丙肝病毒在外周血单个核细胞中的感染状态的进一步研究

丙肝病毒感染是一种全身性的感染 ,其嗜肝性已被肯定。关于在宿主的其他组织及细胞中存在的状态 ,正为广大丙肝研究者密切关注。本文作者曾经报道过Ｉｂ型丙肝病毒在外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)感染状态及其对干扰素应答的影响[1] ,又进一步在慢性丙肝患者的ＰＢＭＣ中用ＲＴ ＰＣＲ方法及间接免疫荧光方法检测ＨＣＶ感染存在的状态 ,结果报道如下。1　材料及方法1 1　试剂　淋巴细胞分离液 (上海生化试剂二厂 ) ;细胞总ＲＮＡ提取试剂 ;(上海华顺生物试剂公司 ) ;ＨＣＶＲＮＡＲＴ ＰＣＲ试剂盒 (洛阳华美生物工程公司 ) ;鼠抗人ＨＣＶＲＮＡＭｃＡｂ(Ｖｉ ｒｏＳｔａｔ,ＵＳＡ .) ;兔抗鼠ＩｇＧ     

筛选抗HBV药物的外周血单个核细胞体外培养系统的建立

由于乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)宿主范围狭小 ,主要对人类和黑猩猩易感 ,因而为抗ＨＢＶ药物筛选的研究带来了很大的困难。本文探索建立了一种利用乙型肝炎病人外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)进行体外培养来筛选抗ＨＢＶ药物的新系统 ,取得了一定的效果。1　资料和方法病例 :选自 1996年本科收治住院的慢性乙型肝炎病人 ,共 2 0例。ＰＢＭＣ分离与培养 :无菌抽取病人外周静脉血 10ｍｌ,常规法分离并培养ＰＢＭＣ ,连续培养 3天 ,分别收集培养上清及细胞 ,- 2 0℃保存备检。药物 :试验药物为磷甲酸钠 (ＰＦＡ)、阿昔洛韦、肝炎灵注射液、注射用蜂毒…     

HCVⅡ型病毒在EBV转化人PBMC中持续存在的研究

近年来发现丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)不仅可以感染肝细胞,也可以侵入肝外多种组织和器官,尤其其嗜淋巴细胞性正在引起越来越多的关注。已有研究证明,丙型肝炎病人外周血单个核细胞(ＰＢＭＣ)中既有ＨＣＶＲＮＡ正链存在,也有负链存在,表明ＨＣＶ可在ＰＢＭＣ中复制。ＰＢＭＣ?..     

细胞凋亡相关基因APG诱导肝癌细胞凋亡实验研究

ＰＧ基因是Ｂｃｌ 2家族中一员 ,与Ｂｃｌ 2家族的广泛氨基酸同源性主要表现在高度保守的ＢＨ1和ＢＨ2 结构域。ＡＰＧ过表达能够对抗Ｂｃｌ 2抑制细胞凋亡的活性 ,在促凋亡因素的刺激下Ｂｃｌ 2 /ＡＰＧ的比值将决定细胞的生与死。本研究旨在研究ＡＰＧ基因转染ＨＣＣ 92 0 4细胞能否诱导该细胞发生凋亡 ,从而探讨ＡＰＧ基因成为肿瘤基因治疗靶基因的潜在可能性。1　材料与方法1 1　细胞系和细胞培养 :人肝癌细胞系ＨＣＣ 92 0 4为启东肝癌研究所建立。在 5 0ｍｌ/Ｌ胎牛血清的Ｅａｇｌｅ’ｓ培养液中培养 ,ＨＣＣ 92 0 4细胞系的ｐ5 3基因…     

肝细胞和肝癌细胞粘弹性的对比研究

本研究以正常肝细胞和肝癌细胞 (Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌ,ＨＣＣ)为研究对象 ,用微管吸吮技术 (Ｍｉｃｒｏｐｉｐｅｔｔｅａｓｐｉｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ)研究了长春花碱 (Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ ,ＶＢＬ)和细胞松弛素Ｄ(ＣｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＤ ,ＣＤ)对两种细胞粘弹性的影响 ,从细胞骨架角度阐明肝癌细胞粘弹性改变的基础。1　材料与方法1.1　细胞样本的制备　　肝细胞由正常肝组织经 0 .0 5%胶原蛋白酶Ⅳ (Ｓｉｇｍａ)消化后用梯度离心的方法分离和纯化制得[1] ,ＨＣＣ细胞经人肝癌细胞株…     

