TGF-β1和CTGF在大鼠肾小球硬化模型中的表达及意义

目的 观察大鼠肾小球硬化模型转化生长因子β1（transforming growth factor- beta1,TGF-β1）和结缔组织生长因子（connective tissue growing factor,CTGF）的表达,探讨其与肾小球硬化病变发生发展的关系。 方法 60只大鼠随机分成2组：对照组、模型组,每组共30只。模型组采用尾静脉注射阿霉素方法建立阿霉素肾病模型。检测各组大鼠24h尿蛋白定量及血清肾功能指标。观察各组大鼠肾组织病理学改变。采用免疫组织化学及荧光定量PCR方法检测肾组织TGF-β1、CTGF蛋白和mRNA的表达水平。 结果 ①模型组于第2、4、6和8周尿蛋白定量均高于同期对照组,差异有统计学意义（p<0.01）。第2、4、6和8周时模型组血尿素氮及肌酐水平均高于同期对照组（p<0.05）。②病理检查提示随时间延长,病变进展。③模型组第4、6周TGF-β1和CTGF免疫组化半定量分析结果均高于同期对照组（p<0.01）。④模型组于第2、4、6、8周TGF-β1和CTGF mRNA表达均高于同期对照组（p<0.05）。与TGF-β1表达趋势相比,CTGF蛋白及mRNA表达高峰出现时间均延迟。结论 TGF-β1和CTGF的过度表达是肾小球硬化发生发展的重要因素。CTGF可能作为TGF-β1的下游效应分子,共同促进细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的积聚,造成肾小球硬化。阻断其表达可能为肾小球硬化提供新的治疗手段。 【关键词】 TGF-β1;CTGF;肾小球硬化;大鼠     

氯沙坦对糖尿病肾病大鼠肾小球硬化的影响

目的:探讨氯沙坦对糖尿病肾病大鼠细胞外基质降解作用的机制.方法:采用链脲霉素(streptozotozin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、模型组和氯沙坦组,16周后测血肌酐、尿素氮.对肾组织进行HE和Masson染色,计算肾小球硬化指数.Western免疫印迹测定肾脏Ⅳ型胶原和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的蛋白表达量,real time-PCR方法检测肾组织Ⅳ型胶原mRNA,转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)mRNA和CTGF mRNA的表达水平.结果:氯沙坦组血尿素氮、肾小球硬化指数及肾组织Ⅳ型胶原、CTGF蛋白表达均低于模型组(均P<0.05);Ⅳ型胶原mRNA,TGF-βJ mRNA及CTGF mRNA的表达水平均低于模型组(均P<0.05).结论:氯沙坦可能通过抑制TGF-βl和CTGF,减少Ⅳ型胶原积聚,减轻肾小球硬化.     

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠转化生长因子-β_1 mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA表达的影响

目的探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾脏病理、肾组织Ⅲ型胶原蛋白及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法 SD大鼠72只随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组24只。行单侧输尿管梗阻(UUO)术诱导肾小管间质纤维化模型。治疗组大鼠给予30 mg.kg-1水飞蓟素,模型组及假手术组给予生理盐水灌胃。分别于UUO术后第7、14、21天各组随机处死8只大鼠,光镜下观察肾组织的病理改变,免疫组织化学法评价肾组织Ⅲ型胶原蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肾组织TGF-β1mRNA及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果各时间点肾小管间质损伤和肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量在治疗组和模型组均较假手术组明显增多(P均<0.01),治疗组较模型组则明显减轻(P均<0.05)。各时间点治疗组和模型组肾脏TGF-β1mRNA和TIMP-1 mRNA表达量明显高于假手术组(P均<0.01),治疗组则明显低于模型组(P均<0.05)。UUO大鼠肾间质中TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾小管间质损伤评分均呈正相关(r=0.915、0.838、P均<0.01)。TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量均呈正相关(r=0.833、0.786、P均<0.01)。结论在UUO大鼠模型中,水飞蓟素通过下调TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA的表达,减少Ⅲ型胶原的产生,从而发挥延缓肾间质纤维化的作用。     

血管紧张素-(1-7)对转化生长因子-β1诱导的大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 采用WST法检测培养系膜细胞增殖情况;采用RT-PCR法检测CTGF基因mRNA的表达.结果 与对照组比较,Ang-(1-7)明显抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖(P＜0.05);同时,Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞CTGF mRNA表达也有明显抑制作用(P＜0.05).结论 Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞增殖有抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β1诱导的CTGF表达有关.     

