. Isoelectric-focussing revealed that addition of Ca(2+) produced characteristic crystallin proteolysis and aggregation patterns. AK295, SJA6017, MDL28170 and E64c prevented these changes. Lenses cultured in A23187 exhibited nuclear cataract, elevated calcium and proteolysis and aggregation of crystallins. Co-culture with SJA6017, MDL28170 and E64c reduced A23187-induced nuclear opacities, proteolysis and aggregation of crystallins without affecting increased total calcium. CONCLUSIONS: Endogenous calpain-activation model and A23187-induced cataract model can be used sequentially to screen calpain inhibitors for potential anti-cataract activity. Proteolytic changes in lens cortex after exposure to A23187 are also due to calpain activation. AK295, SJA6017 and MDL28170 possess efficacy against calcium-induced models of rodent cataracts. Use of calpain inhibitors represents a promising approach to cataract therapy.     

牛磺酸抑制过氧化氢诱发牛晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

观察牛磺酸对对过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）诱发牛晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法采用牛晶状体器官培养及ＤＮＡ缺口末端原位标记法检测牛磺酸对Ｈ２Ｏ２诱发的牛晶状体上皮凋亡细胞数量的影响,并进行相关比较及统计学分析。结果晶状体上皮细胞凋亡发生于晶状体混浊之前;牛磺酸可明显抑制Ｈ２Ｏ２所致的牛晶状体上皮细胞凋亡。     

c—myc反义寡核苷酸抑制半乳糖性白内障晶状体上皮细胞凋亡的机制

目的研究c-myc反义寡核苷酸（ASODN）对半乳糖性白内障晶状体上皮细胞（LECs）凋亡的影响。方法将Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、半乳糖组和半乳糖＋c-myc ASODN组,每组36只。半乳糖组及半乳糖＋c—mycASODN组每日球后注射O．2mL20％半乳糖,制作大鼠半乳糖性白内障模型,半乳糖＋c—mycASODN组球后注射半乳糖4h后加注Lipo—mycASODN复合液0．2mL,隔日1次。分别于给药后7、14、24d处死动物,取出晶状体,检测LECs的凋亡情况,采用TUNEL法检测c—mycASODN对半乳糖诱导LECs凋亡的影响,透射电镜下观察LECs超微结构的改变。结果各组在7、14、24d的LECs凋亡率比较,差异均有统计学意义（F7 days=3418．495,P〈0．01;F14 days=1137．555,P〈0．01;F14 days=2198．871,P〈0．01）;24d时半乳糖组LECs的凋亡率为56．57±3．20,生理盐水组为0．37±0．11,差异有统计学意义（P〈0．01）;半乳糖＋c．mycASODN组细胞凋亡率为29．35±1．63,较半乳糖组明显降低（P〈0．05）。透射电镜下观察发现,半乳糖组可见LECs呈凋亡细胞的早期改变;随着高糖诱导时间的延长,凋亡细胞逐渐增多;生理盐水组几乎未见到凋亡细胞;半乳糖＋c—mycASODN组凋亡细胞数量较同期半乳糖组少。结论在白内障形成过程中半乳糖能诱导LECs凋亡,c．mycASODN能够抑制半乳糖诱导的LECs凋亡。