丙型肝炎病毒准种在单个核细胞和肝细胞内的分隔性分布

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）对单个核细胞感染在ＨＣＶ感染慢性化中的作用。方法通过对ＨＣＶ高度变异区（ＨＶＲ）基因的体外扩增后产物的直接测序,比较慢性丙型肝炎和接受肝移植的肝硬化患者血清、外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）、肝脏相关的单个核细胞（ＬＡＭＣ）和肝脏中ＨＣＶ准种（ｑｕａｓｉｓｐｅｃｉｅｓ）的分布。结果（１）３例肝移植和５例慢性肝炎患者ＰＢＭＣ中的主要ＨＣＶ准种不同于肝脏中的ＨＣＶ;（２）３例患者的ＰＢＭＣ和ＬＡＭＣ中ＨＶＲ有不同的基因替代;（３）ＨＶＲ基因的核苷酸突变主要位于Ｅ２基因的前５０个氨基酸内。结论（１）单个核细胞中的ＨＣＶＲＮＡ是由于ＨＣＶ的感染所致;（２）ＨＣＶ准种在肝细胞和单个核细胞中的分隔性分布可能与ＨＣＶ感染的慢性化密切相关。     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞对丙型肝炎的影响

为了研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对丙型肝炎的影响,运用非同位素原位杂交法（ＮＩＳＨ）和链酶亲和素－生物素（ＳＡＢＣ）法分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ及其Ｔ淋巴细胞亚群,同时检测这些患者的肝功能指标。结果显示８例（４０．０％）ＨＣＶ患者的ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ呈阳性结果。ＨＣＶ－ＲＮＡ呈散在颗粒状或弥漫分布,主要位于胞浆中。ＨＣＶ－ＲＮＡ阳     

Th1／Th2细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的 了解慢性ＨＢＶ感染者外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的表达情况,以测定Ｔｈ０／ＴＨ１／Ｔｈ２细胞的百分数,探明Ｔｈ、、Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 常规分离ＰＢＭＣ,在ＰＭＡ,ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、莫能菌素的刺激下,采用工细胞检测（ＦＡＣＳ）对慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ表达进行分析。结果 正常对照组,２．３％～     

多聚酶链反应检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中的HBVDNA

本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了６９例乙型肝炎患者（其中慢性迁延性肝炎１７例，慢性活动性肝炎２３例，肝炎后肝硬化１２例，重症乙肝１７例）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＢＶＤＮＡ存在状态。结果显示，ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ总阳性率为４６％，而各型乙肝间ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５），提示ＨＢＶ对ＰＢＭＣ的感染，似与乙型肝炎的临床类型无明显的相关性。     

拉米夫定治疗对慢性乙型肝炎患者若干免疫指标的影响

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)持续感染的机理很复杂 ,其中 ,高病毒量所致的外周免疫耐受可能为其原因之一。拉米夫定属于核苷类抗病毒药 ,在体内或体外均能显著抑制ＨＢＶ复制。为了探讨拉米夫定治疗通过快速降低ＨＢＶＤＮＡ量是否会引起慢性乙型肝炎 (ＣＨＢ)患者某些免疫指标的改变 ,我们动态监测了 2 6例接受拉米夫定 (ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ)治疗的ＣＨＢ患者的外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)在体外经重组核心抗原(ｒＨＢｃＡｇ)刺激诱导培养后其上清中γ干扰素 (ＩＦＮ γ)、白细胞介素 10 (ＩＬ 10 )的含量。一、对象与方法1 病例选择 :2 6例…     