氯沙坦对5/6肾切除大鼠残余肾组织中TGF-β1，p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察氯沙坦对5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨氯沙坦抗肾小球硬化的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和氯沙坦治疗组,用两步法建立5/6肾切除模型,于术后12周处死各组大鼠.处死前留取24 h尿检测尿蛋白,心脏取血检测血清肌酐、尿素氮,行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学的方法检测肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的表达.结果:模型组大鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮和肾组织胶原相对面积明显较假手术组增多(P＜0.01),氯沙坦治疗后上述指标均得到不同程度的改善.肾组织TGF-β1和p-Smad2/3在假手术组低表达,模型组呈强阳性表达,而氯沙坦治疗组TGF-β1和p-Smad2/3表达较模型组明显减弱(P＜0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7表达,模型组其表达明显减弱(P＜0.01),而氯沙坦治疗后Smad7表达较模型组增强(P＜0.01).结论:氯沙坦可以通过影响5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7的表达而起到抗肾小球硬化的作用.     

青蒿琥酯对糖尿病大鼠肾脏CTGF及TGF-β1表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯（Art）对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子（CTGF）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。方法：雄性SD大鼠分为假手术组、糖尿病肾病模型组（DN模型组）、Art小剂量治疗组、Art大剂量治疗组。12周末观察大鼠尿微量白蛋白（mALB）、尿β2微球蛋白（β2-MG）,免疫组化观察肾脏CTOF和TGF-β1的表达。结果：各组大鼠肾组织中CTGF和TGF-β1的表达：DN模型组和两组Art治疗组均显著高于假手术组（P〈0．01）,两组Art治疗组均低于DN模型组（P〈0．01）,Art大剂量治疗组表达低于小剂量治疗组（P〈0．05）。结论：青蒿琥酯可抑制CTGF、TGF-β1在糖尿病肾病肾组织的表达,从而起到保护肾脏的作用。     

曲尼司特对阿霉素肾病大鼠肾脏保护作用的实验研究

目的研究曲尼司特对阿霉素肾病肾小球硬化大鼠的肾脏保护作用,并探讨其可能的机制。方法雄性SD大鼠24只,随机分为正常对照组、模型组、曲尼司特组和安博维组,采用单侧肾切除加尾静脉注射阿霉素5mg/kg的方法建立阿霉素肾病模型。观察各组大鼠24h尿蛋白定量、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及肾脏病理的变化。应用免疫组化方法测定肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达,应用原位杂交方法测定肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。结果曲尼司特能减少阿霉素肾病大鼠的尿蛋白,延缓Scr上升;减轻基质增生和肾小球硬化;与模型组比较,曲尼司特下调阿霉素肾病大鼠肾组织中TGF-β1〔(0.6927±0.169)vs(0.4540±0.168)〕、TIMP-1〔(0.1615±0.077)vs(0.0869±0.041)〕、α-SMA mRNA〔(0.2693±0.082)vs(0.1407±0.045)〕的表达。结论曲尼司特可能通过下调阿霉素肾病大鼠肾组织中TGF-β1、TIMP-1的表达以及抑制肾脏细胞表型转分化,调节细胞外基质的生成与降解,从而减轻肾脏病理损害,发挥其肾脏保护作用。     