HBV感染者外周血白细胞和血清内HBV—DNA检测及其意义

乙型病毒性肝炎（简称乙肝）发病机理与机体免疫状态关系密切,乙肝病毒（ＨＢＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）会直接影响机体免疫功能,并可隐藏ＨＢＶ,造成复发,因此ＰＢＭＣ内ＨＢＶ检测具有重要临床意义。由于血清学方法不能直接判断ＰＢＭＣ感染ＨＢＶ,我们...     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的：了解慢性丙型肝炎患者的血浆及其外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｓ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴＰＣＲ）技术检测１２４例慢性丙型肝炎患者的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗ＨＣＶ及血浆ＨＣＶＲＮＡ阳性的患者中有２１例（３０％）的患者其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶＲＮＡ负链。在５４例抗ＨＣＶ阳性、血浆ＨＣＶＲＮＡ阴性的患者中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶＲＮＡ正链，未检出ＨＣＶＲＮＡ负链，这２例患者均为干扰素治疗３～６个月的病人。结论：ＰＢＭＣ可作为肝外病毒复制场所。对慢性ＨＣＶ感染者来说，３～６个月的干扰素治疗时间可能是不够的，ＨＣＶ在ＰＢＭＣ内的存在可能是干扰素治疗后复发的原因之一。     

丙型肝炎病毒C33c抗原、核心抗原和HBxAg在人原发性肝内胆管细胞癌中的分布及意义

目的：研究丙型肝炎病毒Ｃ３３ｃ抗原及核心抗原在人肝内胆管细胞癌中的分布及意义。方法：以免疫组织化学方法检测ＨＣＶ两种抗原及ＨＢｘＡｇ在肝内胆管细胞癌及癌旁肝组织中定位及分布。结果：ＨＣＶＣ３３ｃ抗原位于癌细胞或肝细胞的胞浆内；ＨＣＶ核心抗原在癌组织主要呈核阳性，在癌旁肝以胞浆阳性为主。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原在癌组织及癌旁肝的阳性率分别为６０％（２１／３５）及１００％（２１／２１），ＨＣＶ核心抗原在上述两种组织的阳性率分别为８７．８％（２９／３３）及６１．９％（１３／２１）；ＨＢｘＡｇ在两种组织中检出率分别为７４．３％（２６／３５）及７６．２％（１６／２１）．Ｃ３３ｃ及ＨＢｘＡｇ双阳性分别为４８．６％（１７／３５）及７６．２％（１６／２１）．结论：除ＨＢＶ感染外，ＨＣＶ感染在人肝内胆管细胞癌的发生中可能起重要作用     

“急淋”白血病细胞与高内皮小静脉及骨髓基质细胞粘附行为的变化

采用改进的小鼠肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）冰冻切片粘附结合实验法和ＭＴＴ法，观察白血病患者尤其是Ｂ细胞性急性淋巴细胞性白血病（Ｂ—ＡＬＬ）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）体外粘附小鼠ＭＬＮ高内皮小静脉（ＨＥＶ）的活性变化及患者骨髓班单个核细胞（ＢＭＭＣ）体外粘附患者骨髓基质细胞（ＳＣ）的活性变化．结果：１．Ｂ—ＡＬＬ，患者ＰＢＭＣ粘附ＨＥＶ的阳性率和强阳性率均低于正常组；２．经抗淋巴细胞功能相关抗原一１（ＬＦＡ—１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）封闭后，Ｂ—ＡＬＬ患者ＰＢＭＣ对ＨＥＶ的粘附阳性率低于正常对照ＰＢＭＣ经同样处理组及自身ＰＢＭＣ末处理组。抗ＬＦＡ一１ＭｃＡａｂ封闭也能使正常对照ＰＢＭＣ粘附阳性率和强阳性率下降；３．各型ＡＬＬ患者ＢＭＭＣ与患者骨成ＳＣ的粘附率低于正常对照，各型患者组问没有显著差异。     

大剂量甲氨蝶呤治疗成人急性淋巴细胞白血病的临床观察

我院自 1 997年 5月至 2 0 0 0年 1 0月 ,采用大剂量甲氨蝶呤(Ｈｉｇｈ ｄｏｓｅｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ ,ＨＤＭＴＸ)与吡喃阿霉素 (Ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ ,ＴＨＰ)、长春新碱 (Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ ,ＶＣＲ)、环磷酰胺 (Ｃｙｔｏｘａｎｅｎｄｏｘａｎ ,ＣＴＸ)、强的松 (Ｐｒｅｄｎｉｓｏｎ ,Ｐｒｅｄ)组成联合化疗方案ＨＤＭＴＸ +ＣＴＯＰ(环磷酰胺、吡喃阿霉素、长春新碱、强的松 )治疗成人急性淋巴细胞性白血病 (急淋 ) 3 2例 ,取得较好疗效 ,现报告如下。1　材料和方法　　病例选择 :3 2例住院病人 ,均符合急淋诊断标准[1] 。…     

常见性病患者巨细胞病毒感染461例分析

人巨细胞病毒 (ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ,ＨＣＭＶ)感染是一种全身性感染综合征。ＨＣＭＶ可以通过输血、器官移植等多种方式传播 ,而以往报告多集中于围产期感染。近年来大量流行病学资料证实 ,ＨＣＭＶ是一种常见的性传播因素 ,因此 ,国际上认为ＨＣＭＶ的性传播是其主要的传播途径之一[1] 。本文报道从 2 0 0 0年 2月～ 2 0 0 1年 2月应用ＥＬＩＳＡ法检测 4 6 1例性病患者特异性人巨细胞病毒ＩｇＭ(ＨＣＭＶ -ＩｇＭ)情况 ,旨在探讨ＨＣＭＶ性传播途径的感染率。1　对象与方法1 1　对象　性病患者血清主要取自浙江省…     

乙型肝炎病毒对T细胞亚群的侵犯及对其功能的影响

以单克隆抗体补体溶解法分离Ｔ４、Ｔ８细胞亚群，ＰＣＲ检测６５例各型乙肝患者Ｔ细胞亚群和ＰＢＭＣｓ中的ＨＢＶ ＤＮＡ，结合细胞免疫功能改变，探讨ＨＢＶ侵犯免疫细胞对其功能的影响。结果表明：ＰＢＭＣｓ中ＨＢＶ ＤＮＡ阳性２４例（２４／６４，３６．９２％），不同类型乙肝患者阳性率差异较大；Ｔ４、Ｔ８细胞亚群中ＨＢＶ ＤＮＡ阳性分别为１６例和２１例，ＨＢＶ ＤＮＡ阳性组ＩＬ２Ｒ表达明显降低，抑制细胞功能有     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV—RNA检测

目的：了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ存在情况及其意义。方法：采用套式ＰＣＲ检测３８例急性丙肝炎和３６例慢性丙型肝炎患者血清和外周血ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ《结果：７４例丙型肝炎血清ＨＣＶＲＮＡ阳性６８例,ＰＢＭＣ阳性４４例;急性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（３９．５％）,慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中阳性２９例（８０．６％）。慢性丙型肝炎患者ＰＢＭ     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者外周血单个核细胞HBV.DNA的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测６０例乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及血清ＨＢＶ．ＤＮＡ阳性率分别为７６．７％和４５％，尤其在急性乙肝（ＡＨ）或抗ＨＢｅ阳性或抗ＨＢｓ阳性的患者中，ＨＢＶ．ＤＮＡ在ＰＢＭＣ中检出率显著高血清，提示ＨＢＶ．ＤＮＡ普遍存在乙肝患者甚至ＨＢｓＡｇ转阴的病人ＰＢＭＣ中，可能是肝脏病病变反复活动及病毒重复感染的来源。因此也导致既往有ＨＢＶ感染史的ＨＢｓＡｇ阴性献血员传     

HDV感染者细胞免疫状态的研究

为探讨免疫反应在丁型肝炎发病中的作用，采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）免疫酶染色技术，观察比较了３０例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）合并丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染患者和３０例单纯ＨＢＶ感染者外周血及肝组织中的细胞免疫状态。结果发现ＨＢＶ合并ＨＤＶ感染者外周血ＣＤ８＋Ｔ细胞和ＣＤ１６＋细胞数显著高于单纯ＨＢＶ感染者，而与ＨＤＶ感染后是否抑制ＨＢＶ复制无关。在感染肝组织中，汇管区浸润细胞以ＣＤ４＋Ｔ细胞为主，小叶内坏死区中以ＣＤ８＋Ｔ细胞为主，与单纯ＨＢＶ感染者比较，两者差异无显著性。表明Ｔ细胞所介导的免疫应答在ＨＤＶ感染后所引起的肝细胞损伤中发挥着重要作用。