阿魏酸钠对肾大部切除大鼠肾脏保护作用的研究

目的探讨阿魏酸钠对5/6肾切除大鼠肾脏病变的保护作用.方法大鼠随机分为4组,假手术组(Sham组),肾切除组(NX组),NX+阿魏酸钠组(SF组),NX+依那普利(E组).8周后检测大鼠血压、24h尿蛋白定量、血肌酐、BUN,肾皮质内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)等,观察肾组织病理改变,并应用RT-PCR的方法检测肾皮质内TGF-β1 mRNA的表达;Western蛋白印迹方法检测TGF-β1蛋白质的表达.结果术后大鼠出现明显的尿蛋白[(201.2±4.1)mg/24h,肾皮质ET-1含量显著升高,且有明显的肾小球硬化,而阿魏酸钠和依那普利均能减少尿蛋白[阿魏酸钠(78.1±3.1)mg/24h,依那普利(65.9±6.3)mg/24h,与假手术组比,P＜0.01],减少肾皮质ET-1含量和肾小球硬化指数.肾大部切除后肾皮质TGF-β1mRNA及其蛋白的表达明显升高,用药组上述指标明显降低(SF组和E组与NX组相比,P＜0.01).结论在5/6肾大部切除模型中,阿魏酸钠对5/6肾大部切除大鼠肾脏有明显的保护作用,其机制可能其减少肾脏ET-1的生成,抑制TGF-β1的表达有关.     

化痰活血软坚法干预肾小球硬化机理的实验研究

目的:探讨化痰活血软坚法防治肾小球硬化的作用机理。方法:将Wistar大鼠随机分为正常组,模型组和中药组。除正常组外,其余大鼠制成肾小球硬化大鼠模型。中药组大鼠灌胃中药(1mL/100g),其余两组灌胃等量蒸馏水,共12w。然后观察各组大鼠肾组织TGF-β1mRNA、TGF-β1及MMP-9mRNA的表达。结果:与模型组比较,中药组大鼠肾组织TGF-β1和TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.01),MMP-9mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论:减少肾组织TGF-β1的产生和分泌、促进MMP-9mRNA表达是化痰活血软坚法发挥效应的重要机理,而抑制TGF-β1mRNA的表达是减少TGF-β1产生和分泌的原因之一。     

虫草菌粉对慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾间质纤维化的保护作用

目的研究虫草菌粉对慢性马兜铃酸肾病（CAAN）模型大鼠肾间质纤维化的拮抗作用。方法雄性sD大鼠随机分为对照组、模型组和虫草组;每组6只。于0、1、4,8及12周末分别检测大鼠体重、尿糖、尿蛋白定量和血清肌酐（SCr）;并于第12周末处死大鼠留取肾组织,行Masson染色观察肾间质纤维化程度,逆转录实时聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA及蛋白质表达。结果模型组大鼠尿蛋白定量及SCr显著高于对照组（P〈0．01及P〈0．05）;12周时肾间质纤维化面积显著增加（P〈0．01）;肾组织内上述指标的mRNA及蛋白质表达显著上调（P〈0．01）。与对照组相比,模型组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF、PAI-1、TIMP-1和ColⅠ的mRNA表达分别上调4．19、2．66、6．12、3．09和7．03倍;蛋白质表达分别上调2．31、3．53、3．17、3．18和6．87倍。虫草组大鼠第12周时尿蛋白定量、SCr及肾间质纤维化面积均显著低于模型组（P〈0．05）,上述高表达的mRNA及蛋白质指标均被显著抑制（P〈0．05）,与模型组相比,虫草组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF、PAI-1、TIMP-1和ColⅠ的mRNA表达分别下调45％、41％、47％、48％和67％;蛋白质表达分别下调38％、39％、49％、46％和61％。结论虫草菌粉可通过抑制肾组织促细胞外基质（ECM）合成因子（TGF-β1、CTGF）及抗ECM降解因子（TIMP-1、PAI-1）生成,而改善CAAN的肾间质纤维化及肾功能。